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论文解读：散发性孤立性胸主动脉瘤基因突变的全景观
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
胸主动脉瘤（TAA），是由于各种原因造成的胸主动脉一处或多处向外膨出，部分异常扩张、变形，呈瘤样突出。TAA是最危险的疾病之一，早期的TAA多无症状，体征也不明显，同时由于其位于胸腔内，体表查体也较难发现，而TAA一旦发生破裂，死亡率相当之高。TAA是一种高度遗传的疾病，可大致分为以下几类：综合征性TAA (sTAA)、家族型孤立性TAA (iTAA)和散发性iTAA。与综合征性TAA不同，孤立性TAA，尤其是散发性孤立性TAA 的发病率要高得多，但其遗传基础仍是个谜。 近期，首都医科大学附属北京安贞医院杜杰/李玉琳教授团队在Circulation Research上发表了题为Variants of Focal Adhesion Scaffold Genes Cause Thoracic Aortic Aneurysm的研究论文，首次揭示了散发性iTAA基因突变的全景观，提出了一类新的TAA 致病基因，促进了对TAA遗传原因的理解。 获得候选基因 研究人员招募了556名散发性iTAA患者和1092名对照并进行全外显子测序。该策略的有效性通过在选定的可疑功能突变中鉴定出（1）已知的TAA致病基因中的27个致病突变；(2) 10个已知的TAA致病基因；(3) 疑似功能突变的患者临床表型更严重，但疾病危险因素更少，类似于已知致病基因突变的患者。研究人员假设在血管组织中高表达的基因更可能与iTAA相关。通过将表达谱与遗传数据相结合，选择TES作为后续功能验证的候选致病基因。 体内实验验证 研究人员通过TesY249H基因敲入小鼠（赛业生物构建）和Tes敲除小鼠模型在体内证明TES 的功能及其在主动脉瘤发生中的作用。发现TesY249H基因敲入小鼠和Tes敲除小鼠的血管功能异常。纯合的TesY249H基因敲入小鼠发育正常，并且在8个月大时死亡率没有增加。敲入小鼠与敲除小鼠的主动脉直径比WT小鼠大。与WT小鼠相比，敲入小鼠与敲除小鼠的收缩压和舒张压较低。 体外实验验证 研究人员通过从WT和TesY249H基因敲入小鼠主动脉中分离的原代血管平滑肌细胞 (VSMC)进行胶原收缩测定，检测到该突变对VSMC收缩性有影响。如图1所示，突
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胚胎干细胞（ESC）的鉴定方法与常见问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
干细胞可分为胚胎干细胞（embryonic stem cell, ESC）和成体干细胞(adult stem cell, ASC)，其中ESC是来源于囊胚内细胞团的全能干细胞，初次发现于1981年，研究人员从小鼠囊胚中成功分离并实现了体外培养。因ASC是在成年动物体内的组织中分离提取，如骨髓、脂肪和脐带等，其在体外分化增殖能力有限，仅能分化为特定某几种类型组织的细胞。 而ESC具有无限的增殖传代能力及分化全能性，可分化为三个胚层来源的各种组织及细胞类型。这种无可比拟的特性让ESC成为很多领域的基础和应用研究的强有力工具，包括发育和调控研究、再生医学、潜在**方法。 那么ESC具有什么形态学特征？它有哪些表面标志物？又该如何鉴定其分化潜能呢？请看以下分解。 01 形态学 相对其他细胞，ESC单个细胞个体小，细胞核大，体外培养时呈集落样或克隆样生长，克隆内细胞排列紧密，细胞集落有明显的边界。此特有的形态学特征常用来做初步鉴定ESC的方法。 例如，Mouse ESC细胞核大，胞核内有多个核仁，核浆比高。在贴壁生长的情况下，Human ESC集落与Mouse ESC不同，呈相对松散、扁平状集落，集落内细胞界限隐约可见。 Mouse ESC 40x 02 特异性转录因子/抗原表达 ESC鉴定也有独有的表面标志物，目前常用的检测标志物是特异性转录因子OCT-4、Nanog及阶段特异性胚胎表面抗原SSEA。 OCT-4是一个和胚胎发育全能性相关的转录因子，几乎所有的ESC都表达OCT-4，当ESC被诱导向成体细胞分化时，OCT-4的表达逐渐下降。 Nanog是一种有同源结构域的转录因子，可以维持ESC的自我更新，以及调节ESC的细胞周期。与OCT-4相似，当ESC分裂旺盛时，Nanog高表达，随着ESC分化程度的提高而Nanog表达量逐渐下调。 SSEA是一种糖酯蛋白，用来鉴定ESC的SSEA通常有三种，分别是：SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4，它的表达具有种属间特异性。如通过免疫荧光检测，可发现Human ESC和Mouse ESC具有不同的SSEA表达。 Human ESC的鉴定 高表达OCT-4、Nanog、SSEA
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外泌体的介绍和检测提取机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
近几年，外泌体越来越多的被提起，CNS 里常常有它，自然基金课题总有它，Pubmed 里的文章数量呈现暴风增长，涉及癌症、免疫、病毒感染、心血管疾病及神经退行性疾病的全方位研究，甚至还有美容相关研究 。 想当初，外泌体刚被发现的时候，还被贴上了“代谢废物”的标签，如今却摇身一变成了科研宠儿！妥妥的拿着“废柴逆天”主角剧本。 外泌体 (Exosome) 是什么？ 所有原核和真核细胞在生理正常或异常时，均可通过出芽的方式释放各种各样的膜包裹的囊泡 (Extracellular vesicles, EVs) 到胞外环境中，如外泌体、微囊泡、凋亡小体。胞外囊泡可广泛的分为两类，核外颗粒体 (Ectosome) 和外泌体。核外颗粒体是从质膜脱离的外出芽小泡，包括直径在 ~50 nm-1 μm 的微泡、微粒和大囊泡。 外泌体是细胞核内体途径起源的、直径在 ~40-160 nm (平均 100 nm) 的囊泡。外泌体的产生涉及到一个独特的细胞内调节过程，这可能决定了它们的组成，从而决定了它们的功能。 图 1. 外泌体结构和内容物 外泌体的产生和分泌 外泌体的产生涉及质膜的双重内陷、和含有腔内小泡 (Intraluminal vesicles, ILVs)、细胞内多囊泡体 (Multivesicular bodies, MVBs) 的形成。ILVs 通过 MVBs 与质膜的融合和胞吐，最终以外泌体的形式分泌到胞外。 质膜的第一次内陷形成一个杯状结构，其中包含细胞表面的蛋白与胞外一些可溶性蛋白，这个过程形成了早期内涵体 (Early-sorting endosome, ESE)。ESEs 可发展为成熟的晚期内涵体 (Late-sorting endosomes, LSEs)，并最终生成 MVBs。MVBs 是通过质膜双凹形成的，这一过程导致 MVBs 含有多个 ILVs (未来的外泌体)。MVBs 可以与溶酶体或自噬体融合被降解，或与质膜融合以释放所含的 ILVs 为外泌体。 图 2. 外泌体的生成、分泌和分类 外泌体的起源和形成方式导致其内容物、形状、大小均有差异，从而会影响受体细胞的不同功能，这种特性被称为外泌体的异质性。外泌体可通过其
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阿尔茨海默病的发病机制和抑制剂介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
什么是阿尔茨海默病 (Alzheimer Disease, AD)？ 1907 年德国神经病理学家阿尔茨海默 (Alois Alzheimer) 仔细描述了一名具有进行性痴呆表现的 51 岁妇女 (Auguste Deter) 的症状： “她的记忆力严重受损。如果向她显示了对象，她会正确地命名它们，但随后几乎立即她忘记了一切。在阅读测试时，她会逐行跳过或通过单独拼写单词或通过发音使其变得毫无意义来进行阅读。在写作中，她多次重复单独的音节，省略了其他音节并迅速将其完全分解。在发言中，她使用填空和一些释义的表达方式 (“牛奶倒”而不是杯子)；有时候很明显她无法继续。显然，她不理解某些问题。她不记得某些物品的使用。” ——Alois Alzheimer 图 1. Alois Alzheimer (左) 和他的病人 Auguste Deter (右) 的照片 Deter 死后，Alzheimer 使用当时新的银染组织学技术从显微镜下检查了她的大脑，观察到了神经斑，神经原纤维缠结和淀粉样血管病的症状。1910 年这种病被命名为阿尔茨海默病 (AD)。 图 2. AD 的典型神经病理学特征包括老年 (Aβ) 斑块 (红棕色) 和神经原纤维 (Tau) 缠结 (黑色) AD 是一种神经退行性疾病 (可参见：忘不了餐厅，忘了一切却忘不了爱丨神经退行性疾病——比癌症更残忍)，与特定大脑区域的神经元萎缩和死亡相关，是痴呆症的主要形式 (50-75%)。发病初期表现出程度较小的记忆力丧失，后期发展为严重的认知功能障碍，包括行为障碍，运动困难，语言问题，严重的记忆力丧失，妄想症等。目前临床上药物**仅能改善认知症状和延缓病情进展，不能逆转病程。 阿尔茨海默病的发病形式 AD 一般以两种形式发生，一种是由遗传决定的早发形式，另一种是非遗传的晚发形式。 1、家族性 AD 家族性 AD 是一种常染色体显性遗传疾病，编码淀粉样肽前体蛋白 (APP)、早老素 1 (PSEN1) 和早老素 2 (PSEN2) 的基因突变会导致家族性 AD。其中，PSEN1 基因突变是大多数家族性疾病的原因。家族性 AD 患者的发病年龄小于
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Sirt3基因敲除小鼠与非酒精性脂肪肝的简介与技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
想调整研究方向，获得学术研究突破口？想获得论文选题思路，提高发文命中率？你需要了解学科发展态势和未来走向！赛业生物专栏《Gene of the Week》每周会根据热点研究领域介绍一个基因，详细为您介绍基因基本信息、研究概况和应用背景等，助您保持学术研究敏锐度，提高科学研究效率，期待您的持续关注哦。今天我们要讲的主角是在非酒精性脂肪肝的发病过程中发挥重要作用的Sirt3基因。 Sirt3基因简介 SIRT3基因，中文名为去乙酰化酶3，属于Sirtuins家族，Sirtuins是进化上保守的NAD+依赖性脱乙酰酶家族，具有调控细胞增殖、DNA修复、线粒体能量稳态和抗氧化活性等多种生理功能。哺乳动物Sirtuins家族共有7个成员（包括SIRT1-7），近期研究发现SIRT3在心血管和代谢疾病中发挥着重要作用。在分子机制层面上，SIRT3作为一种脱乙酰酶，主要定位在线粒体上，因此能够调节大部分线粒体蛋白的赖氨酸乙酰化，它的激活是细胞调整能量代谢的一个重要传感器，可调节线粒体ATP生成和对压力的适应性反应。SIRT3基因位于人类11号染色体上，基因全长约21.9kb，共有10个外显子，氨基酸数量为187个，由核编码后形成一个包含N端线粒体靶向序列的无酶活蛋白，该序列导入线粒体后被切断，留下一个酶活性的28kda的蛋白。近期研究表明，该基因调控线粒体的功能，与非酒精性脂肪性肝病（NAFLD)密切相关。 表1. SIRT3的基本信息 备注：标有√的意为赛业红鼠资源库有该种保存状态的小鼠 非酒精性脂肪性肝病（NAFLD） 非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是指除外源酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。NAFLD是一个总称，包括一系列肝脏疾病，包括肝脂肪变性（NAFL）、单纯性脂肪肝（SFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及其相关肝硬化，是肥胖和代谢综合征的一种肝脏表现。 图1. 来自NAFLD患者肝脏
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Red基因编辑重组技术简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
一、技术简介 Red基因重组技术，能使外源同源线性DNA片段快速与基因组DNA相应基因同源重组，主要包括pKD46、pKD3、pCP20三个协助质粒。pKD46质粒由exo、beta、gam三个基因组成，它们分别编码Exo、Beta、Gam三种蛋白质，在一定浓度阿拉伯糖诱导下或诱导表达此三种蛋白。通过外源构建同源线性片段，导入受体菌，在这三种蛋白的协助下与受体菌基因发生同源重组，最终实现基因的突变和缺失。同时pKD46质粒是温度敏感型质粒，42°C条件下其会自动丢失。pKD3为克隆氯霉素抗性基因提供模板,与此同时在此质粒中，Cm两侧有FRT位点，该位点能够被FLP重组酶识别，当重组酶存在时会将此位点之，间的片段进行剪接，从而实现了Cm'去除，因此不仅为实验进行引入抗性标记，方便了重组菌的筛选，更重要的是此抗性标记会在因FRT位点的引入在需要时被酶切剔除。pCP20能够表达FLP重组酶，进而识别重组到基因组上的FRT位点，由此酶切掉两位点之间引入的抗性基因片段片段，最终实现目的基因的缺失。pCP20同为温敏型质粒，培养条件高于42°C时自动丢失。 与Red同源重组基因敲除相关的3个酶： 1、Exo蛋白：Exo蛋白是一种核酸外切酶，单亚基的分子量为24 kD，Exo蛋白的活性形式是一种环状三聚物分子，中间有一中空的通道，通道的一端可容纳双链DNA分子，另一端只可容纳单链DNA。Exo蛋白可结合在双链DNA的末端，从DNA双链的5’端向3’端降解DNA，使DNA分子形成3’粘性末端。 2、Beta蛋白：Beta蛋白在Red同源重组中起着决定性作用，具有介导互补单链DNA退火的功能，是一种退火蛋白，单亚基的分子量为25.8 kD。在溶液中，Beta蛋白自发地形成环状结构，紧紧地结合在单链DNA的3’突出端，防止DNA被单链核酸酶降解，并介导互补单链DNA的退火。双链DNA退火完成后，Beta蛋白从DNA双链上解离下来。 3、Gam蛋白：Gam蛋白为16kD的多肽分子，可与RecBCD核酸外切酶结合，抑制其对外源DNA的降解作用，防止外源DNA 进入细胞后被宿主降解。 二、实验步骤 1、制备pKD46
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氨基酸高通量靶标定量介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
氨基酸（Amino acids）及其衍生物是在分子中既含有氨基同时又含有羧基的一类化合物。在生物体内以游离或结合状态出现。游离氨基酸分布于一切动物细胞及体液内，而结合氨基酸主要是蛋白质及肽类的基本组成成分。 构成人体及其蛋白质的氨基酸的种类有20种，大致可以分为三类：必需氨基酸、半必需氨基酸和非必需氨基酸。不同类型疾病患者体内氨基酸的平衡状态与健康个体体内维持的状态通常不同。总体来说，人体的20%是由氨基酸和他们的代谢物构成，在许多代谢通路中作为底物和调控因子起着重要的作用。肝硬化、肺癌、乳腺癌、食管癌、头颈部肿瘤等病人血浆中氨基酸浓度与健康人血浆中氨基酸浓度相比表现出异常，因此对氨基酸代谢变化的分析可以用来诊断疾病，另外氨基酸是构成蛋白质大分子的基础物质，与生命活动息息相关，氨基酸也参与能量代谢；某些氨基酸在神经生物学及自闭症**中也有显著作用且与很多代谢性疾病密切相关。总之，氨基酸分析在生物化学、食品科学、临床医学、饲料科学、化工等领域具有重要作用。 氨基酸检测列表 注：内标法定量，共可检测25种氨基酸物质 1.技术优势 用同位素内标验证，提高物质定性定量准确性； 采用严格的质量控制体系来保证数据的可靠性。 2.技术路线 3.技术参数 样本要求： 植物组织：1 g/sample 动物及临床组织标本：200 mg/sample 血清、血浆：200 μL/sample 微生物、细胞：1×107 cells/sample 粪便、肠道内容物：200 mg/sample 检测平台： Agilent 1290-6460 MS 4.应用方向 代谢性疾病（糖尿病、肥胖症、心血管疾病）的早期诊断及预测疾病发展的研究； 在生物化学、食品科学、临床医学、饲料科学、化工等领域的研究。 5.案例分析 主动脉夹层分离（AD）是一种具有高死亡率的心血管疾病，且缺少特定的临床生物标志物。为了便于诊断AD，我们通过代谢组学的方法对血浆中氨基
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点突变简介及其对表型变化的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
基因点突变指只有一个碱基对发生改变。基因点突变是基因突变的一种类型，是生物进化的动力来源之一，具有随机性、低频性和可逆性等特点。基因点突变所产生的基因组SNP变异是人类疾病发生、生理生化表型差异的内在原因之一。迄今，已有众多的研究表明，点突变能使人类对癌症、听力疾病、精神病等多种疾病的易感性增加。因而了解点突变作用机制对疾病**与预防具有重要意义。 基因点突变可以发生在基因组任意位置上，能对蛋白质的生物学功能、基因的网络调控机制等产生影响。今天我们就看一看在基因组上不同区域发生的点突变是如何影响基因的功能和产生突变表型的。 在功能蛋白的编码区发生的点突变 点突变发生在功能蛋白的基因编码区中，这是我们所熟知的一种点突变的情况，能对多肽链中氨基酸序列产生影响。一般包括同义突变、错义突变、无义突变和终止密码突变。 1. 同义突变： 当碱基置换后，变换成另一个密码子。由于mRNA翻译的过程中存在简并密码子，因而突变前、后密码子所编码的氨基酸不变，故实际上不会发生突变效应。例如DNA链中的“AGT”的第三位碱基“T”突变为“C”，则mRNA的密码子由“TCA”变为“TCG”。由于“TCA”和“TCG”都是编码丝氨酸的密码子，所以突变前后的蛋白质相同。 2. 错义突变： 碱基对的置换使mRNA的某一个密码子变成编码另一种氨基酸的密码子的突变称为错义突变。错义突变可导致机体内某种蛋白质或酶在结构发生改变，降低蛋白质的活性，甚至完全丧失功能。如较为熟悉的镰刀型红细胞贫血，其病因就是由于基因点突变所造成的。正常血红蛋白β链的第六位是谷氨酸，其密码子为GAA或GAG，如果第二个碱基A被U替代，就变成GUA或GUG，谷氨酸则被缬氨酸所替代，形成异常的血红蛋白S而发病。 3. 无义突变： 由于点突变使原先编码氨基酸的密码子变为终止密码子，使得多肽链合成提前终止，产生没有生物活性的多肽链。从而影响了原蛋白的生物学功能。 4. 终止密码突变： 基因中一个终止密码突变为编码某个氨基酸的
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LYTAC 与靶向蛋白降解技术介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
靶向蛋白降解 (TPD) 是一种有效性的，高度选择性的诱发蛋白降解方式。近年来，以 PROTAC 为代表的 TPD 技术的研究如火如荼。PROTAC 主要降解的是胞内蛋白，实际上，有 40% 的基因产物为胞外和膜相关蛋白，如生长因子、细胞因子和趋化因子，它们在多种疾病 (如癌症和炎症) 中引发异常信号传导。那么，有没有一种诱导胞外蛋白降解的技术来弥补 PROTAC 的这一局限呢？ M 君叨叨：PROTAC 是通过「清洁工」——泛素-蛋白酶体系统 (UPS) 来降解目标蛋白 (POI)，而此途径是胞内蛋白降解的主要途径，因此 PROTAC 主要降解胞内蛋白。泛素-蛋白酶体系统和自噬-溶酶体途径：是目前最主要的两条降解途径。这两条降解途径之间相互联系，具有协同和补偿作用。 溶酶体靶向嵌合体 (LYTAC) 近日，来自斯坦福大学 Bertozzi 教授的研究团队在 Nature 上报道了一项靶向胞外蛋白的降解技术——溶酶体靶向嵌合体 (LYTAC)。并且证明 LYTAC 成功降解了表皮生长因子受体 (EGFR)、程序性死亡配体 1 (PD-L1) 和载脂蛋白 E4。斯坦福大学的研究人员还表明，在细胞中，LYTAC 可以靶向并降解阿尔茨海默症和癌症中的重要蛋白。继 PROTAC 之后，LYTAC 可能会成为另一个“爆款”。 图 1. LYTAC 作用机制[3] LYTAC 含有两个结合域，一个寡糖肽基团 (Oligoglycopeptide group) 和一个能与目标蛋白质结合的抗体或小分子，两者用 Linker 连接。寡糖肽基团在细胞表面与跨膜受体 CI-M6PR 结合，所得复合物被细胞膜吞没，形成运输囊泡，并在 CI-M6PR 作用下将复合物转移至溶酶体降解，而受体 CI-M6PR 可循环利用并回到细胞膜 (如图 1)。例如通过使用抗 EGFR 单克隆抗体 Cetuximab 与 CI-M6PR 配体 M6Pn 糖多肽缀合构建 LYTAC Ab-2 来降解 EGFR。 另外，在去年六月份，PROTAC 先驱、耶鲁大学的 Crews 小组在 ACS Central Science 杂志上发表了另一项胞外蛋白降解技术——内源性嵌合体 (ENDTAC)。但该文章由于无法重现数据，已经于今年年初撤回。 不论是 LYTAC 还是
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牛奶中酪蛋白和乳清蛋白含量的测定方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
人类进化把牛奶带到我们的餐桌上信不信由你，自人类能在地球上行走的15万年里，成年人是不能喝牛奶。即使在一万年前，在地球上任何的地方如果成年人喝牛奶，他们都会产生疼痛和抽筋的身体极端反应，然后发生了一些事情。 基因突变的出现使身体持续产生乳糖酶直至到成年，这似乎是一个明显的进化优势，尽管科学家不清楚具体原因。它很可能与动物驯化有关，人类开始吃发酵乳制品，或者是应为生牛奶营养丰富、热量密集的原因，不管怎样，自那以后牛奶和奶制品一直是人类饮食的核心部分，牛奶能提供蛋白质和大量必需的氨基酸，这是必不可少的身体细胞结构（如肌肉，器官，皮肤，激素，酶）。 牛奶和奶制品 如今食品工业以多种方式加工牛奶和生产许多不同的产品，除了酸奶和牛奶，牛奶也用于生产奶酪和烘焙产品以及冰淇淋的生产。牛奶蛋白质仍然是所有这些产品中跟踪的最重要的成分之一，蛋白质含量在牛奶的交付和奶牛繁殖的价值确定方面也起着重要作用。 凯氏定氮测量方法 牛奶中的总蛋白质是使用凯氏方法确定的，通过使用凯氏消化和蒸馏法完成，该方法确定样品中的所有氮含量，然后用特定因子换算获取蛋白质含量。Kjeldahl方法是确定牛奶中总蛋白质的一种高效和快速的方法。 然而，由于它基于牛奶中所有的氮，它并不总是给出精确的价值，它不能识别其他氮化合物的掺假，因此有时使用特定仪器检测掺假，如三聚氰胺，有时需使用光谱/色谱仪和 Kjeldahl 仪器的组合。使用同一台 Kjeldahl定氮仪设备来确定非蛋白氮化合物 （NPN） 也是一个很好的解决方案，确定总蛋白质和NPN可以更好地分析样品，但在实验室需要花费更多的时间和工作。 酪蛋白 vs. 乳清蛋白 Kjeldahl仪器还可用于分析牛奶和区分酪蛋白和乳清蛋白，这两种蛋白质都存在于牛奶中。酪蛋白和乳清蛋白之间的显著区别之一是身体吸收它们的速度有快慢。酪蛋白为身体提供缓慢、稳定的氨基酸释放，使其在禁食（如睡眠）之前成为理想之选。另一方面，你的身体消化和
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常见缓释微球的制备方法和对应工艺设备介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
缓释微球的制备方法 缓释微球是指药物溶解或分散在高分子材料基质中形成的粒径尺寸大小分布在 5～250 μm 之间的球状实体，利用缓释微球开发新型的给药系统逐渐成为科学界及工业界关注的焦点，理想的缓释微球制剂的性质由活性物质、乳化技术以及聚合物材料三者共同决定。微球的制备关键在于不仅要保持药物原有的活性，还需要药物包封率高、微球粒径均一、制备工艺重复性好，因此在制备微球时，不仅要非常了解药物自身的理化性质，还要非常熟悉常用辅料的性质及乳化工艺技术。本文详细介绍了常见几种缓释微球的制备方法和对应的工艺设备。 1、缓释微球制剂的材料选择 目前微球制剂材料可大体分为两类:天然来源的聚合物和人工化学合成的聚合物。天然来源的聚合物价格低廉且来源广泛，可分为多糖和蛋白质类等，如葡聚糖、壳聚糖、海藻酸盐、淀粉、明胶、白蛋白等，天然来源的聚合物对纯化有着较高的要求，当作为微球辅料用于大批量生产时较难保持批次间严格的质量标准。常用的化学合成聚合物可分为聚酯、聚酸酐、聚磷腈、聚酰胺、聚磷酸酯等，其优点是可以通过人为控制聚合制备工艺，来保证药用辅料级别的质量，当作为载药微球的骨架材料时，聚合物材料还可以通过改变黏度及分子量等参数，灵活地控制载药微球的降解速度，以调节所包埋药物的释放速率。另外对聚合物材料或微球表面进行特异性修饰能使微球具有主动靶向性，精准定位到病灶区域或改变释放行为，因此化学合成的聚合物是微球研究及生产原料的主要来源。 2、微球的制备方法 微球的制备方法很多，常用的有乳化—溶剂挥发法、喷雾干燥法、相分离法、超临界流体沉积法和热熔挤出研磨法等，可根据药物的性质、制备微球的目的选择合适的方法。 2.1乳化溶剂挥发法 使用 PLGA 作为载体制备微球，乳化—溶剂挥发方式是最常用的，乳化溶剂挥发法包括单乳法和复乳法，适用于亲脂性药物，用水包油（O/W）方法进行制备，具体方法①根据药物的物理性质选择相应的
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淀粉样蛋白沉积和致病标志物周围细胞网络失调的揭示
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
近日，Cell 在线发表的论文 “Spatial Transcriptomics and In Situ Sequencing to Study Alzheimer’s Disease” 中，研究团队在 AD 小鼠模型中，利用空间转录组学研究淀粉样斑块周围直径 100 μm 的组织结构域的转录变化，证明了丰富的髓鞘和少突胶质细胞基因 (OLIGs) 的基因共表达网络的早期改变，而斑块诱导基因 (PIGs) 的多细胞基因共表达网络涉及补体系统、氧化应激、溶酶体和炎症，在疾病的后期表现突出。研究人员通过对小鼠和人脑切片的原位测序，证实了细胞水平上观察到的大部分变化。全基因组空间转录组分析提供了一个新的方法，以揭示 AD (淀粉样蛋白沉积) 和其他脑疾病的致病标志物周围的细胞网络失调。 研究背景 淀粉样斑块与神经变性过程的关系是 AD 研究中的一个核心问题。自从“淀粉样蛋白沉积”的病理现象被发现后，一个世纪以来，科学界展开了大量的研究，直到现在这种现象与 AD 疾病发展之间的关系仍未明了。已知： 1、淀粉样斑块可能起 AD 的触发或驱动作用。 2、散发性 AD 的风险与小胶质细胞中响应淀粉样蛋白沉积的基因表达相关，星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞也表现出对淀粉样斑块的分子反应。 3、在 AD 中，将神经元、各种神经胶质细胞分离再检测胞质 mRNA 结果并不理想，还可能人为的影响表达图谱，导致大多数空间信息的丢失，包括细胞和淀粉样斑块的关系。空间条形码阵列 (Spatially barcoded arrays) 支持进行组织中无偏倚的转录组分析，维持已测序分子的空间定位。 Bart De Strooper 和 Mark Fiers 研究团队通过一种开创性技术来具体研究斑块附近的脑细胞中发生的变化。 图 1. 研究概要图 文章概要 在小鼠和人脑样本中，该研究结合空间转录组法和原位测序的实验方法，显示了 AD 中的多细胞基因共表达网络。研究团队鉴定了两个由淀粉样斑块沉积诱导表达网络，一个是斑块诱导基因 (PIG) 网络，主要涉及小胶质细胞和星形胶质细胞；另一个是少突胶质细胞基因 (O
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实验室如何实现安全管理及规范操作？
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
实验室安全管理工作不仅关系到科研、教学工作的顺利进行，也关系到实验人员的生命安全。大家都知道实验室多用于分析化验、产品检验，和教学、科研、小试等。其特点就是化学药品、实际种类繁多，数量相对较少，分析仪器较多，如离心机、灭菌锅等实验设备，且涉及气体钢瓶，如气相色谱用到的空气、氮气、氢气、氩气、氦气等，液相色谱测定用到的流动相，如甲醇、乙腈等，都是属于危险化学品。由于人为或者自燃的原因，引起化学品的泄漏、污染、爆炸造成的事故称为化学事故。据统计，实验室发生的化学事故占整个实验室事故中的大部分比例。 7月27日，广东某大学发生一起实验安全事故，称实验室在清理此前毕业生遗留在烧瓶内的未知白色固体，一博士生用水冲洗时发生炸裂。炸裂产生的玻璃碎片刺穿该生手臂动脉血管。随后，该生已经被送到医院救治。目前，伤情已经得到控制，无生命危险。 7月24日上午，江西省吉安市吉水县一玻璃厂化学实验室发生爆炸。据悉，该爆炸由于化学实验室实验员操作不当所致，引发了气流冲击，造成了小范围的爆炸，事故最终造成一人死亡一人轻伤。 暑期至，高校实验室改造、调整与搬迁、教师和学生尤其是研究生开展科学研究与创新创业活动等相对集中，因而会进入到或企业或工厂的实验室参与研究，面对不熟悉的环境和实验操作，大家一定要时刻注意安全。那么实验室该怎么进行安全管理及规范操作！ 一、推行网格化管理 各高校要健全学校、二级单位、实验室三级联动安全责任体系，进一步明确各级职责和各实验室安全责任人，并签订责任书，建立网格化管理清单，构建“横向到边、纵向到底、全面覆盖，分级管理、层层履责”工作体系。 二、坚持常态化检查 各高校要坚持日常检查和不定期抽查相结合，暑期重点检查开放式实验室。学校层面检查不少于2次，学院层面检查每周不少于1次，各实验室责任人每天要开展例行检查；各级检查记录要留档备查，及时消除隐患。 三、严格准入制度 各高校要严
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肝炎病毒的分类和诱发肝癌的作用机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
肝炎病毒分类 肝炎病毒是世界上最常见的肝炎病因，其它原因包括酗酒、某些药物、毒素、其他感染、自身免疫性疾病和非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)。肝炎病毒共有五种主要的肝炎病毒株，分别为 A、B、C、D 和 E 型。目前，全世界大约有 3.25 亿人患有乙型和/或丙型肝炎。 ■ 甲型肝炎病毒 (Hepatitis A virus, HAV) 通过摄入被污染的食物、水或者感染者直接接触传播。甲型肝炎不会引起慢性肝病，并且很少致命，但它能引起致命的衰弱症状和暴发性肝炎 (急性肝衰竭)。 ■ 乙型肝炎病毒 (Hepatitis B virus, HBV) 传播途径包括母婴传播，血液、体液传播，破损皮肤粘膜以及性传播。HBV 会侵袭肝脏并导致急性和慢性疾病，使患者肝硬化和肝癌发生风险升高。在成年人中，慢性感染的者有 20–30% 会发展为肝硬化和/或肝癌。 除乙型肝炎病毒遗传物质为双链 DNA 外，其他类型病毒均为单链 RNA。 ■ 丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus, HCV) 主要是血液传播，其他少见的传播方式有性传播、母婴传播，不会通过母乳、食物、水或与受感染者拥抱，亲吻和共享食物或饮料等偶然接触传播。大约有 30% 的感染者在感染后 6 个月内自发清除了病毒，其余 70% 的人会发展成慢性 HCV 感染。在慢性 HCV 感染者中，在 20 年内肝硬化的风险介于 15% 和 30% 之间。抗病毒药物可治愈 95% 以上的丙型肝炎感染者，从而降低肝硬化和肝癌死亡的风险。 ■ 丁型肝炎病毒 (Hepatitis D virus, HDV) 传播途径与 HBV 相同，通过与受感染的血液或血液制品接触而经皮或性传播。HDV 的复制依赖于 HBV 。HDV-HBV 共同感染被认为是最严重的慢性病毒性肝炎，因为共同感染加速疾病的进程，加快肝细胞癌的发展。 ■ 戊型肝炎病毒 (Hepatitis E virus, HEV) 主要通过受污染的水 (粪口途径) 传播。通常 HEV 感染是自限性的，即可在 2-6 周内消退，但也可能会诱发暴发性肝炎 (急性肝衰竭)，并导致死亡。 HBV 与 HCV 的结构与感染机制参见往期：典型传染病的
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柱层析法与沉淀法精制蛋黄卵磷脂的生产工艺区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
你知道柱层析法与沉淀法精制蛋黄卵磷脂有何区别吗？本编文章就由AVT小编来给大家讲解一下蛋黄卵磷脂的生产工艺的区别吧！ 精制蛋黄卵磷脂的生产工艺目前主要有柱层析法、沉淀法。 柱层析法是一种常见的传统的分离方法，它以填料选择多样性以及分离效果的优越性，成为蛋黄卵磷脂主要的分离手段之一。柱层析的填料主要有树脂、硅胶以及氧化铝。 沉淀法提纯卵磷脂又分为溶剂法、金属离子法，溶剂法提纯优于金属离子法，是先用于卵磷脂提纯的技术；金属离子沉淀法主要是利用金属离子与卵磷脂的特异性结合实现的。 除以上所述，近几年热门的生产工艺还主要有膜分离法、超临界二氧化碳法、酶法等，但是由于成本较高、对仪器设备要求高等因素，暂未得到广泛应用。 精制蛋黄卵磷脂的生产工艺多种多样，尤其近几年新兴的工艺增加了精制蛋黄卵磷脂的提取率，但是，广使用和实际生产应用性的还是有机溶剂萃取法。不过，溶剂萃取法适合粗提，但是在溶剂萃取法的基础上加入一些新技术辅助，如微波辅助、超声波辅助等辅助萃取磷脂，可提高溶剂提取的效率。 另外一种重要的提纯分离方式，柱层析法，该法虽然可得到含量在90%左右的高纯度磷脂酰胆碱，但是柱层析法分离周期长，负载量低，而且要用到许多有一定毒性的有机溶剂，产品中易有溶剂残留都是这种方法的缺点。 近几年的热门方法—超临界二氧化碳法，提纯蛋黄卵磷脂的萃取率可高达89.2%，虽然超临界萃取技术需要条件较高，但是因其简单高效、无毒无害等完全符合当前绿色环保技术的发展趋势，也是蛋黄卵磷脂生产的一个发展方向。 了解更多磷脂辅料的相关信息欢迎访问我们的官方网站（avt-avt.com）或拨打我们的400官方电话（400-6262-623）！
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