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FOXBOX呼吸代谢技术助力右美托咪定**COVID19重症患者研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
据SSI呼吸代谢技术官网2022年1月20日最新参考信息，镇静剂右美托咪定可能有助于**重症监护中的新冠肺炎患者——但它如何影响呼吸和血压？ 右美托咪定可维持一定程度的镇静状态，有利于降低机体的氧耗率，改善氧合。来自日本牙科大学的科学家采用Foxbox呼吸代谢技术构建了如下图所示的镇静 相关研究成果见2022年1月14日PLOS ONE在线论文“Effect of dexmedetomidine on cardiorespiratory regulation in spontaneously breathing adult rats”。 参考资料 1.Zhou L, Gu W, Kui F, et al. The mechanism and candidate compounds of aged citrus peel (chenpi) preventing chronic obstructive pulmonary disease and its progression to lung cancer. Food & Nutrition Research. 2021 ;65. DOI: 10.29219/fnr.v65.7526. 2.Wearing, O.H., Ivy, C.M., Gutiérrez-Pinto, N. et al. The adaptive benefit of evolved increases in hemoglobin-O2 affinity is contingent on tissue O2 diffusing capacity in high-altitude deer mice. BMC Biol 19, 128 (2021). 3.Catherine M.Ivy,Haley Prest,Claire M.West,and Graham R.Scott. Distinct Mechanisms Underlie Developmental Plasticity and Adult Acclimation of Thermogenic Capacity in High-Altitude Deer Mice. Front Physiol. 2021;12:718163. 11.doi:10.3389/fphys.2021.718163. 4.右美托咪定在临床麻醉中的优势地位 (baidu.com) 5.新冠危重症患者七点**经验_医师网-《医师报》官网 (mdweekly.com.cn)
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中央排风通气笼具(EVC)和独立通气笼具(IVC)的技术指标和参数评价
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
目的：探讨两种密闭式笼具系统：中央排风通气笼具(EVC)和独立通气笼具(IVC)的性能比较。 方法：通过对EVC和IVC的占地面积、使用操作流程(换笼流程及清洗流程)、损坏率、整体消毒清洁流程、小鼠饲养环境条件(换气次数、风速及氨浓度)、笼盒内噪音、断电或机械故障的报警系统等指标进行对比评价。 结论：EVC笼架占地面积小、节省空间及更容易清洗,观察、换笼操作相对简单,配件损耗低且能耗更低，但IVC清洗及隔音效果表现更佳。 EVC是一种节省空间、节能、环保且绿色的优化方案。 关键词：屏障设施;中央排风通气笼具系统;独立通气笼具系统;小鼠 依据国家标准，SPF 级小鼠应饲养于屏障设施中,而且对屏障设施中的温度、相对湿度、换气次数、空气洁净度、菌落数、压差、噪音等技术指标及饲养笼具均有要求。目前，常用的小鼠饲养笼具有两种，即：1敞开式平板架（以房间为独立单元)；2 密闭式笼具（以独立笼盒为饲养单元）。其中，密闭式笼具有中央排气通风笼盒系统 ( Exhaust Ventilation central Cages，简称 EVC) 和独立通气笼盒系统（Individual Ventilated Cages，简称IVC)等[1] 。 EVC主机顶端的风机将笼盒内的废气从排气口经过滤器排出，连接机架排风管道与屏障环境内的中央排气通风系统进行排风，并将清洁空气从饲养笼盒的进气口过滤后送入每个笼盒内。并且饲养笼盒形成微负压，相互独立且无交叉污染，可适用于饲养SPF级实验动物[2] 。IVC由送风机经过初级、高效过滤器向饲养笼盒内送入清洁空气，再由排风机将笼盒内的空气排放出去，形成一送一排的空气流通过程。 通过调节送、排风量，可使饲养笼盒内形成微正压或微负压。 笼盒相互独立、无交叉污染，适用于饲养SPF级实验动物[3] 。综上所述，EVC和IVC属于同一类饲养笼具[4-5]，但表现形式存在一定的差异[6]。本文将对EVC和IVC的相关参数进行对比，为饲养实验动物笼具选择提供相关的数据支持。 1材料和方法 1.1材料 1.1.1实验动物：SPF级小鼠,购自斯贝福
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细胞STR鉴定相关问题汇总解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
STR（Short Tandem Repeats，短串联重复序列）分析已被国际细胞系鉴定协会（ICLAC：International Cell Line Authentication Committee )、ATCC、NIST（美国国家标准局）等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定。目前使用错误细胞情况非常严重，据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复，而且会造成大量人力、物力、金钱损失。Nature和Science等越来越多的杂志要求在投稿时提供细胞STR鉴定报告。 小希整理了以下细胞STR鉴定相关各类问题大合集，为您解决细胞鉴定中的“疑难杂症”。 Q:什么是细胞STR鉴定？ A: STR即短串联重复序列（short tandem repeats），也称微卫星DNA（microsatellite DNA），通常是基因组中由1~6个碱基单元组成的一段DNA重复序列，由于核心单位重复数目在个体间呈高度变异性并且数量丰富，构成了STR基因座的遗传多态性。细胞STR鉴定即通过STR信息建立细胞系的遗传特性，通过STR鉴定来检测细胞是否发生交叉污染现象。 STR图谱 Q:为什么要进行细胞STR鉴定？ A: 由于细胞系发生交叉污染或身份误认，可以导致实验数据的无效和数据的误导。NIH已发出公告，讨论细胞系鉴定的必要性， ATCC数据库要求研究者对细胞系进行鉴定，Nature和Science等越来越多的期刊也要求文章发表前需提供细胞鉴定材料。 Q:如何进行细胞STR鉴定？ A: 细胞STR鉴定目前主要基于多重PCR结合荧光探针检测技术，对人源多个STR位点进行检测。Dr.Cell实验室对人源细胞21个基因座进行检测，所选用的基因座不仅包含ATCC、DSMZ和JCRB细胞库中的9个基因座，更添加12个高度多态性位点，可方便与权威数据库进行比对，具有极高的准确性。 Q:什么时候需做细胞STR鉴定？ A: ● 当实验室引入新的细胞系 ● 细胞来源于组织——原代细胞 ● 文章发表，国外期刊杂志要求 ● 细胞功能不正常 ● 细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大 ● 细胞已连续培养6个
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3D培养之三维结构下的细胞与类器官详解
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
三维细胞培养（Three-dimensional cell culture，3D细胞培养）这个名词已然成为生物科学领域的热点。近几年围绕“3D细胞培养”公开发表的文章或评论数量上升迅猛，3D细胞培养衍生的类器官技术同样成为研究学者的利器。2017年，《自然》杂志的子刊《Nature Methods》评价类器官为生命领域的年度技术；2019年，Organoids登上了《科学》杂志的封面，且为类器官特刊。悄然之间，类器官技术出现在各大顶级期刊杂志。2021年，“十四五”重点研发计划更是把相关肿瘤类器官的研究列为首批重点专项任务。 图1 3D/2D细胞培养发表文献数量比较（左图）；3D细胞培养的市场规模分析（右图） #3D细胞培养的概念 3D细胞培养是指将动物细胞与具有三维结构的支架材料共同培养，使细胞能够在三维立体的空间生长、增殖和迁移，构成三维的细胞-细胞或细胞-载体复合物，从而更好地模拟细胞在体内的生长环境。 目前主要分为有支架和无支架的三维培养技术，其中依附支架的材料主要包括胶原和水凝胶等，价格低廉、操作简单；不依附支架的主要是通过物理方法进行培养，主要包括微载体、磁悬浮、悬滴板等，这类操作复杂、成本投入较大。 图2 2D培养的人结肠癌细胞（HCT116）；利用VitroGel水凝胶3D培养的HCT116 #3D细胞培养的最新动态 【Stem Cell Res Ther】利用VitroGel水凝胶包裹光活化的脂肪来源的干细胞原位移植改善肥胖小鼠的糖代谢。 【Cell Mol Biol Lett】利用VitroGel水凝胶来研究经MSC-CXCL12刺激后的巨噬细胞与肿瘤细胞的共培养。 【Cell Stem Cell】利用Matrigel构建人肺泡干细胞培养模型揭示对SARS-CoV-2的感染反应。 【Cell】结合先进的3D细胞培养和3D生物打印技术构建体外人体的关节模型。 【Nat Commun】自动化微流体平台助力肿瘤类器官的药物筛选研究。 #3D细胞培养与类器官的联系 类器官（Organoids）是一种在体外环境下培养而成的具备三维结构的微器官，具有类似于真实器官的复
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多种分离方法取高质量的外泌体具体操作详解
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
近年来，生物学领域袭来一股“外泌体”研究热潮。从细胞的排泄“废物”到全球学者研究的“珍宝”，完成最强逆袭，一跃成为当下最炙热的关键词。随处可见的以外泌体为关键词的高分文章和相关产品，覆盖各大领域，同时具有非常不错的发展前景，得到国家各类科研基金以及市场资本的支持。 “外泌体”——最新动态 【Mol Cancer】肿瘤相关的外泌体通过多种机制促进肺癌转移。2021.09.13 【Gastroenterology】产肠毒素的脆弱类杆菌通过抑制外泌体包装的miR-149-3p促进肠道炎症和恶性肿瘤。2021.08.06 【Protein Cell】来自鹿茸干细胞的外泌体减轻间充质干细胞衰老和骨关节炎。2021.08.03 【中科院】一种用于外泌体纳米孔化的高通量纳米流体装置，用于开发载物的细胞囊泡。2021.07.21 【苏州大学】基于一种微创外泌体喷雾产品修复心肌梗塞。2021.06.21 【JEV】基于细胞外囊泡的液体活检生物标志物鉴定的最新方法。2021.05.12 【广东省医学科学院】干扰素刺激产生的外泌体hACE2通过竞争性阻断可有效抑制新冠病毒的复制。2021.05.12 【JEV】一种来源于人诱导多能干细胞EV的分离培养方法。2021.04.10 【Gut】外泌体递送的CD44v6/C1QBP复合物通过促进肝纤维化微环境来促进胰腺癌肝转移。2021.04.07 【SCI子刊】新生儿脐带间充质干细胞来源的外泌体通过沉积PCNA可逆转骨髓间充质干细胞的衰老。2021.01.27 “外泌体”提取的方法 作为新兴研究领域，外泌体研究的技术方法从最初的不完善，正在走向标准化。国际细胞外囊泡学会（ISEV）分别在2014年和2018年发表了EVs的研究方法和质控标准。但EVs的分离和纯化是EVs相关基础研究和临床应用的瓶颈问题之一，国内外学者也在尝试不同分离与富集方法。不同研究目的对EVs的纯度要求不同，也就面临不同方法的选择，下面就几种常用的EVs分离与富集方法进行详细介绍。 超速离心法 超速离心法（Ultracentrifugat
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外泌体研究-蛋白质组学应用多个经典案例的解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
对于疾病研究，生物标志物（Biomarker）是指可供客观测定和评价的一个普通生理病理或**过程中的某种特征性的生化指标，通过测定可以获知机体当前所处的生物学过程中的进程。检查一种疾病特异性的生物标志物，不仅可从分子水平探讨发病机制，而且在准确、敏感地评价早期、低水平的损害方面有着独特的优势，可提供早期预警、预后疗效分析、疾病精准的分期分型依据等。寻找和发现有价值的生物标志物已经成为目前研究的一个重要热点。 蛋白质是执行生物学功能的活性生物大分子，和传统方法相比，蛋白质组学能够更直接地鉴定到病人和正常人之间差异表达的蛋白，成为发现生物标志物的重要途径。 今天随小希一起学习一种外泌体蛋白组学常见研究模式——通过蛋白质组学寻找疾病发生发展的新型标志物。 案例：阿尔兹海默症潜在非侵入性早期生物标志物鉴定—外泌体蛋白质组学分析 研究背景 阿尔兹海默症（AD）是常见的老年性疾病，是一种不可治愈的神经退行性疾病。患者大脑中会出现淀粉样蛋白斑块沉积，这些沉积物能破坏脑神经组织的结构与功能，导致神经细胞死亡和认知功能丧失。阿尔兹海默症在β-淀粉样斑块沉积发生之前，识别候选生物标志物对于AD的早期干预具有重要意义。 样本来源 5XFAD小鼠及同窝对照小鼠的尿液样本。5XFAD小鼠携带5个家族性基因突变的APP/PS1转基因AD小鼠模型，该小鼠重现了阿尔兹海默症淀粉样蛋白病理的主要特征，可作为研究AD发病机制、**靶点及**药物的动物模型。 技术方法 蛋白质组学、生物信息学分析、多反应监测（MRM）、WB（Western blot）、ELISA。 研究目的 研究1月龄（β-淀粉样斑块沉积前）的小鼠模型与对照小鼠尿液外泌体蛋白质组，探讨潜在AD早期生物标志物。 技术路线 研究内容 STEP1 样本收集 收取5XFAD小鼠及同窝对照小鼠的尿液样本，分离提取外泌体。 STEP2 外泌体鉴定 NTA粒径浓度分析：对照组和5XFAD组的尿液来源外泌体进行NTA定量分析，其外泌体的平均直径分别为1
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外泌体研究-蛋白组学多个案例与研究思路详解
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
细胞外囊泡（Extracellular Vesicles，EVs）携带大量的细胞特异性的生物活性分子，核酸、蛋白质、脂类和糖类等，在机体很多生理病理过程中发挥重要的作用。外泌体可通过传递信息影响靶细胞的功能，激活细胞信号通路，在免疫、凝血、肿瘤等生理病理过程中发挥作用。EVs甚至可能通过携带聚集蛋白传播疾病，如神经退行性变疾病。 蛋白质的差异表达是区分不同来源外泌体的重要特点，是研究外泌体起源的重要途径。蛋白质组学已经逐渐成为研究各种亚细胞组分蛋白质组的重要工具。针对外泌体进行蛋白质组学研究，可以揭示疾病发病机制、寻找疾病诊断和预后的生物标志物、筛选疾病**靶点等。 近20年来外泌体蛋白质组学研究发表文章趋势 （数据来源：PubMed，数据至2021年7月） 外泌体蛋白质组学技术流程 外泌体蛋白质组学应用 外泌体中的蛋白质居多，外泌体蛋白质组学应用广泛，研究外泌体蛋白质在免疫调节、抗原呈递、癌症转移、肿瘤浸润、血管生成、神经发育中的生物学功能，标志物的筛选与鉴定、药物靶点的发现以及功能机制中的作用以及疾病诊断、**和预后等。 外泌体蛋白质组学案例分享 案例一：通过定量蛋白质组学鉴定人转移性黑色素瘤组织细胞外囊泡亚群 转移性黑色素瘤组织酶处理后，差速超速离心分离出不同大小的细胞外囊泡，然后将其进一步分为高密度（HD）和低密度（LD）部分。然后使用电镜、NTA和TMT定量质谱分析对所有EVs亚种群进行深入分析。 TMT定量蛋白质组学结果显示，大型和小型LD EVs均富集了flotillin-1等几种蛋白质，ADAM10仅富集在小型LD EVs中，而mitofilin仅富集在大型EVs中。 聚类分析结果表明HD EVs 和LD EVs中蛋白表达差异。 案例二：外泌体来源ENO1调节整合素α6β4表达促进肝癌生长和转移 α-烯醇化酶（ENO1）在几种人类恶性肿瘤中被发现失调，包括肝细胞癌（HCC）。 文章证明ENO1在HCC细胞或组织中上调，在高转移性HCC细胞或转移性组织以及来源于
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AlgaTech藻类研究技术：项圈藻天线基因修饰变异株提高固氮酶活性
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
中科院武汉水生所、华盛顿大学、欧洲PSI公司（易科泰公司合作伙伴）合作，采用FKM多光谱荧光动态显微成像技术及MC1000多通道藻类培养监测系统，为项圈藻异形胞中的藻胆蛋白含量对于固氮酶活性的影响提供了直接证据：适应缺氮环境不一定需要藻胆蛋白降解；而藻胆蛋白含量高则有利于维持固氮酶活性，原因是藻胆蛋白能够捕获光能、从而为固氮作用提供更多的ATP。该研究结果于2021年12月发表于mBio杂志上。 固氮蓝藻的异形胞在其丝状体的营养细胞链上间隔分布，固定大气中的N2。异形胞的固氮反应耗能很高，关键的驱动力是ATP；生成ATP的能量则来自光系统中以藻胆蛋白为主的天线色素复合体所捕获的光能。营养细胞中的藻胆蛋白在缺氮时降解、有氮时重新合成；但是异形胞中的藻胆蛋白的含量规律和功能至今尚无定论。本研究制作出项圈藻33047的突变株ΔnblA，该突变株在缺氮环境中藻胆蛋白不会降解所以可维持高含量。将其与野生株在加氮/缺氮条件下同时用不同光强培养，测量二者生长速度、藻胆蛋白含量、环式电子传递等指标变化，证实了本研究结论。 42℃恒温、加氮和缺氮条件下、分别设置光强梯度培养项圈藻33047，自动记录各个样品在特定光强下的生物量变化。全部工作使用MC1000 8通道藻类培养与在线监测系统完成。（A）加氮，（B）缺氮。(蓝, 500; 绿, 1000; 黄, 1500; 红, 2000μmol m-2 s-1)。 可见无论施氮与否，藻株生长速度都很快，并且随着光强的增加而增加。施氮藻株增长速度受到抑制时（倍增时间为3.18±0.16h）的光强在1500-2000μmol m-2 s-1之间。小于500μmol m-2 s-1时加氮和缺氮藻株生长速度都显著受限。 缺氮培养时，突变株ΔnblA的异形胞和营养细胞中始终保持大量的藻胆蛋白；野生株的异形胞和营养细胞中的藻胆蛋白都在缺氮时降解，加氮后营养细胞藻胆蛋白恢复，而异形胞中含量仍低。应用FKM（Fluorescence Kinetic Microscope)多光谱显微荧光动态研究系统，不仅可对这一现象进行直
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空间表型特征：表征实体肿瘤和预测免疫**反应的新型生物标志物
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
越来越多的研究表明，基于多重免疫荧光(mIF)技术的空间表型特征正在用以开发新一代生物标志物，它使用多重抗体面板在完整组织样本中通过所处环境中的功能和状态来描述肿瘤和免疫细胞的特征。不同的细胞密度模式和相互作用构成的细胞间肿瘤微环境中(TME)已被证明可以对疾病结果和免疫**反应高度预测。 在《空间表型特征：表征实体肿瘤和预测免疫**反应的新型生物标志物》白皮书中介绍了基于mIF的空间表型特征作为新一代生物标志物发现的案例，意义和价值。 目前，只有少数经FDA批准的生物标志物鉴定的患者对PD-1/PD-L1检查点抑制剂**表现出阳性反应，而且，并不是所有测试结果呈阴性的人最后都表现很差。这种不确定性使得本可以受益的患者无法得到**，增加了**无效的癌症护理成本，阻碍了下一代免疫疗法的发展。 基于多重免疫荧光(mIF)的技术的空间表型特征，是新一代病理工作流程，可生成有关癌症样本的定量和可重复的见解，具有预测价值和临床洞见方面的潜在价值，可能在不久的将来进入常规临床实践中的标准工具。 设定新的预测值标准 空间表型的核心是一种被称为多重免疫荧光(mIF)的技术，这是新一代病理工作流程，可生成有关癌症样本的定量和可重复的见解。Lu等人发表在《JAMA Oncology》上的一项多种诊断技术的meta分析显示，在预测谁将对PD-1/PD-L1免疫**产生反应方面，mIF比目前广泛使用的技术PD-L1 IHC、基于下一代测序的肿瘤突变负荷(TMB)和基因表达谱(GEP)具有更高的预测价值。 mIF：揭示PD-1/PD-L1阻断反应的新见解 多项研究表明，使用基于mIF的平台检测PD-L1表达，可以获得更量化、更准确的结果，提高预测能力。此外，mIF允许与其他标记物同时检测PD-L1表达，从而产生比单独使用每个标记物更高的预测值。 Vanhersecke等人在一项对11种不同肿瘤类型的泛癌研究中证明了这一点，其中PD-L1表达分析与三级淋巴结构(TLS)和CD8+淋巴细胞密度的测量配对。使用结合CD4、CD8、CD20、CD21和CD23的mIF分析来
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将单细胞分析置于环境中的分析框架：空间多组学方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
空间多组学是单细胞组学、空间转录组学和空间表型之间的桥梁。整合这些技术的发现提供了对组织微环境分析的创新生物学观点，使研究人员能够将他们的转录组发现和设想转化为整个组织，并观察它们在天然状态细胞之间的相互作用。这是将RNA 及蛋白与细胞组织和行为联系起来的关键步骤。 在《将单细胞分析置于环境中：空间多组学方法》白皮书中介绍了空间表型分析的优势，空间多组学分析的意义，整合scRNA-SEQ和空间表型数据的分析框架及整合CITE-SEQ 和空间表型数据的分析框架。 从质谱流式CyTOF到CITE-seq 分析，单细胞多组学方法在持续的改变对生物学的研究，对组织细胞异质性分析提供了新的解读视角。 尽管这些技术在自动化单细胞分析中发挥了重要作用，但对于研究人员而言分析数据与组织细胞表型之间仍然存在差距。细胞行为、状态和命运受到空间位置、周围成分等的极大影响。人们进一步探究发现，细胞命运和行为是细胞生物核心要素（比如DNA、RNA 和蛋白质）和周围微环境的总和。因此要真正了解细胞功能，就需要在其要素和邻域的生物环境下对细胞进行研究。 为了解开细胞的复杂性，科学家们并没有将自己局限于单一分析模式，这就是空间多组学分析的优势所在。空间多组学是单细胞组学、空间转录组学和空间表型之间的桥梁。整合这些技术的发现提供了对组织微环境分析的创新生物学观点，使研究人员能够将他们的转录组发现和设想转化为整个组织，并观察它们在天然状态细胞之间的相互作用。这是将RNA 及蛋白与细胞组织和行为联系起来的关键步骤。 空间表型分析的优势：探索组织微环境中的细胞表型与空间邻域 空间表型分析使用抗体组合在组织样本的环境中通过功能和状态来表征细胞。由此产生的细胞生态系统对细胞注释图揭示了定位、密度、组织和空间邻近度或“细胞邻域”的模式——揭示对发育、分化和反应洞察的空间表型。在肿瘤免疫研究中这些空间表型已被证明可以高度预测疾病**结果和对免疫**的反应。 空间多组学：重新
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SARS-CoV-2触发促纤维化巨噬细胞反应的诱导机理
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
当前COVID-19新冠病毒肆虐全球并且不断产生突变毒株，目前尚未开发出针对COVID-19肺炎的有效疗法，给人类健康和世界经济造成巨大损失。COVID-19感染患者会出现致命的并发症，如重症肺炎、急性呼吸窘迫综合症（ARDS）、脓毒性休克、心律失常和急性心脏损伤等病症，COVID-19 引起的ARDS与长期呼吸衰竭和高死亡率有关，但肺损伤的机制基础仍未完全明确。 近日来自德国柏林柏林夏里特医学院等合作单位的研究人员在Cell杂志发表题为”SARS-CoV-2 infection triggers profibrotic macrophage responses and lung fibrosis”的研究论文，揭示了促纤维化巨噬细胞在ARDS患者肺纤维化中的作用机制和功能。 研究人员使用单细胞基因组学、免疫组织学和电子显微镜分析了两组COVID-19急性呼吸窘迫综合征患者的肺部免疫反应和肺部病理学差异，描述了在 COVID-19 ARDS 期间获得促纤维化转录表型的CD163单核细胞生成巨噬细胞的积累过程。 通过将mRNA水平及基于Phenoptics Opal多重蛋白检测分析数据整合，揭示了 COVID-19 相关巨噬细胞与特发性肺纤维化中鉴定的促纤维化巨噬细胞群之间的显著相似性，COVID-19 造成的ARDS 与肺纤维化的临床、影像学、组织病理学和超微结构特征显著相关。 将人的单核细胞感染 SARS-CoV-2病毒，而不是甲型流感病毒或病毒 RNA 类似物，足以在体外诱导产生类似的促纤维化表型。研究结果表明 SARS-CoV-2 触发促纤维化巨噬细胞的反应和纤维增殖性 ARDS有着显著相关性，这对于COVID-19的新型**方案开发具有重要意义。 为了进一步研究肺巨噬细胞群与纤维化反应的关联，研究人员分析了来自致命 COVID-19 患者的尸检肺组织样本。使用单细胞测序结合多色荧光分析，基于典型标记基因表达鉴定了 15 个不同的肺细胞群。作者发现巨噬细胞表型与周细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞和肌成纤维细胞中描述的相似。成纤维细胞和肌成纤维细胞在 COVID-19 中显示出 ECM 蛋白编码基因的强烈上调，表明强烈的纤维化反应。进一步
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9色免疫荧光区分免疫表型，用于预测三阴性乳腺癌生存率的又一报道
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
三阴乳腺癌(TNBC)缺乏表达雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR),或人类表皮生长因子受体2 (HER2),占所有确诊乳腺癌的10-15%, 且预后差，5年内复发风险高。PD-L1是患者选择免疫**的重要生物标志物，TNBC肿瘤免疫微环境(TIME)中PD-L1表达细胞的详细空间特征可能会进一步加深我们对不同PD-L1+细胞表型的重要贡献，及其与结果关联的理解。 多重免疫荧光(mIF)代表了一种先进的检测方式，使用独特的光谱成像技术识别肿瘤免疫微环境的多标记免疫表型，为深入研究肿瘤微环境中的空间特征提供了可能性。大量转化医学研究者也对其方法学的可靠性和稳定性进行了验证，证实了多色免疫荧光和免疫组织化学(IHC)技术定量的一致性。[1,2] Yeong 等人[1]对比了使用传统IHC定量PD-L1表达和多色免疫荧光下PD-L1的定量一致性，证实了mIHC/IF同时检测和量化多个抗体克隆的PD-L1标记，并允许准确评估肿瘤和免疫细胞,是一种非常有前景的临床研究工具。 用mIHC/IF标记的TNBC组织切片的代表性图像 来自澳大利亚的Millar教授团队[3]进一步研究了TNBC患者中表达PD-L1的免疫细胞的表型，并确定它们与总生存期(OS)和乳腺癌特异性生存期(BCSS)的关系。研究中收集了来自悉尼圣乔治医院(n = 244)的TNBC患者样本进行了回顾性研究，使用基于Akoya Biosciences Vectra Polaris™平台的多重免疫荧光(mIF)技术评估CD3、CD8、CD20、CD68、PD-1、PD-L1、FOXP3和泛细胞角蛋白(pan-CK)及DAPI的9色荧光染色，使用InForm 软件进行了光谱拆分和样本自发荧光的去除，使用QuPath进行定量分析。 CD3、CD8、CD20、CD68、PD-1、PD-L1、FOXP3、泛细胞角蛋白(pan-CK)和DAPI的9色染色和HE的对比。 9色免疫荧光的详细染色方案 统计分析显示对比整体群体，在接受化疗的病人 (HR 0.56, 95% CI 0.33–0.95, p = 0.030)中，高CD68+ PD-L1+基质细胞计数与改善预后相关。尤其是在乳腺癌特异性生存期的预测上，可以显著提供仅使用PD-L1单一数据预测的准确性(HR 0.47, 95% CI 0.25–0.88
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基于多重免疫荧光(mIF)技术的空间表型特征用以开发新一代生物标志物
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
越来越多的研究表明，基于多重免疫荧光(mIF)技术的空间表型特征正在用以开发新一代生物标志物，它使用多重抗体面板在完整组织样本中通过所处环境中的功能和状态来描述肿瘤和免疫细胞的特征。不同的细胞密度模式和相互作用构成的细胞间肿瘤微环境中(TME)已被证明可以对疾病结果和免疫**反应高度预测。 在《空间表型特征：表征实体肿瘤和预测免疫**反应的新型生物标志物》白皮书中介绍了基于mIF的空间表型特征作为新一代生物标志物发现的案例，意义和价值。 目前，只有少数经FDA批准的生物标志物鉴定的患者对PD-1/PD-L1检查点抑制剂**表现出阳性反应，而且，并不是所有测试结果呈阴性的人最后都表现很差。这种不确定性使得本可以受益的患者无法得到**，增加了**无效的癌症护理成本，阻碍了下一代免疫疗法的发展。 基于多重免疫荧光(mIF)的技术的空间表型特征，是新一代病理工作流程，可生成有关癌症样本的定量和可重复的见解，具有预测价值和临床洞见方面的潜在价值，可能在不久的将来进入常规临床实践中的标准工具。 设定新的预测值标准 空间表型的核心是一种被称为多重免疫荧光(mIF)的技术，这是新一代病理工作流程，可生成有关癌症样本的定量和可重复的见解。Lu等人发表在《JAMA Oncology》上的一项多种诊断技术的meta分析显示，在预测谁将对PD-1/PD-L1免疫**产生反应方面，mIF比目前广泛使用的技术PD-L1 IHC、基于下一代测序的肿瘤突变负荷(TMB)和基因表达谱(GEP)具有更高的预测价值。 mIF：揭示PD-1/PD-L1阻断反应的新见解 多项研究表明，使用基于mIF的平台检测PD-L1表达，可以获得更量化、更准确的结果，提高预测能力。此外，mIF允许与其他标记物同时检测PD-L1表达，从而产生比单独使用每个标记物更高的预测值。 Vanhersecke等人在一项对11种不同肿瘤类型的泛癌研究中证明了这一点，其中PD-L1表达分析与三级淋巴结构(TLS)和CD8+淋巴细胞密度的测量配对。使用结合CD4、CD8、CD20、CD21和CD23的mIF分析来
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超多重免疫荧光技术推动肿瘤微环境精准研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
肿瘤微环境（tumor microenvironment, 简称TME）, 主要由肿瘤细胞，及其周围的免疫和炎症细胞，肿瘤相关的成纤维细胞，这些细胞和附近的间质组织，微血管, 以及各种细胞因子和趋化因子构成一个复杂的综合系统。 肿瘤微环境是肿瘤赖以生存的环境。肿瘤细胞在生长过程中需通过血管供应养分。肿瘤浸润免疫细胞可能具有抗肿瘤或促肿瘤功能，这两类细胞在肿瘤进展的不同阶段扮演着不同的角色。抗肿瘤免疫细胞主要由效应性T细胞、自然杀伤(NK)细胞、树突状细胞(DC)、M1极化的巨噬细胞和N1极化的中性粒细胞组成，可直接发挥杀伤肿瘤细胞的作用。而促肿瘤免疫细胞，主要由调节性T细胞(Tregs)和髓源性抑制细胞(MDSCs)组成，通过抑制免疫系统促进肿瘤生长。成纤维细胞作为肿瘤微环境中数量最丰富的一类细胞，是肿瘤微环境的重要组成成分，它不仅可维持肿瘤微环境的架构，还可为肿瘤供应养分。 在肿瘤微环境研究中，对肿瘤组织的组织结构，肿瘤细胞和各种免疫细胞相关标记物的研究，有助于我们更精准的了解肿瘤微环境的构成。但是既往的免疫组化，传统免疫荧光等技术能够在同一张组织切片中标记的靶标分子十分有限，不能够在组织原位上对大量肿瘤细胞和免疫细胞的标记物进行分析，而连续切片可能导致细胞空间异位，不能很好的观察肿瘤微环境中各种细胞之间的空间位置关系。 今年《Frontiers in Immunology》上发表的一篇方法学文章，详述了利用CODEX技术，对肿瘤微环境中的免疫调节相关蛋白进行超多重免疫标记和组织成像，实现了对8个皮肤T细胞淋巴瘤（cutaneous T cell lymphoma，简称CTCL)患者样本的56种标记物染色。 这56个标记物包含结构标记，肿瘤标记，免疫细胞标记，反应有功能的细胞的增殖状态标记和免疫调节相关标记物。下图展示了在一个组织芯片上56个标记物中的7个重要标记物的表达情况。其中，研究人员使用cytokeratin标记上皮细胞，cytokeratin标记基质层，CD31标记血管细胞，Ki-67标记细胞增殖状态，CD3标记T细
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表面计量学简介-原理、方法与应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
表面计量学简介 本报告简要讨论了几种常用于评估表面形貌（也称表面结构或表面光洁度）的重要计量方法和标准定义。随着纳米技术、薄涂层以及电路和装置小型化的出现，表面计量学已经成为一个极其重要的科学和工程领域。其从微米级和亚微米级特征的角度研究表面形貌的精确、代表性表征。这些特征构成了表面的波纹度、粗糙度和层次。形貌在确定许多现代技术、组件、部件和产品（例如电机、涂层、电子设备等）所用材料的机械、热、光学和电气性能方面起着至关重要的作用。 作者 · James DeRose , Ph.D. 1 · James DeRose，博士1 · Albert S. Laforet , M.S. 1 · Albert S. Laforet，理科硕士1 · David R. Barbero , PhD · David R. Barbero，博士 · 1 Leica Microsystems 主题和标签 表面计量学 质量保证 · 金相学 · 计量学 · 质量保证 · 扫描电子显微镜（SEM） · 表面计量学 什么是表面计量学？它为什么有用？ 表面计量学是测量表面的特征（规则图案、不规则性、粗糙度、波纹度、关键尺寸等）。表面形貌（也称为表面纹理或光洁度）在很大程度上决定了其机械和物理性质，例如摩擦、粘附、氧化、导热性和导电性等。形貌对于先进技术和设备（高级涂层、轴承、热、光学和电子/半导体装置）所用的材料很重要。例如，较大的表面粗糙度通常会增加两个接触部件之间的摩擦力。部件之间的摩擦力变大会导致更快的磨损和更短的寿命。半导体表面微小不规则性的形成可引起电荷局部化和非均匀电学性质。 由于氧化、表面张力、污染或加工，表面区域的性能通常而与主体区域不同，表面区域可大致定义为材料表层的前100个原子层。例如，机械或化学抛光或蚀刻等材料制备方法会导致表面缺陷和粗糙。由于用于制备表面的大多数工艺（机械或化学）会导致缺陷和不规则性，因此需要计量仪器和方法来评估表面形貌，并确定其对设备性质（包括性能、可靠性和使用寿命）的影响。 表面计量学方法用于检查和测量表面不同长度尺度和空间频率的
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