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BRGSF重度免疫缺陷小鼠：聚焦新药研发
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
疾病动物模型是研究人类疾病发生发展机制、药物筛选及疗效评价必不可少的工具，好的疾病动物模型可以加快新药的研发速度。你还在为不知道选择什么小鼠模型发愁吗？你还在为造模发愁吗？赛业生物新栏目《每周一鼠》上线啦，每周更新，为大家讲解一个疾病小鼠模型的故事，希望对大家了解不同的疾病小鼠模型有所帮助。 听完上周的赛业生物云课堂，想必你对BRGSF重度免疫缺陷小鼠及经过人CD34+造血干细胞移植重建后得到的BRGSF-HIS人免疫系统重建小鼠的特点和应用都有了一定的了解，今天就让我们复习总结一下吧。 BRGSF重度免疫缺陷小鼠 BRGSF小鼠是目前市面上免疫缺陷程度最高的小鼠之一，对各种来源的CDX和PDX高度兼容，可用于实体瘤和血液瘤研究。与N*G小鼠不同，BRGSF小鼠为BALB/c背景，其体内拥有完整的补体级联反应，也可用于研究补体依赖的细胞毒性（CDC）机制。BRGSF-HIS小鼠由BRGSF小鼠经人CD34+造血干细胞移植重建而得到，具有所有主要的人造血干细胞分化亚群，人源髓系细胞分化完全，人源细胞长效存在，实验窗口期长，且无贫血现象。 品系名称：BALB/c Rag2tm1Fwa Il2rgtm1Cgn SirpaNOD Flk2tm1lrl 一、BRGSF重度免疫缺陷小鼠的特点 1. 体内CDC机制完整，可用于CDC机制的相关研究。 与N*G小鼠不同，BRGSF小鼠为BALB/c背景，其体内拥有完整的补体级联反应，可用于研究补体依赖的细胞毒性（CDC）机制。例如：可用于对利用CDC机制清除CAR-T的药物进行药效和安全性评估。 2. 对各类CDX和PDX高度兼容。 BRGSF小鼠无T、B、NK细胞，NOD背景来源的Sirpa基因（SirpaNOD）取代了BALB/c背景来源的Sirpa基因，小鼠巨噬细胞对人源细胞的吞噬作用弱，对各种来源的CDX和PDX高度兼容。可用于实体瘤和血液瘤研究。 3. 具有较强的辐照耐受力，可用于研究需要放疗的疾病及HIS小鼠的构建。 二、BRGSF小鼠的应用 ☑ CDX/PDX（e.g. 实体瘤、血液肿瘤） ☑ 细胞免疫疗法（e.g. 对CDC介导的CAR-T疗法进行
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超敏一步巢式Taqman qPCR荧光核酸检测技术的机理及应用优势
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
巢式PCR具有很高的灵敏度和特异性，但传统的巢式PCR采用两对引物，通过两轮PCR，进行目标产物的扩增。这种操作的不便性，使得其高灵敏度的特性难以应用到快速检测和临床诊断中。在单管巢式PCR的扩增中，由于内侧引物会阻碍外侧引物的扩增，因此标准的Taq DNA聚合酶不能在单管巢式PCR的扩增中，发挥其高灵敏度的特性。采用耐高温、且具有链置换活性的聚合酶，可保证在单管反应中，内外两侧引物同时扩增，巢式PCR才能达到真正意义上的高灵敏度。一步法巢式PCR（One-Step Nested PCR）技术最早报道于2013年，虽然其拥有高灵敏度的检测特性，但始终未能在核酸检测领域获得广泛应用。其主要原因是SD聚合酶的链置换活性过于强烈，而导致外切酶活性作用的机会太弱，导致高信噪比的TaqMan探针无法应用于One-Step Nested PCR。因此，One-Step Nested PCR的荧光探针检测只能依靠特异性和信噪比欠佳的发卡FRET探针。凭借在分子工具酶改造工作中积累的的丰富经验，开发出具有探针切割活性的SD 2.0 DNA Polymerase和SD 3.0 DNA/RNA Polymerase，结合独有的P-Bond锚定探针技术，将高信噪比的TaqMan探针应用到One-Step Nested PCR上，建立起了TaqMan One-Step Nested qPCR方法。运用TaqMan One-Step Nested PCR方法检测DNA或RNA分子，在检测灵敏度和扩增速度方面，都是传统TaqMan PCR法难以企及的。因此，TaqMan One-Step Nested PCR技术将是未来基因检测市场争夺战中的最有利武器之一。一、One-Step Nested PCR 高灵敏度机理在标准PCR过程中，使用上游和下游两条引物对靶基因进行热循环扩增，每经过一个循环的扩增，产物最多变为2倍。而在One-Step Nested PCR(或称为PCDR法，Polymerase Chain Displacement Reaction)的扩增中由于使用两条上游引物和两条下游引物，因此在每次热循环过程中，产物增加近4倍，在经过30-40次循环后，核酸产物将会高于PCR法成千上万倍，并且所需的循环数更少。在核酸检测的实验中，One-Step Nested PCR法比标
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LAMP核酸扩增技术的发展、优势、体系及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
一、恒温扩增技术的发展现状 自1980年PCR技术发明后，基于PCR技术的核酸检测迅速应用到临床、食品、环境的检测中，并成为核酸检测的金标准。但PCR的检测技术存在设备体积大、粗样品耐受性差、反应时间长、灵敏度难以达到单copy等诸多缺点，已经难以满足现代核酸检测的要求：速度快（
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Hanson超高精度溶出杯在提高USP2法实验结果的一致性中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
众所周知USP2法实验中溶出杯的质量是影响实验结果精度和重复性的一个显著的因素，针对精度我们对溶出杯质量的要求是什么？我们能做什么？Hanson公司发表一篇报告专注了这个细节，基于6年的现场PVT测试数据和溶出杯不同生产厂家的精度经验，对于超高精度溶出杯（Hanson SPV）性能定义的目标就是明显地减少溶出杯变化系数和极高地通过USP PVT第一阶段的测试。并且，最近的生产方法改进和产量的放大使得在经济性上和普通的溶出杯成本非常接近。基于长期的SR8溶出仪SPV成功经验，Hanson现在也能将此产品成功应用于Vison G2系列溶出仪上。 ●6年标准溶出杯和超高精度溶出杯PVT现场测试结果对比 ●通过X射线扫描球体内临界表面的细节 ●色彩映射出溶出杯的一致性，与理想几何的形状的偏差 ●最初的和改进后的标准药片，几何型溶出杯的引入以及USP PVT测试CV考核增加了超高精度溶出杯的需求 ●可以事先发现，调研溶出杯几何形状、流体力学和溶出速率的密切相关性 ●玻璃溶出杯生产方法和最近技术提升了质量和控制了成本 在这个20页的题目为“Improving the Consistency of USP Apparatus 2 with Hanson Research Super Precision Vessels”报告中，Hanson 发布在不规则几何与球形和杯与杯间的溶出速率热点、以及以下相关话题的讨论： ●仪器相关影响因素以及溶出杯如何装配的概论 ●避免同时出现药物超出参数范围（out-of-specification）和仪器超出标定范围 （out-of-calibration）棘手问题的结果出现 ●当升级或者当没有升级成Hanson 超高精度溶出杯已知的问题示现 ●超高精度溶出杯的应用于化学标准药片的优势 USP定义了一个理想的几何形状，与这个理想的形状最小的偏差，临近药片的液体流动速率变化的影响和溶出结果的影响也最小，要提高重复性，设备的制造距这个理想的形状越接近越好 -----Cox et al., from “Systematic Error Associated with Apparatus 2 of USP Dissol
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小鼠巨噬细胞蛋白1βelisa检测试剂盒样本处理及要求方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
小鼠巨噬细胞蛋白1βelisa检测试剂盒样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。 仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 小鼠巨噬细胞蛋白1βelisa检测试剂盒注意事项： 1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标
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肿瘤研究热门基因PTEN
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
想调整研究方向，获得学术研究突破口？想获得论文选题思路，提高发文命中率？你需要了解学科发展态势和未来走向！赛业生物专栏《Gene of the Week》每周会根据热点研究领域介绍一个基因，详细为您介绍基因基本信息、研究概况和应用背景等，助您保持学术研究敏锐度，提高科学研究效率，期待您的持续关注哦。今天我们要讲的主角是抑癌基因PTEN。 1 PTEN基因研究概况 PTEN是迄今发现的第一个具有双重特性磷酸酶活性的肿瘤抑制基因，有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶双重特异性，在细胞内多条信号传导途径调控中起着重要作用，自发现以来受到众多学者的关注。PTEN脂质磷酸酶的活性可使磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3）去磷酸化转变为磷脂酰肌醇二磷酸而失活，继而抑制Pl3K/AKT通路，抑制细胞的生长、调控细胞周期。癌细胞中PTEN功能的丧失几乎总是导致PIP3的积累和相关的AKT信号的激活。癌症中PI3K途径效应子的下游激活是PTEN缺失最重要的标志。然而，PTEN缺失也被证明可以通过依赖PIP3的信号激活多种途径，包括Ras–MAPK、Wnt /β-catenin、Notch、Hippo途径。 图1. PTEN抑制PI3K途径和AKT的下游致癌信号。通过使PIP3磷酸化，PTEN阻止了PDK1激活AKT，从而防止了肿瘤的发生。 尽管PTEN-PI3K轴已经很好地建立了，但是有大量的调节机制可以进入PTEN，并且有许多下游机制可以使PTEN发挥作用，从而导致PTEN信号在癌症中的复杂性不断增加。在这些机制中，已证明翻译后修饰（PTM）和蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）可精确控制PTEN的稳定性，活性和定位。越来越多的数据表明，蛋白磷酸酶活性和磷酸酶非依赖性功能均在PTEN介导的肿瘤抑制中发挥作用。总而言之，阐明涉及PTEN信号传导的新途径将使我们进一步理解和认识PTEN在预防肿瘤发生中的作用。 图2. 细胞核中PTEN信号传导的复杂性。 2 PTEN基因编辑小鼠概述 由于PTEN在肿瘤发生中的重要性，因此已设计了许多复杂的基因工程小鼠模型（GEMM），以阐明“PTEN途径”促进肿瘤发生的潜在机制
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大小鼠Morris水迷宫实验方法浅析
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
Morris水迷宫实验是一种强迫实验动物(大鼠、小鼠)游泳，学习寻找隐藏在水中的平台的一种实验，主要用于测试实验动物对空间位置觉和方向觉(空间定位)的学习记忆能力。它广泛应用于学习记忆、阿尔茨海默病、海马和外海马、智力与衰老、新药开发/筛选/评价、药理学、毒理学、预防医学、神经生物学、动物心理学、行为生物学及时辰生物学等多个学科的科学研究和计算机辅助教学(CAI)。 一、实验目的 检测动物的空间记忆和探索能力。 二、实验原理 大(小)鼠虽然天生会游泳，但是它们性喜干燥，厌恶潮湿，同时游泳对于其而言是十分消耗体力的活动，因此它们会本能地寻找水中的休息场所。寻找休息场所的行为涉及一个复杂的记忆过程，包括收集与空间定位有关的视觉信息，再对这些信息进行处理、整理、记忆、加固，然后再取出，目的是能成功地“航行”并且找到隐藏在水中的站台，最终从水中逃脱。 三、实验材料与方法 (一)实验材料 1.实验设备 Morris水迷宫。 2.实验动物及分组 (1)大鼠或小鼠(本实验以大鼠为例)。 (2)根据实验目的将大鼠分组，并将每只大鼠编号。 (3)分笼饲养，自由饮食，动物房温度21～25℃，相对湿度40％～60％，自然光照昼夜节律变化。 (二)实验具体方法 将各组大鼠在正式训练前一天分别放入水中自由游泳2min，使其熟悉水迷宫环境。然后对各组大鼠正式进行Morris水迷宫测试。实验采用航行定位实验和空间探索实验分别测试大鼠的学习能力和记忆能力。 1.定位航行实验共5d 将大鼠从标记的4个入水点依次朝向池壁轻轻放入水中，采集大鼠在2min内寻找到并爬上平台所用的时间(平台在第3象限，平台低于水位2cm左右)，即逃避潜伏期(在站台上稳定10s算找到站台，否则继续记录)。如果大鼠2min内未找到平台，需将其牵引到平台，并停留60s，这时潜伏期记为2min。 2.空间探索实验1d 撤除平台，将大鼠放入水池中，记录大鼠在2min内在平台所放置的目标象限停留时间和穿越平台所在区域的次数。 (三)实验操作中的注意事项 (1)
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肿瘤干细胞研究套路：Wnt信号通路的激活
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
研究背景 人的子宫内膜是一种高度再生的组织，在类固醇诱导下，每个月都有增殖、分化和脱落的周期。有证据表明，子宫内膜干细胞存在于子宫内膜中，并负责子宫内膜每月的周期性再生。子宫内膜在循环卵巢类固醇激素、雌激素和孕激素的影响下发生再生性改变。子宫内膜癌也被证实含有能自我更新的肿瘤干细胞亚群。这些具有干细胞特性的细胞负责肿瘤生长和化疗耐药性。多种细胞表面蛋白已被成功鉴定为各种类型癌症的肿瘤干细胞标志物，而在子宫内膜癌中CD133和CD44蛋白被用于富集肿瘤干细胞，目前缺乏子宫内膜肿瘤干细胞的特异性标志物。 SMOC-2是SPARC家族成员之一，在胚胎发生和伤口愈合过程中高度表达。该基因产物是一种基质细胞蛋白，可刺激内皮细胞增殖和迁移，以及血管生成活性。已有研究表明，SMOC-2可能在性腺和生殖道发育过程中介导细胞间信号转导和细胞类型特异性分化。此外，SMOC-2已被证明是肠道干细胞的特征基因且对于L1介导的肠癌发展是必需的。因此作者想探索SMOC-2是否与子宫内膜癌肿瘤干细胞之间存在关联。 研究结果 为了确定SMOC-2与肿瘤干细胞之间的关联，作者通过流式分别分选出的人子宫内膜癌细胞系AN3CA和Ishikawa的CD133+/CD44+细胞以及CD133-/CD44-细胞（CD133和CD44已经被广泛地认为是多种类型癌症中的肿瘤干细胞的表面标志物），经Western blot及qPCR验证，SMOC-2在CD133+/CD44+中的表达显著高于CD133-/CD44-细胞，提示了SMOC-2与肿瘤干细胞相关。 图1.SMOC2在CD133+/CD44+细胞中的表达。 作者进一步通过siRNA敲低SMOC-2以及慢病毒构建过表达SMOC-2的细胞株，发现敲低SMOC-2后，已鉴定的干细胞相关基因SOX2、OCT4和NANOG表达发生了下调，而过表达SMOC-2则使得这些干细胞相关基因上调。这些结果证明了SMOC-2促进子宫内膜肿瘤细胞的干细胞特性。 图2. SMOC2促进干性相关基因的上调。 体外的细胞实验证明了SMOC-2促进细胞的成球以及增殖之后，作者通过构建CDX模型（cell-derived x
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徕卡超薄切片技术的原理与应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
对样本开展研究时，为了以纳米级分辨率显示其精细结构，通常会使用到电子显微镜。 电子显微镜有两种类型：扫描电子显微镜（SEM）用于对样本表面成像，以及需要使用极薄电子透明样本的透射电子显微镜（TEM）。因此，使用电子显微镜对样本内部的精细结构进行成像时，此类技术解决方案需要制作出非常薄的样本切片。被称为超显微技术的样本制备方法可以产生具有最小伪影的超薄切片（厚度20-150nm）。 在切片过程中，样本的块面（切割切片处）始终保持在一个平直的表面上，可供SEM进行研究。当截面在阵列中成像时，就可以重建样本的三维图像。这种方法称为阵列断层扫描（AT）。超薄切片技术及其在AT中的应用概述如下。 超薄切片技术 超薄切片技术主要用作透射电子显微镜（TEM）的样本制备方法。它允许样本的内部结构以纳米级分辨率进行可视化和分析。它以快速、干净的方式制作超薄的样本切片。超薄切片技术的一个主要优点是切片内电子透明区域的大小和均匀性以及切片产生的速度。 超薄切片技术可用于多种类型的样本，包括生物学试样和工业材料如聚合物（橡胶和塑料）以及韧性、硬质或脆性材料（金属或陶瓷）等。制备这些样本薄片还有其他技术，如聚焦离子束（FIB）铣削、离子刻蚀、三脚架抛光和电化学处理，但超薄切片技术在速度和清洁度方面具有优势。 阵列断层扫描 (AT) 是一种用于细胞和蛋白质结构分析的高分辨率三维图像重建方法。该技术利用扫描电子显微镜（SEM）或光学显微镜（LM）中超薄、树脂包埋连续切片的有序阵列成像。AT技术能够对细胞及蛋白质结构开展定量立体结构分析和可视化观察。其横向和空间分辨率比传统的共焦显微镜更理想。此外，通过生物试样的部分自动化检测来实现更高的处理量。 超薄切片原理 利用阵列断层扫描进行TEM观察以及实现最优化3D重建时，超薄有序的切片是一大前提。超薄切片机（如徕卡显微系统的EM UC7）则可以制作出此类超薄的样本切片（厚度20 ~ 150 nm）。 要在透射电子显微镜中
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Cell Metabolism文献解析 | 丁酸盐激活5-HIAA-Bregs-AhR轴抑制关节炎
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
类风湿性关节炎(RA)是一种由白细胞功能失调引起的疾病，研究数据显示肠道细菌或微生物群的变化可影响RA的正常免疫系统功能。调节性B细胞(Bregs)是一种免疫抑制细胞，它通过产生白细胞介素(IL)-10, IL-35和转化生长因子-1 (TGFβ1)介导免疫耐受，从而抑制多种免疫病如自身免疫性疾病。英国伦敦大学学院Claudia Mauri和Elizabeth C. Rosser研究团队发现补充丁酸盐可改变微生物群的组成，增加血清素衍生代谢物5-羟基吲哚-3-乙酸（5-HIAA）的产生，激活芳烃受体(AhR)抑制生发中心(GC) B细胞和浆细胞的分化以维持Bregs功能从而改善关节炎，相关成果发表于《Cell Metabolism》。 RA患者粪便丁酸盐降低与CD19+CD24hiCD38hiB细胞和IL-10+Breg频率降低相关 肠道微生物群的生态失调可能是RA发病的一个促进因素，本研究团队已报道CD19+CD24hiCD38hiB细胞中高比例的IL-10+Bregs的频率与RA严重程度呈负相关。微生物来源的SCFAs对维持免疫稳态至关重要，因此，作者推测RA的生态失调可能影响SCFAs，导致B细胞稳态异常和Breg频率降低。本研究招募非活动性RA患者收集粪便和血清样本进行代谢组学分析，发现与年龄和性别匹配的健康对照(HCs)相比，RA患者粪便中丁酸盐和丙酸盐显著减少，而乙酸盐没有差异(图1A)。在RA患者中丁酸盐水平与总CD19+CD24hiCD38hiB细胞和IL-10+B细胞的频率呈显著正相关(图1D,1G)。丙酸盐或乙酸盐与CD19+CD24hiCD38hiB细胞或IL-10+Breg频率无明显相关性(图1B-1F)，表明丁酸盐在维持关节炎疾病中Breg稳态方面起作用。 丁酸盐依赖于Bregs抑制实验性关节炎 对抗原诱导的关节炎模型(AIA)小鼠粪便SCFA水平进行分析，发现与关节炎前小鼠相比，急性期和缓解期关节炎小鼠丁酸盐和乙酸盐含量下降(图2A, S2A)。为评估个体SCFA在控制关节炎严重程度方面的作用，并确定B细胞在介导抑制中的可能作用，疾病诱导前在野生型(WT)小鼠和B细胞缺陷(μMT)小鼠的饮用水中添加乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐，发现与对照组(两种基因型的对照
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构建人免疫系统（HIS）重建小鼠进行抗体研发
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
BRGSF小鼠背景回顾 BRGSF（BALB/c Rag2tm1Fwa Il2rgtm1Cgn SirpaNOD Flk2tm1lrl）小鼠是目前市面上免疫缺陷程度最高的小鼠之一：Rag2和Il2rg基因的敲除使BRGSF小鼠T、B、NK细胞缺失；SirpaNOD抑制了小鼠巨噬细胞对人源细胞的吞噬作用；Flk2基因的敲除使小鼠髓系细胞组分（特别是树突状细胞，DC）大幅减少（图1）。通过在BRGSF小鼠身上进行CD34+人造血干细胞(hematopoirtic stem cell，HSC)移植，我们可以得到人免疫系统(human immune system, HIS)重建小鼠：BRGSF-HIS小鼠。 BRGSF-HIS小鼠的优势之一是其具有所有主要的人造血干细胞分化亚群：包括人源淋系细胞 （e.g., T、B、NK细胞）、人源髓系细胞组分（e.g., 传统的树突状细胞（cDCs）、浆细胞样树突状细胞（pDCs）、单核/巨噬细胞）。 因此，BRGSF-HIS小鼠可用于靶向人pDCs的抗体研发。 图1. BRGSF重度免疫缺陷小鼠。 浆细胞样树突状细胞 树突状细胞（dendritic cells，DCs）是专职的抗原呈递细胞（antigen-presenting cell，APC），也是连接固有免疫（innate immunity）和适应性免疫（adaptive immunity）的桥梁。根据功能和来源，DCs可被分为：经典树突状细胞(conventional dendritic cells，cDCs)、浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cells，pDCs）、单核细胞来源的树突状细胞（monocyte-derived dendritic cells，MoDCs）和郎格罕细胞(Langerhans cells,LCs)[1]。 特别地，其中的pDC亚群有着与浆细胞相似的形态。它主要存在于外周淋巴器官和血液循环中，能通过Toll 样受体（Toll-like receptor，TLR）：TLR-7和TLR-9来识别核酸。被激活后，pDCs能产生大量以IFN-α和IFN-β为主的Ⅰ型干扰素（interferon，IFN），因此也被称为天然干扰素产生细胞（natural interferon–producing cells）[2]。此外，pDCs也能分泌包括IL-6和TNF在内的多种促炎细胞因子和趋化因子，它们与Ⅰ型干扰素一起，对T、B和NK等免疫细胞的功能进行调控。另外，值得一
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跨尺度神经生物学显微成像解决方案的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
内容摘要 神经系统从微观的神经元到神经集群到宏观的多神经环路结构与功能研究要求在微观层面上获得神经细胞二维乃至三维结构信息，以及功能大分子的定位信息。借助显微技术，我们可以进行跨尺度多模态的研究，从微观世界中窥见宏观，解开生命奥秘。 神经系统的研究往往需要高分辨、深度成像和大断面可视化相结合。但是，对不同类型样本的图像处理所应用的设备不尽相同，这时候就需要研究人员为其选择一个最佳CP。对此，Leica配备了多款显微成像系统，适配于不同尺度模型的研究。 超微结构观察 超微结构观察不得不提到Leica全新共聚焦系统STELLARIS，通过搭载不同模块，应用于高分辨成像、多色荧光定位、三维成像、大图拼接以及动态观察等。 神经系统超微结构观察的另一个重要技术路线则是电镜，能够以纳米级分辨率对大量脑组织进行成像，以研究定义单个脑细胞以及与其他细胞相互作用的结构。针对不同的模式生物，应用多元化的电镜技术方案，如体电子显微镜技术、免疫电镜技术、低温冷冻制样技术和光镜电镜联用技术等实现神经科学研究中的不同目的，以及疑难样品的解决方案。 在Cryo TEM方向，想要实现在黑白成像的冷冻透射电镜中快速找到目标小样品，以前是非常困难的，耗时又费力。Leica结合自身的光学成像优势，推出了一套冷冻光电联用系统THUNDER Imager EM Cryo CLEM，能够实现低温光学荧光成像。通过与各类电镜进行软件和硬件上的联用，利用荧光与电镜位置叠加，实现在电镜下快速寻找和成像，极大地提高了工作效率。 细胞、组织、小型漠视动物观察 THUNDER Imager高分辨显微成像系统的诞生为生命科学研究呈现了一套强大的整体解决方案，尤其适合进行活体显微成像，无论是贴壁2D live cell还是3D live cell细胞球，甚至大到类器官组织、昆虫、斑马鱼、小鼠胚胎，再或大鼠、猴子……THUNDER都可以实现实时的高清图像，配合一键化操作，即拍即有，应用于快速动态成像在适合不过。 DMi8
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小鼠脾脏切除模型
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
疾病动物模型是研究人类疾病发生发展机制、药物筛选及疗效评价必不可少的工具，好的疾病动物模型可以加快新药的研发速度。你还在为不知道选择什么小鼠模型发愁吗？你还在为造模发愁吗？赛业生物新栏目《每周一鼠》上线啦，每周更新，为大家讲解一个疾病小鼠模型的故事，希望对大家了解不同的疾病小鼠模型有所帮助。今天和大家见面的是小鼠脾脏切除模型。 脾脏，作为机体隔实性的储血性器官兼机体重要的淋巴免疫器官，呈扁椭圆形，暗红色、质软而脆。具有储存血液、消化吸收、传输营养物质、运化水液、产生免疫物质、淋巴细胞等功能。 脾位于腹腔的左上方、左季肋区胃底与膈之间，恰与第9-11肋相对，其长轴与第10肋一致。 目前，脾脏切除术广泛应用于脾外伤、脾局部感染、良性的（如血管瘤）或恶性的（如淋巴肉瘤）肿瘤、囊肿、胃体部癌、血液病、肝内型门静脉高压症合并脾功能亢进等疾病。脾切除对于免疫功能、脂肪代谢、肝再生、肝硬变和肝细胞凋亡等发病机制的研究有重要意义。 小鼠作为常用的实验动物，其基因型不仅与人类基因组相似度高达90%，还具有繁殖能力强、生殖周期短、遗传背景简单清晰等优点。故小鼠脾脏切除模型具有相当大的科研价值。 模型简介 脾脏切除短期内可引起造血功能下降、白细胞等免疫细胞数量下降等病理现象。脾脏切除术主要先分离脾动、静脉，以及脾膈韧带，然后将其结扎或烙断即可。 模型特点 该方法成熟稳定、操作方便、造模时间短、成功率高，但是操作不熟练容易伤及胰腺、迷走神经，引起动物术后死亡。 手术操作 第一步：打开左侧腹，暴露脾脏 第二部：分离脾动静脉、脾膈韧带 术后表征 血常规 图1. 模型组术后8w、10w、12w白细胞数量明显下降，术后10w体内出现炎症引起白细胞增多，但并未超过正常小鼠的白细胞水平，说明脾脏切除可明显降低小鼠免疫应答能力。 图2. 模型组术后8w、10w、12w造血功能稍有下降，红细胞形态较不均一，说明脾
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2020国自然代谢组学和蛋白质组学等四大组学概况
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
1.2020年国家自然科学基金简况 依据国家自然科学基金委员会官网2016-2019年度报告显示，我们国家每年国自然资助金额增长约7.2%，小趣预测2020年国自然资助总金额约354亿元，2021年将达到379亿元。 2.2020年代谢组学方向国自然简况 代谢组学作为组学领域的研究热点，近几年国自然资助的项目数和项目金额都保持了较好的增长。2020年代谢组学相关项目的数量达到2490项，金额高达18.03亿元。（依据公开资料整理，下同） 3.2020年蛋白质组学方向国自然简况 蛋白质组学作为组学领域经典的研究手段，近几年国自然的资助金额稳中有升，总体上保持了近20亿元的规模。相信国家每年在蛋白质组学基础研究中这么多的投入，蛋白质组学临床产品的产业化也是指日可待。 2020年，比较热门的宏基因组学和单细胞转录组学国自然的资助金额也分别达到了17.31亿元和27.04亿元。 4.2020年四大组学方向资助排行榜 2020年四大组学（包括代谢组学、蛋白质组学、宏基因组学、转录组学）去重后的总资助金额约为33.14亿元，总数量约为5633项。 各省获得的资助金额及数量如下： 2020年国自然四大组学各单位资助金额前100名见下表： 5.结语 虽然国家自然科学基金的金额和数量每年都有所提升，但并不表示国自然的申请越来越容易，相反，国自然评审对于项目的创新性、质量等的要求越来越高。最近，小趣也有幸参与了一些国自然申请标书的讨论，和大家分享一个感悟：创新非创意，创新更多的是关注能否解决实际工作中发现的科学问题？是否能产生科学价值和科学成果？是否能有应用前景或解决卡脖子的技术问题？毋需盲目追求新的理论，新的学说及新的流派。 明天就是国自然提交的最后期限，在此提前恭贺获得国自然资助的各位老师，祝福大家科研顺利，Paper高发！ 尚未中标的老师们，保持从容，来年再战，小趣一直都在你身边。路漫漫其修远兮，杂（咱）酱（将）上下而求索。
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pH校准标准操作程序 （SOP）
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
pH校准标准操作程序（SOP）的目的是为常规校准步骤提供一个方法，以保证pH测试的精度。 设备 pH计 pH电极和温度电极 磁力搅拌器和搅拌子 50毫升的烧杯和200毫升的废液杯 pH 4.01 缓冲液或同等缓冲液 pH 7.00缓冲液或同等缓冲液 pH 10.01 缓冲液或同等缓冲液 表面皿或封口膜 去离子水或者超纯水 校准频率 至少要在使用仪器进行测量前的当天进行校准。在一天测量结束时进行校准后检查，以确定仪器是否偏离校准。 pH校准和测试建议 1. 根据样品的pH值选择合适缓冲液标准液，样品的pH值应该在选择的缓冲液值之间。如果样品的pH值未知，则需要三种标准品进行校准：一种接近于7pH值，一种至少低于5 pH值的缓冲液，另一种至少高于9pH值的缓冲液，如果样品的pH值不在选择的校准溶液范围内，那么需要重新选择合适的校准溶液。 2. 如果电极是可填充的，请在校准和测量过程中打开填充孔，以确保填充液通大气。电极内部的填充液液位必须比缓冲液或样品液位至少高出两厘米。 3. 在校准/测试缓冲液或样品之间，用去离子水冲洗，并用滤纸吸去多余的水。然后再放入下一个缓冲液或样品。不要摩擦或擦拭电极玻璃球泡，减少极化引起的误差。 4. 请勿重复使用缓冲溶液，也不要将使用过的缓冲溶液倒回到原来的存储容器中。 5. 用磁力搅拌器适度匀速地搅拌缓冲液或者样品。 电极的准备 根据电极用户指南或说明书中的说明准备pH电极。校准之前，将电极存放在pH电极保存液中。 校准缓冲液准备 1.在校准之前，将约30 mL的pH 10.01缓冲液倒入50 mL的烧杯中，并用表面皿或封口膜覆盖烧杯。 2.在校准之前，将约30 mL的pH 7.00缓冲液倒入50 mL的烧杯中，并用表面皿或封口膜覆盖烧杯。 3.在校准之前，将约30 mL的pH 4.01缓冲液倒入50 mL的烧杯中，并用表面皿或封口膜覆盖烧杯。 4.再分别将约30 mL的pH 10.01、7.00和4.01缓冲液倒入单独的50 mL烧杯中。在校准过程中，将这三个烧杯中的
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