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新冠"超级实验室"Helix进行高通量COVID-19检测的秘密
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
Helix公司成立于2015年，作为“基因APP Store”的开创者，是测序巨头Illumina旗下的一家子公司，疫情期间Helix获得FDA应急使用授权（EUA），可以使用基于NGS的COVID-19检测。 FDA应急使用授权摘要 Helix的体外诊断试验旨在检测鼻咽拭子、口咽拭子等上呼吸道标本中SARS-CoV-2 刺突蛋白(S)基因(以及人内参RPP30)。 Helix的CLIA / CAP实验室平台，将提供基于Illumina NovaSeq 6000的NGS检测。该检测方法使用Thermo Fisher Scientific公司提供的RNA提取和反转扩增试剂，以及Integrated DNA Technologies公司的定制引物。FDA应急使用授权中规定，Helix COVID-19 NGS检测可使用SPT Labtech mosquito HV genomics移液工作站进行液体处理。 Helix已从美国国立卫生研究院（NIH）的RADx计划中获得了3340万美元的资金支持，成为美国COVID-19“超级实验室”之一 。 Helix的CEO Marc Stapley表示“在全国范围内进行更快速、更可靠的COVID-19检测是现在迫切需要的。通过NIH的资助，将使Helix能够迅速扩大规模，高通量的检测方法和先进的实验室设施可以达到每天10万份样本的检测量，使其成为美国最高通量的COVID-19实验室之一。” COVID-19 NGS 检测流程 此外Helix与加州大学圣地亚哥分校（UCSD）合作进行了COVID-19多重荧光定量PCR（multiplex real time RT-PCR）检测，使用了TaqPath COVID-19 CE-IVD RT-PCR试剂盒，利用了mosquito添加1μL PCR mix和2μL RNA样本，最终将反应体系从25μL微缩化至3μL，每个样本节省了8倍的成本！ 手工加样与mosquito自动加样微缩化体系对比 HELIX和UCSD COVID-19多重荧光定量PCR检测流程 SPT Labtech公司的mosquito genomics移液工作站凭借其小体系加样的精准度和稳定表现，已成为众多基因组学实验室的理想选择。其独有的固相置换技术，可以无视任何黏度的试剂或DNA，对25nL-5μL样品进行精确加样，并且不需要进行任何液体参数的调整。 它正在改变基因组学实验室的工作方式——mosquito能够精确
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独立式显微镜摄像头的优势与应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
光学显微镜 光学显微镜的应用广泛，从工业生产到科研教育，随处可见光学显微镜的身影。确实，这类显微镜在对于样品及其零部件的质量控制当中发挥着至关重要的作用，例如电子产业的样品和零部件检测就经常用到光学显微镜。显微镜检查或质量控制能够让用户意识到零部件的生产是否正确，同时来判定样品的目标性能存在的缺陷和污染是否是因为存在粉尘或其他颗粒物干扰所造成的。 但是，在目镜下检查样本后再转到别处记录观察发现，数小时里如此反复，实在让人精疲力尽、应接不暇。利用数字摄像头在高清显示器上显示显微镜图像则能极大缓解这样的缺点。 但时至今日在图像的查看、记录和共享方面依然需要使用到PC。这样的要求就非常的具有挑战性，尤其是在仅需偶尔使用显微镜的情况下，用户在打开PC时往往要面对数百款软件的更新升级，这不仅非常的耗时，也非常令人沮丧。同时，PC硬件和IT基础设施的维护也是非常耗时的。PC的使用会增加检查的时间和精力消耗，而且对高效和无缝的质量控制流程构成实质性的障碍。如果在多个生产场所采用此类工作流程，则这种负面影响可能会进一步增加。 但是现如今，徕卡显微系统终于推出了一款灵活的独立式显微镜摄像头来扫清这些障碍，因为这款显微镜摄像头让PC变得不再是必需品。这种“智能”数字摄像头可以快速轻松地装配到显微镜上并将数字图像直接传输到显示器上，整个过程无需使用PC。使用简单直观的屏显（OSD）工具即可对显示器进行调节和操作。图像的采集仅在数秒之内即可完成。 此外，摄像头还可通过OSD来方便用户直接在图像上进行注释。标线、十字光标或自定义的覆盖层都可以放置在图像上以便进行直接连续地比较样本和标准参考图像。在12 MP CMOS传感器的帮助下，得以捕获到色彩真实，分辨率高的图像。 此外，PC设置、集成和维护等耗时耗力、成本高昂的工作都成为了历史，整个检查过程变得更加的顺畅。将摄像头安装在显微镜上以后，只需要通过摄像头的HDMI端口连接监视器
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蛋白纯化系统化常见问题总结
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
使用Blupadstart蛋白纯化系统过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。 1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50%～60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀，我用0.5%CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的蛋白疏水性比较强。 既然是疏水性很强你可以加点甘油或者乙二醇降低极性，这样溶解就会好得多，此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性，同时保护你的蛋白，你再做纯化就可以了，我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG-5000，这样的情况下蛋白还是活性回收率很高，我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好，你失去活性你可以监测一下提取，纯化，酶切到底哪里失去了活性，这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值，看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白有沉淀那你可以稍微把蛋白的浓度降低点，这也是个办法。 2)请问有没有合成过配体为FMN的亲和胶? 亲和的填料合成过20来种，你是希望用它来纯化某种脱氢酶吗，我看FMN可偶联的有限，倒是FAD有活泼的氨基好偶联，何况它们几乎是同一个辅酶，你是不是考虑把FAD连上去。当然FMN的结构上也有个仲胺，可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上，而溴化氰活化或别的活化的介质都不大好，因此我觉得这个没有什么问题。 此外如果是以FMN为辅酶的，那我还可以建议你试试蓝色琼脂糖凝胶，因为它的配基的结构和FMN的三个环很相似，它能纯化不少脱氢酶和激酶。 相应的偶联的材料，要自己合成亲和填料，有很多公司都提供活化好的介质，自己偶联就可以，其中比较常用的有启维益成公司的溴化氰琼脂糖凝胶，环氧琼脂糖凝胶，氨基琼脂糖凝胶，羧基琼脂糖凝胶，活化酯琼脂
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多功能平铺光片显微镜在透明组织成像应用中的优势
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
生物组织的高分辨率3D荧光成像在亚细胞、细胞和组织水平上为基因表达、细胞形态和细胞在组织中的分布研究搭建了桥梁。组织透明化方法将生物组织透明，并结合最新的3D荧光成像技术实现了组织结构可视化。 尽管这种结合有诸多好处，但在3D组织成像应用中仍存在挑战：(1)在对厘米级样本进行微米级或更高分辨率成像时，传统光片显微镜成像效率不高；(2)传统光片显微镜难以兼容所有的组织透明化方法透明的样本；(3)不能实时校正由不同成像液的折射率变化引起的偏差，优化不同样品的成像性能；（4）显微镜仪器校准程序复杂且较为困难。2020年11月3日，西湖大学高亮实验室团队在Cell Reports上发表文章A Versatile Tiling Light Sheet Microscope for Imaging of Cleared Tissues，介绍了一款具有半自动校准能力的多功能平铺光片显微镜，它能够对所有组织透明化方法透明的样本组织进行多色快速3D成像，并且成像的空间分辨率达微米级（4×4×10μm3）甚至亚微米级（0.3×0.3×1μm3）。另外，通过组织膨胀技术，平铺光片显微镜的分辨能力可提高至小于100nm（70×70×200 nm3）。 文章指出，平铺光片技术很好地解决了上述问题。不同于其他的光片显微镜，平铺光片显微镜不仅在透明化大组织样本的3D成像上呈现更好的效果，而且可以大范围内更加简单的优化和调节成像品质，可以更方便的应用在不同领域。 那么，与其他的光片显微镜相比，平铺光片显微镜有哪些特点呢？ 1） 和传统的光片显微镜相比，相同的成像时间里，采用平铺光片显微镜成像样本可提高空间分辨率以及成像效率。 2）通过变换不同NA的检测物镜，放大倍数，以及调整激发光片，平铺光片显微镜可以实现对厘米级的组织样本进行从微米级到亚微米级空间分辨率的成像，而利用组织膨胀技术可以进一步提高成像分辨率。 3）通过空间光调制器对激发光片进行相位调制，用于创建和优化样品照明的平铺光片。 4）显微镜具有半自动校准功能，保证了成像的准确性、可靠性和易用性； 5）显微镜
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SPT 移液工作站+Thermo Collibri试剂盒打造低成本自动化NGS建库方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
SPT Labtech宣布与Thermo Fisher Scientific合作，推出低成本自动化NGS建库解决方案 文库制备成本在如今大规模的NGS研究费用中所占的比重越来越重，经费和成本的限制阻碍了科学家对传染病监测、癌症研究等领域更深入探索的步伐。SPT Labtech宣布与Thermo Fisher Scientific进行市场合作，旨在构建自动化的文库制备方案，以期提高建库成功率，并降低variant检测的费用。 高灵敏度的variant检测现在可以通过使用SPT Labtech的mosquito HV genomics和dragonfly discovery系统进行自动化建库，将反应体系微缩化，减少试剂使用量，降低1/10的成本，从而能够在一组样本中添加更多的replicates，提高建库成功率和测序数据质量。 此项方案将首先支持用于Illumina系统的Invitrogen Collibri全基因组测序文库制备试剂盒，以及Collibri文库定量试剂盒，包括SARS-CoV-2研究、癌症研究中拷贝数变异以及其他突变检测的应用。 更高的效率 SPT Labtech的mosquito HV genomics和dragonfly discovery系统可以快速编程，24/7全天候进行样本制备工作，解放研究人员的时间。 图：dragonfly discovery、mosquito HV genomics 及NGS实验set up专用软件 更高的成功率 使用SPT Labtech设备进行微缩化建库，可将试剂的用量体积减少多达10倍，从而可以用不到1个样本的成本，做5–6个replicates。样本重复数量的增加，保障了即使某个样品在flow cell上测序失败，仍有其他样品的数据可以使用，无需再重新准备样本展开测序，从而确保了实验一次成功。Invitrogen Collibri NGS文库制备试剂盒中每种试剂含有一种示踪染料，通过颜色变化可清晰观察文库制备过程，避免高代价的实验失误。 图：dragonfly discovery每个通道可以独立进行试剂分配 更微量的样本 SPT Labtech设备独有的固相置换技术可以精确地处理微量液体，对0.5uL的粘稠样本都有着极高的加样精度。Invitrogen Collibri全基因组测序文库制备试剂盒可从1 ng的样本起始
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免疫损伤后的T细胞再生
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
化疗，放疗，感染等，引起免疫系统的损伤，之后免疫系统的重建，尤其是T细胞再生恢复，与病人预后密切相关。但是，损伤之后，适应性免疫，尤其是T细胞的恢复，比起天然免疫细胞要慢很多。 免疫损伤的因素 感染 健康机体，免疫细胞通过再生和死亡实现平衡。在感染发生后，这种平衡被打破。 感染发生后，造血干祖细胞（HSPCs）通过模式识别受体直接感知病原体，或者间接通过感知下游细胞的消耗，补充免疫细胞。 急性感染，HSPCs更多分化为粒细胞，在脓毒血症，导致早期胸腺祖细胞清除，淋巴细胞减少。 胸腺细胞和基质细胞本身也是病原体喜欢攻击的目标，尤其是CD4+CD8+双阳胸腺细胞和D24hiCD3lowCD8+单阳胸腺细胞，而成熟的CD24mid/lowCD8+单阳细胞是耐受**的细胞。应激反应激素(如糖皮质激素)，促炎介质(如IFNγ，TNF-α）和凋亡途径(如介导的由BAX，BCL-2，p53，caspase8和caspase9)参与其中。 寨卡病毒，麻疹病毒等，也会攻击胸腺基质细胞（mTECs，cTECs)，引起增殖，分化，迁移等改变。 新冠肺炎中，中国科学家也发现，淋巴细胞数量减少和炎症因子（IL-6，IL-8）相关。 文献1 急性感染引起的胸腺萎缩通常是暂时的，但是像HIV等慢性感染可能会引起不可逆的胸腺萎缩。 细胞消融疗法 放疗，化疗，细胞清除抗体**等方法，被用于清除恶性细胞。造血干细胞移植前，也需清除免疫细胞，尤其T，B细胞，以提高移植成功率。 清除造血干细胞和淋巴祖细胞，会导致胸腺T细胞和骨髓中B细胞的发育长期受损，甚至会加速胸腺的退化。 另外环磷酰胺，放疗，也会清除胸腺基质细胞cTECs 和 mTECs，此二者是T细胞发育阳性选择和阴性选择所需要的。 免疫衰老 随着年龄增长，免疫系统衰老，功能下降，易发生感染，同时对于疫苗的免疫应答不足。 免疫功能下降的因素： 造血干细胞归巢，植入容量下降 胸腺祖细胞数量也会减少，不能从骨髓稳定的输出，导致T细胞减少 胸腺基质细胞
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大脑中动脉远端阻塞模型制作及评估
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
建立具有简便、可靠、重复性好、稳定性高的大脑中动脉远端阻塞模型，有利于脑缺血病理生理学的研究，也可以利用该模型对各种预防、**脑缺血的方法和药物进行评价。本次介绍的大脑中动脉远端阻塞模型是利用双极电凝或者手术缝线将大鼠(或小鼠)的大脑中动脉主干进行电灼或结扎以阻断其供血。该模型具有脑梗面积及部位重复性好、物存活率高、梗死体积相对较小等优点，能较好地模拟临床卒中特点。 1.动物选择 大鼠 可选择封闭群大鼠，如SD、 Wistar等；也可选择近交系大鼠，如ACI、BN、F344、WKY及SHR等。实验常用SD、 Wistar和SHR大鼠。 小鼠 可选择封闭群小鼠，如ICR、NIH、LACA、KM(昆明)小鼠等；也可选择近交系小鼠，如C57BL/6J、DBA/2、BALB/c、中国1号(C-1)、津白1号(TA1)等。 2.制作步骤 大鼠手术操作步骤 l 大鼠称重后放置在一个小笼内，在医用级氧气或者含有1%~2%异氟醚的30%氧气和70%二氧化氮的混合气体中进行诱导麻醉。 l 将左边头部毛发剔除，局部皮肤用0.5%聚烯吡酮黄和75%乙醇或者是2%氯己定（蓝色溶液）消毒。 l 将大鼠移至手术台或者手术垫，利用面罩，用医用级氧气或者含有1%-2%异氟醚的30%氧气和70%二氧化氮的混合气体进行吸入麻醉。然后将大鼠放置呈右侧卧位，在左侧眼外眦至外耳道之间做一长约2cm切口(见下图)。 (a)大鼠右侧卧位，四肢固定于手术台；(b)箭头示手术切口部位，直径为2cm l 显露颞肌，可见颞神经、颞浅动脉、颞浅静脉覆盖在颞肌上；钝性分离并牵开颞肌，注意避免损伤颞神经、颞浅动脉及颞浅静脉，暴露颞骨；显露颧弓，并用咬骨钳去除大部分颧弓；显露颞下窝，将下颌支及周围肌肉牵开，以增加显露的颅骨；可见下颌神经跨过颞下颌关节进入卵圆窝。 l 以卵圆窝或者下颌神经前方3cm、侧方1cm的鳞骨上的点为中心，钻一直径为4~6mm的小孔，使该孔接近弓状缘，细心将该孔钻至深度0.5~1.0mm，钻孔过程中感受颅骨的弹性和柔软性，并经常用盐水浇注，以试探是否将颅骨钻透。在该小孔可见
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常用植物生长调节剂配置注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
植物生长调节剂是用于调节植物生长发育的一类化学物质，包括人工合成的化合物和从生物中提取的天然植物激素。植物生长调节剂通常可在植物体内传导至作用部位，以较低的浓度就能促进或抑制其生命过程的某些环节，使之向符合人类的需要发展。 植物生长调节剂主要分为：生长素、细胞分类素、赤霉素、脱落酸等。低浓度生长素促进植物生长，高浓度生长素抑制植物生长；细胞分裂素促进细胞分裂和调控其分化，诱导芽的形成和促进芽的生长；赤霉素打破种子休眠，促进种子萌发；脱落酸促进落花落果，促进球茎和块茎的形成。值得注意的是有些植物生长调节剂在高浓度下和低浓度下对不同植物所起的作用也会有所不同，所以用量需要根据具体实验来选择合适的植物生长调节剂的类型及使用浓度。 西美杰作为美国知名培养基供应商PhytoTech中国区总代理，为广大植物学客户提供常用培养基、抗生素、碳源外还提供组培实验中的“重点要素“——植物生长调节剂。下表例举了常用生长调节剂的配置方法和灭菌方式，以帮助大家解决实验中可能遇到的问题。 产品名称 货号 配置方法 灭菌方式 吲哚乙酸（IAA） I885 用适量KOH或NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度 抽滤灭菌 吲哚丁酸（IBA） I538 用适量KOH或NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度 抽滤灭菌 α-萘乙酸（NAA） N600 可用少量KOH彻底溶解后，再加水定容到一定浓度 可高压灭菌 2，4-D溶液 D309/D295 溶液形式，直接加水定容 可高压灭菌 6-BA B800 先溶于少量50 mM KOH中，再加水定容 可高压灭菌 2ip D525 先溶于KOH中，再加水定容 可高压灭菌 激动素（KT） K750 先溶于少量50 mM KOH中，再加水定容 可高压灭菌 噻苯隆（TDZ） T888 先溶于少量DMSO或KOH中，再加水定容 抽滤灭菌 玉米素反式 Z125 先溶于少量10mM
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如何评估共聚焦光学截面厚度
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
共聚焦显微镜用于光学切片比较厚的样本。最直接的问题是：1. 什么是“比较厚的样本”；2. 光学切片到底有多厚？这两个问题在一定程度上是相关的，即假设一份厚样本至少比光学切片厚10倍。 生物样本的厚度可以从10米（整只动物）到10纳米（电子显微镜的超薄切片制备）。由于共聚焦显微镜采用了入射光的方法，样本本身的尺寸可能有几厘米或更多，但表面下方的穿透深度取决于材料的不透明度和物镜的工作距离。这就限制了样本大小（z方向），只能考虑使用厚度最多为几毫米的样本。 光学切片的决定因素是衍射极限。根据各种不同的参数，共聚焦扫描显微镜的真正光学截面厚度可达到约0.5毫米。标准共聚焦应用（如组织切片）当中常用的样本厚度为50 µm以内。 3D点扩散函数（PSF）和半高宽（FWHM） 图1：z方向上强度分布的半高宽（FWHM）用作光学切片性能的衡量指标之一 点扩散函数通过足够小的荧光小球生成，通过收集xz剖面图的强度来加以记录。上图显示了衍射图中心的强度分布（红色），并对50%数值之间的z方向距离进行测量（介于绿色线段之间）。 由光学系统产生的点（光斑）的图像称为“点扩散函数”（PSF）。点扩散函数描述了来自极小光斑的光在三维空间中的分布。这个衍射模型的中心是一个椭球形，影响着光学分辨率。径向尺寸决定横向分辨率，轴向尺寸决定聚焦深度，进而决定切片性能。 对于共聚焦截面切片，其目的在于只传输PSF的内核部分，即所谓的光学切片。实际上，针孔直径可控制从内核外传递的光量。因此，处在衍射模型大小范围内的光学切片很明显不会出现类似于面包片的锋利边缘，但仍然存在着同等扁平斜率的特征。连接强度曲线两侧50%强度的z距离称为“半高宽”（FWHM），而按照惯例，用于测量光学切片的厚度。光学切片的性能通常要通过聚焦在镜面上来进行测量，镜面用于模拟z方向上无限薄的结构。这种方法相对较容易实现并且可用于检查共聚焦显微镜系统的性能。从更为现实的角度进行考虑，z切片性能还可以
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流式细胞术FCM在染色体倍性分析上的优势及实验步骤介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
倍性育种，指通过改变染色体的数量，产生不同的变异个体，进而选择优良变异个体培育新品种。正常的配子细胞中所包含的染色体数或半数的体细胞染色体数称为一套单倍染色体，用符号n 表示。具有一个染色体组的细胞和由这样的细胞组成的个体称为单倍体(n) ，具有两个染色体组的细胞或个体称为二倍体（2n），具有两个以上整套染色体组的细胞或个体则称为多倍体，包括三倍体（3n）、四倍体（4n）等。 传统的倍性鉴定主要采用常规压片法统计染色体数目，但采用这种方法很难寻找到分裂中期染色体分散良好并可进行计数的细胞，而且整个过程耗时长，检测效率低。采用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）进行倍性分析的方法简化了倍性分析的过程，可以快速准确检测同一物种范围内不同倍性的样品。FCM作为一项快速、高效的检测技术，被广泛应用于细胞分类学、植物遗传学及植物生理学等研究领域中。FCM常被用于鉴定植物倍性水平，通过检测植株G0/G1峰的细胞核DNA含量可以判断出植物的倍性。 实验原理 首先需要裂解液将组织中细胞核释放出来，并打开DNA链，然后用DAPI染液将细胞核DNA上的A-T 碱基对特异性染色，再用仪器检测出被染色的A-T碱基对发出的荧光强度。比如二倍体的荧光强度是100（横坐标），那么单倍体的荧光强度就是50（横坐标）。纵坐标是细胞数量的显示，通常来说，信号峰高说明信号比较好，杂质少。 倍性=待测样本的峰值/参照物的峰值*参照物倍性 e.g. 100/50 x 2n = 4n 实验仪器设备及方法 实验步骤如下： 样品准备 植物样品准备：叶片的新鲜程度直接影响实验结果。由于次生代谢产物的影响，会导致信号峰过宽，甚至检测不到信号峰的情况。嫩叶的选择要选取新鲜、完全舒展开、无虫咬、无枯萎、分裂不活跃的部位实验结果： 鱼类样品准备：大鱼可以取血液样本检测，或者取鱼组织检测，切取0.5cm2大小的新鲜鱼肉即可。 贝类样品准备：贝类大样本可以直接撬开贝壳，取贝的新鲜组织作为样本。贝类幼
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耳鸣动物模型的建立方法及声音惊跳反射检测法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
耳鸣动物模型的建立方法及声音惊跳反射检测法 一.耳鸣动物模型的建立方法 虽然有多种方式可诱发耳鸣，但目前采用的多是噪声和耳毒性药物这两种方法。在此基础上建立的动物模型不仅可以检测耳鸣诱导是否成功，还可以研究药物**耳鸣的疗效、耳鸣相关的神经生理学机制等。 1.水杨酸诱导的耳鸣 经研究发现几乎所有大量使用水杨酸的风湿病患者都发生了耳鸣伴暂时性听力下降。理论上，可以导致人类耳鸣的药物也可以诱导动物产生耳鸣，因此目前建立的耳鸣动物模型很多是由水杨酸诱导的。水杨酸对耳鸣的诱导作用呈剂量依赖性，诱导耳鸣的最小有效剂量可因动物的种属、注射时间的长短而产生变化，从而产生急性、可逆性的耳鸣，其耳鸣感觉与宽带噪声相似。水杨酸的药代动力学显示水杨酸在脑脊液中的浓度水平较血清中晚２～４小时出现，因而在听觉系统中的作用也在水杨酸注射后2小 时左右发生，这个过程是可逆的，大部分在１-２天后消除。 2.噪声诱导的耳鸣 有资料显示，噪声虽然可使毛细胞保持完整性，但会损害相应的传入神经末端，并进一步损害蜗神经，使神经同步放电活动增加，传入兴奋抑制失衡，导致中枢神经的重塑。在听觉敏感的频率范围内，中间频率较阈值频率的噪声更易诱发动物耳鸣。由噪声诱导的急性耳鸣频谱较宽，频率高于噪声频率，急性耳鸣消失后，即使噪声刺激消失，若干年后依然可能产生慢性耳鸣，它的频谱限制在一个较窄的范围内。即使噪声是纯音，它诱发的耳鸣频谱依然是宽带的。 二. 以惊跳反射为基础的耳鸣动物模型的检测 听觉惊跳反射 惊跳反射是动物被突发的强感觉刺激诱发的一种全身防御反应，一般表现为面部及躯体肌肉的快速收缩，常伴随着当下行为的中止以及心率的增加，可由多种感觉模式诱发。听觉惊跳反射可被瞬间增强的声刺激诱发，一般采用１００ｄＢ及以上的宽带白噪声刺激。人类多用眨眼反 射 作为ＡＳＲ的反应指标，通过测量眼轮匝肌肌电图的波幅和潜伏期来表示，而啮齿类动物则通过底板传
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肠道病毒通用型（EV-U）扩增检测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
肠道病毒通用型（EV-U）扩增检测试剂盒说明书 技术原理： DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。 在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性） 发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。 特点优势： 1.特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。 2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。 3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。 4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。 5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。 需要自备
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二血管阻塞慢性脑缺血模型的制作
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
二血管阻塞慢性脑缺血模型 本文介绍模拟慢性脑血流低灌注所致病理生理改变及认知障碍的啮齿类动物模型，包括大鼠双侧颈总动脉结扎和小鼠双侧颈总动脉狭窄模型。其中，大鼠双侧颈总动脉结扎模型通过结扎大鼠双侧颈总动脉实现，小鼠双侧颈总动脉狭窄通过在小鼠的双侧颈总动脉植入钢制线圈实现。结扎大鼠双侧颈总动脉造成脑血流的下降并能较好模拟慢性缺血所致的病理改变，操作简单、重复性好、死亡率低，被广泛用于慢性脑缺血的研究。该模型可造成脱髓鞘改变、轴突丢失、胶质细胞增生等白质损伤的病理改变。 此外，将结扎大鼠双侧颈总动脉与降低平均动脉压(降至50mmHg)结合，并在缺血10~30min后重新恢复血供，可用于模拟前脑缺血。该模型可引起脑内易感脑区神经元的选择性、延迟性死亡，包括新皮质、海马CA1区的锥体神经元以及尾侧壳核。其中，海马神经元损伤与记忆受损及认知障碍密切相关。该模型所致的神经元选择性损伤可通过组织学和行为学检测方法进行评估。二血管结扎模型手术步骤简单、再灌注操作容易，故较四血管结扎模型更具优势。 一、动物选择 大鼠 在建立大鼠二血管结扎的动物模型时，必须考虑动物的品系、性别以及年龄。由于雌激素对缺血结果有影响，通常选用雄性大鼠。在二血管结扎的动物模型中，最常用的动物是250~300g的雄性 Wistar大鼠。Sprague-Dawley(SD)大鼠和其他品系的大鼠亦可用于本模型的制作。 小鼠 常采用雄性C57BI/6小鼠，体重为24-30g。此外，沙鼠是较为常用的品系。由于转基因和基因敲除小鼠大多来源于C57BI/6品系，为了研究基因在慢性脑缺血病理生理机制中发挥的作用，故目前多用C57BI/6小鼠制作该动物模型。 二、制作步骤 1.大鼠手术操作步骤 所有操作均在无菌条件下进行。手术人员应戴口罩和无菌手套，穿无菌隔离衣。术前所有手术器械均应灭菌且在手术过程中存放在无菌溶液中，如恶霉灵溶液。 大鼠二血管结扎模型操作步骤 (a)大鼠头颈部血管及结扎部位示意图； (b)动物呈仰卧位
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合适的手术器械如何维护保养？
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
手术器械生锈是厂家和使用者关注的重点及痛点。生锈的本质是手术器械表面致密的一层氧化膜（保护膜）的破坏。手术器械材质中含铬，器械表面的保护膜实际是一层致密的氧化铬，氧化铬被破坏，器械表面直接空气接触，生锈概率大大增加。那针对器械防锈这一块，瑞沃德手术器械是怎么做的呢？ 1、材质 瑞沃德的手术器械材质采用的是优质进口不锈钢和人体生物相容性极好的钛合金，其中不锈钢材质的手术器械铬、碳含量均超行业标准，表面生成致密氧化铬保护膜的同时，也增加了器械的硬度，剪、切类器械硬度可达50HRC以上，能提高器械防锈能力，保证器械使用寿命。钛合金材质的手术器械，抗氧化性能好，保护里面金属不受腐蚀。 2、工艺 器械的磨损，也是破坏器械表面保护膜的常见的因素，磨损的因素有很多：手术量大，使用频率高，使用操作不规范；反复处理（清洗，消毒等操作）；器械处理过程中人为的一些因素（撞击等）。瑞沃德的手术器械采用PVD镀膜技术，该工艺大大增加了手术器械的表面硬度，从而耐磨损。同时瑞沃德钛合金手术器械采用了表面等离子加硬工艺，钛合金手术器械质软，该工艺更增加器械刃口硬度，从而提高器械的耐腐蚀和耐磨损能力。 3、维护保养 专业的器械维护保养能让手术器械的使用寿命得到有效保障，瑞沃德拥有自己一套专业完整的手术器械维护保养流程。 常规维护方法 1）【清洗前预处理】 手术结束后，先用多酶清洗剂浸泡5-10min后，使存留在器械表面和机械连接部位缝中的污物分解和软化，切忌直接浸泡在热水、酒精、消毒剂或防腐剂中，这样会使黏液、血液或其他体液发生凝固，影响下一步的清洗；复杂难处理的部位，可先拆开器械，拆开后保管好每一个部件，以便处理后进行组装。 2)【清洗】 用流动的蒸馏水（切忌用生理盐水）冲去肉眼可见的血污，冲洗过程中，需打开器械的各个关节，便于清洗彻底；清洗过程中避免器械之间碰撞，不能使用钢刷或颗粒清洗剂，防止损坏器械防腐蚀性膜层；铰接器械(
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浸渍镀膜法：快速制备纳米颗粒薄膜的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
纳米颗粒薄膜在防反射、防雾、自清洁等多功能涂料领域中应用广泛。它也被频繁用于生产，例如材料保护层，防止金属腐蚀等方面。如何制备这些纳米颗粒薄膜是值得考虑的问题。我们通常很难从目前的几种制备方法中选出最适合自己应用的方法。但如果薄膜的堆积密度不是首先需要考虑的问题时，浸渍镀膜则是目前最简单的纳米粒子涂覆基材的方法。更多百欧林纳米薄膜沉积解决方案，请查看产品页。 浸渍镀膜工艺流程 理论上，浸渍镀膜非常简单。将基材垂直浸入含有纳米颗粒的溶液中。首先让基材保持浸没在溶液中，并留出一些时间进行纳米颗粒沉积；之后，将基材从溶液中提拉出并使其干燥。但是，当需要精确控制沉积材料在基材上的性质时（厚度、沉积密度等），浸渍镀膜的过程也有几个因素需要考虑。 浸渍镀膜过程一般分为三个步骤： 基材浸入 纳米颗粒吸附和基材表面溶剂排出 溶剂挥发 基材浸入 基材的浸入通常是采用垂直浸入的方法。但为了得到不对称的沉积厚度，还可以采用不同角度的倾斜浸入方法。浸入通常由计算机程序控制，以实现自动浸入和恒定的浸入速率。浸入后，将基材保留在溶液中，留出足够的时间完全润湿基材。基材和纳米颗粒表面的物理化学性质都会影响需要浸渍的时间长短。 纳米颗粒沉积 在浸没完成之后，将基材从溶液中提拉出。基材提拉的速度会影响镀层的均匀性，较高的提拉速度会导致镀层较厚。因此，在基材提出的整个过程中应该保持速度恒定，并且避免任何振动。 溶液的浓度也是重要的影响因素。浓度太低会导致基材的镀层不均匀，高浓度溶液会引起溶液相中的纳米颗粒团聚，从而导致纳米颗粒的多层自组装。因此，合适的溶液浓度对保持镀膜的均匀性也十分重要。 在某些时候，可能还会通过将基材浸入多次，从而制备多层薄膜。也可能需要通过加入不同浸渍溶液来生产具有类复合材料的多层薄膜，这些功能都可以使用我们的多杯浸渍镀膜机实现。基材表面溶剂此时会被排出。 挥发 挥发阶段是使溶剂从制备的基
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