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BRGSF小鼠背景回顾 BRGSF（BALB/c Rag2tm1Fwa Il2rgtm1Cgn SirpaNOD Flk2tm1lrl）小鼠是目前市面上免疫缺陷程度最高的小鼠之一：Rag2和Il2rg基因的敲除使BRGSF小鼠T、B、NK细胞缺失；SirpaNOD抑制了小鼠巨噬细胞对人源细胞的吞噬作用；Flk2基因的敲除使小鼠髓系细胞组分（特别是树突状细胞，DC）大幅减少（图1）。通过在BRGSF小鼠身上进行CD34+人造血干细胞(hematopoirtic stem cell，HSC)移植，我们可以得到人免疫系统(human immune system, HIS)重建小鼠：BRGSF-HIS小鼠。   BRGSF-HIS小鼠的优势之一是其具有所有主要的人造血干细胞分化亚群：包括人源淋系细胞 （e.g., T、B、NK细胞）、人源髓系细胞组分（e.g., 传统的树突状细胞（cDCs）、浆细胞样树突状细胞（pDCs）、单核/巨噬细胞）。   因此，BRGSF-HIS小鼠可用于靶向人pDCs的抗体研发。 图1. BRGSF重度免疫缺陷小鼠。   浆细胞样树突状细胞 树突状细胞（dendritic cells，DCs）是专职的抗原呈递细胞（antigen-presenting cell，APC），也是连接固有免疫（innate immunity）和适应性免疫（adaptive immunity）的桥梁。根据功能和来源，DCs可被分为：经典树突状细胞(conventional dendritic cells，cDCs)、浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cells，pDCs）、单核细胞来源的树突状细胞（monocyte-derived dendritic cells，MoDCs）和郎格罕细胞(Langerhans cells,LCs)[1]。   特别地，其中的pDC亚群有着与浆细胞相似的形态。它主要存在于外周淋巴器官和血液循环中，能通过Toll 样受体（Toll-like receptor，TLR）：TLR-7和TLR-9来识别核酸。被激活后，pDCs能产生大量以IFN-α和IFN-β为主的Ⅰ型干扰素（interferon，IFN），因此也被称为天然干扰素产生细胞（natural interferon–producing cells）[2]。此外，pDCs也能分泌包括IL-6和TNF在内的多种促炎细胞因子和趋化因子，它们与Ⅰ型干扰素一起，对T、B和NK等免疫细胞的功能进行调控。另外，值得一提的是， pDC的发育依赖于Fms样酪氨酸激酶3-配体（Fms-related tyrosine kinase 3-ligand，Flt3-L），而我们的BRGSF重度免疫缺陷小鼠敲除了Flk2(也称Flt3)基因，阻断了这条信号通路，造成包括pDCs在内的髓系组分（特别是DC）发育受损，数量大幅减少。而这降低了HIS后人源髓系细胞与相应的小鼠髓系细胞间的竞争，因此，人源髓系细胞在BRGSF-HIS小鼠体内发育得更好。 图2. DC亚群以及相关谱系[1]   pDCs参与了多种肿瘤的发生和进展。pDCs可以发生致瘤性转化（neoplastic transformation），产生母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(Blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm, BPDCN）；乳腺癌和卵巢癌中的浸润性pDCs与不良预后相关；骨髓微环境中的pDCs能促进多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM)中肿瘤细胞的生长、存活，以及抗药性[3]。pDCs也与自身免疫疾病有关。尽管机体有很多机制来避免pDCs对自身物质的识别，但仍有漏网之鱼的出现。pDCs针对这些自身抗原释放大量IFNs，引发自身免疫疾病。   人pDCs表面高表达达CD123、CD303和CD304等分子，而小鼠pDC的表面标记则是CD11cintCD11b−B220+SiglecH+CD317+[4]。特别地，CD303是人pDCs的特异性标记物，也称血液树突状细胞抗原2（blood dendritic cell antigen 2，BDCA-2）。因此，靶向CD303的抗体有望用于**有浸润性pDCs参与的癌症、自身免疫性疾病以及炎性疾病。   Case study：构建BRGSF-HIS小鼠进行靶向人pDCs的抗体研发 2018年，Dr. Fournier等人经过一系列选择与优化，构建了一种靶向人CD303的嵌合单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）-- ch122A2[5]。   体外实验显示，Ch122A2 mAb能下调人pDCs的IFN-α分泌量（图3）。而且剂量为1ng/ml时，使用效果比Biogen公司研发的同样靶向CD303的人源化IgG1单克隆抗体（BIIB059/24F4）更好。 图3. Ch122A2 mAb能下调人pDCs经CpG刺激后的IFN-α分泌量。将5×104 个人pDCs和1 mM CpG 以及不同浓度的IgG1、24F4或ch122A2共培养。   由于CD303只在pDCs上特异性表达，因此研究人员们选用了BRGSF-HIS小鼠进行体内实验。因为BRGSF-HIS小鼠支持人源多谱系造血重建，重建后，小鼠体内不仅具有人源淋系组分，还具有包括pDCs等在内的多种人源髓系细胞组分。   体内实验显示（图4）： （1）ch122A2 mAb在BRGSF-HIS小鼠的外周血中具有快速而强烈的人pDC耗竭能力，且这个效果能维持至少3天。 （2）ch122A2 mAb在BRGSF-HIS小鼠的脾脏中对人pDC耗竭能力中等，但与IgG1 mAb对照组依然有显著性差异。 （3）h122A2 mAb在BRGSF-HIS小鼠的骨髓中对人pDC没有明显耗竭能力。   这些实验结果显示ch122A2 mAb可以通过耗竭pDCs以及下调Ⅰ型干扰素等促炎细胞因子的分泌，从而达到改善患者症状的目的，是一种十分有应用前景的特异性靶向人pDCs的抗体药物。 图4. ch122A2 mAb在BRGSF-HIS小鼠的外周血（A）、脾脏(B)和骨髓（C）中的pDC耗竭能力。   总结 pDCs是机体内Ⅰ型干扰素的主要产生细胞，越来越多的研究显示它与自身免疫性疾病与炎性疾病相关，例如皮肤红斑狼疮（cutaneous lupus erythemtosus，CLE）、系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）、干燥综合征（Sjogren syndrome）等。目前，这些疾病都没有特效药物可以**。前文提到的靶向pDCs表面特异性标记物CD303的BIIB059/24F4抗体目前正处于临床试验阶段，适应症为CLE和SLE。Biogen公布的临床2期试验结果显示，与安慰剂相比，BIIB059/24F4抗体能显著改善患者症状，而两者的严重副作用发生频率相近。这些数据都表明pDCs在机体免疫应反应中起到了重要的作用。