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m6A甲基化修饰对神经退行性疾病的重大发现
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
近年来，人们发现表观遗传上的修饰与多种疾病的发生发展密切相关。其中m6A修饰作为RNA修饰中常见的修饰，在神经系统中的研究也备受关注。近期云序客户在Environmental Pollution期刊上发表了“Global N6-methyladenosine profiling of cobalt-exposed cortex and human neuroblastoma H4 cells presents epitranscriptomics alterations in neurodegenerative disease-associated genes”文章，运用云序生物的m6A-MeRIP-seq和RNA-seq的技术阐明了CoCl2处理会显著改变涉及突触传递和中枢神经发育通路的基因的m6A修饰和表达的变化。该结果为m6A修饰在环境中神经毒物引起的神经退行性损伤中的作用提供了新的见解，从而拓宽了人们对重金属诱导RNA的表观遗传调控机制的理解。 发表期刊：Environmental Pollution 影响因子：6.792 研究方法：m6A- meRIP-seq、RNA-seq、qPCR 文章链接：Global N6-methyladenosine profiling of cobalt-exposed cortex and human neuroblastoma H4 cells presents epitranscriptomics alterations in neurodegenerative disease-associated genes 研究内容 （1）CoCl2引起神经系统的病理和神经行为损伤 为了鉴定CoCl2会造成什么病理损伤，作者采用H&E染色法、Bielschowsky银染和Nissl染色法检测发现暴露于CoCl2后，皮质细胞数量显著减少，神经纤维缠结的数量增加，Nissl体减少。为进一步鉴定CoCl2对神经系统的影响，作者通过在小鼠中进行Morris water maze评估发现随着时间的增长，小鼠在CoCl2中逃跑的潜伏期逐渐缩短。此外，中、高剂量CoCl2组小鼠在目标象限停留的时间更少，通过平台的次数也明显低于对照组。根据到达平台所需的距离和到达次数间接反映小鼠的空间学习记忆能力，根据轨道图可知神经行为损伤的小鼠到达平台的距离较长，到达平台的次数较少。综上可知，长时间暴露于CoCl2中会导致空间学习和记忆障碍。 （2）GO和KEGG分析大脑皮层中受CoCl2影响的差异表达基因 通过RNA-seq发
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辅料、贮存、以及配方条件对注射用蛋白质药物稳定性的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
为什么蛋白质与包装容器之间的相互作用很重要？ 在制造、存储和运输过程中，注射用蛋白质药物会接触到金属、玻璃、油和聚合物等多种表面和材料。从最初的蛋白合成用的不锈钢容器，到最后注射入人体前的玻璃针管都会涉及。蛋白质固有的表面活性可导致它们与表面相互作用，从而产生可能的变性和后期聚集。这种聚集会产生与安全相关的问题，例如不良的免疫反应，不良的交叉反应或功效丧失。 辅料蛋白质保护机制 辅料（赋形剂）是蛋白质制剂的添加剂，有助于稳定蛋白质的结构，并最大程度地减少潜在的有害聚集、级联反应。它们的范围从简单的缓冲液到更复杂的成分如氨基酸，糖，表面活性剂和抗氧化剂等。表面活性剂或表面活化物质，在决定蛋白质通过潜在的三种可能机制与表面相互作用中起主要作用（图1）： 共配制：药物制剂中的表面活性剂/活化物质在蛋白质分子上形成保护层，从而防止它们粘附到容器表面上。 表面相互作用：表面活性剂/活化物质在容器表面形成保护层并抑制蛋白质吸附。 蛋白质相互作用：表面活性剂/活化物质与吸附的蛋白质相互作用并将其从表面去除。 图1：代表表面活性剂/活化物质保护药物蛋白质的三种可能机理的示意图：共配制，表面相互作用和蛋白质相互作用。 QSense QCM-D如何帮助量化蛋白质表面吸附? 表面敏感的QSense耗散型石英晶体微天平（QCM-D）技术可用于评估蛋白质如何与生产容器，加工材料（例如过滤器），储存容器或运输装置相互作用。QCM-D是一种基于石英压电效应传感器的表面技术，可实时监控表面的纳米/纳克级变化。 由于可以在QCM-D传感器上准备多种不同的表面材料，轻松研究各种不同材料的性质便成为了可能。该技术可以量化与表面相互作用的蛋白质的量（质量和厚度），以及由于蛋白质溶液和QCM-D传感器之间的相互作用而导致的结构（粘弹性）特性变化。可以评估赋形剂的存在及其他配方条件例如浓度，pH或缓冲液类型等等，对吸附特性的影响。类似如温度波动，pH值变化
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光片技术小课堂（番外）——平铺光片技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
之前说到光片显微镜以其较高的三维空间分辨率、良好的光学切片能力和较高的成像速度而备受关注。但是由于衍射极限导致的光片形状限制（见光片技术小课堂二2.1），当需要大视场时，会导致较低的轴向分辨率或较差的光学切片能力。因此，如何产生出厚度均匀且薄，又大到能覆盖视场的激发光片成为光片显微镜的关键问题。目前已经有很多不同的方法来尝试在光片显微镜中产生这样的光片，例如高斯光片、贝塞尔光片和晶格光片。然而无论采用何种方法，这种光片自身特性的相互限制对所有类型的光片都是存在的，而且当我们需要用亚微米厚度的光片去对几十微米或更大的视场进行成像时，这个问题尤其具有挑战性。 Dean和Fiolka首先提出了一种解决方案，通过使用聚焦可调的透镜沿光的传播方向扫描激发光的焦点，从而可以创建长而均匀的虚拟激发光束，并且可以通过扫描虚拟激发光束进一步生成大而均匀的虚拟激发光片。但是这种方法有两个局限性，第一是由于扫描过程中激发光束尾迹的混合使得用这种方法产生的光片对激发光的限制很差，因此光学切片的能力较差，必须与共焦检测一起使用以抑制荧光背景；其次，由于产生的激发光片是一个虚拟光片，因此在一个相机曝光周期内，焦点必须扫描整个视场，因此在视场内任何特定位置的实际曝光时间都非常短，必须使用相对较高的激发功率才能产生足够的荧光信号，从而导致更强的光毒效应。 在这之后，西湖大学的高亮博士提出了一种在不增加光片厚度或降低光约束力的情况下提高光片显微镜视场的替代方案。如图1所示，可以通过沿光片长度方向在检测光路的焦平面内平铺光片并在每个位置拍摄图像来代替使用较大的激发光片对大视场进行成像。然后，将所有图像组合在一起，重建整个视场的图像。尽管这种方法降低了成像速度，但其所带来的好处是显而易见的，采用更薄的光约束能力越好的光片对同一样品进行成像，可以获得更高的轴向分辨率和更好的光学切片能力。 图1 该图展示了该方法的工作原理
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实验室通风系统三种不同控制方式的原理和区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
实验室通风与舒适性空调系统的通风设计要求不同，主要目的是提供安全、舒适的工作环境，减少人员暴露在危险空气下的可能。通风主要解决的是工作环境对实验人员的身体健康和劳动保护问题。 在现代化实验室设备中有通风柜、中央实验台、边台、药品柜、器皿柜、气瓶柜等，其中通风柜是生化实验室设备中担负着十分重要的功能，是必不可少的设备。因此，选择通风柜是实验室建设中的重要问题，一定要引起足够的重视。 实验室通风系统分为以下三种： 第一：静压变频控制系统 静压变频控制系统是根据管道压差数据针对实验室排风量实时变化及时调整排风机运转频率，降低或增大排风量，进而达到节能、降噪的自动化控制系统。 第二：VAV变风量控制系统 VAV变风量系统（Variable Air Volume System）于20世纪60年代诞生在美国，根据室内负荷变化或室内要求参数的变化，保持恒定送风温度，自动调节系统送风量，从而使室内参数达到要求的全空气系统。VAV系统追求以较少的能耗来满足室内空气环境的要求。 变风量控制系统是现代实验室建设中主要送排通风方式。通过通风系统管理软件能对实验室温湿度、通风量进行自动调节、实时监控、自动记录并输出《运行监控报表》，详细记录各时段的运行情况、故障情况，并可输出实际节能的数据，让用户对投资成本与运行成本一目了然。将智能化通风系统接上互联网后，可通过手机或电脑在异地操作智能化通风系统，还可让智能化通风系统的供应商在异地对其进行故障诊断与维护。 变风量控制系统是相对于定风量系统而言的，过去实验室通风系统只是由功率和风量都基本衡定的风机组成。无论风量还是房间的温度湿度都无法控制，通风系统只是起到一个排风的作用。变风量系统是指送风随着排风而变，排风又随着人们的需要自动或人为设置而变，送风与排风形成一个动态平衡，使房间始终保持一个相对恒定的温度、湿度和微负压。变风量系统由空调机组、送风系统、排风系统以及控制系统组成
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肺癌研究热门靶点之MET
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
想获得国自然选题思路，提高国自然基金申请命中率？想调整研究方向，获得学术研究突破口？有机会发高分文章？你需要了解学科发展态势和未来走向！赛业生物专栏《Gene of the Week》每周会根据热点研究领域介绍一个基因，详细为您介绍基因基本信息、研究概况和应用背景等，助您保持学术研究敏锐度，提高科学研究效率，期待您的持续关注哦。今天我们要讲的主角是肺癌研究热门靶点MET。 1 MET基因概述 MET也称为c-MET，为原癌基因，位于人类7号染色体长臂，含21个外显子。Met是肝细胞生长因子（HGF）的酪氨酸激酶受体，主要包括三个结构域：胞外区，跨膜结构域，胞内区。HGF与c-MET结合使MET活化，然后激活众多下游信号通路，如PI3K-Akt、 Ras-MAPK、STAT和Wnt/β-catenin等，从而发挥其促细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、侵袭血管及血管生成等效应，在组织正常发育和肿瘤进展中发挥关键作用。c-MET通路正常表达时促进组织的分化与修复，当MET表达失调时则促进肿瘤细胞的增殖与转移。 图1. HGF信号传导/途径。活化的HGF与Met受体的结合可诱导Met酪氨酸激酶的活化和Met中酪氨酸残基的自磷酸化。HGF对c-Met的激活会导致多种细胞信号介导肿瘤的生长、转移和血管生成。HGF与c-Met的结合可诱导酪氨酸激酶的C端聚簇的酪氨酸残基磷酸化，从而导致多种细胞的生物活性，包括促细胞分裂等。HGF/Met信号传导激活多个信号转导途径，如PI3K-Akt、Ras-MAPK、STAT和Wnt/β-catenin等。 2 MET基因与肿瘤 MET通路在肿瘤学中的失调可以通过几种方式表现出来：蛋白质的遗传突变、扩增、重排或过表达。除了非小细胞肺癌（NSCLC）以外，乳腺癌、结肠癌、肾癌和胃癌均过表达MET。在结肠癌、食道癌和胃癌中发现了MET扩增。阻断HGF/c-Met信号途径可有效抑制肿瘤的发生发展和转移。 3 非小细胞肺癌中针对Met靶点的疗法 非小细胞肺癌（NSCLC）是全球癌症相关死亡的主要原因，且预后不良。虽然NSCLC领域的MET通路异常类型、检测和**等方面
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新冠"超级实验室"Helix进行高通量COVID-19检测的秘密
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
Helix公司成立于2015年，作为“基因APP Store”的开创者，是测序巨头Illumina旗下的一家子公司，疫情期间Helix获得FDA应急使用授权（EUA），可以使用基于NGS的COVID-19检测。 FDA应急使用授权摘要 Helix的体外诊断试验旨在检测鼻咽拭子、口咽拭子等上呼吸道标本中SARS-CoV-2 刺突蛋白(S)基因(以及人内参RPP30)。 Helix的CLIA / CAP实验室平台，将提供基于Illumina NovaSeq 6000的NGS检测。该检测方法使用Thermo Fisher Scientific公司提供的RNA提取和反转扩增试剂，以及Integrated DNA Technologies公司的定制引物。FDA应急使用授权中规定，Helix COVID-19 NGS检测可使用SPT Labtech mosquito HV genomics移液工作站进行液体处理。 Helix已从美国国立卫生研究院（NIH）的RADx计划中获得了3340万美元的资金支持，成为美国COVID-19“超级实验室”之一 。 Helix的CEO Marc Stapley表示“在全国范围内进行更快速、更可靠的COVID-19检测是现在迫切需要的。通过NIH的资助，将使Helix能够迅速扩大规模，高通量的检测方法和先进的实验室设施可以达到每天10万份样本的检测量，使其成为美国最高通量的COVID-19实验室之一。” COVID-19 NGS 检测流程 此外Helix与加州大学圣地亚哥分校（UCSD）合作进行了COVID-19多重荧光定量PCR（multiplex real time RT-PCR）检测，使用了TaqPath COVID-19 CE-IVD RT-PCR试剂盒，利用了mosquito添加1μL PCR mix和2μL RNA样本，最终将反应体系从25μL微缩化至3μL，每个样本节省了8倍的成本！ 手工加样与mosquito自动加样微缩化体系对比 HELIX和UCSD COVID-19多重荧光定量PCR检测流程 SPT Labtech公司的mosquito genomics移液工作站凭借其小体系加样的精准度和稳定表现，已成为众多基因组学实验室的理想选择。其独有的固相置换技术，可以无视任何黏度的试剂或DNA，对25nL-5μL样品进行精确加样，并且不需要进行任何液体参数的调整。 它正在改变基因组学实验室的工作方式——mosquito能够精确
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独立式显微镜摄像头的优势与应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
光学显微镜 光学显微镜的应用广泛，从工业生产到科研教育，随处可见光学显微镜的身影。确实，这类显微镜在对于样品及其零部件的质量控制当中发挥着至关重要的作用，例如电子产业的样品和零部件检测就经常用到光学显微镜。显微镜检查或质量控制能够让用户意识到零部件的生产是否正确，同时来判定样品的目标性能存在的缺陷和污染是否是因为存在粉尘或其他颗粒物干扰所造成的。 但是，在目镜下检查样本后再转到别处记录观察发现，数小时里如此反复，实在让人精疲力尽、应接不暇。利用数字摄像头在高清显示器上显示显微镜图像则能极大缓解这样的缺点。 但时至今日在图像的查看、记录和共享方面依然需要使用到PC。这样的要求就非常的具有挑战性，尤其是在仅需偶尔使用显微镜的情况下，用户在打开PC时往往要面对数百款软件的更新升级，这不仅非常的耗时，也非常令人沮丧。同时，PC硬件和IT基础设施的维护也是非常耗时的。PC的使用会增加检查的时间和精力消耗，而且对高效和无缝的质量控制流程构成实质性的障碍。如果在多个生产场所采用此类工作流程，则这种负面影响可能会进一步增加。 但是现如今，徕卡显微系统终于推出了一款灵活的独立式显微镜摄像头来扫清这些障碍，因为这款显微镜摄像头让PC变得不再是必需品。这种“智能”数字摄像头可以快速轻松地装配到显微镜上并将数字图像直接传输到显示器上，整个过程无需使用PC。使用简单直观的屏显（OSD）工具即可对显示器进行调节和操作。图像的采集仅在数秒之内即可完成。 此外，摄像头还可通过OSD来方便用户直接在图像上进行注释。标线、十字光标或自定义的覆盖层都可以放置在图像上以便进行直接连续地比较样本和标准参考图像。在12 MP CMOS传感器的帮助下，得以捕获到色彩真实，分辨率高的图像。 此外，PC设置、集成和维护等耗时耗力、成本高昂的工作都成为了历史，整个检查过程变得更加的顺畅。将摄像头安装在显微镜上以后，只需要通过摄像头的HDMI端口连接监视器
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蛋白纯化系统化常见问题总结
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
使用Blupadstart蛋白纯化系统过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。 1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50%～60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀，我用0.5%CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的蛋白疏水性比较强。 既然是疏水性很强你可以加点甘油或者乙二醇降低极性，这样溶解就会好得多，此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性，同时保护你的蛋白，你再做纯化就可以了，我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG-5000，这样的情况下蛋白还是活性回收率很高，我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好，你失去活性你可以监测一下提取，纯化，酶切到底哪里失去了活性，这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值，看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白有沉淀那你可以稍微把蛋白的浓度降低点，这也是个办法。 2)请问有没有合成过配体为FMN的亲和胶? 亲和的填料合成过20来种，你是希望用它来纯化某种脱氢酶吗，我看FMN可偶联的有限，倒是FAD有活泼的氨基好偶联，何况它们几乎是同一个辅酶，你是不是考虑把FAD连上去。当然FMN的结构上也有个仲胺，可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上，而溴化氰活化或别的活化的介质都不大好，因此我觉得这个没有什么问题。 此外如果是以FMN为辅酶的，那我还可以建议你试试蓝色琼脂糖凝胶，因为它的配基的结构和FMN的三个环很相似，它能纯化不少脱氢酶和激酶。 相应的偶联的材料，要自己合成亲和填料，有很多公司都提供活化好的介质，自己偶联就可以，其中比较常用的有启维益成公司的溴化氰琼脂糖凝胶，环氧琼脂糖凝胶，氨基琼脂糖凝胶，羧基琼脂糖凝胶，活化酯琼脂
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多功能平铺光片显微镜在透明组织成像应用中的优势
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
生物组织的高分辨率3D荧光成像在亚细胞、细胞和组织水平上为基因表达、细胞形态和细胞在组织中的分布研究搭建了桥梁。组织透明化方法将生物组织透明，并结合最新的3D荧光成像技术实现了组织结构可视化。 尽管这种结合有诸多好处，但在3D组织成像应用中仍存在挑战：(1)在对厘米级样本进行微米级或更高分辨率成像时，传统光片显微镜成像效率不高；(2)传统光片显微镜难以兼容所有的组织透明化方法透明的样本；(3)不能实时校正由不同成像液的折射率变化引起的偏差，优化不同样品的成像性能；（4）显微镜仪器校准程序复杂且较为困难。2020年11月3日，西湖大学高亮实验室团队在Cell Reports上发表文章A Versatile Tiling Light Sheet Microscope for Imaging of Cleared Tissues，介绍了一款具有半自动校准能力的多功能平铺光片显微镜，它能够对所有组织透明化方法透明的样本组织进行多色快速3D成像，并且成像的空间分辨率达微米级（4×4×10μm3）甚至亚微米级（0.3×0.3×1μm3）。另外，通过组织膨胀技术，平铺光片显微镜的分辨能力可提高至小于100nm（70×70×200 nm3）。 文章指出，平铺光片技术很好地解决了上述问题。不同于其他的光片显微镜，平铺光片显微镜不仅在透明化大组织样本的3D成像上呈现更好的效果，而且可以大范围内更加简单的优化和调节成像品质，可以更方便的应用在不同领域。 那么，与其他的光片显微镜相比，平铺光片显微镜有哪些特点呢？ 1） 和传统的光片显微镜相比，相同的成像时间里，采用平铺光片显微镜成像样本可提高空间分辨率以及成像效率。 2）通过变换不同NA的检测物镜，放大倍数，以及调整激发光片，平铺光片显微镜可以实现对厘米级的组织样本进行从微米级到亚微米级空间分辨率的成像，而利用组织膨胀技术可以进一步提高成像分辨率。 3）通过空间光调制器对激发光片进行相位调制，用于创建和优化样品照明的平铺光片。 4）显微镜具有半自动校准功能，保证了成像的准确性、可靠性和易用性； 5）显微镜
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SPT 移液工作站+Thermo Collibri试剂盒打造低成本自动化NGS建库方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
SPT Labtech宣布与Thermo Fisher Scientific合作，推出低成本自动化NGS建库解决方案 文库制备成本在如今大规模的NGS研究费用中所占的比重越来越重，经费和成本的限制阻碍了科学家对传染病监测、癌症研究等领域更深入探索的步伐。SPT Labtech宣布与Thermo Fisher Scientific进行市场合作，旨在构建自动化的文库制备方案，以期提高建库成功率，并降低variant检测的费用。 高灵敏度的variant检测现在可以通过使用SPT Labtech的mosquito HV genomics和dragonfly discovery系统进行自动化建库，将反应体系微缩化，减少试剂使用量，降低1/10的成本，从而能够在一组样本中添加更多的replicates，提高建库成功率和测序数据质量。 此项方案将首先支持用于Illumina系统的Invitrogen Collibri全基因组测序文库制备试剂盒，以及Collibri文库定量试剂盒，包括SARS-CoV-2研究、癌症研究中拷贝数变异以及其他突变检测的应用。 更高的效率 SPT Labtech的mosquito HV genomics和dragonfly discovery系统可以快速编程，24/7全天候进行样本制备工作，解放研究人员的时间。 图：dragonfly discovery、mosquito HV genomics 及NGS实验set up专用软件 更高的成功率 使用SPT Labtech设备进行微缩化建库，可将试剂的用量体积减少多达10倍，从而可以用不到1个样本的成本，做5–6个replicates。样本重复数量的增加，保障了即使某个样品在flow cell上测序失败，仍有其他样品的数据可以使用，无需再重新准备样本展开测序，从而确保了实验一次成功。Invitrogen Collibri NGS文库制备试剂盒中每种试剂含有一种示踪染料，通过颜色变化可清晰观察文库制备过程，避免高代价的实验失误。 图：dragonfly discovery每个通道可以独立进行试剂分配 更微量的样本 SPT Labtech设备独有的固相置换技术可以精确地处理微量液体，对0.5uL的粘稠样本都有着极高的加样精度。Invitrogen Collibri全基因组测序文库制备试剂盒可从1 ng的样本起始
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免疫损伤后的T细胞再生
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
化疗，放疗，感染等，引起免疫系统的损伤，之后免疫系统的重建，尤其是T细胞再生恢复，与病人预后密切相关。但是，损伤之后，适应性免疫，尤其是T细胞的恢复，比起天然免疫细胞要慢很多。 免疫损伤的因素 感染 健康机体，免疫细胞通过再生和死亡实现平衡。在感染发生后，这种平衡被打破。 感染发生后，造血干祖细胞（HSPCs）通过模式识别受体直接感知病原体，或者间接通过感知下游细胞的消耗，补充免疫细胞。 急性感染，HSPCs更多分化为粒细胞，在脓毒血症，导致早期胸腺祖细胞清除，淋巴细胞减少。 胸腺细胞和基质细胞本身也是病原体喜欢攻击的目标，尤其是CD4+CD8+双阳胸腺细胞和D24hiCD3lowCD8+单阳胸腺细胞，而成熟的CD24mid/lowCD8+单阳细胞是耐受**的细胞。应激反应激素(如糖皮质激素)，促炎介质(如IFNγ，TNF-α）和凋亡途径(如介导的由BAX，BCL-2，p53，caspase8和caspase9)参与其中。 寨卡病毒，麻疹病毒等，也会攻击胸腺基质细胞（mTECs，cTECs)，引起增殖，分化，迁移等改变。 新冠肺炎中，中国科学家也发现，淋巴细胞数量减少和炎症因子（IL-6，IL-8）相关。 文献1 急性感染引起的胸腺萎缩通常是暂时的，但是像HIV等慢性感染可能会引起不可逆的胸腺萎缩。 细胞消融疗法 放疗，化疗，细胞清除抗体**等方法，被用于清除恶性细胞。造血干细胞移植前，也需清除免疫细胞，尤其T，B细胞，以提高移植成功率。 清除造血干细胞和淋巴祖细胞，会导致胸腺T细胞和骨髓中B细胞的发育长期受损，甚至会加速胸腺的退化。 另外环磷酰胺，放疗，也会清除胸腺基质细胞cTECs 和 mTECs，此二者是T细胞发育阳性选择和阴性选择所需要的。 免疫衰老 随着年龄增长，免疫系统衰老，功能下降，易发生感染，同时对于疫苗的免疫应答不足。 免疫功能下降的因素： 造血干细胞归巢，植入容量下降 胸腺祖细胞数量也会减少，不能从骨髓稳定的输出，导致T细胞减少 胸腺基质细胞
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大脑中动脉远端阻塞模型制作及评估
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
建立具有简便、可靠、重复性好、稳定性高的大脑中动脉远端阻塞模型，有利于脑缺血病理生理学的研究，也可以利用该模型对各种预防、**脑缺血的方法和药物进行评价。本次介绍的大脑中动脉远端阻塞模型是利用双极电凝或者手术缝线将大鼠(或小鼠)的大脑中动脉主干进行电灼或结扎以阻断其供血。该模型具有脑梗面积及部位重复性好、物存活率高、梗死体积相对较小等优点，能较好地模拟临床卒中特点。 1.动物选择 大鼠 可选择封闭群大鼠，如SD、 Wistar等；也可选择近交系大鼠，如ACI、BN、F344、WKY及SHR等。实验常用SD、 Wistar和SHR大鼠。 小鼠 可选择封闭群小鼠，如ICR、NIH、LACA、KM(昆明)小鼠等；也可选择近交系小鼠，如C57BL/6J、DBA/2、BALB/c、中国1号(C-1)、津白1号(TA1)等。 2.制作步骤 大鼠手术操作步骤 l 大鼠称重后放置在一个小笼内，在医用级氧气或者含有1%~2%异氟醚的30%氧气和70%二氧化氮的混合气体中进行诱导麻醉。 l 将左边头部毛发剔除，局部皮肤用0.5%聚烯吡酮黄和75%乙醇或者是2%氯己定（蓝色溶液）消毒。 l 将大鼠移至手术台或者手术垫，利用面罩，用医用级氧气或者含有1%-2%异氟醚的30%氧气和70%二氧化氮的混合气体进行吸入麻醉。然后将大鼠放置呈右侧卧位，在左侧眼外眦至外耳道之间做一长约2cm切口(见下图)。 (a)大鼠右侧卧位，四肢固定于手术台；(b)箭头示手术切口部位，直径为2cm l 显露颞肌，可见颞神经、颞浅动脉、颞浅静脉覆盖在颞肌上；钝性分离并牵开颞肌，注意避免损伤颞神经、颞浅动脉及颞浅静脉，暴露颞骨；显露颧弓，并用咬骨钳去除大部分颧弓；显露颞下窝，将下颌支及周围肌肉牵开，以增加显露的颅骨；可见下颌神经跨过颞下颌关节进入卵圆窝。 l 以卵圆窝或者下颌神经前方3cm、侧方1cm的鳞骨上的点为中心，钻一直径为4~6mm的小孔，使该孔接近弓状缘，细心将该孔钻至深度0.5~1.0mm，钻孔过程中感受颅骨的弹性和柔软性，并经常用盐水浇注，以试探是否将颅骨钻透。在该小孔可见
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常用植物生长调节剂配置注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
植物生长调节剂是用于调节植物生长发育的一类化学物质，包括人工合成的化合物和从生物中提取的天然植物激素。植物生长调节剂通常可在植物体内传导至作用部位，以较低的浓度就能促进或抑制其生命过程的某些环节，使之向符合人类的需要发展。 植物生长调节剂主要分为：生长素、细胞分类素、赤霉素、脱落酸等。低浓度生长素促进植物生长，高浓度生长素抑制植物生长；细胞分裂素促进细胞分裂和调控其分化，诱导芽的形成和促进芽的生长；赤霉素打破种子休眠，促进种子萌发；脱落酸促进落花落果，促进球茎和块茎的形成。值得注意的是有些植物生长调节剂在高浓度下和低浓度下对不同植物所起的作用也会有所不同，所以用量需要根据具体实验来选择合适的植物生长调节剂的类型及使用浓度。 西美杰作为美国知名培养基供应商PhytoTech中国区总代理，为广大植物学客户提供常用培养基、抗生素、碳源外还提供组培实验中的“重点要素“——植物生长调节剂。下表例举了常用生长调节剂的配置方法和灭菌方式，以帮助大家解决实验中可能遇到的问题。 产品名称 货号 配置方法 灭菌方式 吲哚乙酸（IAA） I885 用适量KOH或NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度 抽滤灭菌 吲哚丁酸（IBA） I538 用适量KOH或NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度 抽滤灭菌 α-萘乙酸（NAA） N600 可用少量KOH彻底溶解后，再加水定容到一定浓度 可高压灭菌 2，4-D溶液 D309/D295 溶液形式，直接加水定容 可高压灭菌 6-BA B800 先溶于少量50 mM KOH中，再加水定容 可高压灭菌 2ip D525 先溶于KOH中，再加水定容 可高压灭菌 激动素（KT） K750 先溶于少量50 mM KOH中，再加水定容 可高压灭菌 噻苯隆（TDZ） T888 先溶于少量DMSO或KOH中，再加水定容 抽滤灭菌 玉米素反式 Z125 先溶于少量10mM
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如何评估共聚焦光学截面厚度
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
共聚焦显微镜用于光学切片比较厚的样本。最直接的问题是：1. 什么是“比较厚的样本”；2. 光学切片到底有多厚？这两个问题在一定程度上是相关的，即假设一份厚样本至少比光学切片厚10倍。 生物样本的厚度可以从10米（整只动物）到10纳米（电子显微镜的超薄切片制备）。由于共聚焦显微镜采用了入射光的方法，样本本身的尺寸可能有几厘米或更多，但表面下方的穿透深度取决于材料的不透明度和物镜的工作距离。这就限制了样本大小（z方向），只能考虑使用厚度最多为几毫米的样本。 光学切片的决定因素是衍射极限。根据各种不同的参数，共聚焦扫描显微镜的真正光学截面厚度可达到约0.5毫米。标准共聚焦应用（如组织切片）当中常用的样本厚度为50 µm以内。 3D点扩散函数（PSF）和半高宽（FWHM） 图1：z方向上强度分布的半高宽（FWHM）用作光学切片性能的衡量指标之一 点扩散函数通过足够小的荧光小球生成，通过收集xz剖面图的强度来加以记录。上图显示了衍射图中心的强度分布（红色），并对50%数值之间的z方向距离进行测量（介于绿色线段之间）。 由光学系统产生的点（光斑）的图像称为“点扩散函数”（PSF）。点扩散函数描述了来自极小光斑的光在三维空间中的分布。这个衍射模型的中心是一个椭球形，影响着光学分辨率。径向尺寸决定横向分辨率，轴向尺寸决定聚焦深度，进而决定切片性能。 对于共聚焦截面切片，其目的在于只传输PSF的内核部分，即所谓的光学切片。实际上，针孔直径可控制从内核外传递的光量。因此，处在衍射模型大小范围内的光学切片很明显不会出现类似于面包片的锋利边缘，但仍然存在着同等扁平斜率的特征。连接强度曲线两侧50%强度的z距离称为“半高宽”（FWHM），而按照惯例，用于测量光学切片的厚度。光学切片的性能通常要通过聚焦在镜面上来进行测量，镜面用于模拟z方向上无限薄的结构。这种方法相对较容易实现并且可用于检查共聚焦显微镜系统的性能。从更为现实的角度进行考虑，z切片性能还可以
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流式细胞术FCM在染色体倍性分析上的优势及实验步骤介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
倍性育种，指通过改变染色体的数量，产生不同的变异个体，进而选择优良变异个体培育新品种。正常的配子细胞中所包含的染色体数或半数的体细胞染色体数称为一套单倍染色体，用符号n 表示。具有一个染色体组的细胞和由这样的细胞组成的个体称为单倍体(n) ，具有两个染色体组的细胞或个体称为二倍体（2n），具有两个以上整套染色体组的细胞或个体则称为多倍体，包括三倍体（3n）、四倍体（4n）等。 传统的倍性鉴定主要采用常规压片法统计染色体数目，但采用这种方法很难寻找到分裂中期染色体分散良好并可进行计数的细胞，而且整个过程耗时长，检测效率低。采用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）进行倍性分析的方法简化了倍性分析的过程，可以快速准确检测同一物种范围内不同倍性的样品。FCM作为一项快速、高效的检测技术，被广泛应用于细胞分类学、植物遗传学及植物生理学等研究领域中。FCM常被用于鉴定植物倍性水平，通过检测植株G0/G1峰的细胞核DNA含量可以判断出植物的倍性。 实验原理 首先需要裂解液将组织中细胞核释放出来，并打开DNA链，然后用DAPI染液将细胞核DNA上的A-T 碱基对特异性染色，再用仪器检测出被染色的A-T碱基对发出的荧光强度。比如二倍体的荧光强度是100（横坐标），那么单倍体的荧光强度就是50（横坐标）。纵坐标是细胞数量的显示，通常来说，信号峰高说明信号比较好，杂质少。 倍性=待测样本的峰值/参照物的峰值*参照物倍性 e.g. 100/50 x 2n = 4n 实验仪器设备及方法 实验步骤如下： 样品准备 植物样品准备：叶片的新鲜程度直接影响实验结果。由于次生代谢产物的影响，会导致信号峰过宽，甚至检测不到信号峰的情况。嫩叶的选择要选取新鲜、完全舒展开、无虫咬、无枯萎、分裂不活跃的部位实验结果： 鱼类样品准备：大鱼可以取血液样本检测，或者取鱼组织检测，切取0.5cm2大小的新鲜鱼肉即可。 贝类样品准备：贝类大样本可以直接撬开贝壳，取贝的新鲜组织作为样本。贝类幼
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