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单核细胞增生李斯特氏菌的培养特性
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）简称单增李斯特菌，革兰氏阳性小杆菌，大小为（0.4-0.5）μm×（0.5-2）μm，直或稍弯，多数菌体一端较大，似棒状，常呈V字型排列，有的呈丝状，偶尔可见双球状。在22℃-25℃环境可形成4根鞭毛。本菌对理化因素抵抗力较强。在士壤、粪便、青贮饲料和干草内能长期存活：对碱和盐抵抗力强，对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺等均敏感。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李斯特氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。本菌营养要求不高，兼性厌氧。菌落初期极小，水滴样，经37℃数天培养后，直径可达2mm，初期菌落光滑、透明，后变灰暗。血平板上的菌落有β-型溶血环本菌耐碱不耐酸，在4℃-45℃均能生长，适生长温度30℃-37℃。该菌营养要求不高，在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。该菌的生长范围为2-42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在pH3.8-4.4能缓慢生长，在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂（TSAYE）和改良Mc Bride（MMA）琼脂上，用45角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
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体外定量检测人GYG1浓度：人糖原蛋白1 ELISA试剂盒
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
糖原是一种多支链多糖。它是动物细胞中葡萄糖储存的主要方式。在人体中，储存糖原的两个主要组织是肝脏和骨骼肌。糖原通常更多地集中在肝脏中，但由于人类有更多的肌肉，我们的肌肉储存了我们体内大约四分之三的总糖原。 在人类中，糖原蛋白可以表达两种亚型：糖原蛋白-1，分子量约为37 kDa，由GYG1基因编码，主要在肌肉中表达；糖原蛋白2，分子量约为55 kDa，由GYG2基因编码，主要在肝脏、心肌等组织中表达，在骨骼肌中不表达。 糖原蛋白1缺乏可导致糖原贮积病XV型。该疾病患者骨骼肌的表型特征是肌糖原消耗，线粒体增殖，以及缓慢收缩氧化肌纤维的显著表现。GYG1的基因突变也是心肌病和心律失常的原因之一。 艾美捷糖原蛋白1（Glycogenin 1，GYG1）蛋白，抗体和ELISA试剂盒等提供了一系列独特而可靠的产品来支持研究中的糖原蛋白1（GYG1）分析（仅用于科研，不可用于临床诊断）。 abx387724 人糖原蛋白1 (GYG1) ELISA试剂盒是用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液等生物体液中的GYG1浓度。 检测原理： 该试剂盒基于夹心法酶联免疫吸附测定技术。将抗体预包被到96孔板上。将标准品，测试样品和生物素偶联试剂添加到孔中并孵育。然后加入结合了HRP的试剂，并孵育整个板子。在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的结合物。TMB底物用于定量HRP酶促反应。添加TMB底物后，只有含有足够GYG1的孔才会产生蓝色产物，然后在加入酸性终止液后变为黄色。黄色的强度与结合在板上的GYG1量成正比。在酶标仪中于450nm处以分光光度法测量光密度（OD），由此可计算出GYG1的浓度。 人糖原蛋白1（GYG1）的OD值标曲 Abbexa总部位于英国剑桥的剑桥科学园，是一家专业的全球抗体供应商和蛋白质供应商，致力于为生命科学、药物开发和生物技术领域的科学家和研究者提供优质的客户体验和高质量的产品。产品涵盖一抗、二抗、蛋白质、ELISA试剂盒、酶以及其他用于研究的试剂盒和工具。艾美捷科技是Abbexa的中
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ELISA实验需要注意哪些细节？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
ELISA实验需要注意哪些细节？ 想要正确的操作ELISA实验，操作当中的每一个步骤都非常重要，不可忽略任何一个操作细节。下面是具体步骤： 1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。 3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。 4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。 5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。 9. 不能使用过期产品。 10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 11.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
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病毒RNA分离：病毒RNA提取试剂盒解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
这次的升级版新丨冠让我们更加意识到防疫的重要性。只要疫情没有完全控制住就不能松懈，除此之外，对于病毒的诊断也是至关重要的。那么病毒RNA的提取就显得十分关键。这里amyjet为大家整理了10种常见的核酸纯化方法，重点是病毒RNA的分离。 一、过滤 膜过滤是一种物理分离技术，根据膜的性质（例如，孔隙率）和液体含量（例如，粒度），液体的内含物通过或被膜排除。通过选择具有适当孔径的膜，可以过滤液体病毒样本以排除细胞和其他大型非病毒污染物。 二、核酸酶处理 衣壳和包膜为病毒基因组提供了额外的保护层，防止核酸酶降解。DNAse和RNAse通常用于消除外源核酸，同时受保护的病毒基因组保持完整。 三、苯酚/氯仿抽提 可以使用苯酚/氯仿提取方法从病毒RNA基因组中分离宿主来源的基因组DNA和小RNA，该方法涉及将DNA 和RNA分别分为有机相和水相。首先，通过向含有核酸的样品中加入酸性苯酚和酸性缓冲液来产生单相溶液。氯仿的加入创建了一个双相系统，其中DNA和蛋白质分配到下层有机相，而上层水相保留RNA。水相可以另外用异丙醇处理，并通过基于硅胶柱的纯化处理，以提取总 RNA 或单个小RNA（miRNA、tRNA、5SrRNA、5.8SrRNA）和大RNA（mRNA、18SrRNA、28SrRNA） , snRNA) 分子，这取决于乙醇的浓度。 四、离心 低速离心：（例如，4℃下6000 ×g10分钟)是一种简单方便的病毒净化方式。细胞和大的细胞碎片被沉淀，上清液中悬浮的病毒粒子可以进行更严格的纯化。 超速离心：病毒的大小和密度不同于细胞器（例如线粒体、核糖体、细胞核）、生物大分子（例如 DNA、RNA、蛋白质）和污染病毒样本的其他宿主成分。超速离心利用这些物理化学特性将病毒与非病毒元素分离。这种分离通常是通过结合蔗糖和氯化铯密度梯度来实现的。在超速离心之前，细胞碎片在初始离心步骤中被清除。通过首先应用蔗糖密度梯度离心进一步去除剩余的杂质，该离心基于颗粒的 S 值或沉降系数进行分离。然后将氯化铯密度梯度平衡离心（根据其浮力
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活性氧检测——总ROS检测试剂盒解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
活性氧（ROS）是生物有氧代谢过程中的副产品，包括氧离子，过氧化物和含氧自由基等。下面给大家介绍一下活性氧检测工具。 Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。活性氧分子（ROS）是氧正常代谢过程的固有副产品，在细胞信号及转导过程中扮演着重要的角色。然而，在氧化应激阶段，ROS水平显著增加。ROS的积聚导致细胞结构的重大破坏。氧化应激通常在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松，中风，炎症以及许多神经变性疾病和癌症中被被发现。ROS的测定能帮助我们理解氧化应激如何调节改变的胞内途径。 艾美捷总ROS检测试剂/试剂盒可以检测活细胞中总的ROS，它与ROS反应时，会产生荧光。 图1. 用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒（cat# AAT-22900）检测HeLa细胞中的ROS。将HeLa细胞以15,000个细胞/ 90 uL /孔在Costar黑色/透明底部96孔板中过夜接种。将细胞未经处理（对照）或在37°C下用1 mM H2O2或100 uM叔丁基氢过氧化物（TBHP）处理30分钟。加入ROS Brite 670工作溶液（100 uL /孔），并在5％CO2和37°C的培养箱中孵育1小时。使用FlexStation（Molecular Devices）以底部读取模式在Ex / Em = 650/675 nm（cut off= 665 nm）处检测荧光信号。 图2. 在Costar黑色/透明底部96孔板中，用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒染色的Hela细胞图像。A：未经处理的对照细胞。 B：细胞在染色前用100 uM氢过氧化叔丁基（TBHP）处理30分钟。 图3. ROS Brite 700对PBS缓冲液（pH 7.2）中不同活性氧的荧光响应。用Ex / Em ＝ 670 / 700nm测量荧光强度。 美国AAT Bioquest Inc。（前身是ABD Bioquest，Inc。）是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生
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粪便隐血检查对消化道出血的诊断有重要价值
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
粪便隐血检查对消化道出血的诊断有重要价值。消化性溃疡、药物致胃粘膜损伤（如服用消炎痛、糖皮质激素等）、肠结核、克罗恩病、溃疡性结肠炎、结肠息肉、钩虫病及胃癌、结肠癌等消化肿瘤时，粪便隐知试验均常为阳性，故须结合临床其它资料进行鉴别诊断在消化性溃疡时，阳性率为40-70%，呈间断性阳性。消化性溃疡**后当粪便外观正常时，隐血试验阳性仍可持续5-7天，此后如出血完全停止，隐血试验即可转阴。消化道癌症时，阳性率可达95%.呈持续性阳性，故粪便隐血试验常作为消化道恶性肿瘤诊断的一个筛选指标。尤其对中老年人早期发现消化道恶性肿瘤有重要价值。 隐血试验目前主要采用化学法。如邻联甲苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、匹拉米洞法，无色孔雀绿法、愈创木酯法等。其实验设计原理基本于血红蛋白中的含铁血红素部分有催化过氧化物分解的作用，能催化试剂中的过氧化氢，分解释放新生态氧，氧化上述色原物质而呈色。呈色的深浅反映了血红蛋白多少，亦即出血量的大小。经上试验方法虽然原理相同，但在实际应用中却由于粪便的成分判别很大，各实验室具体操作细节如粪便取材多少，试剂配方、观察时间等不同，而使结果存在较在差异。 人粪便血红蛋白（HB）/转铁蛋白（TF）定量测定试剂盒用于体外定量测定人粪便中血红蛋白（HB）和转铁蛋白（TF）的浓度，用于辅助诊断消化道出血性疾病。
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科研用细胞系鉴定的6大要求
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一种新细胞系，不论是从原代培养衍生或是从已有的细胞系衍生，很难估计它未来的价值。通常要经过一段时间的应用、传播以后，该细胞系真正的重要性才体现出来。这时，需要有关其起源的详细信息，然而已经为时太晚，无法回顾性的收集信息。因此，从组织分离或得到一种新的细胞系开始，充分记录有关细胞系的起源和处理的详细资料，是至关重要的。这些记录形成该细胞系的“身世”，记录越详细，价值越大。 随着细胞系通过细胞库和私人联系广泛传播到已远离其起源的各研究室及商业公司，细胞培养工作中细胞系起源方面的问题也变得尤其重要，特别是当研究需要使用成分明确的细胞时，细胞的真实性即成为关键。在获得细胞时就应鉴定其真实性，并在使用观察中定期鉴定，而且这些鉴定的结果要与现有的数据一致，并补充到已有的“身世”记录中。 鉴定细胞系主要有6个方面的要求： （1）证实没有交叉污染 （2）确定其来源的物种。 （3）与来源组织的关系，包括下列特性： a.确定细胞所属谱系； B.谱系中细胞所处的位置（即干细胞阶段、前体细胞阶段或分化阶段）。 （4）确定细胞系转化与否： a.该细胞系是有限细胞系还是连续细胞系； b.细胞系是否表达恶性特征。 （5）是否有迹象表明细胞系有遗传不稳定和表型多样性的倾向。 （6）确定一组起源相同的细胞中的特定细胞系，以及选出的细胞株或杂交细胞系，都需要证明该种细胞系或细胞株的独特特征。 细胞系的鉴定是至关重要的，不仅决定其功能，而且也证明其真实性。我们应当特别注意细胞系被已有的连续细胞系污染的可能性，或由于标记错误、处理混乱而错认。
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见风使舵的 TGF-β
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
转化生长因子 (Transforming growth factor beta，TGF-β) 是一类多功能的细胞因子，可由多种组织细胞产生。TGF-β 信号通路是由众多成员的多功能细胞因子，与相应的受体、细胞内信号转导分子组成的通路，能影响疾病发生和发展，调节基因的转录，控制着细胞周期，影响细胞的增殖、分化、黏附、转移和凋亡。值得注意的是，TGF-β 与肿瘤以及免疫系统疾病的发生密切相关。 图 1. TGF-β 细胞信号通路[4] ■ TGF-β 与肿瘤的发生与发展 TGF-β 在肿瘤发生过程中有双重作用。在肿瘤形成早期，TGF-β 主要通过触发癌细胞的细胞停滞和凋亡程序，从而抑制肿瘤的生长；在肿瘤发展过程中，TGF-β 对肿瘤细胞的抑制增殖作用会降低甚至消失，并分泌出大量的 TGF-β，而此时的 TGF-β 就能成为肿瘤细胞生长的促进因子。 TGF-β 通过多种机制实现其肿瘤促进作用。例如，TGF-β 通过抑制一些免疫细胞，如 T 细胞的增殖和功能实现免疫抑制；TGF-β 诱导分泌结缔组织生长因子 (CTGF)、内皮素-1 和血管内皮生长因子 (VEGF) 的分泌，促进血管、肿瘤纤维间质的形成。 重要的是，肿瘤上皮细胞中的 TGF-β 信号还可以诱导形成有利于肿瘤转移的微环境 (TME)，通过诱导 Snail1/2、ZEB1/2 和 HMGA2 等转录因子的表达，促进了肿瘤的上皮细胞间充质转化 (EMT)，这些转录因子又抑制了上皮细胞粘附蛋白的表达，并诱导了间充质蛋白的表达。EMT 转化与肿瘤转移和化疗耐药有关。 图 2. TGF-β 信号的抑癌和促癌功能[9] ■ TGF-β 与免疫调节 研究表明，TGF-β 在免疫调节方面发挥着重要功能。TGF-β1 是淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞等免疫细胞表达转化生长因子的主要形式。它可以通过旁分泌和自分泌方式调节这些细胞的增殖、分化和活化。TGF-β 还可以调节粘附分子的表达，进而调节粒细胞以及其他参与的炎性反应的细胞趋化作用。 图 3. TGF-β 在 T 细胞分化中的作用[10] T 淋巴细胞能够产生 TGF-β，参与调节 T 淋巴细胞的生长。T 细
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意大利UTAK诊断试剂带来了怎样的优势
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
国内临床检验市场经过几年的快速发展，虽然一些重要的临床产品项目已经进入成熟期，国内市场发展速度有所减缓，但仍然有15%~20%的增长速度。目前同上的几百种产品相比，国内市场还远没有得到开发，像肿瘤诊断和基因芯片试剂都具有巨大的市场潜力。即使从目前需求较大、发展比较成熟的几个病种来看，市场仍有很大的发展潜力。同时随着人们生活水平的提高和国家医疗体制的改革，市场规模必然会进一步扩大。 意大利UTAK诊断试剂是指采用免疫学、微生物学、分子生物学等原理或方法制备的、在体外用于对人类疾病的诊断、检测及流行病学调查等的诊断试剂。诊断试剂从一般用途来分，可分为体内诊断试剂和体外诊断试剂两大类。除用于诊断的如旧结核菌素、布氏菌素、锡克氏毒素等皮内用的体内诊断试剂等外，大部分为体外诊断制品。 当前意大利UTAK诊断试剂总体发展主要有以下优势: (1)免疫诊断试剂将会逐渐取代临床生化试剂，成为诊断试剂发展的主流。 (2)诊断技术正在向两极发展。一方面是高度集成、自动化的仪器诊断，另一方面是简单、快速便于普及的快速诊断。 (3)检验产品的种类将快速扩大。 (4)产品更新应用加快，由于遗传工程、基因重组以及单克隆抗体等现代生物技术的不断应用和发展，使这些的诊断试剂能迅速由研究阶段进入临床阶段，缩短了开发时间。
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胎牛血清怎么选？看这篇就够了
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
目前中国国内市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。小编汇总了多家用户和血清经销商以及网络的经验，分析如下： 养过细胞的童鞋大都有着这样的共识：血清，由于其复杂的内在成分和难以控制的外界因素，它既是细胞生长的营养，也是细胞死亡的致命，当我们废寝忘食的，呕心沥血的，鞠躬尽瘁的养着细胞同时，也极有可能因为一时的疏忽和大意选错了血清，导致珍贵的细胞意外身外，一切归零，不得不洗心革面重头开始！ 一、首先跟大家介绍几种常规的血清品牌： 1.Gibco品牌大，市场占有率最高。但正品价格太贵，用户直呼用不起，同时市场上Gibco品牌产品参差不齐，价位从2000-8000的都有，若没有孙悟空的火眼金睛，实难保证产品质量啊。 2.Corning2011年收购mediatech北美的生产培养基和血清的工厂，在2015-2018年间，又收购了2家美国血清工厂，新西兰血源，与Gibco、Sigma不相上下的生产工艺，虽然进入中国市场稍晚，但度渐长，得益于corning敏锐的市场嗅觉，及对中国市场的重视和不遗余力的推广，供应链日趋成熟，现货充足，质量稳定，市场上有口皆碑，品牌值得信赖！ 3.sigmaSAFC血清国内拥有大批的粉丝在追寻，特别是一些大的药厂和疫苗企业，质量比较稳定，无奈品牌血清受监管严重，导致供应量是严重不足，终端科研用户能使用到正品sigma血清的！ 4.Hyclone进入中国市场最早的血清品牌，但随着品牌并购整合、正品断货、假货横行导致客户对hyclone已失去耐心，市场上已难觅踪影。 5.Ausgenex血清澳洲本土血清品牌，处于第一批海关放行的血清清单，曾经抓住很多品牌血清断货的契机，市场增长很快，价格相对便宜，也受到部分实验室的欢迎。 6.Bioind血清简称BI血清，曾经凭借低价策略在中国市场占有率还是比较高的，近两年有部分客户反应批间差较大，质量不够稳定，选择时务必要谨慎小心。
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HPV核酸分型检测的临床意义
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
不同型别的HPV致病能力差异较大，低危型与外生殖器、肛周皮肤尖锐湿疣和低度宫颈上皮内瘤等良性病变有关；高危型与皮肤和黏膜恶性肿瘤宫颈癌相关。只有高危型HPV持续性感染才会有罹患宫颈癌的风险，不同的高危型别致癌风险也有差异，针对性进行HPV分型检测， 对宫颈癌的早期发现，**和手术效果监测具有非常重要的意义。 HPV核酸分型检测试剂盒的产品优势体现在哪些方面？ 1、全分型的HPV 基因分型检测系统，一次检测，精确区分27种HPV亚型（17种高危，10种低危），准确区分单一型别的持续感染、 多重感染和不同型别的复发感染 2、β- Globin完善的内参质控：采用β- Globin作为全程内部质控，有效判断因采样不足、扩增失败带来的假阴性结果。 3、数字化、高通量结果呈现：流式荧光双激光检测系统，每种型别100次分析，软件自动分析和判读，数字化结果呈现。 4、操作简单快捷，全程无需洗涤，减少污染，采用液相杂交系统检测，荧光显色安全无毒，全程无需洗涤，减少交叉污染可能。
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什么是“Enhanced Ligation Adapter Technology ”
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
Bioo Scientific 公司的NEXTflex® Rapid DNA-Seq Kit(Bioo Scientific代理 DNA建库试剂盒)兼容于Illumina 测序平台的测序建库，样品DNA起始量可少至1ng，整个建库流程仅用2 小时或更短的时间。此试剂盒适用于基因组DNA、福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本、ChIP DNA和低起始量的临床样本的建库。NEXTflex Rapid DNA-Seq Kit 样品的起始量范围非常灵活，跨越了3个数量级，从1ng 至1ug 。这是一个基于磁珠纯化、无需电泳进行片段选择的实验方案，多达384种接头可有效运用于多重测序NEXTflex Rapid DNA-Seq Kit与“Enhanced Adapter Ligation Technology ”联合使用，可以有效的连接更长的接头，得到更长的、种类更多的测reads。Bioo Scientific 公司的连接酶与聚合酶预混液可以确保建库过程的高质量进行。 什么是“Enhanced Ligation Adapter Technology ” 这个试剂盒的特色“Enhanced Ligation Adapter Technology”可在建库时生成大量的不同的测序reads。NEXTflex连接酶混合液的优势在于连接步骤中可连接更长的接头并可达到更好的连接效率。连接酶与传统的T4 DNA 连接酶相比，可以更高效率的(>10 9 ，传统酶的效率为10 6 )修复 DNA缺口，Bioo Scientific 公司已经在建库的接头连接方面取得了革命性的进展。“Enhanced Adapter Ligation Technology”减少接头二聚体和增加双端接头连接效率。用NEXTflex 连接酶混合液，使用者可得到更多不同reads、更丰富的测序多样性和更高的测序覆盖率。 多重测序 NEXTflex®接头较长，包含index序列，改进了多重建库实验流程，样本起始量也可进行灵活的选择。这些接头可用于单端测序、双端测序和多重测序。NEXTflex® Rapid DNA-Seq Kit 与NEXTflex® DNA Barcodes、NEXTflex-96® DNA Barcodes 和NEXTflex® Dual-Indexed Barcodes搭配用于10 ng或更多的起始材料的建库，也与NEXTflex® ChIP-Seq Barcodes 和NEXTflex-96® ChIP-Seq Barcodes搭配用于少于10ng的起始材料的建库
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菌种有着哪些保存方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。 工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛，挑选具有某种能力的有用菌种。分离就是首先是从土壤或腐生植物中收集含菌样品，用无菌水稀释后，涂布于置有适宜细菌、放线菌或霉菌生长的琼脂培养基平皿上，并将其倒置于恒温箱中，培养一定时间，平皿上长出的许多单个菌落(单一微生物的集落)经分别分离后即为各种纯种菌株，简称纯种，移种至试管斜面培养基上，置4℃冰箱备用。 菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究。 1、梭氏法 将容有1滴细胞悬液的小管﹐置于盛有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的大试管中﹐用真空泵抽至1、3帕时﹐将大试管密封保存。这是为减少细胞死亡率而采取的一种不经冻结﹑缓慢脱水的干燥保藏法﹐适用于多种细菌﹑真菌。 2、冷冻真空干燥法 将细胞悬液每0、1~0、2毫升注入一无菌安瓿瓶﹐于-40℃预冻1小时﹐再于-20~30℃﹑真空度为13、3帕的条件下脱水。在脱水过程后期﹐安瓿瓶外温度可逐渐升至25℃。脱水后的样品含水量应在3%以下。后﹐将安瓿瓶保持真空度1、3帕﹐用火焰溶封﹐置10℃保存。为防止细胞在冻结和脱水过程中损伤或死亡﹐要用保护剂制备细胞悬液。保护剂有脱脂牛奶﹑血清﹑10%蔗糖或葡萄糖溶液等﹐其作用是通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力来稳定细胞成分的构型。此法适用于病毒﹑衣原体﹑枝原体﹑细菌﹑放线菌﹑酵母菌﹑丝状真菌等的长期保存﹐是当前保藏菌种的一个重要方法。但是﹐盐杆菌﹑发光杆菌﹑黏杆菌﹑阿舒囊霉﹑多囊霉﹑担子菌中的大多数属种不适用于此法保存。 3、液态氮超低温冻结法 用甘油或二甲亚(DMSO)作保护
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ELISA实验条件该如何选择
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
在ELISA实验中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括: 1.固相载体的选择:许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。 2. 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。 3.酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取"方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 4. 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。 进口分装: 检测范围和灵敏度不同，用量少时，可使用分装，前期是它的长久性不是很好。 试剂盒的标准曲线best高点OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。 试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。 试剂盒重复性好，板内、板间变异系数均
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myTXTL® 体外蛋白表达系统的特点
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
体外蛋白表达系统 Arbor Biosciences是基于大肠杆菌的体外蛋白表达系统：myTXTL无细胞体外蛋白表达系统(Arbor Biosciences中国代理) 在大肠杆菌蛋白表达实验中，我们经常会遇到蛋白表达不出来、表达出的蛋白没有活性、蛋白表达过程中容易形成包涵体等情况，还要分析出现这些情况的原因。 1、目的蛋白不适合在大肠杆菌中表达。包括稀有密码子、mRNA结构、跨膜区等; 2、表达条件需要进一步优化。比如温度、分子伴侣、适合的表达宿主等； 3、采用哪种温和复性条件可以提高蛋白活性，减少包涵体的形成等等。 除此之外，几乎每出一点差错就需要重新开始实验，表达载体的构建、感受态细胞的转化、阳性克隆的鉴定、培养基的配制、小量诱导摸条件、大量诱导、离心富集细胞、超声裂解细胞、亲和富集与纯化。又需要额外花费一周、几周甚至半年的时间，时间成本高到让人心烦不已。 现在有一个新技术：myTXTL无细胞蛋白表达技术，这个技术可以替代原核细胞大肠杆菌表达系统，可以解决蛋白表达不出来、表达的蛋白没有活性、原核蛋白表达产物有包涵体的问题。除此之外，这个技术能够应用于可溶蛋白和膜蛋白表达、蛋白质功能鉴定、高通量筛选、分子间互作分析。还适用于在大肠杆菌中难以表达的蛋白质、蛋白质分子定向进化、噬菌体生产、基因调控网络构建、基础研究(比如，CRISPR系统鉴定)、蛋白-蛋白互作、蛋白-核酸互作、蛋白与小分子的相互作用、酶活检测等。 myTXTL® 体外蛋白表达系统的特点： myTXTL® 是一种简单快速的蛋白质体外表达系统。基因的转录(Transcription, TX)和翻译(Translation, TL)基于大肠杆菌的内源TXTL机制，在体外建立高效的无细胞反应体系。同时，又保证了T7表达系统的兼容性。 myTXTL®体外蛋白表达系统操作简单，仅需将线性模板或质粒与myTXTL® Master Mix混匀，目标蛋白在数小时内即可表达出来。不需要转化、克隆筛选和细胞裂解，避免了包涵体的形成。
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