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采购冷水机重要的注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
采购冷水机重要的注意事项 采购冷水机组注意事项 如何采购称心的制冷机组，根据多年的经验积累总结出一些建议，希望帮助到所有使用冷水机组的用户。 ，又名工业制冷机，工业冷却机，工业冷冻机，工业冰水机，工业冻水机，循环水冷却机等，种类有:水冷式、风冷式、螺杆式；按封装形式分有：封闭式、开放式、半开放式等；按大小分有：大型、小型、冻水机组、冰水机组、制冷机组、冷却机组、循环水制冷机组、冷水机组。 现在市场上工业冷水机型号繁多，厂家良莠不齐，价格更是差别很大，最高的和最低的差别能达到2-3倍。让人眼花缭乱无从下手，尤其是初次使用冷水机的用户。 对上述情形，不建议选择价格偏低的产品。有一条永恒的规律：一分价钱一分货。首先产品价格肯定是成本加利润，如果过低的售价，肯定会在机器成本上大做文章，首先是压缩机，压缩机成本占掉冷水机成本的很大一部分，压缩机又是冷水机的核心部件，有些厂商为了压缩成本，不惜采用翻新压缩机充当新压缩机，当然用户是分辨不出来的，如果买了翻新压缩机的冷水机，会造成能耗比下降，性能不稳定，甚至压缩机会很快报废，影响生产，造成更大损失。其次会在冷凝器方面做文章，有的冷凝面积缩水，铜管变铝管，更有实用翻新冷凝器的，会造成冷水机压缩机频繁报警(尤其是夏天)，制冷量明显不足。再次，蒸发器也会缩水，蒸发面积缩小，铜管变薄，材质折扣等。最后还有机箱钣金，其他配件的选择配置，售后服务条款等都会影响机器的价格等等。 因此购买冷水机时应注意主要配件的品牌、产地，用户在选择冷水机的时候首先要考虑自己的现实条件，选择适合自己的冷水机产品，需要综合对比。 转载--上海田枫实业有限公司
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染色质免疫共沉淀研究完整方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比，染色质免疫沉淀技术（ChIP）能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最佳方法。 染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, ChIP）作为最佳的研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法，它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。 CHIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且，CHIP与其他方法的结合，扩大了其应用范围：CHIP与基因芯片相结合建立的CHIP-on-chip方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选；CHIP与体内足迹法相结合，用于寻找反式因子的体内结合位点；RNA-CHIP用于研究RNA在基因表达调控中的作用。由此可见，随着CHIP的进一步完善，它必将会在基因表达调控研究中发挥越来越重要的作用。 作为表观遗传学的专业解决方案供应商，艾美捷向您推荐Epigentek品牌的最热销的常规的染色质免疫试剂盒和最有特色的植物。另外，除了成套的试剂盒外，艾美捷同样能为您提供与ChIP试剂盒相关的ChIP级抗体，可广泛用于包括ChIP、IHC、IF等在内的多种实验应用。 性价比最高的组织(ChIP)(p-2002)提供了对细胞样品进行染色质免疫沉淀反应所需的所有试剂。并且本试剂盒中含有一种阳性对照抗体(RNA聚合酶II抗体)、一种阴性对照抗体(正常小鼠的IgG)、GAPDH引物(可以作为阳性对照来保证试剂盒中试剂和操作步骤没出现问题)。在大多数生长期的哺乳动物细胞中，RNA聚合酶II会在GAPDH基因启动子上富集，准备起始转录，因此该启动子能与RNA聚合酶II发生免疫
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超声波清洗机换能器常见故障维修
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
以下是由上海巴玖技术人员整理的超声波清洗机换能器的四大常见故障，希望能对您有帮助！ 一、超声波清洗机换能器常见故障 1、换能器振子打火，陶瓷材料碎裂，可以用肉眼和兆欧表结合检查，一般作为应急处理的措施，可以把个别损坏的振子断开，不会影响到别的振子正常使用。 2、超声波振子受潮，可以用兆欧表检查与换能器相连接的插头，检查绝缘电阻值就可以判断基本情况，一般要求绝缘电阻大于5兆欧以上。如果达不到这个绝缘电阻值，一般是换能器受潮，可以把换能器整体(不包括喷塑外壳)放进烘箱设定100℃左右烘干3小时或者使用电吹风去潮至阻值正常为止。 3、振子脱胶，我们的换能器是采用胶结，螺钉紧固双重保证工艺，在一般情况下不会出现这种情况。 4、不锈钢振动面穿孔，一般换能器满负荷使用10年以后可能会出现振动面穿孔的情况。 二、超声波清洗机换能器的安装 1、准备：根据生产任务单要求，认真检查确认，把所需胶接的超声波换能器（配好对的）、缸体、网垫、胶水等准备好。 2、喷沙：把所需胶接的超声波换能器、缸体进行喷沙处理，喷沙胶接面应尽量毛，喷沙应用30目的金刚沙，沙子必须保持干燥并经常筛选（每次放入沙箱时都要筛选），喷沙时压缩空气的压力应≥6KG，并经过气源处理器除湿后的高压空气。 3、清洗：把喷好沙的缸体和超声波换能器进行清洗，换能器先用甲醇进行清洗，把表面的沙子等灰尘除掉，再用丙酮进行漂洗；缸体先用水冲、再用酸洗后冲洗干净，凉干后再用甲醇和丙酮各进行一次漂洗，网垫用≤30目厚度≤0.15的不锈钢网同样清洗干净(有条件时电解处理)备用。 4、烘干、预热：把清洗好的超声波换能器和缸体及网垫放入烘箱进行烘干，烘干为60℃－80℃烘干2小时后冷却到40℃左右时进行胶接。在所有胶接准备工作做好后，配好胶水(常温)充分调和后快速进行胶接。 5、胶接： a) 把处理好的缸体放在胶接平板上放好，并用丙酮在胶接处用棉布再擦试一遍。 b) 把处理好的超声波换能器胶接面用丙酮再
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禁用偶氮染料检测的浓缩方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
偶氮染料(Azo dyes，偶氮基两端连接芳基的一类有机化合物)是纺织品服装在印染工艺中应用最广泛的一类合成染料，用于多种天然和合成纤维的染色和印花，也用于油漆、塑料、橡胶等的着色。偶氮是染料中形成基础颜色的物质，如果摈弃了偶氮结构，那么大部分染料基础颜色将无法生成。有少数偶氮结构的染料品种在化学反应分解中可能产生以下二十四种致癌芳香胺物质，属于禁用的。这些禁用的偶氮染料品种占全部偶氮染料底5%左右。 偶氮是国际环保要求的必检项目之一，检验方法有以下三种：薄层色谱法（TLC），气相色谱及质谱联用法（GC-MSD）及高效液相色谱法（HPLC）。标准规定被检产品中不得含有23种偶氮染料中间体，若检出其中一种即为不合格产品，其限量为30ppm。 根据最新的国家标准：GB/T 17592-2011《纺织品 禁用偶氮染料的测定》，北京出入境检验检疫局唐晓萍专家开展了“纺织品禁用偶氮染料的检测”的讲座，特别强调偶氮痕量物质检测的浓缩注意事项。 偶氮浓缩 注意事项 IKA支招 IKA浓缩方案 RV10 auto control 旋转蒸发仪 控制真空度和温度 1） 内置真空控制器，真空精确控制，精度+1mbar，满足真空度精确控制的要求。 2） HB10加热锅控温精度+1°C，可满足精确控温的要求。 浓缩至近干，不能完全蒸干 具备定量蒸馏功能，可100%避免蒸干，杜绝重复试验和回收率偏低。 低真空 N920为三级隔膜真空泵，无油干式运行，极限真空可达2mbar，完成满足低真空的要求。 附：唐晓萍专家网络视频观看链接： 关于IKA ( www.ika.cn ) IKA 集团是实验室前处理, 量热分析, 混合分散工业技术的市场领导者. 磁力搅拌器, 顶置式搅拌器, 分散均质机, 混匀器, 恒温摇床, 研磨机, 旋转蒸发仪, 加热板, 恒温循环器,量热仪, 实验室反应釜等相关产品构成了IKA实验室分析的产品线, 而工业技术主要包括用于规模生产的混合设备, 分散乳化设备, 捏合设备, 以及从中试到扩大生产的整套解决方案. 集团总部位
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英国Apogee洞察细微的流式细胞仪技术创新及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
英国Apogee洞察细微的流式细胞仪 ——独特的时间戳功能 近年来，中小型个人型流式细胞仪以其价格低廉，操作简便，售后维护成本低等优势，越来越受到用户们的青睐。但是，由于流式最初都用于细胞生物学相关的研究，因此传统的仪器多针对哺乳动物细胞而设计，对特殊样本如细菌、病毒、纳米颗粒、血小板等体积较小的微粒，无法达到最佳的检测效果。 针对这一情况，英国Apogee公司突破传统，推出了A50-Micro系列的流式细胞仪，其超高的散射光灵敏度（100nm）和分辨率（10nm），使其在完成高质量的常规细胞分析的同时，在微小颗粒检测领域的具有无可匹敌的优势。性能优越、低成本和维护费用、易于操作，体积精巧，Apogee大大拓展了流式细胞术的应用领域，成为唯一一款能够帮助你“洞察细微”的流式细胞仪。因其稳定的性能和极佳的灵敏度，Apogee成为美国军方推介品牌，用于炭疽孢子、鼠疫等细菌和疾病的快速检测。 技术创新 亮点一：纳米级分辨率及灵敏度 A-50 Micro采用光胶耦合石英杯流动室，数值孔径能大于等于1.2。此外，散射光采用多角度光散射（MALS）技术，可以设置不同的激光器进行散射光检测（紫光相对于蓝光有更高的散射光分辨率），达到惊人的纳米级水平。分辨率能达到10nm，散射光灵敏度达到100nm。 亮点二：唯一一款具备宽泛的样本检测浓度（102~109 cell/ml）的流式细胞仪 对于传统流式，样本浓度是非常关键的样本制备指标，样本浓度太高或太低都会影响检测结果的准确性。因此上样前需要对这类样品进行稀释或浓缩，但这样一方面造成操作的复杂度，另一方面引入了人为误差。使用Apogee则打破了样本浓度检测的限制，大大拓展了流式应用的多样性。 亮点三：10万/秒的超高检测速度 检测速度是流式细胞仪最重要的性能之一，在保证检测结果准确的前体下，速度越快实验消耗的时间越少。特别是对于某些需要分析大量数据的实验样本，如白
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高压清洗机没有压力或压力不稳定的原因及处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
高压清洗机没有压力或压力不稳定是为什么呢？以及应如何处理呢？以下将由上海巴玖技术人员为您详细解说，欢迎进入浏览！ 一、高压清洗机在启动后出现压力不稳定或时有时无 1、高压水泵或进水管路内吸入了空气，这时我们只需要扣动高压水枪扳机，调低高压清洗机工作压力并运转一会，直到产生稳定的压力为止。 2、供水不足，这时要检查水源的压力是否足够，有的高压清洗机并不具备自吸功能，这时添置一个增压泵即可解决问题。 3、供水过滤器堵塞，这时只要清洗供水过滤器即可。 二、高压清洗机达不到设备的额定压力 高压清洗机运转时有一定的工作压力达不到设备的额定压力但是或者说压力只停留在一定范围内而不能上升,在这种情况下，首先应先检查高压喷嘴的孔径是否匹配，如不匹配更换高压喷嘴即可。其次检查调压阀是否调到正确的位置。如果在排除这两种情况下压力仍然上不去，最后检查高压泵内密封组件（O型圈、水封）是否完好，活塞是否损坏。如果活塞出现损坏这就需要检修了。 三、高压清洗机在正常运转一定时间后压力降低 1、检查高压喷嘴是否严重磨损，如磨损比较严重更换高压喷嘴即可。小压力设备的高压喷嘴基本不会出现磨损现象，因为我们所配高压喷嘴基本都进行过热处理的，但对于大压力设备的高压喷嘴就难以保证了。 2、检查进水过滤器是否堵塞，如进水滤网堵塞了，将滤网取下用水清洗就可以了。如果是不清洁的水源造成过滤网经常堵塞，可增大外置过滤器，或更换洁净水源。 3、分别检查调压阀、溢流阀和高压水泵内部的密封组件，如：调压阀和溢流阀的O型圈是否磨损、弹簧与座面是否有磨损、泵内部的O型圈是否磨损、水封是否有损坏、单向阀是否磨损或被异物垫起。
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与多肽合成技术相关的基本资讯
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
1. 多肽如何运输和保存？ 冻干粉形式的可在常温下密封运输，但溶解状态的多肽不宜长期保存。为了长时间保存多肽，建议以冻干粉形式置于含干燥剂的密封容器内，可在-20°C（-80°C效果更好）保存数年，同时避免了细菌降解和氧化，也可以避免二级结构的形成。 往往容易吸潮，因此建议在称取时操作迅速，并将剩余多肽密闭储存在-20°C或更低温度。与其他多肽相比，含有半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和谷氨酸N -末端的多肽保存期更短。 2. 多肽如何溶解？ 的溶解性很大程度上取决于多肽极性。酸性的多肽溶解于碱性溶剂，而碱性多肽可溶解于酸性溶剂，含大量不带电荷的极性氨基酸残基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有机溶剂中，如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇，然后加水（蒸馏水）稀释。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解，因为DMSO可能造成侧链氧化。 请尽量以冻干粉形式保存在-20°C（-80°C更佳），但如要保存溶解好的多肽，请注意分装成小样存放，以避免反复冻融。每份样品融冻后未用完应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦，所以请将肽溶于无菌水或直接将多肽肽溶液过滤除菌（0.22 uM）。 3.何谓多肽的纯度？ 多肽的纯度是指HPLC法在214nm波长处检测到的目标多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长)，紫外分光光度计检测不到水和残留的盐。一般而言，纯化后的多肽包含的杂质多为序列被修改的多肽，比如：缺失序列（缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列），截断序列（加帽过程中产生的序列）脱保护不完全序列（产生于整个合成过程或最后的裂解过程）。
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超声波清洗机开机操作运行流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
①检查电源是否正常，开关是否正常，指示灯，指示表是否正常，保证清洗槽干净。 ②放入清洗液，方可打开工作电源，观察电流指示表的读数是否在80-100之间，清洗液温度在40-60度之间，同事水槽会出现小气泡并伴随有“吱，吱”的声响，这就表示开始正常清洗。 ③在超声波清洗过程中必须戴上绝缘手套。 ④清洗物件不能直接放置在缸底，以免影响清洗效果，应放在专用清洗篮内或采用零装方法。 ⑤清洗液的高度也会影响清洗质量，对不同物件的清洗位置应摸索其最佳位置(注：清洗液的量与清洗槽的体积比为3/4)。 ⑥缸内无清洗液时切勿开机，以免损坏换能器。 ⑦长期不使用时，机器应保存在干燥处。 ⑧把工件料盘放入超声波清洗槽中，进行液体清洗。 ⑨工作时间为1-2分钟，手工清洗-用工具轻轻清洗工件表面(尼龙毛刷)，保证工件表面及内孔清洁(注：如果孔内还有杂质，就用高压气枪进行喷射，然后再放到清洗液中进行清洗)。 ⑩防止工件在清洗过程中刮伤表面及丢失，保证工件数量的完整。
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原料药、目录肽和合成肽分别是什么，有和区别？
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
何谓多肽的纯度？ 的纯度是指HPLC法在214nm波长处检测到的目标多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长)，紫外分光光度计检测不到水和残留的盐。一般而言，纯化后的包含的杂质多为序列被修改的多肽，比如：缺失序列（缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列），截断序列（加帽过程中产生的序列）脱保护不完全序列（产生于整个合成过程或最后的裂解过程）。 原料药、目录肽和合成肽分别是什么，有和区别？ 合成肽（Custom peptide synthesis）？ 原料药（APIs，活性药物成分）是医药中具有药物活性的成分，如胰高血糖素样肽-1 (Glucagon-likepeptide1, GLP-1)、促胰液素（Secretin）等。 目录肽（Catalog peptides）是市场上销售的多肽，通常以高纯度水平批量生产。 合成肽（Custom peptide synthesis）是根据客户的具体要求定制的多肽，如特定序列、修饰、不同纯度、不同长度等要求。
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组装换能器的工艺步骤及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
组装换能器的人员必须严格按照以下工艺来操作 一：熟悉换能器的结构 二：组装间必须每天拖一次地板，严禁抽烟，保证组装间的清洁 三：陶瓷片，铜片用360#金相沙轻磨，目的是去掉陶瓷片铜片上的毛刺及测量陶瓷片的平整度 四：换能器组件的两个面及后压板必须研磨至镜面。先用水沙打磨 再用360#金相沙磨至镜面 用刀尺30-45℃测量整个平面无透见为合格 五：在陶瓷片外围标记+号 六：电及铜片内径先刷上绝缘化注意电极平面不能有油化（预先做好） 七：电极片，陶瓷片，换能器接触面，后压盖组装前必须用丙酮清洗 2-3边 至有丙酮的餐镜纸擦拭 看不见有变黑为止 八：按顺序装 电极片，陶瓷片，压盖，手拿器件时必须拿外圆 九：Φ50，两片装的换能器 压力一般为220KG，四片装的一般为260KG，加压时必须电极短路，注意压块陶瓷片与换能器组件垂直度，注意螺杆长度 螺杆旋到底时，余有1mm。螺杆外必须套0.3mm的绝版2-3层，注意陶瓷片中外圆的垂直度 十：测试：两片装换能器，绝脉电阻》=500。阻抗应该10欧以下，Φ值2000以上 ，四片装的阻抗应该5欧以下，Φ值1500以上（注随着陶瓷片的厚度变化 阻抗参数微有变化） 十一：所有换能器组装测试后进烘箱90℃ 烘2-3小时 进烘箱前电极短路 3小时候后待温度降至60-70℃时在陶瓷片处面刷上绝缘化。螺丝缝隙处刷上705胶式硅胶 十二：换能器老化后 进仓前。每只换能器必须有钢印编码 记录细数据 谐震频率，反谐震频率，阻抗，θ值，电容 十三：换能器与变幅杆的链接方法：连接两面要用水沙皮。金相沙磨平（光）用丙酮擦净 用力拨紧 测试其参数及节点位置是否正确 ，节点位置用发兰抱紧 其频率变化小于50H2为合格
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个人型流式细胞仪HPC-100技术原理、技术革新及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
一直以来，流式细胞仪售价昂贵、维护和使用成本高、操作复杂，是制约其成为常规仪器的掣肘。近年来，不断涌现的个人型流式细胞仪以其价格低廉、操作简单、维护和使用成本低等优势逐渐成为实验室的新宠儿。但小流式的不稳定性是仍然其最大的问题之一。 Handyem公司在2013推出了革命性的新一代个人型流式细胞仪HPC-100。其核心技术是采用光纤微流体设计的“F3FiberFlowFluidics™”流动室，可以实现无鞘液，超小型，防震动等性能。HPC-100个人型流式细胞仪的出现将彻底改变人们对于传统流式细胞仪的认知，成为提高科研效率的好帮手。 四大技术革新 1、航空级别的防震性能 光纤介入流动室，避免传统流式细胞仪流动室中反射和聚焦光斑的偏移导致的检测误差，无需日常校正，可以放在生物安全柜、通风橱里，防止样品污染、保护操作者，规范操作；也可以用于野外检测和海上作业，随搬随用。 2、绝无仅有的样品回收 无鞘液设计科避免细胞被鞘液稀释后导致的破裂，检测后的样品可回收进行显微镜观测或再培养，节约并保存你的珍贵样本。 3、媲美高端流式的高数据质量 首次采用26位智能AD转换器，超越2000万道的数据精度，超越7个数量级的动态范围，能呈现更多的有效数据。 4、超紧凑设计实现的超小体积 体积是目前最主流的小型流式细胞仪体积的三分之一，可灵活放置在生物安全柜中，便于携带。 专利设计 1、非鞘液设计 HPC-100的微流体设计是目前非鞘液动力聚焦的升级技术，光纤创新的无鞘液流式细胞仪，降低运行和维护成本，消除了繁琐的激光光斑校正，从而在防震和便携性上有了极大的突破。 2、高光学效率 流动室内置全反射滤片，侧向散射光及荧光双倍收集并实现二次激发，光学效率是普通流式细胞仪的2.3倍以上。 3、全光纤导入技术 HPC-100是市面上唯一一款由光纤作为空间滤波器，传导激光进流动室激发样本的流式细胞仪。其激发和发射光纤共同集成在流动室中，一方面可保证激光在任何环境下能够稳定激发细胞，另一方面固定的
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细胞培养常见问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
1 冷冻管应如何解冻? 取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO? 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞)， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 3 可否使用与原先培养条件不同之培养基? 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类? 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2?或根本没有影响? 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。 7 何时须更换培养基? 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 8 培养基中是否须添加抗生素? 除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。
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影响细胞生长的几点因素
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
影响细胞生长的几点因素， 摘要：细胞在体外进行培养,失去了机体的调节和控制,因此,除满足营养的要求外,还必须使细胞生存环境昼接近活体的环境.外环境的培养条件如温度、渗透压、酸碱度等均能影响细胞的生长. 一、温度： 一般哺乳类及禽类细胞体外培养的适宜温度是37~38℃.温度过高或过低都会影响到细胞的生长.细胞耐受低温的能力比抗热的能力强,在低温下,细胞的代谢活力及核分裂降低.温度低于0℃时,虽影响细胞代谢,但并无伤害作用.把细胞置于23~25℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减缓,不过,鱼类细胞的适宜培养温度为23~25℃.若温度过低,在降到冰点以下时,细胞因胞外水和胞质结冰而受损死亡,但若向培养基中加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）等保护剂,封入安瓿中后,置于液氮或低温冰箱（-70℃）中,可起保护作用,此时细胞可而耐受-70℃以下温度,能长期储存,解冻后细胞复苏,仍能继续生长增殖,细胞物性状不受任何影响.此为保存细胞的主要手段. 高温对细胞培养不利.细胞在39~40℃培养1h,会受到一定损伤,但仍有可能恢复,但不能忍受温度再升高2℃,持续数小时,即在41~42℃培养1h,细胞操作严重,温度到43℃以上时细胞多数被杀死.高温主要引起酶的灭活、类脂质破坏、核分裂的破坏,产生凝固酶使细胞发生凝固,另外使蛋白质变性.因此,体外培养细胞时一定要避免高温. 二、渗透压： 细胞在高渗透溶液中低渗溶液中,可以立即发生皱缩或肿胀、破裂.所以,渗透压是体外细胞培养的重要条件之一.哺乳动物和其他动物组织细胞体外孙女培养的渗透压的维持主要与NaCl有关,但不能忽视其他电解质与渗透压的关系,渗透压与单位体积溶剂内溶质的分子数和离子娄成正比.为此,按一定比例控制培养基中离子平衡,维持正常渗透压是很重要的.这不仅是为了维持细胞张力,而且是为了调节细胞的代谢.因为细胞外离子输送和离子浓度改变着其他营养物质的输送（如氨基酸、糖等）,直接影响细胞基本合成系统. 理想的渗透压因细胞的类型及种族而异,人血浆渗透压为290mmol/L,被
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细胞的复苏及冻存方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
细胞的复苏及冻存方法 一. 细胞复苏与培养 将液氮或- 80℃ 保存的肿瘤细胞于 37℃ 水浴，快速溶化，用 8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液，于 1500 转/ 分，离心 3 分钟。 弃上清，再吸取 8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀，再 1500 转/ 分，离心 3 分钟，弃上清，细胞沉淀用 1.0ml 培养基混匀，备用。 另取一个 75cm2 方瓶，加入 14.0ml 培养基质，将上述制备的含 肿瘤细胞悬液(1.0ml)加入此方瓶中，于 37℃，5%CO2 孵育箱中培养。 若此肿瘤细胞悬浮生长，大约 3－4 天细胞基质会变黄，5.0ml 细胞悬液可传代一个方瓶培养，可用 3－4 个方瓶培养，一个方瓶中呈对数生长的肿瘤细胞可达 1-1.5×107 个，根据试验所需，可决定传代的次数。 若此肿瘤细胞呈贴壁生 长，经过 3-4 天，肿瘤细胞生长至 80%-95% 单层时，弃上清，用 0.5mM 的EDTA(难消化的肿瘤细胞用0.25%胰酶1.0ml)，处理肿瘤细胞大约 3-5 分钟，用倒置显微镜观察，当 90% 的肿瘤细胞变圆时，即可用弯管吹打并将消化的细胞转移到 15ml 离心管中，于 1500 转/ 分下，离心 3 分钟，弃上清，加少许培养基混匀，可传代 3 个 75cm2 方瓶扩大培养。 二. 细胞冻存 将对数生长的肿瘤细胞用 1 个 75cm2 方瓶按上述方法收集，于 1500 转/分离心 3 分钟，弃上清，用保种液( 含 10% DMSO 的小牛血清)3.0ml 混匀，分别加入到 2-3 只保种管中，写上肿瘤细胞名称、时间、保种者姓名，放- 80℃ 保存，次日将它们转移到液氮中保存( 注： -80℃ 下可保存细胞半年至一年，液氮可保存细 胞 5-10 年，甚至更长的时间)。以上所有物品均需经过高温灭菌 ( 121℃，30 分钟) ，培养基质则经过过滤(0.22uM)除菌，所有操作均必须遵守无菌操作技术，避免细菌、真菌、病原体、衣原体等污染。
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T淋巴细胞转化实验的基本原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
T淋巴细胞转化实验的基本原理 T细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化.淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一. 淋巴细胞转化试验有形态计数法、MTT 法和同位素法三种.MTT 法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法.MTT 是一种噻唑盐,化学名3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色.小鼠脾细胞受到ConA 作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT 作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜（Formazan）颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸─异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD 值,测定波长570nm.根据OD 值的大小计算反应体系中细胞增殖程度. 3H-TdR 掺入法：细胞增殖的基本条件或前提为细胞质和细胞核的复制,这是正常细胞增殖过程缺一不可的前提.一般来说,一个细胞周期可大致分为四期,即G1 期、S期、G2 期和M期.其中S期为DNA合成期,主要功能活动为DNA合成.3H-TdR即（甲基-3H）胸腺嘧啶核苷（[3H-methyl]thymidine）,是DNA合成的前体.加入细胞培养液中后被细胞摄取作为DNA合成的原料.细胞合成的DNA越多,则所掺入的3H-TdR就越多,因此,检测所掺入的3H-TdR就可反映细胞增殖的程度.因该方法有同位素污染问题,故我们实习中仍用MTT法.
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