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Cell子刊最新发表应用Arraystar LncRNA芯片研究宿主抗病毒反应的文章
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
中科院微生物研究所/福建农林大学的陈吉龙研究员长期从事流感病毒致病机理、抗病毒免疫学、病毒感染诱导肿瘤发生机理、肿瘤免疫学等领域的研究。近期，其实验室利用Arraystar Human LncRNA 芯片研究发现了一种新的调控宿主抗病毒反应的长链非编码RNA——NRAV，通过抑制干扰素刺激基因转录从而调控抗病毒反应，在抗病毒天然免疫反应中发挥重要调控功能。该研究成果刊登在国际顶级期刊Cell子刊Cell, Host & Microbe（影响因子12.194）。（芯片实验由康成提供技术服务） 研究背景： 流感是一种重要的人畜共患传染病，极具感染性和传染性。流感病毒感染宿主后，病毒RNA被宿主的病原识别受体所识别，激活抗病毒天然免疫应答，抑制病毒复制。LncRNA是近5年来生物和医学界的热门研究领域，已有报道证明lncRNA在众多细胞过程中具有重要功能，但是lncRNA在抗病毒天然免疫应答过程中的作用目前仍不清楚。陈吉龙教授课题组本次研究目的是利用Arraystar Human LncRNA 芯片对lncRNA在流感病毒复制及宿主抗病毒天然免疫应答中的功能展开系统研究。 研究思路： 为了系统检测病毒对宿主lncRNA的影响，作者首先应用美国Arraystar Human LncRNA芯片检测甲型流感病毒（IAV）感染和不感染的肺泡上皮细胞细胞（各3例）的lncRNA表达变化。其中，lncRNA-NRAV在IAV感染的细胞中表达水平显著降低，并且借助于生物信息学分析和分子生物学手段，确认了NRAV的非编码特征和全长序列。作者通过细胞和转基因小鼠的体外、体内实验表明，NRAV能够显著促进IAV的复制及毒力，说明NRAV是抗病毒天然免疫应答的负调控因子。 作者进一步研究NRAV促进IAV复制的机制，在病毒感染的细胞中过表达NRAV，通过全基因组表达谱芯片检测基因表达改变。GO分析显示很多差异表达基因与病原体感染和病毒复制有关，并且众多干扰素刺激基因的基因表达发生显著变化。 作者在多个层次研究NRAV影响干扰素刺激基因表达的机制。ChIP-PCR实验发现，NRAV显著改变关键干扰素刺激基因IF
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冻干机制冷与真空系统的维护及常见问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
摘 要：从冻干机的制冷与真空系统2方面分析了其日常维护和常见问题。 关键词：冻干机；制冷系统；真空系统；日常维护保养；维护措施；常见问题 冻干机被广泛应用于药品生产，然而，由于冻干生产过程的不可间断性，一旦冻干机出现故障将严重影响生产，给企业带来损失。因此，笔者就其中重要的制冷与真空2大系统的日常维护和常见问题进行分析，希望对冻干机使用者能有所启发。 1 制冷系统 1.1 日常维护保养 （1）每次开机前要例行检查：1）所有截止阀（压缩机吸排气阀、供液阀、手阀等）是否处于开启状态；2）各压力表读数是否正常（0.6～0.7 MPa）；3）压缩机油位是否正常（1/4～3/4）；4）冷却水压力（0.1 MPa以上）、温度是否正常。 （2）送电后应注意：1）压缩机是否自动收液；2）油压差是否复位等；3）检查曲轴箱的加热器加热情况，曲轴箱的温度应高于环境温度20 ℃。 （3）开机后要注意：1）压缩机运行声音是否正常；2）制冷管路是否有异常振动；3）压缩机本身的振动是否最小；4）视液镜流量是否正常；5）膨胀阀结霜情况；6）压缩机回霜情况。 （4）压缩机冷冻机油视情况每半年或1年更换1次。 （5）水冷凝器需定期清洗，一般为1年。可拆洗，也可用水处理清洗剂进行循环清洗。对于风冷机组，及时清理冷凝器外表面。 （6）注意压缩机不能频繁启动，启动间隔的时间应大于3 min。 1.2 常见问题及处理办法 1.2.1 高压压力过高，高压报警 （1）制冷剂太多，排气压力高，应放出部分制冷剂。 （2）冷却水温度高，流量不足或水冷凝器结垢。 （3）制冷管道低压段有泄漏，吸入空气。 （4）高压排气阀没开足或损坏，造成排气不畅。 可以通过消警复位按扭进行复位，按扭开关在高压压力继电器上。 1.2.2 油压差报警 （1）回油不畅，造成压缩机曲轴箱内油位不够，油泵吸不到油。一般需换新的油分离器。 （2）油脏，造成油泵过滤器堵塞。需换油，并清洗油过滤器。 （3）油压差继电器失灵。更换新的油压差继
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水活度对蛋糕的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
瑞士novasina水分活度仪给出全美解决方案，帮助大家快速方便准确的检测药品中的水分活度，保证产品优良品质和稳定生产。 水活度--一个未被广知及被意识到的指标，但对质量控制能比传统的水分含量测量提供更多的有效帮助信息。她是关于产品保质期、质地、味道及微生物和化学稳定性的关键参数。 寿命长的烘焙产品如蛋糕是一个很好的例子，水活度是一个主要的保护因素，这些烘焙产品有大约6个月的保质期–水含量为15到27%之间。这些产品的填充由各种不同的糖，果酱和巧克力构成。 主要保护因素水活度aw值控制在0.7~0.8之间。通过使用不同的糖（葡萄糖，蔗糖）或多元醇（山梨醇）来实现。并且也通过喷洒食用乙醇来控制旱生霉菌的生长。通过这些措施，连同真空包装等手段来防止生物腐败。 以一些填充巧克力馅的蛋糕为例：水活度（aw） 水份含量（%）生面团 0.755 23.2 牛奶焦糖慕斯 0.785 15.4 在多组份食品中水份的迁移关系是食品的保质期的一个重要因素，高温烘焙可以使这些不同的组份之间水活度达到平衡。因此，食物的不同层组份之间的平衡的调整不仅是由烘烤过程的影响，同时也受生产和包装之间的存储时间影响。所以用水活度这个指标可以表征烘焙产品的微生物的稳定性。生产一个稳定的产品，味道和质地的感官仍然很重要，然后在生产过程中依据HACCP的规定应进行监测控制，而水活度aw的测量是进行这种控制的一种重要手段。 关于大昌华嘉 大昌华嘉商业（中国）有限公司(DKSH)作为瑞士NOVASINA产品在国内的总代理，负责其所有中国地区产品、技术的推广销售和服务。 大昌华嘉是一家著名的国际贸易集团，总部位于瑞士的苏黎世。公司自1900年以来便与中国进行友好贸易往来。大昌华嘉仪器部专业提供分析仪器及设备，独家代理众多欧美先进仪器，在中国的石化，化工，制药，食品，饮料，农业科技等诸多领域拥有大量用户，具有良好的市场声誉。业务范围涉及水分活度仪、粒度仪、接触角测量仪、表/界面张力仪、粉末流动
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多肽常用的几种水解方法分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
虽然的氨基酸组成分析方法较多，且趋向更灵敏、更精确、更简便、更快速，但还没有一种方法可以单独适用于所有氨基酸残基的检测，并且很多因素如温度、时间、水解试剂、水解方法及样品中添加剂等对水解程度均有影响。常用的水解方法作简要介绍如下: 1酸性水解 酸性水解是应用最为广泛水解方法，可以使大多数氨基酸残基完全水解，最通用的水解剂是6 mol/L HCI。 条件:6 mol/L HCI、真空、110℃.水解时间为20-24h。即可用于液相水解模式也可用于气相水解模式。但在该条件下，天冬酰胺和谷氨酰胺分别被完全水解为天冬氨酸和谷氨酸，色氨酸则被完全破坏，半胱氨酸先用二硫代二丙酸、4一乙烯呲啶或碘代乙酸保护后水解方可测定，酷氨酸部分被水解液所破坏，丝氨酸和苏氨酸被部分水解。有些脂肪族氨基酸残基间的肽键难于裂解，可以通过延长水解时间如水解92h甚至120h来解决。 2碱性水解 碱性水解一般选用NaOH和KOH作为水解剂。该水解方法是HCI水解的互补法。因为碱水解时，多数氨基酸遭到破坏或外消旋化，仅色氨酸是稳定的。所以此法仅限于测定色氨酸。 3酶水解 用一组蛋白酶水解肽链，特别适用于对化学水解敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的测定。水解过程中氨基酸不发生消旋化，几乎可以保持所有的组成氨基酸不被破坏。但是因为酶水解条件温和，对天冬酰胺、谷氨酰胺等皆无破坏作用，且反应需要较长的时间，水解不完全，酶本身也是蛋白质，对样品的测定结果可能会有干扰。 微波辐射能水解，一般情况下190℃微波水解15分钟肽类即可完全水解，导致完全水解的时间大大缩短。在微波辅助酸水解和微波辅助酶水解中，水解时间可从过去的几十小时缩短到几十分钟。 总之，药物水解方式应根据其产品的性质、研究目的、可获得的样品量及少实验室的具体条件采取适宜的水解方法。
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玻璃器皿的洗涤方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
分析化学实验室经常使用玻璃器皿和瓷器，用没有清洗干净的容器进行实验往往得不到准确的结果。分析化学使用中使用的器皿应洁净透明，其内外壁应为水均匀地润湿且不挂水珠。 洗涤应根据实验要求及污染物的性质和玷污的程度选择洗涤方法。清洗玻璃器皿时，一般要先倒去污物，然后用自来水冲洗，加洗涤液刷洗，再用自来水冲净洗涤液，最后用纯水（蒸馏水或去离子水）淋洗三次。这样清洗的的容器内壁应为水均匀地润湿且不挂水珠。 实验室常用的烧杯、锥形瓶、比色皿、试管等用洗涤剂和毛刷按以上方法进行洗涤即可。 滴定管、移液管、吸量管、容量瓶、量筒等具有精密刻度的玻璃仪器，不宜采用刷洗方式，以免伤及刻度线，**采用 Y eadar 实验室专用清洗消毒机，专用的清洗剂和清洗程序进行喷淋冲洗、吹干。或者采用合成洗涤液或铬酸洗液浸泡一段时间，然后再冲洗干净。 光学玻璃制成的比色皿等玻璃仪器更不能用刷子刷洗，在用洗液浸泡时也要防止长时间浸泡导致浸润造成透光率下降的问题。因为比色皿通常为显色反应，所以建议采用合成洗涤剂或者盐酸-乙醇溶液浸泡数分钟，然后再冲洗干净。或者采用实验室专用清洗消毒机，专用的清洗剂和清洗程序进行喷淋冲洗、吹干。 洗涤玻璃器皿时应符合少量多次的原则，即节约，又提高了效率。不能用布或滤纸擦拭已经洗净的容器，这样会使纤维或污物留在器皿上，污染了容器。干燥时或者采用倒置挂起干燥，或者使用干燥箱（如果最后冲洗用的是溶剂时切不可放入干燥箱以免危险）。 推荐Y3600全自动实验室器皿清洗机、实验室洗瓶机清洗效果佳，使用稳定，服务有保障。 孙 光 Gavin Sun 13321180593
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多肽合成的基本原理及相关问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
1.的基本原理? 多肽固相合成法是化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化中间产物，合成过程可以连续进行，进而为的自动化奠定了基础。目前全自动多肽的合成，基本都是固相合成。其基本过程如下： 基于Fmoc化学合成，先将所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点，同其它的氨基酸已经活化的羧基作用形成肽键，不断重复这一过程，即可得到多肽。根据多肽的氨基酸组成不同，多肽后处理方式不同，纯化方式也有差异。 2.做免疫用的多肽多长为合适? 答：一般约10-15个氨基酸，当然长一些免疫效果好一些，不过合成费用也会增加。MAP多肽则希望长度在15aa以上，效果较好。另外，10aa以下的多肽免疫效果比较差。 3.免疫用多肽的纯度需要很高吗? 答：一般而言，免疫用Peptide，70-85%即可。 4.我们合成的多肽溶解性不好，多肽就有问题对吗? 答：很难准确预测一个多肽的溶解性及合适的溶剂是什么。如果多肽难以溶解就认为有问题这个观念并不正确。 5.多肽状态是如何?如何保存储存? 答：我们提供的多肽是粉末状，一般为灰白色，组成不同，多肽粉末的颜色有差异，多肽一般长期保存需要避光保存，并应保存在-20度，短期可以保存在4度。可以短时间的话是以室温运输。 6.如何溶解多肽? 答：溶解多肽是非常复杂的事情，一般很难一下子确定合适的溶剂。通常是先取一点试验，在没有确定合适的溶剂前千万不要合部溶解。 下列方法有助于您选择合适的溶剂： (1)判定多肽的电荷特定，设定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1；碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它氨基酸的电荷为0。计算出将电荷数。 (2)如果净电荷数>0，多肽为碱性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸(10%以上)；如果多肽还不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然后加入500ul水稀释。 (3)如果净电荷数
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从修饰肽序列中判定修饰肽的溶解性方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
如何从修饰肽序列中判定修饰肽的溶解性? 1.非HPLC纯化的中有哪些杂质? 答：粗品和脱盐级别的修饰肽中修饰肽和非修饰肽类杂质：如非全长修饰肽和修饰肽后处理的一些原料如DTT、TFA等。 2.HPLC纯化的有哪些杂质? 答：经过HPLC纯化的修饰肽，仍会有一些一些杂质存在，其中的杂质主要是短肽和微量TFA。 3.多长的为合适? 答：修饰肽合成需要考虑修饰肽的长度，电荷，亲疏水性等因素。长度越长，合成粗品的纯度和产率都随着降低，纯化的难度和无法合成的几率就会大些。当然修饰肽功能区的序列是无法改变的，但是为了修饰肽的顺利合成，有时不得不在功能取的上下游增加一些辅助氨基酸，以改善修饰肽的溶解性和亲疏水性。如果修饰肽太短，合成也可能有问题，主要问题是合成的修饰肽在后处理过程中有一定的难度，5肽以下的修饰肽，一般要有疏水的氨基酸，否则后处理难度加大。15个氨基酸残基以下的修饰肽一般都可以得到满意的产率和得率。 4.如何从序列中判定修饰肽的溶解性? (1)修饰肽中如果含有高比例的疏水性很强的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，修饰肽很难溶解与水性溶液中或根本不可能溶解。这些氨基酸无论是纯化或合成，都有可能有问题。 (2)一般情况下疏水性氨基酸的比例
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食品行业实验室如何摆布实验室家具
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
一般根据食品企业自身的需求，会建设相应的食品类实验室，细菌与理化检验相当重要，其综合实验室主要包括：办公室、理化分析室、细菌实验室。 1.办公室 2.理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并） ①理化分析室（兼作感观检验室） ②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器） 3．细菌实验室： ①细菌检验操作室； ②无菌室； ③培养基制作室；④洗涤消毒室； 一般建设布局要求如下： 1.办公室： 办公室是食品企业化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，因此，应设在整体综合化验室的最外层，只需有桌、椅等简单设施即可。 2.细菌检验操作室（常规操作） 细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台。 对实验台的要求： a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m； b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线；也可以做边台。 c.实验台两侧安装小盆与水龙头； d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座； e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜。 3.无菌室： 无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物实验提供一个相对无菌的工作环境，无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连。为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局： a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内； b.与操作室用两道缓冲间隔开； c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏； d.无菌室内设有实验台（中央实验台与边台皆可），紫外灯距实验台面要小于1.5m； e.无菌室与操作室之间设有双层窗构成小通道。 4.培养基制作室： 培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品柜。 a.边台上要放置电炉，以满足熔化煮沸培养基时用； b.边台材料要耐高热、耐酸碱； c.药品柜分门别类存放一些一般药品及试剂； d.危险、易腐易燃有毒有害药品单独设保险柜存放； e.边台上要放天平，以称取药品
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化学实验室设计所需实验室家具介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
实验室是存在一定危险系数的空间，实验操作使用一些酸、碱、有机溶剂等试剂药品；试管、烧瓶、烧杯、冷凝管等玻璃器皿；原子吸收、气相色谱、液相色谱、紫外分光光度计等精密仪器以及烘箱、马弗炉等高温设备。实验室规划设计是必须以“实用、安全”为出发点，综合考虑各种仪器设备安全操作要求，配置相应实验设备。 一、普通及分析化学实验室 普通及分析化学实验室从事研究实验包括化学物之混合、加热、冷却、蒸馏、蒸发、稀释及反应，这些工作可在开放实验台上或排烟柜操作，所需分析设备如分光光度计、瓦斯、液态层析计等，分析化学实验室常会使用一些有害物品，包括高毒性、挥发液体、粉体、有压可燃气体。虽然毒性物质分析过程可分解成无毒性合成物，但在分析操作上仍为有毒状态，通常不建议分析化学实验室操作极毒化学物，如致癌、致命易爆炸等化学物及较高放射性物质等。 配置实验设备：边台、中央台(水槽、试剂架)、通风柜、药品柜、器皿柜、回流冷凝装置（小水杯及水拷克）、抽滤装置（抽滤水龙头、小水杯槽）。 二、有机化学实验室 有机化学实验室从事研究实验包括一般有机物分析(定量分析和定性分析、药品检测(含量测定和鉴别、农药残留测定(六六六DDT农药残留、菊脂农药残留、有机氮农药残留、有机磷农药残留、气体分析（人工煤气组分分析、天然气的组成分析、液化石油气成分分析）、有害物质测定(苯并吡、多环芳烃、黄曲霉毒素)、红外光谱未知物鉴定、质谱未知物鉴定、侦检样品(水、食品、血样) 等。有机实验室拥有高效液相色谱仪、气相色谱仪、薄层扫描仪、元素分析仪、核磁共振仪、红外吸收光谱仪等大型仪器及配套设施。 配置实验设备：边台、中央台、中央台式整体通风罩、药品柜、器皿柜、回流冷凝装置（小水杯及水拷克）、抽滤装置（抽滤水龙头、小水杯槽）。 三、无机化学实验室 无机化学实验室从事研究实验包括重金属（铅、镉、汞、砷等）定量分析，包括环境、食品、生物、中药材等各类型样品、
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实验室通风柜及通风系统设计事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
一、通风系统的分类 1、全面通风：在整体房间内进行全面的空气交换。当有毒有害的气体大面积的扩散到实验台空间时，必须要及时排出，同时还要有一定的新鲜空气进行补充。把有毒有害的气体控制在规定的范围内。 2、局部通风：将有毒有害的气体通过小的操作设施进行局部的通风处理，防止扩散到整个房间；还可根据气体浓度的大小选择强制排风。强制排风可称机械排风，利用局部排风把所产生的风压借助通风管道进行整体排放。 对于排放到空气中的废气，其有害物质的排放标准超过国家规定的排放标准时，不能直接排放到大气中污染环境；必须根据该气体的化学性质经中和反应吸收处理使其浓度低于排放标准后，方可排放到大气中。 二、风量的选择 风量的选择是根据房间排风要求大小来进行的，每行业每个专业都有不同的标准要求，这根本就没有怎样选的问题。风机的选择跟转速/功率/压值都有关系，风机的压力跟通风系统的阻值有关系，当然是很重要的。 三、通风管设计要点 1、一台通风柜与一台通风机，用单一管道连接是**的方法。 2、不能用单一管道连接的，只限于同层同一房间的可采用互相并连。 3、通风机尽可能安装在管道的末端（屋顶上等处）。 4、 管道长度越短越好。 5、一台通风柜连接的通风柜越烧越好。排风通道尽可能直立，而且通道越高越好。 6、如需改变风道风速，则应配置相应的变频调整系统。 7、排风通道的末端应尽量避开补风管道送气口，防止排出的有害气体通过排风管道再被送至通风柜。 四、风机选择 1、正确选择风机，是保证通风系统正常、经济运行的一个重要条件。所谓正确选择风机，主要是指根据被输送气体的性质和用途选择不同用途的风机；选择的风机要满足系统所需要的风量，同时风机的风压要能 克服系统的阻力，而且在效率最高或经济使用范围内工作。具体选择方法和步骤如下： 2、根据被输送气体的性质，选用不同用途的风机。例如，输送清洁空气，或含尘气体流经风机时已经过净化，含尘浓度不超过150
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实验室家具合理规划及布置
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
实验室的整体工作环境不同于普通的办公环境，它有着更高技术层面的要求，而且不同领域实验室又有着不同的需求，其差别有时候还大。 实验室规划理念： 实验室的各种实验台、实验柜等实验室家具应符合国际标准与环保的要求，面材应具备理化性能好、耐腐蚀、易清洗的特点，结构要符合人体功效学以及操作安全，能有效地提高操作者的工作效率。 实验室的墙体应采用表面极附性小、清洗方便、分隔灵活的建筑材料；实验室地面应采用耐腐蚀、耐磨损、易冲洗等建筑材料，建筑耐火等级不应该低于二级，消防设施的设置也应遵守国家有关建筑设计规范的规定。实验室的水槽、下水管道等应耐酸碱及有机溶剂、并采取防堵塞、防渗漏措施。 具有洁净度、温湿度、压力梯度要求的不同功能的实验室，应采用独立的新风、回风、排风系统。通风柜的排风系统宜独立设置，不宜共用风道，更不能借用消防风道。 标准实验室的配置方法： 1、 实验室中央 这里是设置中央实验台的空间，通常在中央实验台的纵向侧面或中间设置洗涤台，台上设置试剂架，也可设置万向抽气罩。 2、 右侧靠窗 设置实验边台、作业台、天平台、边台试剂架、万能组合架、吊柜 3、 右侧靠门 设置通风柜、实验台、洗涤台、干燥架、药品柜、储物柜（通风柜的位置应便于通风管道的连接）。 4、 门的左右 通常放置安全设备，紧急喷淋器、洗眼器、灭火器等。 5、 左侧靠门 设置通风柜、实验边台、边台试剂架、洗涤台、吊柜，安置大型装置和设备。 6、 左侧靠窗 设置边台、作业台、边台试剂架、安置大型装置和设备的地方。 7、 窗的位置 窗下的空间可设置边台、测试台、显微镜台，操作时视觉良好。 实验室分类布置方案： 在现代的实验研究机构中，实验室通常按物理学，一般化学，有机合成化学，生物学来分类，在选择设备进行平面设计时，不同领域的实验室有不同的要求，其差别有进很大。 在设计化学分析实验室时，通常在实验室中央配置两面操作的中央台，两边配置边台、测试台、通风
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磷酸化蛋白做WB小妙招
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
磷酸化蛋白做WB小妙招 1、一定要在Lysis Buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂； 2、加一抗后**4度过夜，保证抗体有充分的结合时间，因为磷酸化的蛋白只占总蛋白量的极少部分； 3、选择优质的磷酸化抗体，所以要选好的厂商，Novus为全球高端抗体品牌，其磷酸化抗体效果不错； 4、抗体的稀释倍数要优化，可以根据厂商建议进行优化； 5、用含5% BSA的TBST稀释抗体，不要用常见的5% -Fat Milk的TBST； 6、磷酸化蛋白WB时背景也往往较深,所以压片时间要适当,不能太长或过短,太长则背景太深盖住想要的那条条带，时间过短则可能没有条带或者条带太浅； 7、磷酸化蛋白WB时,用TBST洗时也要注意一下,摇床的转速不要太快,洗的时间不要太长,孵育一抗和二抗之后分别洗5min 3次即可,宁愿背景深一些,总比做不出来强得多.另外，洗的时候，**不要把几张膜叠在一起洗。 阅读原文：
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eBioscience流式抗体常见问题与解答（二）
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
1、eBioscience公司提供了哪些抗体？ A：物种——人、小鼠、大鼠、非人灵长类、犬类等。 检测指标——包括细胞表面标记（CD分子，膜骨架，趋化因子受体）和胞内指标（细胞因子，核内转录因子）。 抗体标记——生物素标记抗体，亲和纯化抗体以及直标荧光素抗体。 eB抗体的直标荧光素有（括号内是发射光波长）： 紫光（405nm）激发： eFluor® 450 (450nm) 蓝光（488nm）激发：FITC (518nm)、Alexa Fluor® 488 (519nm)、PE (575nm)、PerCP-eFluor610(610nm)、PE-Cy5 (667nm)、PerCP-Cy5.5 (695nm)、PerCP-eFluor® 710 (710nm)、PE-Cy7 (785nm) 黄绿光（532-561nm）激发：PE (575nm)、PE-Cy5 (667nm)、PE-Cy7 (785nm) 红光（633nm）激发：APC (660nm) 、eFluor® 660 (660nm)、Alexa Fluor® 647 (668nm)、Alexa Fluor® 700 (723nm)、APC-eFluor® 780 (780nm) 2、eBioscience抗体的保存期限？ A：请见试剂瓶包装上的标注，如没有标注的一般为收货后6个月。特殊情况见说明书或咨询联科生物。 3、eBioscience抗体交叉反应性 A：ebioscience公司测试了抗体与非人灵长类及猪、犬类的交叉反应性。 抗人抗体的交叉反应性请见网页 抗小鼠抗体的交叉反应性 4、亲和纯化抗体与功能性抗体的区别？ A：eBioscience提供的亲和纯化抗体含有叠氮化钠，这些产品主要用于flow cytometry, WB, IP, and IHC 实验；功能级抗体则不含有叠氮化钠，而且进行了内毒素检测，这些抗体的内毒素含量低于或者等于工业内毒素标准0.001 ng/ mg。功能性抗体一般用于体外功能实验，如刺激、阻断、中和。 5、eBioscience公司提供抗体浓度是多大？ A：eBioscience公司的提供抗体包括两种规格：ug和test包装. 在ug规格的抗体中，亲和纯化、生物素标记、功能纯化生物素标以及FITC和Alexa Fluor® 488标记的抗体浓度一般为0.5 mg/ml；APC、PE、Alexa Fluor® 647,700和tandem标记的抗体浓度一般为0.2 mg/ml；功能纯化抗体浓度一般为1 mg/ml；具体以抗
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抗原肽设计的基本原则
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
设计的基本原则 为了使生产抗体获得最佳效果，仔细地设计是很有必要的，设计应满足一个基本条件：在免疫过程中，该抗原既不会产生过强的免疫反应，同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的抗体。尽管设计是一个很复杂的课题， 但是有几点关键的基本设计原则可以提供给大家参考： 1、确定抗体的用途（应用）新开展一个研究项目，弄清楚所感兴趣的蛋白的一些基本特性是很有必要的，特别是如果知道蛋白的结构会对选择抗体易于接触和识别的识别区域有很大的帮助。然而，在没有这样精确的结构信息（多数是这种情况）的情况下，了解研究的用途（应用）会影响多肽设计的策略。例如：如果研究重点是集中在蛋白的不同区域，如C端或N端，或在一种特定状态下的蛋白，如磷酸化等，那么按照所需序列设计的多肽和产生的相应的抗体在应用上应该没有太大的困难，然而，蛋白的构象将影响抗体与其识别区域之间的相互作用。这种情况下可能存在的问题是如果在折叠的蛋白中，该识别区域被藏在蛋白的内部，抗体将无法接触到该区域。（无法产生相互作用）。 2、识别区域的选择原则一般说来最理想的抗原性识别区域应具备亲水、位于蛋白表面和结构上易变形性等特点。因为在大多数的天然（自然）环境中，亲水区域倾向于集中在蛋白表面，而疏水区域常常被包裹在蛋白内部，同样道理，抗体只能与在蛋白表面发现的识别区域相互作用，而当这些识别区域有足够的结构易变形性而转移到抗体可接触的位置时，将会与抗体间有很高的亲和性。 3、连续的与不连续的识别区域连续的区域是指由连续的氨基酸序列（残基）构成的识别区域。大多数抗体是针对连续识别区域的，抗体能与这类区域以很高的亲和力相结合表明这段序列不在蛋白内部。不连续的识别区域是代表有一定折叠的一段多肽序列，或是将两段分离开的多肽连在一起的抗体的识别区域。在某些情况下，针对这样不连续识别区域的抗体也能产生，只是用来免疫的必须具备与该不连续识别区域相似的二级结构，而序
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过滤器的作用和安装
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
过滤器的作用： （1）吸油过滤器：该过滤器设在泵的吸入管路上，滤除油箱内的残留污染物质的通过空气孔进入的污染物，有保护泵的作用。但是为了避免泵产生空穴现象，必须充分注意压力损失，一般使用100—200目的的粗金属网或凹口金属丝材料。因此，它不是控制系统的污染浓度的过滤器。 （2） 高压管路过滤器（A）：设在泵的出口管道上，有保护污染物不进入系统的作用。因此，可以控制系统的污染物浓度。但是，因为是高压主管路，要受泵的脉动和压力冲击，所以过滤元件的材质，强度要慎重考虑。 （3） 高压管路过滤器（B）：在系统中，为了保护对污染特别敏感的液压件，才安装此过滤器，也称终端过滤器。因而它往往比其他过滤器的过滤粒度小。因此使用时要选择容量大的。另外对元件的材质，强度也同（A）一样要充分考虑。 （4） 回流过滤器：设在系统的回油管路上，其作用是把系统内产生或侵入的污染物在返回油箱前捕获到。因此它是控制系统污染浓度的最有效最重要的过滤器。虽是低压管路，但根据传动装置的运转状况，也会出现脉动或压力冲击，所以对元件材质、强度要充分考虑。进口泵 （5） 循环过滤器：设在油箱循环的回油路上，系统的容量大，所以在要求要求严格的清洁度时往往被采用，即使系统不在工作，也可以把油箱内污染物捕集到，因此，降低污染浓度的效率**。另外安装着冷却器，具有可以同时进行冷却、容易维修等优点。但需要用专用泵和电机，造价高。 （6） 空气过滤器：设在油箱上，具有防止污染物由于油箱的油量变动而随空气混入油箱。因此过滤精度要具有与过滤器同等以上的性能，容量要留有充分余地，以防由于孔阻塞使油箱内压变成负压，引起泵的空穴现象。在周围环境恶劣时尤其要注意。 （6）使用方法：在滤头上放上水系滤膜把不锈钢滤杯与滤头通过卡箍固定在一起，气嘴与真空动力相连，打开各个碟阀，把溶液注入滤杯，打开真空动力，溶液通过滤头上的滤膜在动力作用下溶液迅速通过过滤支架流入集液室，待滤
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