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Mynox去除支原体有何优势？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
目前，市面上祛除支原体的产品不少，五花八门，如何挑一款真正的好产品出来呢？本文威正翔禹/缔一生物为您分析Mynox去除支原体有何优势？ 如何判断这是一款真正的好产品，可以从几个方面去比较。例如，支原体的祛除效果，祛除速度，是否有副作用等等。目前市面上的祛除支原体产品大部分都是抗生素。很多抗生素其实对支原体并没有效果，因为它们的作用靶点是细菌的细胞壁，而支原体是没有细胞壁的。所以针对支原体的抗生素是某些特定类型。抗生素对支原体的作用主要是两方面，一是抑制支原体的核酸复制，二是有抑制支原体的蛋白合成。这两方面都是抑制作用，而对支原体没有直接杀伤，只是通过换液来逐渐降低支原体的浓度，抑制支原体的繁殖，因此，这些抗生素类的支原体祛除剂作用时间较长，一般至少需要一周作用。平均则要两周时间。 使用抗生素还会产生两个问题，1是对细胞会有毒害作用。所以，许多干细胞培养时，不建议加抗生素。2是有时支原体会产生耐药，从而使抗生素失去效力。这时要彻底消除支原体，又需要换药。 Mynox是德国Minerva Biolabs公司的产品，于消除细胞培养过程中的支原体污染。如果你培养的细胞比较珍贵，想保种，或者不舍得丢弃，那么就可以用这款产品。Mynox有哪些别的产品不具有的优势呢？小编给你介绍一下。 1、Mynox祛除支原体效果迅速。一般只需作用2个小时，即可杀灭全部支原体。其原理主要是Mynox?能与支原体特异性的直接结合，破坏支原体膜的完整性，导致外源液体进入支原体，使支原体膨胀而死。因此，Mynox是直接杀灭支原体，而非仅仅抑制支原体的复制，因此起效迅速，只需作用一次即可。 2、Mynox杀灭支原体是采用生物物理学的方法，而非化学的方法，因此不会产生耐药株。 3、Mynox对正常细胞毒性小，由于细胞不断的增殖分裂，因此，在Mynox作用2-3小时后进行换液，细胞形态和生长即可恢复正常，不再受支原体影响。到现在也没有任何Mynox?导致细胞
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原位聚合酶链式反应与原位反转录聚合酶链式反应操作规程
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
原位聚合酶链式反应（in situ PCR）和原位反转录聚合酶链式反应（in situ RT-PCR）操作规程 （一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤 1）预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶k消化组织37℃10min； （4）Nase消化组织37℃ 30min； （5）梯度酒精脱水，室温干燥。 2）原位扩增： （1）切片滴加特异性序列引物30μLpcr扩增反应液，覆盖硅化盖玻片，石蜡油封边； （2）PCR热循环：94℃，1min；55℃，1min；72℃，1.5min，共25～30个循环，72℃延伸10min； （3）氯洗去盖玻片，4％多聚甲醛后固定10min，梯度酒精脱水，干燥。 3) 原位杂交： （1）加地高辛标记探针的杂交液，98℃变性10min，-20℃退火5min，42℃杂交过夜。 （2）杂交后用2×SSC洗涤10min，3次，1×SSC洗涤10min，3次； （3）缓冲液洗涤10min，3次； （4）加碱性磷酸酶标记的羊抗地高辛抗体复合物，37℃，2h； （5）缓冲液洗涤5min，3次； （6）NBT、BCIP暗处显色，镜下控制，终止显色。 （7）常规脱水：透明、封固。 2、原位RT-PCR步骤 1）预处理： （1）蛋白酶K(0.3mg/mL) 54℃消化20min，蒸馏水洗； （2）95℃加热3min，灭活残存的蛋白酶。 2）原位扩增： （1）在有RNA酶抑制剂存在的条件下，用随机六聚物进行逆转录反应； （2）用热启动法进行PCR扩增。标本加热至75℃时加上反应液，覆以盖玻片，四周用指甲油密封。然后将温度升至95℃，2min。再将热循环仪设定为95℃，45s，55℃，1min和75℃，45s，共26次循环； （3）扩增结束后，在80℃烤15min～30min。 3）原位杂交： （1）杂交前标本95℃加热3min； （2）加上杂交液，湿盒内50℃过夜；杂交液组成：25％硫酸葡聚糖，2×SSC，50％甲酰胺，0.33mg/ml变性的鲑鱼精子DNA， 每0．5mL杂交液内含生物素标记探针1ng。 （3）扩增的β-肌动蛋白和IL-6用DAKO检测试剂盒K600(链霉卵白素，生物素标记的碱性磷酸酶和硝基四
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简易且能避免污染的细胞培养方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
培养细胞常规方法需用二氧化碳温箱，且为保持箱内二氧化碳气5%～10%的浓度，需持续输入二氧化碳气体。为此，箱内的培养瓶盖不能拧紧以便二氧化碳气体自由进出。*步，配制1L培养液。培养基中含有酚红指示剂，偏碱时液体为深红或紫色，偏酸时则呈黄色。取配1L培养液的粉剂培养基，加入750ml三蒸水或去离子水，摇匀(一般培养液呈橘红色)；再加入碳酸氢钠1～1．1g，至完全溶解(呈深红色)；zui后再加三蒸水或去离子水至1L止。第二步，插吸管于配好的培养液内，通入二氧化碳气体。随着二氧化碳气的融人，液体逐渐变成黄色。用一次性0．22 m孔径的滤膜于正压情况下将该液体过滤除菌。在此过程中，由于部分二氧化碳气体溢出，液体渐成橘黄色。此时迅速将其分装到4个250ml的瓶内，一定塞严或拧紧瓶。在无菌情况下取样本数毫升，37。c无菌培养72h，确定该批培养液无污染后方可使用。常使用的培养液存放于4℃冰箱内，其它暂时不用的可放入一20。c冰箱内保存。第三步，根据不同细胞系的需求添加不同量血清和抗生素。将配好的培养液吸入小培养瓶内，再将适量细胞吸入，塞严或拧紧瓶盖，置37。c普通隔水式恒温箱内即可。操作过程中因有少量二氧化碳气体溢出，液体呈橘红色，酸碱度(pH) 约为7．0～7．2。如果细胞较少或者生长较慢，液体的pH值似宜偏酸些为好。我们的产品原料为进口原装：无菌包装，不需要做任何除菌的处理，直接使用。
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人抗EB病毒抗体Elisa试剂盒操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
本品以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 步骤： 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 温育：操作同3。 洗涤：操作同5。 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 我司长期供应试剂盒，无菌包装，价格优惠，致购！
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让利做实验，让小伙伴们有一个全新的开始
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
即日起凡购买试剂_进口试剂_进口生物试剂可享受我司经销价，让利做实验，让做实验的您与您的小伙伴们有一个全新的开始。我司实验代测服务流程：1、售前服务，客户在收集标本、技术咨询等方面可以先和公司技术人员进行沟通。2、客户收集好标本、快递给我公司。3、实验室进行代测服务。4、客户付款之后代测结果由销售人员发给客户。5、客户收到结果后如有疑问请销售人员，由销售人员通知技术部门给客户进行技术分析，答疑。生化试剂保存规定：一、未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20℃。二、开封后、使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。研域生物技术（上海）有限公司售后服务：您于我司购买产品后有任何疑问，都可以打给我公司业务员，我们会为您安排解决，在为了节省您宝贵的时间，我们还提供免费代实验，只要你把样品邮寄给我们，我们会在5-7个工作日内完成，并且保证结果。
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实时荧光定量PCR具体实验步骤1
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1 样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。 ③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1）紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。具体计算如下： RNA溶于40 ?l DEPC水中，取5ul，1:100稀释至495?l的TE中，测得A260 = 0.21 RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l 取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 ?l，剩余RNA总量为： 35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g ②纯度检测 RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。 2）变性琼脂糖凝胶电泳测定 ①制胶 1g琼脂糖溶于72ml水中，冷却至60℃，10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。 10×MOPS电泳缓冲液 浓度 成分 0.4M MOPS，pH 7.0
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定量PCR实验技术分享1
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话，32左右，一般有什么方法解决没有 ct值比较靠后，对实验有一定的影响，因为经过那么多次的循环，酶的活性有可能有所下降，这时候扩增效率会有所改变（而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值）。因此能够把ct值往前移。 解决办法可以将模板加以浓缩或者抽干之后用少量水去溶解。 2. 为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带，而内参用同样体系就没有呢? 引物被污染。 3. 实时定量PCR，荧光定量PCR，实时荧光定量PCR，real－time PCR，这些是不是同一个概念 是一个概念。 4. 我的标准曲线的slope总是大于４，而且每个梯度的平行ct值差别比较大，原因？ 这个斜率是＝1/LOG 10(扩增效率)，理论上扩增效率＝2，斜率是3.322。如果斜率大于4，说明扩增效率比较小。可以考查一下反应体系是否合理？酶活是否正常？ 平行管的CT值差别大可以考查一下自己实验操作是否规范，另外一种原因就是仪器本身的误差也可能会导致CT值差别比较大。 当斜率为4的时候，扩增效率是77.8%，斜率大于4的话，效率继续下降。 扩增效率的问题实际就是引物的扩增效率，可能酶活的关系没有那么重要，前提是试剂盒的质量有保证。回到扩增效率，只有在引物和模板处于zui适比例时才能得到比较满意的扩增效率，因此通过调节PCR反应体系中的引物终浓度来解决，可以做一些引物梯度来比较。 5. ROX染料是什么作用？ ROX的作用ABI宣称是用来校准加样误差的。 但是据说ROX的作用实际上是用来校准光程差的。即每个孔的荧光信号经过滤光片在经过聚焦到CCD的时候，走过的光程是不一样的，这样在CCD上成像的亮度就不一样了。所以需要把这个差异用ROX来计算孔间差异有多大，然后差异系数去处理，实际的荧光信号。具体过程我不是非常清楚，请高手指正。 6. 荧光定量PCR的基线，是怎么确定的呢？ 基线就是背景值，因此就是曲
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体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏2
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
一、实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养， 即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以zui大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或DMSO作保护剂，这两种物质能提高 细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方 法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 二、实验方法 材料： 小鼠，生理盐水，100ml灭菌烧杯，15ml离心管，培养皿，滴管，无菌镊子、剪刀，筛网，泡沫板，大头针，酒精灯，培养瓶，培养 液，PBS，0.25%胰酶，超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜，显微镜，计数板，离心机，恒温水浴箱，冰箱（4℃、-20℃、-70℃），液氮 罐，冻存管，冻存液，废液缸等。 方法： （1）原代培养： 1.取出小鼠后沥干酒精，放入超净台内，固定在泡沫板上。 2.用镊子提起皮肤，用解剖剪剪开皮肤一个横切口，将皮肤向上撕开，然后剪开肌肉等，暴露出腹腔，在左侧找到脾脏，用弯头眼科镊取出脾脏，置于无菌培养皿中。 3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次，并剔除多余无用的组织。 4.将筛网置于平皿中，脾脏置于筛网上，用弯头镊镊住，轻轻在筛网上进行碾磨，同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。 5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中，离心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。 6.加入10ml培养液，吹打混匀，取样计数。 7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中，轻轻摇晃混匀，在培养瓶上。 面做好标志，注明细胞、组别及日期。然后将培养瓶置于二氧化碳培养
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原代培养经验分享
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
经验分享： 1.原代细胞铺満瓶底后弃原液，PBS冲洗2次。 2.加入0.25%Trypsin-0.02%EDTA,量覆盖瓶底即可，室温作用，镜下观察至组织块周围的细胞回缩，立体感增强。 3.弃去消化液，PBS轻漂一遍(目的是除去EDTA，它对脆弱的原代细胞很不好)但不要用力摇晃，以免部分消化稍过的细胞流失。 4.加入培养液吹打，不要产生气泡，对细胞有损。 5.吸出2/3的悬液传入新瓶。 6.向原瓶中余下的1/3细胞悬液中补加2/3的新培养液，与未消化的组织块继续培养。 7. 24小时内新的细胞又从组织块中爬出啦，等铺满后再如上所述做一次吧。 注： 1.只有当原代培养时组织块较多时才这样做，否则得不偿失。 2.保留1/3的细胞是为了让余下的组织块在细胞间作用下迅速健康的生长。 3.一瓶细胞以此法处理不要超过3次。
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上海沪鼎*分享：制备洗涤液的方法与注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
对于实验室工作人员来讲，洗涤玻璃仪器不仅是一项必须做的实验前的准备工作，也是一项技术性的工作。仪器洗涤是否符合要求，对检验结果的准确和精密度均有影响。在今天的技术文章内容中，上海沪鼎生物公司来为大家介绍制备洗涤液的方法与注意事项。 一、纯酸纯碱洗液 根据器皿污垢的性质，直接用浓硫酸(HCL)或浓硫酸(H2SO4)、浓硝酸(HNO3)浸泡或浸煮器皿(温度不宜太高，否者浓酸挥发刺激人)。纯碱洗液多采用10%以上的浓烧碱(NaOH)、氢氧化钾(KOH)或碳酸钠(Na2CO3)液浸泡或浸煮器皿(可以煮沸)。 二、有机溶剂 带有脂肪性污物的器皿，可以用汽油、甲苯、二甲苯、丙酮、酒精、等有机溶剂擦洗或浸泡。但用有机溶剂作为洗液浪费较大，能用刷子洗刷的大件仪器尽量采用碱性洗液。只有无法使用刷子的小件或特殊形状的仪器才使用有机溶剂洗涤，如活塞内孔、移液管尖头、滴定管尖头、滴定管活塞孔、滴管、小瓶等。 三、强酸氧化剂洗液 是用重铬酸甲(K2Cr2O7)和浓硫酸(H2SO4)配成。K2Cr2O7在酸性溶液中，有很强的氧化能力， 对玻璃仪器又及少有侵蚀作用。所以这种洗液在实验室内使用zui广泛。 配制浓度各有不同，从5~12%的各种浓度都有。配制方法大致相同：取一定量的K2Cr2O7(工业品即可)，先用约1~2倍的水加热溶解，稍冷后，将工业品浓H2SO4所需体积数徐徐加入K2Cr2O7不溶液中(千万不能将水或溶液加入H2SO4中)，边倒边用玻璃棒搅拌，并注意不要溅出，混合均匀，俟冷却后，装入洗液瓶备用。新配制的洗液为红褐色，氧化能力很强。当洗液用久后变为黑绿色，即说明洗液无氧化洗涤力。 例如，配制12%的洗液500mL。取60克工业品K2Cr2O7置于100mL水中(加水量不是固定不变的，以能溶解为度)，加热溶解，冷却，徐徐加入浓H2SO4 340mL，边加边搅拌，冷后装瓶备用。 这种洗液在使用时要切实注意不能溅到身上，以防“烧”破衣服和损伤皮肤。洗液倒入要洗的仪器中，应使仪器周壁全浸洗后稍停一会再倒回洗液瓶。*次用少量水冲
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趣味无限:来看上海劲马分享细胞计数的步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
自上海劲马成立以来，已得到数大科研机构的认可，产品优势多，有保障，而且质量好，不论是还是实验技术服务都很周到，购我公司产品欢迎您我公司业务员。细胞计数操作步骤：1.将计数板及盖玻片擦拭干净，并将盖玻片盖在计数板上；2.轻轻吹打细胞悬液，使细胞均匀分布；吸出少许细胞悬液滴在细胞入口，使细胞悬液充满盖玻片和计数板之间，静置1-2min，使细胞沉降；注意盖玻片下不要有气泡，也避免细胞悬液进入旁边的槽中；3.在显微镜下对A/B/C/D四个大格内的细胞进行计数，压在大格四周边线上的细胞只计数压在2条边线上的细胞（如右侧和下方）；若镜下有2个细胞组成的细胞团，则应按单个细胞计算；若细胞团数量较多，占细胞总量的10%左右，则说明细胞分散不好会导致计算不准确，需要重新制备细胞悬液；4.按公式计数细胞数量：细胞数/mL=四个大格内细胞总数×104/4（每一个大格的体积为长1mm×宽1mm×高0.1mm=0.1mm3，1mL=1000mm3，因此计算时需×104）上海劲马温馨提醒：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目即可换算出每mL细胞悬液中的细胞数量。
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支原体污染细胞的严重影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
威正翔禹生物专家近日从《动物医学进展》上的一篇文章《支原体对细胞培养污染的研究概况》（动物医学进展，2013,34：112-117）看到里面有一节“支原体污染细胞的严重性”，特摘出如下，与大家分享支原体污染细胞的严重影响。 支原体zui早发现于1898年，1956年Robinson等从细胞培养物中分离出支原体，之后国内外关于支原体污染细胞的报道屡见不鲜。它广泛存在于自然界中，有80余种，污染细胞zui常见的支原体包括发酵支原体（ M.fementans）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）、口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginina）、梨支原体（M.pirum）、唾液支原体（M.salivarium）和人型支原体（M.hominis）。 支原体通常附着在细胞的表面，并影响其宿主细胞的生理、遗传等多方面的正常功能，用这些污染后貌似正常的细胞做试验或生产，将会严重影响结果。 1、对细胞生长繁殖和形态的影响 细胞培养物被支原体污染后生长减慢，且产生细胞病变（cytopathic effect, CPE），表现为细胞体积增大，碎片增多，在细胞质中产生一些颗粒；细胞内病毒繁殖受阻，使细胞形成空斑。光镜下形成不正常密度生长的单层，贴壁细胞形成“流沙样”脱落、裂解。某些支原体可在侵入细胞８ｈ使线粒体膨胀，继而被破坏，细胞核萎缩呈空泡化，细胞微管解聚，培养瓶中细胞与细胞间隙出现膜状沉积，细胞无法传代，甚至整个细胞群体溶解。 2、对细胞代谢和功能的影响 有些被污染后的细胞，虽形态上变化不明显，但培养液pH变化较大，更换培养液后几小时就变酸，培养基中的必需氨基酸被消耗掉，如谷氨酸或核苷前体，改变细胞代谢。 支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；消耗细胞的核苷库，引起细胞染色体异常；发酵型支原体能迅速降解简单糖类，代谢产生的酸能改变细胞的功能；利用精氨酸的支原体则发生精氨酸效应，从而影响蛋白质和核酸的合成、导致细胞的分裂和生长受阻；引起细胞酶谱改变；
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血清里面含有什么成分？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
血清就是去除了血细胞和纤维蛋白（用于凝血）的成分之后，剩下的血液中的液体。在细胞体外培养中常需要添加血清。血清是细胞所需的营养物质的天然来源，具有许多人工合成的培养基所不具备的营养因子。它的应用已经有了100多年的历史。那么血清里面含有什么成分呢？本文威正翔禹/缔一生物为您分析总结一二。 例如《生物制品学杂志》 1981年第1期第22页上就发表过1篇《血清的性质：血清成分的分析》文章，作者是Macleod AJ等。这是一篇翻译。原始出处是AJ Macleod，O Drummond. Serum quality: an analysis of its components. Developments in Biological Standardization.1980,46:17。 该文章开始提到的是苏格兰国立输血站蛋白分离中心用序贯低温酒精沉淀法处理人血浆，得到了很多成分（注： 血浆是去除了血细胞的血液液体，和血清区别是含有纤维蛋白原），包括凝血因子、纤维蛋白原、免疫球蛋白、白蛋白、a球蛋白和b球蛋白，很多有重要的**作用。该中心曾在1年中处理了5万升血浆，得到了750kg的血浆蛋白。血浆蛋白中的许多蛋白质对细胞生长很重要，如铜蓝蛋白、转铁蛋白和生长调节素（somatomedin），还有一些蛋白酶抑制剂，如a-抗胰蛋白酶、抗凝血酶III和a2-巨球蛋白。 该文还指出，胎牛血清蛋白含量一般低于新生牛或成牛血清。用醋酸纤维素电泳作蛋白成分分析，胎牛血清的白蛋白含量比其他血清高，而球蛋白的含量比其他血清低得多。 注：生长调节素（somatomedin）是过去使用的名字，是一类促进细胞生长分裂的物质。现已发现，胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）是生长调节素A，玻连蛋白是生长调节素B，胰岛素样生长因子1（IGF-I）称为生长调节素C。 a1-抗胰蛋白酶：主要由肝脏合成，主要作用是保护机体正常细胞和器官不受蛋白酶的损伤，抑制感染和炎症，维持机体内环境的平衡。 a2-巨球蛋白：是血浆中分子量zui大的蛋白质。分子量约为65.2万-80万，含糖量约8%，由4个亚单位组成。它与淋巴
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反复冻融的血清对细胞有什么影响？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
血清中因含有许多蛋白质，反复冻融对蛋白的活性肯定会有一定的影响，这似乎已*。因此，如果几次内用不完，应尽量分装，这不仅适用于血清，也适用于其他储存于-20℃的蛋白质类产品。本文威正翔禹/缔一生物为您分析反复冻融的血清对细胞有什么影响？ 曾有研究发现，血清冻融三次，对肿瘤标志物的浓度影响不大1，对于血浆，有报道在短时间内反复冻融三次，对总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影响不大，但作者推测对免疫球蛋白的活性有影响2。zui重要的是一篇西北民族学院的文章，《反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响》，作者针对SP2/0细胞，用MEM培养基和三批新生牛血清进行培养。血清分别冻融4次至28次不等。然后绘制细胞生长曲线，根据公式t =T/A , A=log2 Y/X计算细胞倍增时间（t 为细胞倍增时间， Y 为细胞峰值前1 d 的细胞数， X 为接种细胞数， T 为细胞生长时间）。结果显示：选用的三批新生牛血清在反复冻融 28 次时， 血清促细胞生长的zui大增殖量变化不大，均高于1×106/mL, 但是血清促细胞生长的倍增时间在反复冻融 20次时延长， 即血清促细胞繁殖一代所需的时间在冻融次数达到 20 次时显著增加。笔者观察了一下该文章的结果列表，发现在冻融20次之前，细胞倍增时间延长2-3小时不等，20次时，则延长3-4小时。可见，影响还是比较显著的。该文章的局限是针对新生牛血清，而没有对胎牛血清进行测试。 国外有人对大鼠血清中的18种化学成分进行了检测，发现反复冻融3次对其中的14种成分没有显著影响，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，胆红素，甚至包括氯离子有一些明显变化，但其浓度变化控制在10%以内。3 总而言之，如果能避免牛血清的反复冻融，及时分装，那是的。如果在短时间内有几次反复冻融，也不用过于担心。但是，对于胎牛血清，还有一个问题，是反复冻融增高了血清产生沉淀或浑浊的风险。因为血清在融化时，冰块和蛋白融化的速度是不一样的，局部可能因蛋白浓度过高而产生沉淀
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使用Mynox杀支原体应注意什么？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
德国Minerva公司生产的Mynox支原体祛除剂是市面上惟一的支原体杀除剂，而其他牌子的支原体清除剂只是对支原体产生抑制作用，并无杀灭效果，因此作用很慢。本文威正翔禹/缔一生物为您分析使用Mynox杀支原体应注意什么？ Mynox起效时间却只有2-3个小时。但在使用Mynox过程中，还需要注意一些问题，以保证zui大的使用效果。 1、Mynox加入的细胞量要控制。Mynox每管200?l，是加入到2ml包含1x104- 1x105细胞的培养液中。 2、细胞要注意打散为单细胞，不要让细胞成团。因为Mynox需要与支原体直接接触才能发挥效力。细胞成团容易造成细胞间隙，从而成为支原体的藏身之所。 3、Mynox与支原体污染的细胞的混合2个小时，即能完成支原体的杀灭。这时应换新鲜的培养基继续培养，不必再用Mynox。但这时不应马上用PCR检测支原体，因支原体虽然死亡，但培养液中还游离很多支原体DNA。应等传代三至四次后，再进行检测。 4、如果想延长Mynox作用时间至数天（细胞一代时间），期间应观察细胞状态。必要时换为标准培养基，或将Mynox与培养基按1:5稀释培养。 5、如果使用Mynox?消除污染细胞中的支原体，胎牛血清的*浓度为5%。过高浓度的血清会影响Mynox消除支原体的效果。如果使用Mynox消除病毒中的支原体，建议使用无血清的培养基。 6、包被病毒外层的脂质膜成分与支原体膜相似，也是Mynox结合的对象。根据使用Mynox?的浓度和作用时间，这些病毒极易被Mynox杀除。为了能够彻底杀除支原体同时保证病毒的继续培养，起始病毒滴度应高于106TCID50。 另外，或许有人疑问，Mynox只能杀灭细胞外的支原体，而对细胞内的支原体不起作用。这里需要澄清一下。事实上，细胞培养中产生的支原体污染就是细胞外的污染。只有一种支原体能进入到细胞内，就是Mycoplasma penetrans，但它并不污染体外培养的细胞。 综上所述，您是不是已经对使用Mynox杀支原体应注意什么，有所了解。如果还有其他疑问，请咨
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