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微生物菌种的具体保存方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于zui不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。微生物菌种保藏方法大致可分为以下几种： 1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。 2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3.载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4.寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5．冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6.冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
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使用胎牛血清的小细节您知道吗？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
运用胎牛血清应留心啥？今天小编要为咱们解说运用胎牛血清时应留心的小细节，究竟细节是实验成功与否的要害：1.运用前需做细菌、支原体培养及内毒素测定，在确实无污染的情况下方可运用。 2.每批小牛血清测定总蛋白含量并分别配成10%20%,25%于荃础培养墓和HAT培养基中，对骨越瘤细胞和杂交瘤细胞进行培养，查询小牛血清对瘤细胞和融合细胞的细胞毒性。若在20%浓度小牛血清情况下，细胞生长差，则该批小牛血清不适宜应用。 3.应在细胞培养瓶内进行，培养期间随时可放于倒置显微镜下查询，可避免由于肉眼查询的忽略。经增菌培养I周后，虽肉眼未见生长，还有必要进一步做分别培养，直至确实无菌后方可运用。 4.杂交瘤实验全过程有必要选用同一批血清。常常更换不一样批号的血清是影响培养成果的zui主要因素之一，并常致使悉数实验失利。
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山西大学:显色弱灵敏度低是怎么回事?
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
昨天上午来自山西大学的程老师通过到本公司吴，此次山西大学的程老师想要了解下做试验时显色弱灵敏度低是怎么一回事？随后恒远吴为程老师安排了技术人员进行解答： 在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中孔的显色比较浅，即只有微弱的信号呈现。 出现该现象的可能原因： 1.产品过有效期，试剂没有按规定进行适当的保存。 2.试剂，标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。 3.少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。 4.洗板或者加样过程中，酶标物受污染失活。 5.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。 6.洗涤液稀释倍数不符合要求，洗板次数过多，洗板冲击力过大，洗板浸泡时间过长。 7.底物溶液TMB显色时间太短。 听完本公司技术人员的一番解说后，程老师表示：怪不得贵公司的口碑一向很不错，单单凭借服务这一块就很让人信服！后期有实验项目，还会继续保持合作的！ 购买本公司BIM品牌ELISA试剂盒，不仅有优惠，还全程提供免费的技术指导及代测服务哦!
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ELISA试剂盒实验之温育小课堂开课啦！
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒实验中，有一个步骤是*的，那就是保温，这一保温过程大家称之为温育！ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结 合的机会，只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗 原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。 温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应 动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1～2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜 采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA试剂盒中一般不予采用。 保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平 衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传 热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，zui后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。 无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指 20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA试剂盒只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准 确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。 上海沪鼎生物科技
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为什么血清的颜色有的成黄色有的成红色呢?
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
相信有不少科研工作者都比较好奇一个问题，那就是为什么血清有的血清成黄色，而有的血清成红色呢?到底哪种颜色才是正常的呢？质量好的血清又是哪种颜色呢？今天上海恒远将围绕这个问题为大家分析一下！ 根据我公司多年经验技术员的分析：血清中，血红蛋白含量的不同，可表现出黄色或红色。我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。 国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。进口血清或多或少总有点溶血，因为真正的血清凝血功能差，红细胞容易破裂。不过总的来说，国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量的呈现出谈黄、微红色，如Gibco 16000，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭活血清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖啡色。 上海恒远血清包装规格分别有100ML、200ML和500ML，主要涉及品牌有HyClone、GIBCO、NQBB、Sigma，保证，质量稳定可靠，价格经济实惠。咨询。
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ELISA试剂盒SCI文章复杂的操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒SCI文章影响反响因素较多，特别是固相载体的包被难到达各个别之间的共同，因此在定量测定中，每批测验均须用一系列不一样浓度的参阅规范品在一样的条件下制作规范曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA试剂盒，规范曲线的规模通常较宽，曲线zui高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以检查物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点衔接，所得曲线通常呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中心较呈直线的有些是的检查区域。在实验条件(包含试剂)较难确保稳定的情况下，这种判别法较为适宜。ELISA试剂盒在得出标本(S)和阴性对照(N)的A值后，核算S/N值。也有写作P/N的，这儿的P不代表阳性ELISA试剂盒(positive)，而是患者(patient)的缩写，不该误解。为防止混杂，更宜用S/N表明。在前期的间接法ELISA中，有些作者定出S/N为阳性规范，现多为各种测定所沿袭。实际上每一测定体系应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应留意的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的ELISA试剂盒SCI文章中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，致使反响后发生的本底也许较正常人血清的本底低得多。定性测定的成果判别是对受检标本中是不是含有待测抗原或抗 出"有"或"无"的简略答复，分别用"阳性"、"阴性"表明。"阳性"表明该标本在该测定体系中有反响。"阴性"则为无反响。用定性判别法也可得到半定量成果，即用滴度来表明反响的强度，其实质仍是一个定性实验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行实验，呈阳性反响的zui高稀释度即为滴度。依据滴度的高低，能够判别标本反响性的强弱，这比调查不稀释标本呈色的深浅判别为强阳性、弱阳性更具定量意义。 在间接法和夹心法ELISA试剂盒中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA试剂盒中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。两类反响的成果判别方法不一样，分述于下。胺碘酮相关物质H标准品 规格： 15mg CAS: 进口、国产 英
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青海发光杆菌的营养物质
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1.水：青海发光杆菌湿重的80～90%为水。细菌代谢过程中所有的化学反应、营养的吸收和渗透、分泌、排泄均需有水才能进行。2.碳源：各种无机或有机的含碳化合物（CO2、碳酸盐、糖、脂肪等）都能被细菌吸收利用，作为合成菌体所必需的原料，同时也作为细菌代谢的主要能量来源。致病性细菌主要从糖类中获得碳，己糖是组成细菌内多糖的基本成分，戊糖参与细菌核酸组成。3.氮源：从分子态氮到夏杂的含氮化合物都可被不同的细菌利用。但多数病原菌是利用有机氮化物如氨基酸、蛋白胨作为氮源。少数细菌（如固氮菌）能以空气中的游离氮或无机氮如硝酸盐、铵盐等为氮源，主要用于合成菌体细胞质及其他结构成分。4.无机盐：钾、钠、钙、镁、硫、磷、铁、锰、锌、钴、铜、钼等是细菌生长代谢中所需的无机盐成份。除磷、钾、钠、镁、硫、铁需要量较多外，其他只需微量。各类无机盐的作用为：①构成菌体成份；②调节菌体内外渗透压；③促进酶的活性或作为某些辅酶组分；④某些元素素与细菌的生长繁殖及致病作用密切相关。如白喉杆菌产毒株其毒素产量明显受培养基中铁含量的影响。培养基中铁浓度降至7mg/L时，可显著增加毒素的产量，故在培养产毒株白喉杆菌PW2制备类毒素的生产中，多采用含铁很少的培养基，其毒素产量可达青海发光杆菌产生蛋白量的5%以上，约占细菌外分泌总蛋白的75%以上，使培养基含毒素量达500ug/L研究认为低铁可影响细胞壁的通透性，利于毒素释放。亦有人认为宿主含铁蛋白可抑制白喉毒素基因，故低铁时可导致白喉毒素产量增高。5.生长因子：很多细菌在其生长过程中还必需一些自身不能合成的化合物质，称为生长因子（Growthfactor）。生长因子必须从外界得以补充，其中包括维生素、某些氨基酸、脂类、嘌呤、嘧啶等。各种细菌对生长因子的要求不同，如大肠杆菌很少需要生长因子，而有些细菌如肺炎球菌则需要胱氨酸、谷氨酸、色氨酸、天冬酰胺、核黄素、腺嘌呤、尿嘧啶、泛酸、胆碱等多种生长因子。致病菌合成能力差，生长繁
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剖析抗原elisa试剂盒实验测定效果总结
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
血清是zui常用的抗原elisa试剂盒标本，血浆通常可视为与血清平等的标本，ELISA试剂盒标本致使的假阳性和假阴性成果主要是搅扰性物质所构成的，分为内源性物质和外源性物质两种： 1． 内源性物质 普遍认为大概40%的人血清标本中富含非特异性搅扰物质，能够不一样程度影响检查成果。多见的搅扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原本身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig （s）抗体、穿插反响物质和其它物质等。 （1）类风湿因子 人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）能够与ELISA体系中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接，然后致使假阳性。处理该状况的方法是：①用F（ab）2代替完好的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG参加到标本稀释液中同样有用）；③检查抗原时，能够用2-巯基乙醇等参加到标本稀释液中，使RF降解。 （2）补体 ELISA体系中固相一抗和符号二抗过程中，抗体分子发作变构，其FC段的补体C1q分子位点被露出出来，使C1q 能够将二者连接起来，然后构成假阳性。处理的方法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。 （3）嗜异性抗体 人类血清中富含能与啮齿类动物（如鼠等）Ig （s） 的天然嗜异性抗体，可将ELISA体系中一抗和二抗连接起来，也能构成假阳性。处理的方法是：可在标本稀释液中参加过量的动物Ig （s） ，但参加量缺乏或亚类不一样时无效。 （4）嗜靶抗原的本身抗体 抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体，ELISA试剂盒有时能与靶抗原构成复合物，在ELISA方法中均可搅扰抗原抗体测定成果。为防止以上状况呈现，处理的方法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。 （5）医源性诱导的抗鼠Ig （s） 抗体 临床展开的用鼠源性CD3等单克隆抗体医治，用放射性同位素符号鼠源性抗体的印象确诊及靶向医治等新技术，均有可能使这些患者体内发生抗鼠抗体；别的，被鼠等啮齿类动物咬伤的患者体内也能够发生抗鼠Ig （s） 抗体。这些患者
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微生物菌种鉴定方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
（1）微生物菌种常规鉴定 常规鉴定内容有形态特征和生理生化特征。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应等。（2）分子生物学鉴定 应用分子生物学方法从遗传进化角度阐明微生物种群之间的分类学关系，是目前微生物分类学研究普遍采用的鉴定方法。CICC拥有微生物菌种分类鉴定的分子生物学实验室，配有PCR仪、高速冷冻离心机、电泳仪、HPLC、凝胶成像系统、紫外控温分析系统等先进仪器设备，以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。盘长孢菌目前CICC可采用核酸序列分析法分析细菌16S rDNA/16S-23S rDNA区间序列、酵母18S rDNA/26S rDNA（D1/D2）序列及丝状真菌的18S rDNA/ ITS1-5.8S-ITS2序列，提供科学的鉴定结果。（3）功能性分析及功能基因 经单位不断致力于工业微生物资源的功能及其功能基因研究，目前通过木聚糖酶、纤维素酶、葡萄糖异构酶、β-甘露聚糖酶等功能基因的克隆进行菌种产酶的功能性分析。应用gyrA、atpD及pheS等看家基因于微生物菌种鉴定，在某些种、亚种、株间有较好的分辨效果。（4）API微生物菌种数值鉴定系统 API鉴定系统涵盖15个鉴定系列，约有1000种生化反应，目前已可鉴定超过600种的细菌。鉴定过程中，可根据细菌所属类群选择适当的生理生化鉴定系列，通过软件将待测细菌与数据库参比，得出鉴定结果。 CICC目前可应用API 50CH系列、API 20 E系列、API Staph系列对乳酸杆菌（Lactobacillus sp.）和相关细菌、芽孢杆菌（Bacillus sp.）、葡萄球菌属（Staphylococcus sp.）、微球菌属（Micrococcus sp.）和库克菌属（Locuria sp.）进行鉴定。（5）RAPD、SSCP技术 随着微生物菌种应用的进一步发展，在食品安全管理、生物产品出口认证、知识产权保护等行业需求日益增加，盘长孢菌菌种株水平的鉴别技术成为一个迫切需要解决的问题。贝那普利相关物质F标准品 规格： 200mg CAS: 1235-82-1 进口、国产 英文名称
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大肠杆菌培养基可预防肺炎双球菌性疾病
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
据研究人员大肠杆菌培养基一项研究披露，那些在出生后2、4及11个月接受了7价结合型肺炎双球菌疫苗（PCV-7）的婴儿与那些未接受该疫苗的对照者相比，他们更容易在鼻咽部（位于鼻通道及鼻后的喉部上方）染上肺炎双球菌-血清型19A，这是罹患呼吸道肺炎双球菌性疾病的一个主要的原因。 根据文章的背景资料：“人们在过去的10年中观察到，肺炎双球菌-血清型19A株病例有了快速的增加，而该菌株常常对多种抗菌素具有抵抗性。在美国，血清型19A现在已经成为侵入性及呼吸道肺炎双球菌性疾病的主要的血清型，它也是在鼻咽部所zui常遇到的血清型。在美国及其它国家，血清型19A疾病的增加与在婴儿的免疫接种计划中常规性广泛使用7价结合型肺炎双球菌疫苗（PCV-7）的时间有关。” 研究者在1003名健康新生婴儿中对7价结合型肺炎双球菌疫苗（PCV-7）与鼻咽部染上肺炎双球菌血清型19A之间的关系进行了检查，并对这些孩子一直跟踪至2岁。该菌的抗药性比率较低。 该项研究是在2005年7月至2008年2月间进行的，该时段发生在婴儿广泛应用7价结合型肺炎双球菌疫苗（PCV-7）之前。对这些孩子的鼻咽拭子是在其6、12、18及24个月的时候获取的。这些婴儿被随机分配接受2次剂量的7价结合型肺炎双球菌疫苗（PCV-7）[在第2及4个月时]、2+1次剂量的7价结合型肺炎双球菌疫苗（PCV-7）[在第2、4及11个月时] 或不给予疫苗接种（不接种对照组）。 研究人员得出结论：“除了过去由其他研究人员所描述的抗菌素选择性压力的促成作用外，据我们所知，大肠杆菌培养基我们现在*次证明了7价结合型肺炎双球菌疫苗（PCV-7）在鼻咽部染上血清型19A上具有促成作用。鉴于血清型19A已被证明的可导致中耳炎和侵入性肺炎双球菌性疾病的可能性及所观察到的其与抗菌素抵抗力的相关性，因此接种的疫苗如果能够更为广泛（包括能够保护被接种者不受血清型19A的侵害）的话，该疫苗将可进一步地帮助人们预防肺炎双球菌性疾病。但是，我们需要认识到其它的具有类似特点及致
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干细胞传代吹打减少气泡的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1.有一些干细胞可以不用消化液就能够吹打下来。个人认为能不用消化液是的。譬如巨噬细胞。我一直维持巨噬细胞，每次传代都不用消化液，吹打的时候我一般会用瓶内未换的剩余旧培养液，这样子比用新的培养基可以减少点泡沫的生成。当然这个一定要求原培养基未被污染。2. 吹打的时候我们都知道要一点挨着一点吹，这样子不会漏掉地方。而我每次都会首先沿着两条对角线的方向吹打，然后再按照横着或者是竖着吹打。这样子就可以比较容易把细胞吹下来，因为首先细胞的各个方向都受力了，而且比较均匀，细胞比较容易下来，而且对细胞形态的维护比较好。3.对胶头滴管的要求。胶头滴管头部是做成弯曲45度角的形状，一般都是自己用止血钳夹住头部在酒精灯上烧弯。我还发现，如果你吹打的时候，滴管的头部边缘如果是和吹打平面平行的话，反而容易产生泡沫，贴在底部吹，也容易产生泡沫，是能够有一个角度顺着你吹打的方向和滴管一致。并且稍微远离吹打面，这样滴管内的液体容易流出，阻力会减小，就不会产生那么多的泡沫了。4.控制你吹打的节奏，急速地吹打会很快地产生泡沫，用力越大，越容易产生。是能够把握住自己的力度和节奏，有条不紊的吹打。我的体会是以自己拿滴管用手的轻松程度为准，如果刚吹几下很快就累的话，那就证明干细胞是节奏过快。吹完都不累的话那就是太慢力度也不够。我觉得一般在吹完一遍时指头发困会比较好。这样的节奏能够比较快速而且有效地完成。本人觉得zui关键的操作是不要吹打到底。培养细胞多年，避免气泡产生要注意以下两点：1 吹打用的培养基不能太少，如果只有1-2mL，气泡难以避免；2 吸管每次打出液体后立刻深入液面下吸取液体。在传代的时候，急速的反复吹打肯定容易产生泡沫，这对细胞不利，所以我们要尽量避免。在操作时尽量选用较大口的吸管，吸液时先将吸管内空气排空，再深入液面以下吸液，吹打干细胞时，尽量沿着壁吹出液体，操作轻柔，就可zui大程度避免泡沫的产生！
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如何使细胞培养物快速适应无血清培养基？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
许多原代细胞系容易适应无血清培养基和无蛋白培养基，而对环境要求过高的其它细胞却难以适应变化，这就需要更为专业的方法来适应变化。而根据细胞系的特性，有两种方法可使细胞适应无血清培养基。*种方法是连续适应/循序隔绝法；另一种方法是直接适应。 一、连续适应/循序隔绝法 *种方法是连续适应/循序隔绝法。通过一系列的血清还原步骤，使细胞适应无血清培养基。这是优先选用的方法，且不对细胞培养环境形成太过恶劣的变化。 连续适应/循序隔绝法——方法1 使原培养基内的细胞连续地经过以下几个阶段： 阶段1：75%补加血清的培养基或25%无血清培养基 阶段2：50%补加血清的培养基或50%无血清培养基 阶段3：25%补加血清的培养基或75%无血清培养基 阶段4:100%无血清培养基 连续适应/循序隔绝法——方法2 1、以原培养基中的相同浓度，将血清加入无血清培养基内。将细胞从含血清的原培养基转移到加了血清的无血清培养基，此时应注意要提高新培养系统中的细胞密度。让细胞有一个适应过渡期。 2、按照方法1，缓慢地降低血清浓度，使细胞在每个阶段有适应的时间。 3、一旦血清补加量降为0，在用于进行分析或其他操作前，让细胞培养物具有数个适应过渡期。 二、直接适应法 另一种方法是直接适应。其中，原代细胞直接从含血清培养基转移到无血清培养基内。将大量细胞直接转移到无血清或无蛋白的新培养基内。细胞必须处于指数生长期中期，且存活率>90%。 每3到4天更换约50%的培养基，以防止培养基变成酸性。维持高于正常值的细胞培养密度，直至培养的细胞需要每日更换培养基。这时，将细胞扩增到多个培养瓶内。 考虑建议 请在适应过程中，细胞通常对PH和温度变化较为敏感。让细胞在每个阶段都至少有一个适应过渡期。 细胞存活率和细胞密度 细胞在对数生长期中期快速分裂，且在适应过程开始时，存活率大于90%。这一点至关重要。当细胞需传代时，建议采用1:2或1:3的小传代比例，以维持更高的细胞密度，同时提供隔绝期间可能有助于细胞
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细胞计数与存活的测试实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
肿瘤细胞冷冻与复苏是细胞培养的常规工作，可以解决细胞因为连续继代造成的退变或转化。细胞的原代培养和传代培养以及细胞冻存和复苏后都需要细胞计数。那么细胞计数与存活的测试实验方法有哪些呢？ 1、原理： （1）计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。 （2）血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml中之细胞数目。 （3）存活测试之步骤为dyeexclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypanblue染料，如果细胞不易吸收trypanblue，则用红色之Erythrosinbluish。计算细胞活率：活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成，随时间延长，部分活细胞也开始摄取染料；因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力，用不含血清的稀释液，可以使染色计数更为准确。 2、材料： 0.4%w/vtrypanblue(GibcoBRL15250-061)；Erythosinbluishstain；取0.1gramErythrosinbluish(SigmaE-9259)及0.05grampreservativemethylparaben(SigmaH-3647)溶于100mlCa++/Mg++freesaline；血球计数盘及盖玻片(Hemocytometerandcoverslip)；计数器(counter)；低倍倒立显微镜；粒子计数器(Coultercounter,CoulterElectronics)。肿瘤细胞稀释液（4%乙酸溶液）。 3、步骤： （1）取50μl细胞悬浮液与50μltrypanblue(orErythrosinbluish)等体积混合均匀于1.5ml小离心管中。 （2）取少许混合液(约15μl)自血球计数盘chamber上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色(或红色-Erythrosinbluish)。 （3）计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因
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蛋白䏡与蛋白胨的区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
蛋白胨和蛋白䏡，都是蛋白质的部分水解产物，可溶于水。说部分，是因为此时蛋白尚未被完全水解为氨基酸。蛋白胨和蛋白䏡二者还存在区别。本文威正翔禹/缔一生物为您分析蛋白䏡与蛋白胨的区别。 蛋白胨，英文名称：Peptone，是将肉、酪蛋白或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料。用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白、植物蛋白、微生物蛋白（酵母）等三种。蛋白胨分子量平均分子量在2000左右。 蛋白䏡，英文名Proteose，它与蛋白胨的区别主要在于水解程度不同。蛋白胨的水解程度要高些，不为饱和硫酸铵所沉淀。蛋白䏡的蛋白水解程度低些，能被饱和硫酸铵所沉淀。而且蛋白䏡一般是蛋白被酶来水解，例如胰脂肪酶（见美国药典）。 䏡蛋白胨常用动物组织水解而成，富含蛋白䏡、蛋白胨和游离氨基酸，常用于生产抗生素、酶和细菌毒素。 综上所述，您是不是已经对蛋白䏡与蛋白胨的区别，有所了解。如果还有其他疑问，请咨询威正翔禹/缔一生物资深专家。
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胎牛血清对细胞粘附的影响1
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
胎牛血清中有一些促进细胞粘附的物质，例如纤黏连蛋白（Fibronectin）。纤黏连蛋白是细胞外基质中的成分，事实上，它也存在于胎牛血清中，下面威正翔禹/缔一生物为您分析胎牛血清对细胞粘附的影响1。 国外曾有人用胎牛血清培养大鼠肾脏细胞，同时用祛除了纤黏连蛋白的胎牛血清也进行细胞体外培养，作为对照。结果发现大鼠肾脏细胞形成的外基质层中，除了有肾脏细胞自身合成的纤黏连蛋白外，也含有胎牛血清中的纤黏连蛋白。血清中的纤黏连蛋白成分被加入到细胞外基质层中。（见下图） a,b,c,d图是用胎牛血清培养的大鼠肾脏细胞，e,f,g,h图是用祛除了纤黏连蛋白（以下简称Fn）的胎牛血清进行的培养。a, e图是用抗大鼠Fn的抗体做的免疫荧光染色，b,f图是用大鼠Fn中和抗体，染色消失，证明是真阳性。c,g图是用抗牛Fn进行的免疫荧光染色，d,h图是用牛Fn中和抗体，染色消失。 该结果说明，大鼠肾脏细胞自身能分泌Fn，但胎牛血清中的Fn也被掺入到细胞外基质中，进而证实，胎牛血清中不仅有Fn，而且胎牛血清中的Fn作为一种营养，参与细胞外基质的形成，从而促成细胞的粘附。 参考文献 Hayman EG, Ruoslahti E. Distribution of fetal bovine serum fibronectin and endogenous rat cell fibronectin inextracellular matrix. J Cell Biol. 1979 Oct;83（1）：255-9. 综上所述，您是不是已经对胎牛血清对细胞粘附的影响1，有所了解。如果还有其他疑问，请咨询威正翔禹/缔一生物资深专家：。
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