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纳氏试剂知识介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
纳氏试剂（Nessler）是指一种利用紫外－可见分光光度法原理用于测定空气中、水体中氨氮含量的试剂。性状常温下略显淡黄绿色的透明溶液，随着暴光时间增加逐渐生成黄棕色沉淀，溶液会渐渐变黄。反应机理碘离子和汞离子在强碱性条件下，会与氨反应生成淡红棕色络合物，此颜色在波长420nm处会有强烈的吸收。而生成的这类红棕色络合物的吸光度会与其溶液的氨氮含量成正比，可用测试反应液的吸收值而测定氨氮的含量。使用注意事项1、纳氏试剂中的汞有毒，使用时要小心，皮肤触碰时要及时清洗。2、纳氏试剂的使用寿命比较短，配制后保存期通常只有三个星期，随着沉淀增加会影响测定结果。3、配制溶液时所有的用水都要用无氨水，而且不可以用普通的滤纸过滤，否则容易污染纳氏试剂。
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肿瘤标志物在临床的应用有哪些？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
肿瘤标志物是反映肿瘤存在的化学类物质。它们或不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织，或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量，它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质，借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能，以帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及**指导。 肿瘤标志物在临床的应用有哪些？ 肿瘤标志物用于帮助检测、诊断和管理某些类型的癌症。虽然肿瘤标志物水平升高可能提示癌症的存在，但仅仅这点是不足以诊断癌症的。因此，肿瘤标志物通常与其他检查（如活检）结合来诊断癌症。 **前检测肿瘤标志物水平，帮助医生制定适当的**。一些肿瘤标志物帮助医生决定是否在手术和/或放疗后增加化疗或免疫**。其他肿瘤标志物帮助医生选择哪种药物或药物组合最有效。 监测**。医生可能使用肿瘤标志物的变化来评估**的效果。肿瘤标志物水平的降低或肿瘤标志物回归正常水平可能表明癌症对**有反应，而无变化或增加可能表明癌症没有反应。 预测康复的机会。肿瘤标志物可以帮助医生预测癌症的行为和对**的反应。它们也可以预测一个人康复的机会。 预测或观察复发。肿瘤标志物可以用来预测**后癌症复发的可能性。寻找肿瘤标志物数量的变化可能是病人随访计划的一部分。它能在其他测试之前更早的帮助检测复发。
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保定米奇生物：体外蛋白表达系统特点
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
在大肠杆菌蛋白表达实验中，我们经常会遇到蛋白表达不出来、表达出的蛋白没有活性、蛋白表达过程中容易形成包涵体等情况，还要分析出现这些情况的原因。1、目的蛋白不适合在大肠杆菌中表达。包括稀有密码子、mRNA结构、跨膜区等；2、表达条件需要进一步优化。比如温度、分子伴侣、适合的表达宿主等；3、采用哪种温和复性条件可以提高蛋白活性，减少包涵体的形成等等。 除此之外，几乎每出一点差错就需要重新开始实验，表达载体的构建、感受态细胞的转化、阳性克隆的鉴定、培养基的配制、小量诱导摸条件、大量诱导、离心富集细胞、超声裂解细胞、亲和富集与纯化。又需要额外花费一周、几周甚至半年的时间，时间成本高到让人心烦不已。 现在有一个新技术：myTXTL无细胞蛋白表达技术，这个技术可以替代原核细胞大肠杆菌表达系统，可以解决蛋白表达不出来、表达的蛋白没有活性、原核蛋白表达产物有包涵体的问题。除此之外，这个技术能够应用于可溶蛋白和膜蛋白表达、蛋白质功能鉴定、高通量筛选、分子间互作分析。还适用于在大肠杆菌中难以表达的蛋白质、蛋白质分子定向进化、噬菌体生产、基因调控网络构建、基础研究(比如，CRISPR系统鉴定)、蛋白-蛋白互作、蛋白-核酸互作、蛋白与小分子的相互作用、酶活检测等。 myTXTL® 体外蛋白表达系统的特点： myTXTL® 是一种简单快速的蛋白质体外表达系统。基因的转录(Transcription, TX)和翻译(Translation, TL)基于大肠杆菌的内源TXTL机制，在体外建立高效的无细胞反应体系。同时，又保证了T7表达系统的兼容性。 myTXTL体外蛋白表达系统操作简单，仅需将线性模板或质粒与myTXTL® Master Mix混匀，目标蛋白在数小时内即可表达出来。不需要转化、克隆筛选和细胞裂解，避免了包涵体的形成。同时，避免了产物纯化过程中目标蛋白的损失。 myTXTL蛋白表达系统一次实验可对多个样品进行操作，小的反应体系是12 μl，表达出来的蛋白浓度能达到1 μg/μL，反应体系可等
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ELISA试剂盒反应五要素
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则： ①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。 引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。 上海沪鼎生物科技有限公司为您提供实验室操作试剂包括elisa试剂盒,进口elisa试剂盒,培养基,血清,抗体,标准品,生化试剂。
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肿瘤标志物的局限性有哪些方面？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
肿瘤标志物是指特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生，或是宿主对肿瘤的刺激反应而产生，并能反映肿瘤发生、发展，监测肿瘤对**反应的一类物质。肿瘤标志物存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中，能够用免疫学、生物学及化学的方法检测到，以指导肿瘤的预后判断以及**。 但是，肿瘤标志物不是万无一失的，也有一定的局限性，通常表现在如下几个方面？ 1、因为人体的一些正常细胞也产生肿瘤标志物，癌症以外的疾病或状况可能使肿瘤标志物水平显著上升，这限制了肿瘤标志物辅助癌症诊断的潜力。 2、肿瘤标志物水平可能随着时间而变化，很难得到一致的结果。 3、并不是每一个患有某种癌症的人都会有与癌症相关、更高水平的肿瘤标志物。肿瘤标志物的水平可能在癌症恶化之前不会上升。这对早期发现、筛查或观察复发没有帮助。 4、有些癌症不会产生血液中发现的肿瘤标志物，这包括有些癌症类型没有任何已知的肿瘤标志物。即使某些类型的癌症通常产生肿瘤标志物，这些类型的癌症患者中有些患者并没有较高的肿瘤标志物水平。 5、使用肿瘤标志物诊断癌症的最佳方式还没有确定。一些肿瘤标志物的使用也是有争议的。
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四环素类抗生素的鉴定方法有哪些？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
四环素类抗生素是主要抑制细菌蛋白质合成的广谱抗生素，高浓度具有杀菌作用。其抗菌谱广，对革兰氏阴性需氧菌和厌氧菌、立克次体、螺旋体、支原体、衣原体及某些原虫等有抗菌作用。四环素类抗生素具有共同的基本母核（氢化骈四苯），仅取代基有所不同。它们是两性物质，可与碱或酸结合成盐，在碱性水溶液中易降解，在酸性水溶液中则较稳定，故临床一般用其盐酸盐。 四环素类抗生素的测定方法主要包括微生物抑制法、酶联免疫法、分光光度法、毛细管电泳色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱法等。 样品经过提取和净化后，四环素类抗生素可通过薄层色谱或液相色谱进行分离，再采用分光光度、荧光或质谱检测系统进行定量测定。 微生物法是一种传统的测定四环素类化合物和其他抗生素的分析方法。微生物通常对四环素类抗生素具有固有的敏感性。操作简便，价格低廉，不需要精密仪器和复杂的样品前处理过程，因而适合大量样品的筛选。 间接酶联免疫法可用来检测牛奶中的四环素类抗生素。检测限可达5 ng/g由于该方法所采用抗体与金霉素有强烈的交叉反应活性，因此，该法虽然不是用来检测四环素类的，但对于金霉素的检测限也低达5 ng/g。
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抗体是由什么产生的
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
抗原侵入机体后，被吞噬细胞吞噬，吞噬细胞呈递抗原给T细胞，再由T细胞呈递给B细胞，从而导致B细胞分裂分化为浆细胞和记忆细胞，浆细胞产生抗体，当同种抗原再次入侵时，记忆细胞快速分裂分化产生浆细胞，浆细胞产生抗体。 抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体按其反应形式分为凝集素、沉降素、抗毒素、溶解素、调理素、中和抗体、补体结合抗体等。 按抗体产生的来源分为正常抗体(天然抗体)，如血型ABO型中的抗A和抗B的抗体，和免疫抗体如抗微生物的抗体。按反应抗原的来源分为异种抗体，异嗜性抗体，同种抗体和自身抗体。 扩展资料： 在一定条件下，Ig分子肽链的某些部分易被蛋白酶水解为不同片段。木瓜蛋白酶和胃蛋白酶是常用的两种Ig蛋白水解酶，并可籍此研究Ig的结构和功能，分离和纯化特定的12多肽片段。 抗体的功能与其结构密切相关。同一抗体的V区和c区的氨基酸组成和顺序的不同，决定了其功能上的差异。不同抗体的V区和C区在结构变化上具有一定的规律，又使得其在功能上存在共性。V区和C区的组成和结构，决定了抗体的生物学功能。 在人类，lgG是能够通过胎盘的抗体。胎盘母体一侧的滋养层细胞可表达一种特异性的IgG输送蛋白，称为FcRn。IgG可选择性地与FcRn结合，从而转移到滋养层细胞内，并主动进入胎儿的血循环中。 IgG穿过胎盘的作用在于这是一种重要的自然被动免疫机制，对于新生儿抗感染具有重要意义。另外，sigA可通过呼吸道和消化道的黏膜，在黏膜局部免疫中发挥重要的免疫防御作用。
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操作细胞培养室的环境很重要
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁，空气清新，干燥和无烟尘。 一、常用设施及设备 1. 超净工作台：也称净化工作台，分为侧流式，直流式和外流式三大类。 2. 无菌操作间：一般由更衣间，缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱，离心机，倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱，冷藏器及消毒好的无菌物品等。 3. 操作间：普通培养箱，离心机，水浴锅，定时钟，普通天平及日常分析处理物。 4. 洗刷消毒间：烤箱，消毒锅，蒸馏水处理器及酸缸等。 5. 分析间：显微镜，计算机及打印机等。 二、培养器皿 用细胞培养器皿有培养瓶，培养板，培养皿等。 常准备量是使用量的三倍，器皿应选择透明度好，无毒，利于细胞粘附和生长的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。 常用的器皿有下面几种： 1.液体储存瓶：用于储存各种配制好的培养液，血清等液体，常用规格有500ml，250ml，100ml等几种。 2.培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管伸入瓶内任何部位，规格有200ml,100ml,50ml,25ml,10ml等几种。 3.培养皿：用于开放式培养及其它用途。分直径30mm，60mm，120mm等几种。 4.吸管：常用的有长吸管和短吸管两类，长吸管也称刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度称改良吸管，刻度吸管用于移动液体，常用1ml和10ml两种。短吸管也叫滴管，分弯头和直头两种。 5.离心管：离心管是细胞培养中使用广泛的器皿，根据用途不同形态各样，常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类。前者分别为50ml，30ml，15ml；后者则多为10ml和5ml。 6.其它：如三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，注射
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暴雨灾害时，钩体病防治牢记这五条
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
暴雨灾害时，钩体病防治牢记这五条 前言： 近日，我国多个省份发生强降雨，至7月28日，暴雨已致河南1366.43万人受灾，广东、上海、浙江等地也相继经受了暴雨的考验。暴雨灾害后,肾综合征出血热、钩体病、血吸虫病等传染病极易流行，这其中，钩体病就是需要高度关注、重点防范的自然疫源性传染病之一。 钩体病传染源及传播途径： 钩端螺旋体病简称钩体病，是一种由致病性钩体引起的，人畜共患的急性传染病（国家乙类），在河南新乡、信阳等地曾有高达161.63/10万的发病率，在广东、浙江等地也曾流行。带病动物的尿液或粪便排出致病性钩体污染水源后，钩体在污水中可长期生存，并通过皮肤黏膜再次侵入机体，连续的暴雨灾害使人接触疫水感染钩体病的机率大为增加，我们应当加以重视。 钩体病临床症状： 钩体病起病3天内主要表现为皮炎、急起发热39℃左右、全身酸痛、乏力，查体可见腓肠肌触压痛，部分患者发病第1天即出现结膜充血，发病第2天出现淋巴结肿大。钩体病第3至10天，依感染钩体类型不同患者会出现流感伤寒型、肺出血型、黄疸出血型及脑膜炎型等不同症状，以上一般称之为钩体病的三症状、三体症及四分型。 钩体病退热后为恢复期，或迁延为慢性钩体病或重症。贫血是慢性钩体病的主要症状，部分病患有闭塞性脑动脉炎等后发症；重症病患有明显的肝肾、中枢神经损害和肺弥漫性出血，可危及生命。 钩体病诊断方法： 实验室钩体培养法和基于活的钩体标准菌株的显微镜凝集试验 （microscopic agglutination test，MAT）是诊断和监测钩体病的金标准。由于MAT方法用时较长，且目前国内尚无批准上市的钩体试剂盒，进口钩体病试剂盒在以往钩体病监测与控制中发挥着重要的作用 深圳市科润达生物工程有限公司代理的DRG的ELISA试剂盒、FULLER的免疫荧光试剂盒，CORTEZ公司的胶体金检测卡在以往的钩体病监测中有得到较好的评价。其中DRG的钩体IgM及IgG试剂盒，在发病的第6至10天即可以检测到抗体，30分钟即可以出结果，具
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肺癌诊断中的基因甲基化相关说明
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
基因甲基化是指DNA分子上CpG双核苷中的胞嘧啶（C）在酶的作用下选择性地添加甲基形成5'-甲基胞嘧啶的过程。CpG双核苷常位于基因转录调控区附近，其甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性等发生改变，从而调控基因的转录和表达。 简单来说，基因甲基化就像DNA的一顶最神奇的“帽子”。戴上这顶“帽子”则会封闭转录起始使转录过程不能延伸，并且影响转录因子与启动子的结合，从而使得基因沉默。因此低甲基化会激活基因转录，而超甲基化则会阻止基因转录导致基因沉默。 基因甲基化异常是肿瘤发生最常见的表观遗传变化之一，肿瘤的发生表现为基因组整体甲基化水平降低（癌基因）和CpG岛局部甲基化水平的异常升高（抑癌基因）。 肺癌甲基化人SHOX2、RASSF1A检测试剂盒，检测人SHOX2基因和RASSF1A基因甲基化，辅助临床肺癌的早期诊断，提高肺癌患者生存率。肺癌早期诊断、肺结节良恶性鉴别诊断等提高无创样本的检测灵敏度，同时保证检测特异性；提高无创样本的检测灵敏度，同时保证检测特异性。
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单核细胞增生李斯特氏菌的培养特性
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）简称单增李斯特菌，革兰氏阳性小杆菌，大小为（0.4-0.5）μm×（0.5-2）μm，直或稍弯，多数菌体一端较大，似棒状，常呈V字型排列，有的呈丝状，偶尔可见双球状。在22℃-25℃环境可形成4根鞭毛。本菌对理化因素抵抗力较强。在士壤、粪便、青贮饲料和干草内能长期存活：对碱和盐抵抗力强，对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺等均敏感。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李斯特氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。本菌营养要求不高，兼性厌氧。菌落初期极小，水滴样，经37℃数天培养后，直径可达2mm，初期菌落光滑、透明，后变灰暗。血平板上的菌落有β-型溶血环本菌耐碱不耐酸，在4℃-45℃均能生长，适生长温度30℃-37℃。该菌营养要求不高，在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。该菌的生长范围为2-42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在pH3.8-4.4能缓慢生长，在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂（TSAYE）和改良Mc Bride（MMA）琼脂上，用45角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
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体外定量检测人GYG1浓度：人糖原蛋白1 ELISA试剂盒
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
糖原是一种多支链多糖。它是动物细胞中葡萄糖储存的主要方式。在人体中，储存糖原的两个主要组织是肝脏和骨骼肌。糖原通常更多地集中在肝脏中，但由于人类有更多的肌肉，我们的肌肉储存了我们体内大约四分之三的总糖原。 在人类中，糖原蛋白可以表达两种亚型：糖原蛋白-1，分子量约为37 kDa，由GYG1基因编码，主要在肌肉中表达；糖原蛋白2，分子量约为55 kDa，由GYG2基因编码，主要在肝脏、心肌等组织中表达，在骨骼肌中不表达。 糖原蛋白1缺乏可导致糖原贮积病XV型。该疾病患者骨骼肌的表型特征是肌糖原消耗，线粒体增殖，以及缓慢收缩氧化肌纤维的显著表现。GYG1的基因突变也是心肌病和心律失常的原因之一。 艾美捷糖原蛋白1（Glycogenin 1，GYG1）蛋白，抗体和ELISA试剂盒等提供了一系列独特而可靠的产品来支持研究中的糖原蛋白1（GYG1）分析（仅用于科研，不可用于临床诊断）。 abx387724 人糖原蛋白1 (GYG1) ELISA试剂盒是用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液等生物体液中的GYG1浓度。 检测原理： 该试剂盒基于夹心法酶联免疫吸附测定技术。将抗体预包被到96孔板上。将标准品，测试样品和生物素偶联试剂添加到孔中并孵育。然后加入结合了HRP的试剂，并孵育整个板子。在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的结合物。TMB底物用于定量HRP酶促反应。添加TMB底物后，只有含有足够GYG1的孔才会产生蓝色产物，然后在加入酸性终止液后变为黄色。黄色的强度与结合在板上的GYG1量成正比。在酶标仪中于450nm处以分光光度法测量光密度（OD），由此可计算出GYG1的浓度。 人糖原蛋白1（GYG1）的OD值标曲 Abbexa总部位于英国剑桥的剑桥科学园，是一家专业的全球抗体供应商和蛋白质供应商，致力于为生命科学、药物开发和生物技术领域的科学家和研究者提供优质的客户体验和高质量的产品。产品涵盖一抗、二抗、蛋白质、ELISA试剂盒、酶以及其他用于研究的试剂盒和工具。艾美捷科技是Abbexa的中
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ELISA实验需要注意哪些细节？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
ELISA实验需要注意哪些细节？ 想要正确的操作ELISA实验，操作当中的每一个步骤都非常重要，不可忽略任何一个操作细节。下面是具体步骤： 1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。 3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。 4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。 5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。 9. 不能使用过期产品。 10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 11.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
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病毒RNA分离：病毒RNA提取试剂盒解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
这次的升级版新丨冠让我们更加意识到防疫的重要性。只要疫情没有完全控制住就不能松懈，除此之外，对于病毒的诊断也是至关重要的。那么病毒RNA的提取就显得十分关键。这里amyjet为大家整理了10种常见的核酸纯化方法，重点是病毒RNA的分离。 一、过滤 膜过滤是一种物理分离技术，根据膜的性质（例如，孔隙率）和液体含量（例如，粒度），液体的内含物通过或被膜排除。通过选择具有适当孔径的膜，可以过滤液体病毒样本以排除细胞和其他大型非病毒污染物。 二、核酸酶处理 衣壳和包膜为病毒基因组提供了额外的保护层，防止核酸酶降解。DNAse和RNAse通常用于消除外源核酸，同时受保护的病毒基因组保持完整。 三、苯酚/氯仿抽提 可以使用苯酚/氯仿提取方法从病毒RNA基因组中分离宿主来源的基因组DNA和小RNA，该方法涉及将DNA 和RNA分别分为有机相和水相。首先，通过向含有核酸的样品中加入酸性苯酚和酸性缓冲液来产生单相溶液。氯仿的加入创建了一个双相系统，其中DNA和蛋白质分配到下层有机相，而上层水相保留RNA。水相可以另外用异丙醇处理，并通过基于硅胶柱的纯化处理，以提取总 RNA 或单个小RNA（miRNA、tRNA、5SrRNA、5.8SrRNA）和大RNA（mRNA、18SrRNA、28SrRNA） , snRNA) 分子，这取决于乙醇的浓度。 四、离心 低速离心：（例如，4℃下6000 ×g10分钟)是一种简单方便的病毒净化方式。细胞和大的细胞碎片被沉淀，上清液中悬浮的病毒粒子可以进行更严格的纯化。 超速离心：病毒的大小和密度不同于细胞器（例如线粒体、核糖体、细胞核）、生物大分子（例如 DNA、RNA、蛋白质）和污染病毒样本的其他宿主成分。超速离心利用这些物理化学特性将病毒与非病毒元素分离。这种分离通常是通过结合蔗糖和氯化铯密度梯度来实现的。在超速离心之前，细胞碎片在初始离心步骤中被清除。通过首先应用蔗糖密度梯度离心进一步去除剩余的杂质，该离心基于颗粒的 S 值或沉降系数进行分离。然后将氯化铯密度梯度平衡离心（根据其浮力
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活性氧检测——总ROS检测试剂盒解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
活性氧（ROS）是生物有氧代谢过程中的副产品，包括氧离子，过氧化物和含氧自由基等。下面给大家介绍一下活性氧检测工具。 Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。活性氧分子（ROS）是氧正常代谢过程的固有副产品，在细胞信号及转导过程中扮演着重要的角色。然而，在氧化应激阶段，ROS水平显著增加。ROS的积聚导致细胞结构的重大破坏。氧化应激通常在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松，中风，炎症以及许多神经变性疾病和癌症中被被发现。ROS的测定能帮助我们理解氧化应激如何调节改变的胞内途径。 艾美捷总ROS检测试剂/试剂盒可以检测活细胞中总的ROS，它与ROS反应时，会产生荧光。 图1. 用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒（cat# AAT-22900）检测HeLa细胞中的ROS。将HeLa细胞以15,000个细胞/ 90 uL /孔在Costar黑色/透明底部96孔板中过夜接种。将细胞未经处理（对照）或在37°C下用1 mM H2O2或100 uM叔丁基氢过氧化物（TBHP）处理30分钟。加入ROS Brite 670工作溶液（100 uL /孔），并在5％CO2和37°C的培养箱中孵育1小时。使用FlexStation（Molecular Devices）以底部读取模式在Ex / Em = 650/675 nm（cut off= 665 nm）处检测荧光信号。 图2. 在Costar黑色/透明底部96孔板中，用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒染色的Hela细胞图像。A：未经处理的对照细胞。 B：细胞在染色前用100 uM氢过氧化叔丁基（TBHP）处理30分钟。 图3. ROS Brite 700对PBS缓冲液（pH 7.2）中不同活性氧的荧光响应。用Ex / Em ＝ 670 / 700nm测量荧光强度。 美国AAT Bioquest Inc。（前身是ABD Bioquest，Inc。）是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生
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