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蛋白样品制备详解—概念篇
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
蛋白样品制备是许多实验重要的第一步，蛋白样品由于其结构特性各异，又必须使其完全溶解和尽可能少的化学修饰，所以不可能有一个通用的技术，只能通过大量的实验来积累经验。正如开篇所引用的两句话中包含的深意：在研究蛋白的过程中，既需要严谨的技术流程，规范的操作手段来确保蛋白研究的完整性，也需要将其看成是独特而奇妙的个体，结合以往经验但又不拘泥于经验，才能真正揭开她神秘的面纱。2012年让我们一起来回顾一下这一重要技术及值得关注的产品。 1.为什么要进行样品制备 “为什么要进行样品制备？电泳的目的不就是分离吗？"刚接触双向电泳的小菜鸟有可能就会这么问。这个问题很好回答，这是由于目前双向电泳一般只能分辨到1000-3000个蛋白质点(spot)，而样品中的蛋白种类可达到10万种以上，因此样品的预分离制备是必须的。另外比如像对临床组织样本进行研究，寻找疾病标记的蛋白质组学研究目的，由于临床样本都是各种细胞或组织混杂，而且状态不一，如肿瘤组织中，发生癌变的往往是上皮类细胞，而这类细胞在肿瘤中总是与血管、基质细胞等混杂。所以常规采用的癌和癌旁组织或肿瘤与正常组织进行差异比较，实际上是多种细胞甚至组织蛋白质组混合物的比较，而蛋白质组研究的通常是单一的细胞类型，因此需要进行有效的样品制备。 但是为什么要进行不同步骤的样品制备呢？这不仅仅是由于蛋白本身不同，所以需要不同方法来配合，而且在制备样品的时候，首先需要明确的是什么是实验的最终目的：是分离尽可能多的蛋白还是分离样品中某些感兴趣的蛋白，这些直接决定了你的制备方法，也决定了实验的成功与否。由于想要分离的蛋白必须是完全溶解的，溶解的效果取决于裂解、破碎、沉淀、溶解的过程以及去污剂的选择和各种溶液的组成，因此如果是只对样品中的一部分蛋白感兴趣，可采取预分离的方法，如欲分析的蛋白来自细胞器（细胞核、线粒体和原生质膜），则应先采取超速离心或其他方法将细胞器分离出来再溶解蛋白；如
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siPOOLs如何提高基因沉默的特异性和可信度
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1、特性1：高复杂度混池 （1）更低浓度的单一siRNA 高浓度siRNA 会导致更多的脱靶效应。高复杂度混池可使单一siRNAs在更低浓度下发挥作用。这在很大程度上减弱了siRNA的脱靶效应。 （2）更丰富的siRNA序列多样性 单一siRNAs的表现优于低复杂度的siRNAs混池。高复杂度的 siPOOLs相对于低复杂度的siRNA池能更有效地降低脱靶效应。 2、特性2：基于生物信息学的详尽设计 完整覆盖转录本 多样化的siRNAs 能够完整覆盖转录本异构体。可同时定位 XM和 NM 转录本。 最优化siRNAs热动力学 专属算法设计可根据热动力学属性选取最有效的siRNAs帮助向导链组装成沉默复合体(RISC)。 规避同源序列 siPOOLs规避了有高度相似序列的基因。在全基因组范围内进行相似序列筛选。 siPOOLs的其他优势： 一个基因 - 一个siPOOL。 不同于其他siRNA试剂一般需要测试多种试剂，单一的siPOOL就能够敲除目标基因。 转染简便。 siPOOL使用方法与其他siRNA相同，所以可以在所选细胞系中使用已经成熟的转染体系。 siPOOL池可定制，序列可得。 所有的siPOOL设计均由我们执行，且可以整合客户的个性化设计需求，比如物种、异构体以及转录本区域等。如果客户需要，我们可以提供siPOOL池中siRNA的序列信息。我们还可以提供用于展示siPOOL中siRNA与转录本结合区域的网站。 售后支持。 基因沉默的效果与基因特性以及转染效率有关。客户购买siPOOLs试剂后我们会提供专业的售后支持，以确保siPOOOLs的表现达到客户满意。如果使用效果不及客户预期，我们会努力评估原因，并在必要的情况下重新设计。
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平滑肌细胞的功能分类介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
平滑肌细胞是指构成平滑肌的组织。平滑肌即无纹肌的通称，是被视为较横纹肌原始的一种肌肉。平滑肌除作为无脊椎动物的躯体肌而有广泛分布外，在脊椎动物除心肌之外而大部分内脏肌也是由平滑肌组成的。平滑肌（细胞）虽有如斧足类的闭壳肌和足系牵引肌等是由平行走向长纤维状细胞（平滑肌纤维）所构成，但多数的平滑肌则是由长纺锤形（脊椎动物的内脏肌长不到1毫米）的单核细胞构成。它不构成**的器官，而只是成为构成体壁和内脏壁的因素（肌层）。其细胞实质仅由相当于横纹肌的向异性物质组成，整体表现同样的双折射。在有的平滑肌中可见到肌原纤维。作为收缩物质的肌动球蛋白和横纹肌大致相同，但含量少，肌动蛋白细丝和肌球蛋白细丝间的相互排列缺乏规律性。平滑肌收缩和舒张的速度较慢，横纹肌每次收缩大约是0.1秒，而平滑肌需要数秒，甚至数十秒。时值（电刺激时约0.1秒）和潜伏期（0.2-1.0秒）也长。容易产生刺激的总和，认为这是由于缺少肌管系统的缘故。与作为应相性肌和运动肌的横纹肌不同，平滑肌主要适应于作为紧张性肌和保持肌的机能。被动的伸展性和主动的缩短度都明显大于横纹肌的以及经常显示自动的兴奋性，这些都成为上述适应的内容。脊椎动物的平滑肌（内脏肌）一般受来自植物性神经系统的双重神经支配，它们的神经末梢在肌肉细胞间形成神经网络，有时还介有神经节细胞。一如血管壁肌肉和瞬膜那样，有神经的控制显著者，也有如肠和子宫那样的不显著者，后者具有类似心肌的自动性。在平滑肌内兴奋的传导有各种形式，有的被认为是通过神经的（瞬膜），有的则是通过肌细胞间传递乃至合体细胞的连接（子宫），但速度常常是低的（2-3厘米/秒）。在后一种情况下，证明有类似于横纹肌峰电位的动作电位。体液支配显著也是平滑肌的特征，在子宫壁和血管壁特别**（催产素、肾上腺素等）。平滑肌细胞功能分类尽管体内各器官所含平滑肌在功能特性上判别很大，但一般可分为两大类：一类称为多单位（multi-unit）平滑肌
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胎牛血清的功能以及保存措施
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
胎牛血清是一种性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。 胎牛血清的功能： 1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 胎牛血清保存应该注意： (1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。 (2)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。 (3)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。 (4)血清中的沉淀物、絮状物主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理. 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。 (5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成
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如何让ELISA系统更稳定
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1、包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保存抗原很重要，还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法简要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②脂类物质:可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。 2、包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理：由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。 3、封闭：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还有一些稀有用到的各种动物血清（主要为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等等。但最终选用什么，要依据试验具体来实践。 4、洗涤板：可以说在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游
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有趣的细胞冷知识
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1.人体细胞都很小吗？答案是否定的，比如说星形胶质细胞，它的胞体上有着长长的轴突，长度甚至可达一米；（jing）子是人体内最小的细胞，只有不到3微米，而卵子却有140微米。 2.人体免疫细胞过多是好事吗？NO，他们会内讧，会打的谁也不认识谁，结果受伤的只有你自己，比如说强直性脊柱炎，自身免疫病等大部分都是免疫细胞过多造成的； 3.人体细胞也有“七年之痒”？科学的解释是：因为人体在不断地新陈代谢，细胞会每七年全部更新，拥有一个全新的身体，但是为什么更新后人也在不断的老去，这是因为每更新一次，细胞自身的端粒酶越来越短。 4.人体最神奇的细胞是大脑的神经细胞的神经冲动，传递速度超过400公里/小时，相当于波音777飞机速度的一半，那些不努力的细胞只活几天，努力一把的却活上百年。 5.在整个人体中，而每分钟起码有一亿细胞在死亡，其中有三千万属于血液细胞。 6.脂肪细胞生命周期约为90天到180天。如果减肥时间低于90天就停止减肥，体重可能会立刻反弹。而且脂肪细胞在人类成年以后数量基本不会发生改变，但是只要营养足够，脂肪细胞体积可以扩大一百倍到一千倍左右，所以说减肥并不是细胞减少了 ，只是细胞变小了，但是减肥千万不要过度，有研究称：大脑60%的是脂肪，没了脂肪可能会变傻，抽脂可能会带来这样的风险。 7.如果吃下一块癌细胞会怎么样？不要想太多了，癌细胞在空气中存活很少，即使它存活被吃下去一般它会在您身体里经过6米长的消化管道之后变成臭臭拉出来。 8.组成一个人需要120万亿个细胞，这些细胞是生命的基本单位，构成了我们的大脑、肌肉、器官和身体的每一部分，组织不同细胞的构造和基能也不一样。 关于细胞实验： 1.来自自然杂志的调查结果显示：超过1500名被调查研究人员中 ，大约70%的人表示无法重复出别人的实验，有一半的人甚至无法重复出自己的实验。 2.Hela细胞是在供主不知情的情况下获得的，大约25%的细胞交叉污染都来源它 3.最早出来的培养基是M199，它
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今日为你叙说抗体保存方法！
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
不同的抗体产品保存、运送方法也是不同的，保存是否得当直接影响到抗体的实验效果，选对了保存方法，大部分的抗体活性都可以维持数月乃至数年。今日为你叙说抗体保存方法！ diyi、刚收到货时需当即保存 1.请务必在12000rpm离心1分钟后再打开管盖进行分装和保存。 注意：假设抗体体积小于50ul，请延长离心时间至5分钟，以保证悉数抗体均离心下来。 2.绝大多数抗体保存在-20℃是完全足够了，没有根据显阐明保存在-80℃会有更多好处。 3.避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上。 第二、抗体的分装要求与保存温度 1.分装可以程度的下降重复冻融对抗体活性的损害，一同也下降了因为屡次从同一管中吸取抗体形成的污染可能性。 2.分装的量以一次实验用完为好，少不能少于10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响 3.复融后的分装抗体假设一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来！ 4.抗体工作液应该当天制作当天用完，在4℃尽量不要超过1天。 第三、为什么抗体保存要4℃？ 一般情况下，抗体的运送进程需求3-4周的时间。4℃运送*首要的目的是为了避免重复冻融对抗体活性的损害。假设运用干冰运送，那么收到抗体时是冻起来的，为了分装就需求冻结。这就多了一次冻融的进程。所以运送进程中避免干冰运送。 第四、抗体的保存注意 1.抗体运用非常特别的贮存管，只要在12000rpm离心1分钟才能将附着在管壁或盖内的抗体悉数离心下来。即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全，导致呈现抗体的量不足的现象！ 2.假设抗体很快(1-2周)会运用，举荐在4℃保存，这是为了避免重复冻融对抗体活性的损害。假设要长时间保存则*是在-20℃or-80℃。*要害的一点是要根据阐明书举荐的方法来正确的保存抗体！ 3.腹水方式的产品请在收到后当即冻起来。因为该类产品含有许多的蛋白酶，长时间在4℃保存会导致抗体的降解。 我司作为中国生物行业的一支
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细胞转染率低，转染试剂要全背锅吗？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
目前细胞转染技术主要分为三大类：化学法、物理法及生物学法。但是没有一种方法是通用并且准确无误的，所以只有依据自己的实验要求或者实验探索选择理想的方法，才能获得漂亮的实验结果。当然也可以在前辈们发的文献中多看看，前车之鉴可以减少很多不必要的花费。 细胞转染低都是转染试剂的问题吗？纯度不够确实会有这样的问题，所以选择转染试剂很重要，其次还需要考虑以下几点影响： 1. 其他微生物污染 您觉得您养的细胞 ，不，不，不 ，可能您只知道您养的是细胞，你不知道的是您的细胞可能背着您养了一群小三，比如支原体，病毒，黑胶虫等等，特别是支原体它可以更改细胞的特性，穿透细胞膜进行基因改造，培养几代可能看不到“它”给细胞做的整容效果，但是随着代次的增多，细胞就慢慢体现出来了，“它”已经变得不是从前的那个“它”了，所以建议在转染之前进行一次支原体检测，如有支原体清除干净再转染。 2.交叉污染： 如果同时养了很多细胞，在操作的时候没有规范化，然后不小心让A细胞到B细胞家里走了个亲戚，最后的结果可能就是A细胞和B细胞不离不弃，若B细胞比较强悍，可能会发生鸠占鹊巢的事情。所以操作的时候一定要注意，发生不明确的交叉污染，宁可错杀一千，不要放过一个。 3.转染高不高，时机很重要 转染细胞真的没有那么容易 ，想什么时候都可以，就像不尿急，占个厕所也拉不出来，相比非分裂的细胞—正在分裂的细胞往往会比静止细胞更容易摄取并表达外源DNA，因此对大多数操作而言，细胞一般建议在转染当天或者前一天种板，需要注意的是，铺板细胞不宜过多，特别是疯长的癌细胞，因为如果细胞较多，甚至互相叠加，细胞自己都吃不饱，住不好，它也糟心的很，哪有时间和您玩转染？ 4. 抗生素和血清带偏的转染效果 本来想 ，能让个细胞好好生长不容易 ，为了防治心里觉得细胞可能产生的各种污染 ，于是给他们加上各种抗生素预防，比如青霉素和链霉素，在细胞转染的时候，若含有这两个组分，可增加细胞
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核糖核酸酶的分类和作用
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
指能水解RNA磷酸二酯键的酶称核糖核酸酶(ribonuclease，RNase)，不同的RNase其专一性不同。核糖核酸酶，白色粉末，为具有球蛋白性状的一种蛋白质。溶于水、50%丙酮。此酶最适宜温度为60℃，85℃以上失去作用，最适宜的pH值为7.6。是催化核糖核酸水解的一种核酸内切酶，可使胞嘧啶核酸解聚，对胸腺核酸则无作用。 核糖核酸酶的分类： 1.核糖核酸酶A(RNase A)：来源于牛胰脏，是一种内切核糖核酸酶，可特异攻击RNA上嘧啶残基的3'端，切割胞嘧啶或尿嘧啶与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键，反应终产物是3'嘧啶核苷酸和末端带3'嘧啶核苷酸的寡核苷酸。无辅助因子及二价阳离子存在时，核糖核酸酶A的作用可以被胎盘RNA酶抑制剂(RNasin)或氧钒一核糖核苷复合物(vanadyl-ribonuclosidecomplex，VRC)所抑制。 2.核糖核酸酶T1(RNase T1)：来源于米曲霉(Aspergillus orjzae)，它特异地作用于鸟嘌呤3'端磷酸，切割位点在鸟嘌呤的3'磷酸和相邻核苷酸的5'羟基之问的磷酸二酯键，反应终产物为3'鸟苷酸和末端带3'鸟苷酸的寡核苷酸片段。 3.核糖核酸酶H(RNase H)：最早是从小牛胸腺组织中发现的，其编码基因已被克隆到大肠杆菌中。它能特异地降解DNA:RNA杂交双链中的RNA链，产生具有3'一OH和5'一磷酸末端的寡核苷酸和单核苷酸，它不能降解单链或双链的DNA或RNA。 核糖核酸酶的作用： 核糖核酸酶能催化核糖核酸(RNA)的降解，现已能人工合成。药用油膏局部外用于**外伤及关节疼痛。据报道，核糖核酸酶能改变宿主细胞新陈代谢，抑制病毒合成，在体外能抑制流感病毒增殖，在鸡胚内能抑制痘苗、疱疹病毒形成。临床用核糖核酸酶每天肌注180毫克，对**流行性脑炎有益。
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对照品标定方法时需注意的细节
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
对照品的品种众多，对于它的保存方法也有一定的要求，一般来说应将对照品置于干燥阴凉处，大家都知道对照品是实验室常客，所以如果保存不当，会直接影响到它的实验精准性，但是对于不同的对照品，保存方法也是不同，建议开瓶后的对照品尽快使用完，避免对照品的分解、污染或吸潮。那么对照品标定方法时需注意的细节有那些要点呢？下面博林达小编来给大家介绍。 对照品标定方法时需注意的细节要点： 1、对照品的取用量应满足滴定精度的要求(消耗滴定液约20ml)。 2、滴定终点的判断要明确，提供滴定曲线;如选用指示剂法，应考虑其变色敏锐，并用电位法校准其终点颜色。 3、为排除因加入其它试剂而混入杂质对测定结果的影响，或便于剩余滴定法的计算，可采用“将滴定的结果用空白试验校正”的办法。 4、要给出滴定度(采用四位有效数字)的推导过程;标定结果要根据3个以上实验室各不少于15组测定结果经统计分析，去除离群值和可疑值后的结果，并报告可信限。 以上内容就是对照品标定方法时需注意的细节要点的介绍了，目前，很多的企业其实对于对照品的管理并不是十分到位，特别是那些对照品本身就不是很了解的企业而言，经常会将对照品配制成浓度较高的储备液，但未能对其稳定性和储存期限进行考查，有些将开启后和开启前的对照品放一起，包装上也没有特别说明。这也让某些对照品失去了原本的实验精准性。
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中药对照品包装运输过程的规范管理
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
中药对照品和中药标准品的包装是指选用适宜的包装材抖和容器.采用适宜的包装技术对药品或药物制剂进行分、封、装、贴签.从而在运输、储存、管理和使用中为药品提供保护、分类和说明作用的过程。 我们对对照药材的包装进行了规范。除参照国家相关规定外.还制仃了详细的包装要求，主要有:包装工作开始前.须核对外包装上的标识与该品种名称、批号、规格等信息是否一致。包装一般在相对通风环境良好的工作间，对于有毒有害的品种需在手套操作箱中包装，配截好手套口革等防护用具。包装结束后.清点包装数量.稍毁多余标签，清扫工作现场。 中药对照品、对照品系指国家药品标准中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等标准物质，它是国家药品标准不可分割的组成部分。国家药品标准物质是国家药品标准的物质基础，它是用来检查药品质量的一种特殊的专用量具；是测量药品质量的基准；也是做为校正测试仪器与方法的物质标准；在药品检验中，它是确定药品真伪优劣的对照，是控制药品质量不可少的工具。
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细胞培养基础（一）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
环境保持 相信很多新手朋友都会遇到这种情况，自己培养的细胞养的好好的，突然有一天细胞培养基浑浊了、变黄、飘着一些霉菌团或者显微镜下全是树枝样的霉菌菌丝，起初还只是一两个培养瓶有这种情况，过段时间就大面积都出现这种情况了。出现以上情况的时候，很多刚开始接触细胞培养的人都不知道怎么污染的，更不知道如何处理。那么接下来，小编就带你们看看怎么从环境上降低细胞被污染的概率。 首先我们要知道，造成细胞污染的污染物不是凭空产生的，而是环境或者人为带入的，那么我们就要从环境和个人方面入手。接下来，就让我们详细的了解下具体需要注意哪些事项吧。 一、 细胞室设计 细胞室设计可别小看这点，很多实验室长期出现污染都与这个有很大关系。 1. 细胞室应设计合理的通风、缓冲区域。 细胞室的空气要保持清洁，需要对流入的空气进行过滤，防止外界污染通过空气传播。人员进入细胞室，需要经过缓冲室，缓冲室的作用就是避免开门进出时外界的空气直接与细胞室内流通，同时还有另外一个功能，就是人员穿戴实验服、防具的可以在这里进行，避免人体身上灰尘、皮屑等直接进入细胞室。 2. 细胞室位置避免阳光直射、隔离水源、通风良好。 避免阳光直射，可以直接降低细胞室夏天的空调费用，这个应该没有人有疑问。不过还有另外一个重要原因，我们目前培养的细胞大部分都是37度培养的，所以气温需要维持37度以下，甚至部分国产培养箱需要保持室温30度以下才能正常工作。隔离水源可以避免水池里滋生的各种细菌、真菌等，降低实验室污染概率，切忌图方便将水源引入细胞室，否则管理不善的话很容易出现各种污染的情况。细胞室需要经常保持通风，通风可以降低空气湿度，尤其是南方梅雨季节，降低空气湿度可以减少霉菌滋生的情况。 3. 细胞室超净台、生物安全柜应摆放合理。 超净台、安全柜都是通过过滤空气来防止污染的，所以彼此之间应留出一定空间，避免出现互相吹风，影响各自工作的情况。 二、 个人装
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DNA提取的8个问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
质粒DNA的提取是DNA技术中的必需实验技能。分离质粒DNA一般分为三个步骤： 1、培养细菌使质粒扩增 2、收集和裂解细菌 3、分离和纯化质粒 DNA碱裂解法是较常用的提取的方法，在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA(cccDNA)：质粒的两条链没有断裂;超螺旋开环DNA(ocDNA) 而在DNA提取中总会遇到各种一些问题，导致实验无从下手，下面我们来分析一些常见的问题： 一、为什么用无水乙醇沉淀DNA? 乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，当加入乙醇时，乙醇会夺DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验的做法是：初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。 二、在用无水乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAC或NaCL至最终浓度达0.1-0.25MOL/L? 在Ph为8左右的DNA溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAC或NaCL，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，DNA沉淀不完全，反之DNA难以收集。在沉淀的DNA过程中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。 三、为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液? 在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用，所以采用Tris-HCL(pKa=8.0)的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH /Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，TE缓冲液中的EDTA更能稳定DNA的活性。加核糖核酸酶降解核糖核酸后，要用SDS与Kac来处理一次，可以让沉淀更加完全。 四、如何选择聚乙二醇(6000)的浓度来沉淀DNA? 采用PEG(6000)沉淀DNA，大小不同的DNA分子所用的PEG的
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细胞实验需要准备些什么？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1. 常用的吸量管有： 奥氏吸量管、移液管、刻度吸量管 2. 如何正确使用吸量管？ 答：(1) 选用原则：就近原则 (2) 吸量管的使用：吸-擦-调-放 3. 如何正确使用微量加样器？ 答：转-按-吸-擦-按 4. 如何正确使用离心机？ 放置-装管-平衡-启动-取出 5. 细胞培养必需设备有哪些？ 答：细胞培养必需设备有超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、液氮生物容器、压力蒸汽消毒器、无菌过滤器、电热干燥箱、离心机、细胞计数板和冰箱等。 6. 无菌操作技术包括哪些内容? 答：1. 保持安静、整洁的无菌工作区域; 2. 保持干净整洁的工作面; 3. 注意个人卫生；4. 在洁净工作台内无菌操作 7.实验一般贴壁细胞的传代培养 7.1.何谓贴壁细胞？ 答：贴壁细胞又称锚着依赖性细胞，是指赖于贴附在培养器皿表面生长的细胞，大多数培养细胞属于此类。细胞附着或贴附于底物表面上，呈现出极性细胞的典型形态过程，称为贴壁。贴壁是贴附类细胞生长增殖的条件之一。 7.2. 贴壁细胞的传代培养的实验原理是什么？ 答：细胞的贴壁是通过特异的细胞表面受体与细胞外基质分子结合而实现的，细胞在铺展之前，细胞已分泌了细胞外基质和蛋白聚糖。细胞外基质先粘着在带电荷的培养基质上，然后，细胞再通过特异的受体附着到基质上。蛋白酶可消化细胞外基质，甚至通过降解跨膜蛋白的胞外区使单层培养的贴壁细胞彼此分离。上皮细胞一般不易解离，因为它们通过紧密连 接复合体使细胞结合在一起；间充质间结合则更多地依赖基质的作用，因此容易分离。 8．细胞的计数方法是什么？ n/4*104 *稀释倍数 9．怎样鉴别死、活细胞？ 台盼蓝染色法。 10. 怎样进行细胞计数？ 答：低倍镜下按一定方向逐格计数板内四个角的每格大格中的呈透亮的细胞数。若细胞正好压在格线上，则按数上不数下、数左不数右的原则计数。
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香菇多糖的性质及用途
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
香菇多糖是一种宿主免疫增强剂，其主要有效成分是香菇，提取自优质香菇子实体的有效活性成分。 香菇多糖的性质： (1)化学组成：香菇多糖是一种以β-D(1→3)葡聚糖残基为主链，侧链为(1→6)葡聚糖残基的葡聚糖。 (2)性质：香菇多糖为灰白色粉末，大多为酸性多糖，溶于水、稀碱，尤其易溶于热水，不溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、等有机溶剂，其水溶液呈透明黏稠状。 香菇多糖的用途： 1.香菇多糖在医药领域的应用 香菇多糖在**胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。作为免疫辅助药物，香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移，提高肿瘤对化疗药物的敏感性，改善患者的身体状况，延长其寿命。 香菇多糖与化疗剂联合使用，有减毒、增效的作用。化疗药物杀伤肿瘤细胞的选择性较差，对正常细胞也具有杀伤作用，产生毒副作用，造成化疗不能按期按量进行；由于化疗的剂量不足，常引起肿瘤细胞的耐药性，成为难治性癌症，影响疗效。化疗过程中服用香菇多糖，可以增强化疗的疗效，并减轻化疗的毒性作用；同时，化疗过程中患者的白细胞下降的发生率、胃肠毒性、肝功能损害及呕吐的发生明显降低。这充分说明了香菇多糖与化疗并用可以增效、减毒，并增强患者机体的免疫功能。 香菇多糖配合其他药物**慢性乙型肝炎，可提高乙肝病毒标志物的转阴作用，减少抗病物的副作用。此外，香菇多糖可用于**结核杆菌感染。 2.多糖在保健食品领域的应用 香菇多糖是一种特殊的生物活性物质，是一种生物反应增强剂和调节剂，它能增强体液免疫和细胞免疫功能。香菇多糖的抗病毒作用机制可能在于其提高感染细胞免疫力，增强细胞膜的稳定性，抑制细胞病变，促进细胞修复等功能。同时，香菇多糖还具有抗逆转录病毒活性。因此，香菇多糖是一种有待 此文章由上海尚宝生物为您提供
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