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今日推荐：客户咨询实验相关问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
经过整理，我司将上周客户咨询的常见问题及我司做出的分析分享给大家，以供参考： 一、在加液的时候，如果不用多道移液器，对结果有影响吗？ 技术分析：对于熟练的技术人员来说，可能影响不会很大，如果不是很熟练，结果就很难说了。也正是因为如此，进口的试剂盒的说明书都要求用多道移液器或自动加样器加样。 二、抗原的纯度达到多少？ 技术分析：如果对本底要求不是很高对化，不纯对抗原对包被影响不大，如果可以避免交叉反应的化，包被物中的一些杂质有时还可以起一定的封闭作用（但仅限于科研），你就先用抗原包被（采用不同稀释度），用间接法检测。 三、一般做组织的ELISA，做什么液体研磨组织较好？ 技术分析：如果是检测组织内的成分，建议采用pH在7左右离子强度不高的缓冲液研磨就可以，这样对结果不会产生太大影响。 如果是采用研磨组织后包被，这要看你提取得成分在何种条件下能保持生物活性，建议用其保持生物活性好的液体研磨，然后用pH9.6的碳酸盐缓冲液透析，如果可以对话，可直接用pH9.6的碳酸盐缓冲液。 上海恒远致力为每一位客户提供为优质的产品与服务，产品包括试剂盒、生化试剂、标准品、抗体、血清。以上内容如有不太清楚的地方，或是了解其它技术问题，欢迎您联系我司业务员咨询。
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客户咨询实验相关问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
经过整理，我司将上周客户咨询的常见问题及我司做出的分析分享给大家，以供参考： 一、在加液的时候，如果不用多道移液器，对结果有影响吗？ 技术分析：对于熟练的技术人员来说，可能影响不会很大，如果不是很熟练，结果就很难说了。也正是因为如此，进口的试剂盒的说明书都要求用多道移液器或自动加样器加样。 二、抗原的纯度达到多少？ 技术分析：如果对本底要求不是很高对化，不纯对抗原对包被影响不大，如果可以避免交叉反应的化，包被物中的一些杂质有时还可以起一定的封闭作用（但仅限于科研），你就先用抗原包被（采用不同稀释度），用间接法检测。 三、一般做组织的ELISA，做什么液体研磨组织较好？ 技术分析：如果是检测组织内的成分，建议采用pH在7左右离子强度不高的缓冲液研磨就可以，这样对结果不会产生太大影响。 如果是采用研磨组织后包被，这要看你提取得成分在何种条件下能保持生物活性，建议用其保持生物活性好的液体研磨，然后用pH9.6的碳酸盐缓冲液透析，如果可以对话，可直接用pH9.6的碳酸盐缓冲液。 上海恒远致力为每一位客户提供为优质的产品与服务，产品包括试剂盒、生化试剂、标准品、抗体、血清。以上内容如有不太清楚的地方，或是了解其它技术问题，欢迎您联系我司业务员咨询。
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实验室用品使用规范
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
一、实验用品种类 1.细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌 制品。 2.TC 级培养盘表面均有coating 高分子物质以让细胞吸附，培养容器种类有Tflask, plates, dishes, roller bottle 等，依实验需要使用。 3.plastic sterile pipet: 1 ml, 2 ml,5 ml, 10 ml, 25 ml 4.塑料离心管: 15 ml, 50 ml，均有2 种不同材质，其中polypropylene (PP) 为不透 明材质，polystyrene (PS) 为透明材质，可依实验需要而选择适合材质之离心管。 5.glass pastuer pipet: 9 inch，用以抽掉废弃培养液等。 6.玻璃血清瓶(Pyrex or Duran glassware)：100 ml, 250 ml,500 ml,1000 ml 二、实验用品清洗 1.新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05 N HCl 浸泡数小时，洗净后才开始使用。 2.用过之玻璃血清瓶，以高压蒸汽灭菌，洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干 净，勿加清洁剂清洗。 三、实验用品灭菌 1.实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖，高压蒸汽灭菌121 oC, 15 lb, 20 分钟，置于 oven 中烘干。 2.实验用玻璃pasteur pipet 以干热灭菌170 oC, 4 小时。 3.液体或是固体废弃物可用10 % hypochloride 溶液(次氯酸，即漂白水) 或是蒸汽高 压灭菌121 oC, 15 lb, 20 分钟处理。
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进行试验怎么挑选实验动物
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
试验动物尽量挑选研讨对象的功用、代谢、结构及疾病性质与人类类似的动物。医学研讨的底子目的是要探索人类疾病的发病机制，寻找防备及医治办法，一般来说，动物所处的进化阶段愈高，其功用、结构、反响也愈挨近人类，如小鼠、牛、大鼠等非人灵长类动物是类似于动物类的。试验动物挑选动物的物种进化程度在挑选试验动物时应该是优先考虑的问题。在或许的条件下，应尽量挑选结构、功用、代谢方面与人类附近的动物做试验。由于试验动物和人类的生活环境不同，生物学特性存在许多相同和相异之处，研讨者在挑选动物用于试验之前，应充沛了解各种试验动物的生物学特性。通过试验动物与人类之间特性方面的比较，做出恰当的挑选。试验动物特色他们是胚胎学、病理学、解剖学、生理学、免疫学、牙科学和放射医学研讨的抱负动物；我国南边和印度出产的猕猴有许多特性与人类似，可用于细菌、病毒和寄生虫病的研讨。例如脊髓灰质炎、麻疹、疱疹病毒感染、弓形虫病、阿米巴脑膜炎、南美锥虫病、间日疟和恶性疟，以及自发性类风湿因子，奴卡氏菌病、病毒性肝炎等，对痢疾杆菌和结核分枝杆菌也较敏感。小鼠的生殖生理十分近似于人，月经周期也是28天，可用于生殖生理、计划生育及避孕药研讨。但实践中，非人灵长类动物属稀有动物，来历很少，又需特殊养殖，挑选有很大困难。另一方面，也并非只有非人灵长类动物与人具有类似性。许多哺乳类试验动物在某些功用、代谢、结构及疾病特色方面也与人类近似。可从如下几方面将不同试验动物与人进行比较，以便充沛利用其类似之处为科研服务。
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细胞培养中血清的重要功能
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
作为各类种属的高质量血清供应商,一般客户咨询血清购买时,我们都会推荐胎牛血清。而我公司热销的血清产品中莫过于胎牛血清了,那么为何胎牛血清在细胞培养实验中如此受宠呢？据分析,主要原因有这五个方面： 1. 提供结合蛋白：作用是携带重要地低分子量物质,在细胞代谢过程中起重要作用 2. 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤 3. 提供基本营养物质：氨基酸 维生等是细胞生长必须的物质 4. 提供激素和各种生长因子 5. 对培养中的细胞起到某些保护作用 针对第五个原因,我们来重点谈谈。有一些细胞,如内皮细胞 骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用，这种作用是偶然发现的,现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。上海恒远公司技术员分析,这是因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代.血清蛋白形成了的粘度可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用，还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用。
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ELISA试剂盒加样问题及解决方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
在酶联免疫实验操作中，加样是*的一项步骤，这一步骤在整个实验中都有着很大的影响。近日，我司技术针对这一问题作出分析整理；酶联免疫加样步骤问题应如何解决处理： 一、加样问题的可能原因 1.血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。 二、解决方法 1.标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2.加样后及时放入孵箱。 3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4.如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5.标本较多时，请分批操作。 最后，上海恒远建议您：在整个操作过程中必须保证酶标板不接触次氯酸，实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。我司酶联免疫试剂盒质量保证，种属齐全，各种指标试剂盒均有现货，可提供全程技术指导，如有相关实验技术疑问，恒远技术员将在较快时间内给出问题解决方案。
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血清在细胞培养中的鉴别方法及作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
血清在细胞培养中的鉴别方法及作用您知道吗？今日，上海恒远就为您详情解说：一、鉴别方法：血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。二、主要作用：●提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。●提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。●提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。●提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。●对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。 上海德尔塔生物科技有限公司具有完善的实验技术开发平台，成熟的抗原、抗体研发系统，熟练掌握各种酶联技
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如何增加PCR特异性
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
1、引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点： 1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。 2.选择GC含量为40％到60％或GC含量映像模板GC含量的引物。 3.设计5'端和中间区为G或C的引物。这会增加引物的稳定性和引物同目的序列杂交的稳定性。 4.避免引物对3'末端存在互补序列，这会形成引物二聚体，抑制扩增。 5.避免3'末端富含GC。设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。 6.避免3'末端的错误配对。3'端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸。 7.避免存在可能会产生内部二级结构的序列，这会破坏引物退火稳定性。 目的序列上并不存在的附加序列，如限制位点和启动子序列，可以加入到引物5'端而不影响特异性。当计算引物Tm值时并不包括这些序列，但是应该对其进行互补性和内部二级结构的检测。 有时候，对于引物设计仅了解有限的序列信息。比如，如果仅知道氨基酸序列，可以设计兼并引物。兼并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少兼并性。次黄嘌呤可以同所有的碱基配对，降低引物的退火温度。不要在引物的3'端使用兼并碱基，因为3'端最后3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR。使用较高的引物浓度（1μM到3μM），因为许多兼并混合物中的引物不是特异性针对目的模板。 2、引物退火温度 引物的另一个重要参数是熔解温度（Tm）。这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。Tm对于设定PCR退火温度
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科研干货：实验室中的仪器防热方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
我公司所售的产品中是用于科研的，我们不会怎么样的去夸赞我们的产品有多好多好，那样太假太做作。我们公司是非常遵守原则的，我们可以保证我的产品质量！我们可以保证我们的价格合理！这些就够了，而于技术部的服务于是完善的，我们也非常感谢朋友们长期以来对我公司的支持！ 我公司开展了促销活动，想了解的朋友们。在这三月尾际，上海研域为您整理：实验室中的仪器防热方法。 ▲ 地理位置 实验室在选型仪器的时候，根据仪表的类别用途及拟安装地理位置，提出该仪表的保温防热需求，再提交与厂家来处理。若从选型上解决则性价比相当大不合算。 ▲ 伴热措施 1、蒸汽伴热措施即使用管蒸汽暖气保温。夏季保温送汽之前要检查一下蒸汽保温管路是否畅通或堵塞。 2、电加热带措施：电伴热保温技术是一种新型的由电能直接转化为热能的供暖技术。加装保温电缆，将伴热带，缠绕在仪表上，或粘在仪表柜内部(但要注意所用伴热带的长度，要经济适度) ▲ 维护措施 1、安装措施合理选择安装地点：干燥、无雨雪滴漏的地方。 2、点检措施有条件时由专人每日对保温材料的是否破损、蒸汽管路的是否堵塞进行技术确认与技术处置。 3、报警措施有条件的可加装蒸汽泄露或断电状态的声光报警小装置，以方便保温防热措施隐患的发现与及时整治。 4、巡检措施由区域仪表维护责任人按预定巡检路线定时巡检。巡检中要检查保温管线阀门是否正常、保温箱是否正常、疏水装置是否正常、保温材料包装是否完好、电伴热供电元器件是否正常等。 以上就是实验室中的仪器防热方法啦，老师朋友们要注意了哦！为实验室展开防热措施吧。
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MicroCT 骨组织扫描服务（Scan 1276 新仪器上线啦）
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
MicroCT扫描检测服务 MicroCT又称微型CT或显微CT，是一种新型的采用X线成像原理进行超高分辨率三维成像技术，可以在不破坏样品的情况下，对骨骼、牙和各种生物材料进行超高分辨率X线成像，获得高精度三维图像，并进行结构、密度和力学的定量分析，是研究硬组织材料的强大工具。 一、实验仪器 型号：比利时Bruker SkyScan 1276。 特点：SKYSCAN 1276 是一款高性能、独立、快速的台式Micro-CT扫描仪，具有连续可变的放大率，用于扫描小型实验室动物（小鼠、大鼠等）和生物样品。SKYSCAN 1276 具有较高的高分辨率、大图像尺寸、圆形和螺旋形（螺旋）扫描和重低剂量成像的组合。可变的X 射线能量与一系列滤片结合，确保了无论是对肺组织还是对有金属植入物的骨骼等各种研究应用，都能获取高清图像。 分辨率：2.8-81.8μm像素大小。 二、应用领域 1.骨组织研究 用于骨质疏松和关节炎动物模型潜伏期的骨结构和密度改变的研究。MicroCT是目前研究骨立体结构、容量和微结构细微改变的优选方法。 2.口腔医学。 使用MicroCT可以详细了解牙根管的三维形态，测量根管的高度、体积、截面积、管壁厚度等。 3.新药开发 研究新的骨质疏松药物及疗效评价。MicroCT已经成为一种重要的临床前检测技术。 三、服务内容： 1.骨组织样本扫描。 2.提供2D图、3D图和相关参数的分析数据(骨密度BMD 单独收费)。 3.提供扫描的全部原始数据集（数据比较大 百度云网盘分享客户。） 二、样本要求 1.组织外形尺寸：直径小于8cm，长度小于30cm。 2.新鲜组织或4%多聚甲醛固定的组织，寄送至公司。 3.骨密度(BMD)检测请保证样本尽量新鲜，骨组织处于闭合状态，没有折损，断裂。 注意事项： 1.骨组织样本，请尽量剔除周围的与研究无关的物质。 2.骨密度(BMD)检测，单独收费，请保证骨组织处于闭合状态，无折损和断裂。 3.告诉我们您的实验需求，需要扫描的部位。 4.提供相关文献，可参照文献出相关的结果图和数据。 5.特殊组织
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生物学重复到底设定多少个合适
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
我打算做一个RNA-seq项目，研究一株细菌在两个环境条件下的表达差异。现在，我打算确定生物学重复的个数，以便可以得到统计学上有意义的结果。我打算每个环境的样本设置两个生物学重复，而不打算测更多重复。请问，两个重复的设置是否合理？ 1.如果是我的话，我会选择设置三个生物学重复。要知道两个生物学重复意味着双倍的工作量但没有双倍的效果。如果做两个生物学重复，你会引入无法校正的噪音。如果两个重复结果一样，那能说明问题，但如果不一样，你就解释不了了。如果样品制备不是非常难，经费不是非常有限，我建议还是设置3个生物学重复吧。 2.这是个有意思的问题，从统计学的角度来说 排除生物学意义，从统计学的角度来说，不同的统计方法，对生物学重复的个数的要求并不相同。 如果使用T检验，你应该设置尽可能多的生物学重复，建议至少3个重复。当然T检验的方法，在RNA-seq的差异分析里不是很合理。因为RNA-seq的误差分布，并不符合正态分布。 如果你选择的统计模型是Fisher 精Que检验类的统计模型（包括超几何分布或泊松分布），即使没有生物重复也是可以进行统计的。当然，没有生物学重复只是在统计学上可行，但实际上无算估算生物差异或实验误差带来的系统误差。所以，这样的策略现在发表论文的话，可能会被质疑的。 如果你选择一些软件，例如Deseq这样的软件，一般也要求2个以上的生物学重复。 这个是非常有意思的问题，我提供的建议非常有限，期望其他人有更好的回答。 “虎式坦克”的回答不错。关于生物学重复与统计的关系，我补充一下。在我们的测序样本中，每一个基因表达量的方差包含两个方面的内容： 1）处理方差，就是我们的实验处理导致的差异，这些差异当然就是我们关注的； 2）误差方差，就是与我们实验处理无关的差异，例如，生物个体间的差异，实验技术不稳定导致的偏差等。误差方差并非我们关注的，但这些差异会引入假阳性。 所以生物学重复的价值在于帮助我们估算误差方差的大小，从而
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原代细胞的复苏步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
细胞一般储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。 细胞复苏就是要把原本冷冻保存(冻存)着的细胞恢复到一般的生长状态，今天我们来看看原代细胞的复苏步骤。 一、检查 收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形，若有请立即处理告诉寄方。细胞株请尽速开始培养，或立即冷冻保存(置于–70 °C，隔夜后，移到liq N2)。 二、冷冻细胞解冻 1、依据细胞株说明书规定的基础培养基种类、血清种类和其它规定之成份和比例，制备培养基。 绝大多数之细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同时，务必以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行所需之实验。 2、 FBS (fetal bovine serum, 胎牛血清), CS (calfserum, 小牛血清)和HS (horseserum, 马血清)，对细胞而言差异较大，请务必依据细胞株资料规定的血清种类培养细胞。 3、将培养基置于37 °C 水槽中回温，回温后喷以70 % 酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。取出冷冻管，立即放入37 °C 水槽中快速解冻，水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿，否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后，以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部，移入无菌操作台内。 4、依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基，混合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。 5、对绝大多数细胞而言，1 % 以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。 对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO 者，则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中，离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均
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原代细胞的取材和分类方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 原代细胞培养的步骤一般是：取材→分离→培养和维持，今天我们重点介绍原代细胞的取材和分离方法。 一、取材 人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。 取材的基本要求： ① 取材要注意新鲜和保鲜 ② 应严格无菌 ③ 防止机械损伤 ④ 去除无用组织和避免干燥 ⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等 ⑥ 作好记录 各类组织的取材技术： ① 皮肤和粘膜的取材 主要取自于手术过程中的皮片，方法似外科取断层皮片手术操作，但面积一般2~4平方厘米。 ② 内脏和实体瘤的取材 内脏除消化道外基本是无菌的，但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位，实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域，要避开破溃、坏死液化部分，以防污染，尽量去除混杂的结缔组织。 ③ 血液细胞的取材 血细胞、淋巴细胞的取材，一般多抽取静脉外周血，或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞，取材时应注意抗凝。 ④ 骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材 严格无菌，注意抗凝，还要尽快分离培养，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。 ⑤ 动物组织取材 I 鼠胚组织取材 首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物，然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中，5分钟后(注意时间不能太长，以避免酒精从口或其他通道进入体内，影响组织活力)，取出动物，在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢，切开皮肤，用无菌操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤，用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾，把动物反包，暴露躯干，然后再固定，更换无菌解
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原代细胞的培养方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
原代细胞接近和最能反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。 原代细胞的培养，也叫初代培养，是从供体取得组织细胞在体外进行的*培养，是建立细胞系的首步，是一项基本技术。 原代细胞的培养方法一般有以下4种： ① 组织块培养法 组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。 ② 消化培养法 ③ 悬浮细胞培养法 对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。 ④器官培养 器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。 原代细胞的培养条件： 一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养 1、细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性； 2、细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5×108细胞/L； 3、培养基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培养； 4、 胎牛血清浓度为10%-80%； 5、应在37℃5% CO2的培养箱中培养； 6、在起始的2天中尽量减少振荡，以防止刚贴壁的细胞发生脱落，漂浮； 7、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状，应将原代细胞换液； 8、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时，应将细胞悬液经低速离心后换液。 二、悬浮细胞培养 1、原代培养时要尽量去除红细胞； 2、短期培养，可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行； 3、细胞浓度可在5-8×109/L范围内，进行分瓶试验； 4、长期培养
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关于细胞冻存你了解吗？
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
实验简介： 细胞培养技术创建于1907年，历经一个世纪磨练与升华，现已成为自然科学领域不可缺少的研究方法之一。小伙伴们要想在如今细胞培养技术广泛渗透的科学研究领域搞好科研，最基础的细胞株的冷冻保存和解冻复苏技术自然不能忽视。 细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。 实验前准备： 1.材料准备： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降温机 2.冷冻方法理论准备: (1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-8O℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-8O℃冰箱中。 (2）程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至（-8o℃以下) -120℃，再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 实验步骤： 细胞冻存步骤： 1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍; 2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化; 3.待消化到位后加入适量血清或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min; 4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL，转移到冻存管中; 5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。 6.冻存细胞后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存， 为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存 注意事项 1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态，约为80~90%致密度。 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 2.细胞在液氮中可长期冻存无限时间，而不会影响细胞活力﹔在-70度可保存数月。注意冷冻保护剂之品质
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