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原代细胞注意事项及技术步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
原代细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们，信息确认后我们为您再免费寄送一次。 4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。 5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。 6. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 原代细胞操作步骤： 1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。 2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
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CRISPR/Cas9基因敲除和RNAi干扰表达，哪种调控方式更好？
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
刚进实验室的小萌新，总有一种天下风云出我辈的风范，两耳不闻窗外事，一心只想发CNS。 想要实验快速上手，首先要掌握的就是研究策略。 在基因功能研究中常用两种基础策略，功能减弱或缺失，功能增强或获得。 实现基因功能减弱，可以采用RNA干扰（RNAi）技术下调目的基因表达。在RNAi使用中，siRNA或shRNA的设计是关键。长度约为21bp的siRNA与蛋白形成RISC复合物，结合目的基因的mRNA，从而使其降解，达到降低基因表达水平的目的（注意RNAi是作用于mRNA水平）。但需要引起注意的是，如果目的基因在细胞中本体表达就较低的情况下（一般ΔCT＞16），就不适合用RNAi了。 随着CRISPR/Cas9技术的成熟，越来越多的科研人员采用基因敲除的方式实现基因彻底缺失的目的。与RNAi不同的是，基因敲除理论上可作用于基因组上所有的基因片段，并使目的基因的蛋白完全不表达，从而更有利于观察细胞表型的变化，简单来说，就是更容易做出实验结果。 CRISPR/Cas9基因敲除和RNAi干扰表达，哪种调控方式更好？ 没有更好，只有最适合！ 1. 两种方法没有绝对的好坏，通常RNAi技术由于操作简便，使用广泛，但CRISPR/Cas9可使基因功能丧失更彻底，因此近些年受到广泛追捧。 2. 某些情况下不适合用RNAi，例如需要改变无法转录的DNA区域，只能用基因敲除。 3. 某些特殊情况，敲除该基因会导致细胞生长缓慢，停滞甚至死亡，这样获得基因敲除细胞株比较困难，因此就需要选择通过RNA干扰的手段实现功能减弱。 对于基因功能增强或获得来说，常用的就是过表达和基因敲入了。 过表达和基因敲入，如何选择？ 上调表达使得功能增强通常采用的方法是将目的基因的编码区（CDS）构建到载体中，导入细胞内使目的基因的表达量显著增加。但基因在细胞内本体表达已经很高时，此时再进行过表达的调控，细胞的表型很可能不会发生变化，此外，外源高表达对细胞也是个刺激压力，会产生假阳性和假阴性的结果。 而对于功能
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1,5-AG ELISA试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
1,5-AG ELISA试剂盒说明书 本产品是即用型PCR试剂盒的改良产品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等所有PCR 所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR 反应，具有广泛的用途。 1. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR 实验。 2. 快捷，操作步骤已经限度地简化，能减少污染，降低实验误差。 3. 本产品A 型含电泳染料，PCR 反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。 4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能扩增各种常见的DNA 样品。 5. 产物可直接用于T 载体克隆，不需要额外的加A 反应。 使用及效果：将本产品15 μL 与用户自备的模板，引物和水共15 μL 混合后，直接进行PCR反应（PCR 参数由用户自己确定），反应结束后直接取10 μL 电泳检查扩增结果。 技术特点： 1、准确可靠，临床双盲对照试验＞1000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。 2、高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。 3、快速：整个检测流程只需3小时。 4、简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。 5、防污染 6、高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。 组成及试剂配制: 1、 酶标板：一块（96孔） 2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3、 样品稀释液：1×20ml。 4、 检测稀释
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浅述生物学中的机器学习算法——随机森林篇
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
01.随机森林概述 随机森林=决策树+bagging，随机森林是一种比较新的机器学习算法，是集成算法的一种。上世纪八十年代Breiman等人发明分类树算法，通过反复二分数据进行分类或回归，计算量大大降低，2001年Breiman把分类树组合成随机森林，即在样本和特征的使用上进行随机化，生成很多分类树，再汇总分类树结果。随机森林在运算量没有显著提高前提下提高了预测精度，随机森林对多元共线性不敏感，结果对缺失数据和非平衡数据比较稳健，可以很好地预测多达几千个解释变量的作用，被誉为当前**算法之一。 随机森林是集成分类算法的一种，随机森林是用随机的方式建立一个森林，森林由很多的决策树组成，且每一棵决策树之间是没有关联的。得到随机森林模型后，当对新的样本进行预测时，随机森林中的每一棵决策树分别进行判断，bagging集成策略比较简单，对于分类问题通常采用简单的投票法，得到最多票数的类别为最终模型输出。对于回归问题通常使用平均法，T个弱分类器得到的回归结果进行算术平均即为最终模型输出。 02.相关基础知识 1. 集成学习概述集成学习集合多个机器学习算法来完成学习任务。即“博采众长”，集成学习可用于分类问题集成、回归问题集成、特征选取集成、异常点检测集成等。从下图可以看出集成学习通过训练集训练出若干个个体学习器，通过一定的结合策略，可以最终形成一个强学习器，达到博采众长的目的。 据此可以看出，集成学习要解决的主要问题有两个，第一如何得到个体学习器；第二如何选择一种结合策略。 2. 集成学习中的个体学习器得到若干个个体学习器，有两种方式。第一种是所有的个体学习器都是同一类的，或者说是同质的，即所有的个体学习器都是同一种机器学习算法，比如都是决策树或者神经网络个体学习器。第二种是所有的个体学习器不全是同一类学习器，如里面包含支持向量机、逻辑回归、朴素贝叶斯等个体学习器，再通过某种策略来确定最终的分类强学习器。目前来看，同质个体学习器应用广泛。一
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Cell Metabolism 综述解析 | 肝星状细胞的可塑性代谢调节能力
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
肝星状细胞（HSCs）是一种非实质肝周细胞，因其是肝损伤的原发性纤维化细胞类型备受关注。HSCs被认为是一种可塑的细胞类型，可以调节肝脏生长、免疫和炎症，以及能量和营养稳态，这些功能依赖于代谢的多样性和能量消耗的严格调控。然而HSCs通过其可塑性调节多种生理和病理反应的机制仍不清楚。HSCs是一个被忽视的决定免疫代谢的因素，在支持肝功能和免疫应答损失中，细胞从静止状态激活或转分化为增殖的、运动的肌成纤维细胞，分泌细胞外基质，需要快速适应以满足更高的能量需求，这些适应包括中心碳代谢的编程、线粒体数量和活性的增强、内质网应激，以及通过储存在细胞质液滴中的视黄酯自噬依赖性水解而释放游离脂肪酸。本文揭示了HSCs的代谢调节如何在健康和疾病中发挥其功能。 背景 星状细胞（以前称为脂肪细胞、脂肪储存细胞、窦周细胞或Ito细胞）来源于隔膜横隔间充质，间充质来源的间皮和间皮细胞从胚胎肝脏表面向内迁移，产生HSCs和其他血管周围间充质细胞。正常的肝脏中，HSCs在核周液滴中储存维生素A作为视黄酯，这些细胞是人体维甲酸储存的主要仓库。 单细胞转录方法在表征HSCs方面有非常广泛的应用。在肝损伤期间，HSCs转分化，或“激活”成增殖的、纤维化的肌成纤维细胞(MFBs)，这些细胞获得一系列共同维持损伤和纤维化的特征（Figure 1），由于肝损伤通过凋亡或逆转为“失活”表型来减少HSC衍生的MFBs数量。这些失活细胞具有独特的表观遗传特征，并且在未来HSCs再损伤时更容易重新激活。 Figure 1. Features of HSC Activation and Resolution 慢性肝损伤可促进HSCs的持续激活，导致细胞外基质（ECM）蛋白的积累，从而破坏肝脏的结构及其功能。HSC的激活是由许多信号触发的，这些信号是细胞损伤的标志，包括浸润免疫细胞产生的促炎细胞因子、肝细胞凋亡小体、内皮细胞介导的生长因子激活和活性氧负担增加。细胞对损伤的反应通过一系列旁分泌和自分泌环增强，包括转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生
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技术介绍之中药非靶标代谢组学技术路线及研究意义
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
中药是中华民族的瑰宝，是数千年临床经验的积淀与科学技术的结晶。中药产业是我国医药卫生领域的重要产业，对提高我国广大人民的健康水平做出了重大贡献，在国际上的地位也在不断提高。 代谢组学强调把人或动物作为一个整体去研究，同时在方法学上具有无创伤、动态、接近生理条件等研究特点，与中药治病整体性、动态性原则极为相似。 运用代谢组学研究中药，对认识中药的药效作用、安全性评价、正确用药等方面都有重要的科学意义、社会效益和经济效益。代谢组学在中医证候模型复制、方剂作用机制研究、药物靶点的发现、毒理学等中药现代化研究中的重要性越来越明显，开展中药代谢组学研究是中医药现代化的重要途径。 1.技术路线 2.技术优势 物质鉴定全面：5万+中药理论代谢物数据库 注释信息全面：超90%初级次级代谢物分类；超80%中英文名注释 物质鉴定准确：3000+中药标准数据库 全面的数据分析：网络药理学、中药指纹图谱分析助力您的科学研究 3.技术参数 样本要求 药用植物、动物组织 鲜 样 ≥1 g， 干 样 ≥0.5 g 汤药 冻干粉≥0.5 g，药液≥2 mL 药丸≥1g 检测平台 UHPLC-Thermo Fisher QE HFX 或UHPLC-Thermo Fisher QE focus 4.应用方向 中药鉴别和质量评价； 药用植物资源保护、品种选育及抗逆研究； 中药药效物质基础及药理作用研究； 中药功能活性成分代谢通路及代谢工程研究； 结合中药基因组、转录组学，定位功能基因。 5.个性化分析 网络药理学从系统生物学和生物网络平衡的角度阐释疾病的发生发展过程、从改善或恢复生物网络平衡的整体观角度认识药物与机体的相互作用并指导新药发现。其整体性、系统性的特点与中医药整体观、辩证论治原则一致，目前已被广泛应用于中药研究。 疾病靶点GO富集分析图 疾病靶点KEGG富集分析图 疾病靶点KEGG富集分析图 指纹图谱相似度是用来比较多张图谱的相似程度，具体运用在中药指纹图谱中来对不同产地的中
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免疫缺陷鼠之裸鼠
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
疾病动物模型是研究人类疾病发生发展机制、药物筛选及疗效评价必不可少的工具，好的疾病动物模型可以加快新药的研发速度。你还在为不知道选择什么小鼠模型发愁吗？你还在为造模发愁吗？赛业生物新栏目《每周一鼠》，每周更新，为大家讲解一个疾病小鼠模型的故事，希望对大家了解不同的疾病小鼠模型有所帮助。 今天和大家见面的小鼠有点特别。它们“没有毛发”、没有胸腺、皮肤褶皱，外表略显沧桑——这种小鼠被人们形象地称为裸鼠（nude mice）。实际上它并不是彻底的秃子，只是发量很少。那么好好的小鼠怎么就秃了呢？秃了的小鼠变强了吗？变“强”的小鼠如何成为抗癌战士？接下来，就让我们一起了解裸鼠变秃变“强”的血泪史。 好好的小鼠怎么就秃了呢？ 外观上看，裸鼠似乎是无毛的。但实际上它在出生时就包含正常的毛囊，只是大部分毛干在漏斗部盘绕并且无法穿透表皮，因此就产生了肉眼可见的秃。换句话说就是，裸鼠并不是彻底的秃子，如果人家长出稀疏的毛发也是正常现象。 究竟是什么阻拦了毛干穿透表皮，使裸鼠变秃呢？这是由位于11号染色体上的隐性基因Foxn1（forkhead box N1）突变（这种突变被称为Foxn1nu）导致编码的蛋白提前终止而形成截短的无功能蛋白所致。杂合突变小鼠看上去和野生型小鼠一样，毛茸茸的（图1）。 图1. 纯合和杂合突变小鼠的比较。（a）纯和突变雌性裸鼠（nu/nu）；（b）杂和突变雌性裸鼠（nu/+）（均在7周龄左右）。[1] 秃了的小鼠变强了吗？ 琦玉老师说过：“我变秃了，也变强了！”但对于裸鼠来说，让它变秃的基因突变，反而使它变弱了： 裸鼠：终究是我一只鼠扛下了所有，我变秃了，还变弱了！但是对于你们来说，我变强了，因为我更适合移植肿瘤了。图片来源：赛业生物。 T淋巴细胞免疫缺陷 特定的T淋巴细胞介导的免疫负责破坏受感染的细胞（例如，被病毒感染）或恶性细胞，还负责宿主与移植物的反应（所谓的HVGR），这是移植物（异源或异源）被宿主排斥的主要原因。裸
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单细胞测序在临床肿瘤研究中的进展:鉴定循环抗肿瘤CD8 T细胞及功能
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
肿瘤免疫**是当前癌症研究领域的热点之一，而对肿瘤抗原特异性T细胞的全面分析一直是该领域中一项具有挑战性的工作。本研究中，作者通过单细胞转录组+TCR测序技术对肿瘤小鼠和黑色素瘤患者的血液和肿瘤组织进行分析，利用TCR序列作为“分子条形码”的方法为鉴定循环抗肿瘤 CD8+ T 细胞提供新的思路。 Single-cell analyses identify circulating anti-tumor CD8 T cells and markers for their enrichment 发表时间：2021.3.2（published online） 发表期刊：Journal of Experimental Medicine ; IF=11.743 实验平台：10x Genomics Chromium（5’表达文库+VDJ富集文库）、CITE-seq 样本类型和数量：５只皮下结肠腺癌模型小鼠和4位黑色素瘤患者，血液和肿瘤 DOI: 10.1084/jem.20200920 研究背景 肿瘤免疫**彻底改变了固体和液体肿瘤的**方式。新 CD8+ T 细胞从循环系统转移到肿瘤组织，即“克隆替代”，与免疫疗法更好的反应相关。但是，目前需要改进方法来鉴定针对肿瘤的T细胞，以将分析集中于少数具有预后和功能相关性的循环T细胞。 本研究中，作者使用单细胞转录组测序技术来跟踪血液中与肿瘤相关的T细胞反应。使用TCR作为“分子条形码”，使用成对的肿瘤和血液样本来识别和表征肿瘤匹配(TM)血液CD8+ T细胞，这些细胞与小鼠MC38肿瘤或患者黑色素瘤中的CD8+ T细胞具有相同的TCR序列。对检查点阻断无反应患者的两个纵向样本中，TM细胞转变并出现更强的功能障碍信号。研究者鉴定了富集TM细胞的候选表面标记，并在小鼠中使用CITE-seq验证了三种标记。重要的是，与单一标记相比，这些标记基因的联合在鉴定TM细胞上实现了更好的性能。 研究内容 1、用MC38肿瘤中匹配的CD8+ T细胞的TCR表征血液中的CD8+ T细胞 由于TCR编码抗原特异性，研究者假设TCR序列可用于评估血液中哪些克隆与抗肿瘤反应相关。为了测试这一点，从小鼠配对的血液和MC38肿瘤中分离出的CD8+ T细胞进行了scRNAseq和TCR测序。通过对鉴定到的细胞分析
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Green Button Go™和SPT全自动化整合方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
Green Button Go™和SPT全自动化整合方案 近年来，越来越多的人意识到在人力成本日益增高的今天，自动化已经成为一种趋势，它不仅仅将科学家从冗余繁琐的低价值劳动中释放出来；同时，以更高的精确度、可重复性和通量完成手工操作不可能实现的任务。于是各种移液自动化设备孕育而生，新产品和新技术层出不穷。来自SPT Labtech的明星产品mosquito和dragonfly，凭借其小体积的精确度和高度的液体兼容性，在业内独树一帜，被广泛应用于蛋白结晶、药物研发、基因组学和合成生物学领域。 然而，精益求精的科研人员越来越不满足单一的自动化流程，而是瞄准更多目标的自动化联动及其相互之间的整合，甚至以无人值守为最终目标，其中Biosero公司及其整合软件则是其中出色的践行者。 未来自动化整合 Biosero公司是美国著名的提供实验室自动化流程整合解决方案的供应商，总部位于圣地亚哥。其出色的整合软件Green Button Go™, 拥有最广泛的外围设备驱动程序集，为科研和工业客户提供从中小型到大型，从单一到多系统的整合方案。 近期，Biosero和SPT Labtech 紧密合作，整合了mosquito、dragonfly和其他相关自动化设备，实现了新冠病毒检测流程中，从病毒样品准备→RNA获取→cDNA合成→PCR扩增→建库的全自动化和无人值守的完全整合流程。 See our instruments in action in this automated Pre-PCR workcell in partnershipwith Biosero, Inc. 戳下方视频了解更多
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想在组织中有所发现，却还没用空间测序技术？Why not？
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
了解细胞和器官的组织结构，以及这一构成如何影响功能，是生命科学研究的一项重要内容。“单细胞转录组技术”被《Science》评为2018年年度突破技术；“单细胞多组学技术”被《Nature Methods》评为2019年年度技术方法；但是，单细胞数据缺失了空间位置信息，依然是科学研究的遗憾。终于，在刚刚过去的2020年，空间转录组学被《Nature Methods》评选为年度技术，为生物学家们开辟了新的科研角度。 通过单细胞RNA测序（scRNA-seq），研究人员根据从组织中分离出来的细胞的基因表达信息，识别出不同的细胞类型。现在，通过基于空间的转录组检测，科学家可以在保留细胞在组织中分布信息的基础上，获取转录组数据。 正如《Nature Methods》的文章中说到：RNA测序就如同制作一杯冰沙，我们需要把样本研磨成匀浆，最终得到的是组织细胞中平均的mRNA 基因表达情况。而单细胞转录组测序，就像是一盘水果沙拉，我们可以清楚的看到里面的每一个细胞的基因表达情况。而空间转录组技术，就像一个水果馅饼，我们可以看到每一个水果在空间上的位置信息。 10x Genomics的空间转录组技术，是现有最主要的商用空间检测技术，它将引领未来的发展方向。10x Genomics公司于2018年收购了瑞典的patial Transcriptomics公司，从此开始了空间转录组技术之旅。 Spatial Transcriptomics公司的空间转录组技术，结合显微成像技术和RNA测序技术，能够从一片完整的冰冻组织切片中，获取切片上不同位置细胞中的完整转录组数据。最开始，该技术的分辨率为100微米，也就是在一个spot内有几十个细胞。后来10x Genomics将该技术进行了优化，目前一个spot的直径只有55微米，根据细胞类型的不同，一个spot内可能有1-10个细胞。 空间信息对于细胞生物学，发育生物学，神经生物学，肿瘤生物学等领域具有至关重要的作用，因为特定的细胞类型及其特定组织与生物学活性密切相关。因此，诸如人类细胞图谱和BICCN（Brain Initiative Cell Census Network）
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厌氧菌自动化分选技术探秘
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
厌氧菌的分选与鉴定是对氧敏感度高的细菌进行分离与鉴别的试验，厌氧微生物在自然界分布广泛，种类繁多，其生理作用日益受到人们的重视。专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，他们的分离、培养及活菌计数的关键是提供低氧和无氧的培养环境。这其中肠道菌群、益生菌、深海、极地、土壤等厌氧菌的分选研究越来越受到关注。 厌氧分选技术早在上世纪就开展了广泛的研究，研究员最早在产甲烷菌上进行厌氧分选实验，这类细菌常见于沼泽、池溏污泥中，在食草动物的盲肠、瘤胃中也有大量的产甲烷细菌，常随粪便排出。 1899年，当时俄国的微生物学家B·L·Omeliansku将厌氧分解纤维素的微生物分为两类：一类是产氢的细菌；另一类是产甲烷细菌。 1901年Sohngen对甲烷菌的特征以及对物质的转化作用做了详细的研究。 1936年Baber对奥氏甲烷菌又做了分纯研究。但由于厌氧分离甲烷菌技术尚不完备，这些研究没有取得很好的进展。 直到1950年Hungate首创了严格的厌氧分选技术-亨格特技术，才是甲烷菌的研究取得迅速发展。此后该技术又经Balch 等( 1979) 改进而日趋完善, 而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。 现在，厌氧分离、提取、培养技术取得了更大的进步，磐麦科技和英国厌氧设备制造商ELECTROTEK、微生物自动化机器人设备商SINGER达成一项合作，将会整合其两大制造商的核心技术，将菌落挑取、分离、筛选等一系列自动操作在厌氧手套箱中实现，期间的技术难题，也在逐步攻克，这也将是全自动厌氧分选技术的重大变革。 ELECTROTEK作为全球首屈一指的微生物厌氧设备制作商，有着将近50年的制造经验，其现代化工厂可支持客户根据自己的实验需求来定制特殊机型，产品广泛应用在全球各大科研院校、政府检测机构及食品、饮料、生物、制药、化工等行业。 成立于1934年的SINGER公司，拥有者具有尖端科研能力的现代化工厂，长期从事研发和制造机电一体化的工作站和实验室自动化机器人
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利用兔关节软骨细胞进行细胞培养的优点
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
产品名称：兔关节软骨细胞 组织来源：关节软骨组织 产品规格：5×0^5cells/T25细胞培养瓶 兔关节软骨细胞简介： 兔关节软骨细胞分离自关节软骨组织；关节软骨属于透明软骨，表面光滑、呈淡蓝色、有光泽，它是由一种特殊的叫做致密结缔组织的胶原纤维构成的基本框架，这种框架呈半环形，类似拱形球门，其底端紧紧附着在下面的骨质上，上端朝向关节面，这种结构使关节软骨紧紧与骨结合起来而不会掉下来，同时当受到压力时候，还可以有少许的变形，起到缓冲压力的作用。在这些纤维之间，散在分布着软骨细胞，软骨细胞由浅层向深层逐渐由扁平样至椭圆或圆形的细胞组成，这些软骨细胞维持关节软骨的正常代谢。关节软骨没有神经支配，也没有血管，其营养成分必须从关节液中取得，而其代谢废物也必须排至关节液中，关节软骨的这种营养代谢必须通过关节运动，使关节软骨不断的受到压力刺激才行，所以关节运动对于维持关节软骨的正常结构起重要的作用。关节软骨细胞位于关节软骨陷窝内。幼稚的关节软骨细胞位于关节软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形，长轴与关节软骨表面平行，越向深层的关节软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形、染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的关节软骨细胞多2-8个成群分布于关节软骨陷窝内，这些关节软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，关节软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，关节软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的关节软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。 兔关节软骨细胞兔关节软骨细胞图片培养： .取出小鼠后沥干酒精，放入超净台内，固定在泡沫板上。 2.用镊子提起皮肤，用解剖剪剪开皮肤一个横切口，将皮肤向上撕开，然后剪开肌肉等，暴露出腹腔，在左侧找到脾脏，用
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微生物菌种的保存与分离方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
微生物菌种的保存方法： 1、低温存法：①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月；②液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。 2、脱水存法：①沙土保存法，能产孢子的细菌、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。③ 石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。 微生物菌种的分离方法： (1)施加选择性压力分离法：主要是利用不同种类的微生物其生长繁殖对环境和营养的要求不同,如温度、 pH 、渗透压、 氧气、碳源、氮源等,人为控制这些条件,使之利于某类或某种微生物生长,而不利于其他 种类微生物的生存, 以达到使目的菌种占优势. 而得以快速分离纯化的目的。 如可以控制培 养时的氧, 可将好氧微生物和厌氧微生物分开; 通过控制温度, 可将嗜热微生物和非嗜热微 生物分
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CRISPR-Cas9技术的详细介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
这是一篇针对实验室萌新写的关于CRISPR-Cas9技术的详细介绍，对于实验室老手也建议收藏转发给师弟师妹，这样省心省力，又能节省大量讲解时间，这不香么？ 原核生物的‘免疫系统’ 人体有着一套复杂且高效的免疫系统，时刻保护着我们免受病毒和细菌的攻击。但是，对于弱小又无助的原核细胞而言，它们也是急切需要被保护的。为此，经过几亿年的进化，细菌和大部分古细菌衍生出了CRISPR-Cas系统，用于保护它们免受外源DNA和噬菌体的侵染。到目前为止，科学家们发现50%的细菌和超过90%的古细菌均携带有CRISPR-Cas系统。CRISPR是一段高度重复的DNA序列，两端重复序列之间存在着各不相同的spacer序列，表达Cas蛋白家族的基因簇位于CRISPR位点的上游，其表达翻译的几种类型的Cas蛋白作为原核生物免疫应答的效应器发挥着重要作用。 当细菌受到噬菌体的侵染时，被释放到细菌细胞质中的噬菌体基因组的某段DNA序列被识别并整合到CRISPR的spacer区域，随后转录出相应的crRNA前体（pre-crRNA）。crRNA前体经过修饰和加工，生成向导RNA（guide-RNA）。由于gRNA中存在一段来源于噬菌体基因组的序列，因此gRNA可以通过碱基的互补配对原则识别噬菌体的基因组。同时存在于细胞质中的gRNA和Cas蛋白特异性结合，并靶向到噬菌体基因组参与DNA的切割与降解。 CRISPR-Cas9技术 简单来讲，CRISPR-Cas9是一种分子生物学技术，通过这种技术科研人员可以对细胞和生物体内的基因进行编辑。所谓的基因编辑就是通过某种生物手段和技术，对生物体内的遗传物质进行修改。 基于原核生物的获得性免疫系统研发出的CRISPR-Cas9技术只包含两种重要的成分，一种是行使DNA双链切割功能的Cas9蛋白，而另一种则是具有导向功能的sgRNA（single guide RNA）。当细胞内同时表达sgRNA和Cas9蛋白时，Cas9蛋白通过与sgRNA结合，靶向到目的DNA序列上发挥DNA双链切割的功能。DNA序列被切割产生断裂后，引发细胞内部的DNA修复机制（DNA repair）。真核细胞同
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Alport综合症致病基因之COL4A5
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
想调整研究方向，获得学术研究突破口？想获得论文选题思路，提高发文命中率？你需要了解学科发展态势和未来走向！赛业生物专栏《Gene of the Week》每周会根据热点研究领域介绍一个基因，详细为您介绍基因基本信息、研究概况和应用背景等，助您保持学术研究敏锐度，提高科学研究效率，期待您的持续关注哦。今天我们要讲的主角是Alport综合症致病基因之一COL4A5。 基因基本信息 COL4A5基因研究概况 COL4A5是编码IV型胶原蛋白的六个基因之一，这种蛋白胶原肽是细胞膜的重要基质之一。该基因位于X染色体上，长度超过20万个碱基对，属于相对较大的基因。同时，其外显子超过50个。该基因的突变有可能导致眼-耳-肾综合症，该疾病又被称为Alport综合症。 该疾病是一种遗传性胶原病，由于该基因位于X染色体上，因此遗传与性别有关。3种编码IV型胶原蛋白的基因发生改变都有可能造成该疾病的发生，它们分别是编码α3、α4和α5链的COL4A3、COL4A4和COL4A5。这些蛋白的突变会导致基底膜发生病变，其中肾脏受损最为明显，表现为尿血、蛋白尿和肾功能进行性下降；其次常伴有神经性听力下降和视觉异常，这是由于患者不同气管胶原结构异常所导致。这三种基因共同在人群中有1/10 000～1/5000的致病突变携带率。 图1. Alport综合症，信息来源：https://kidneyfailuretreatment.in/alport-syndrome/. 虽然COL4A3和COL4A4都会引起Aloport综合症，但是，由这两个基因突变引起的Aloport综合症比例只有20%，大部分Alport综合症都是由于COL4A5基因突变造成的。其中，涉及到外显子的突变中有接近一半是错义突变，另外有1/4是移码突变，此外还有少量的无义突变和剪切位点突变，其中无义突变和移码突变引起的病情最重，发病也一般较早。通过对该基因外显子突变与临床信息的关联来看，该基因外显子发生突变会有超过70%的致病概率，如果把一些大概率致病的突变也加入进来，则突变致病的概率为84%。 图2. COL4A5与Alport综合症。信息来
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