-
仓鼠ELISA检测试剂盒优势与注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
仓鼠ELISA检测试剂盒注意事项： 1. 仓鼠ELISA检测试剂盒品牌试剂盒使用前请保存在2-8℃。复溶后的标准品若未用完，请废弃。 2. 微量试剂运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请1000转/分离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。 3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象，微加热至40℃使结晶完全溶解后再配制洗涤液。 （加热温度不要超过50℃）使用时洗涤液应为室温。 4. 不同批号的试剂盒组份避免混用（洗涤液和反应终止液除外）。 5. 充分轻微混匀对反应结果尤为重要，zui好使用微量振荡器(使用zui低频率)，如无微量振荡器， 可在反应孵育前手工轻轻混匀。 6. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。 7. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用，严禁在不同的液体之间混用！否则将影响试验结果。 8. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时，请按国家生物试验室安全防护条列执行。 仓鼠ELISA检测试剂盒公司优势： 1. 仓鼠甲状腺结合球仓鼠ELISA检测试剂盒品牌立足于科研前沿，主营ELISA试剂盒、抗体或抗原、血清、培养基等等各种科研试剂，满足各大高校以及研究机构在生物领域的科研需求。 2.完善的实验技术开发平台，和成熟的试剂研发系统，并熟练掌握了各种酶联技术，产品具有较强的稳定性和较高的准确性。 3.面向高校、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、专注于生物技术研发的公司等单位的广大客户。 4.多年积累的营销经验，已形成一套相对完整的产销体系，可为客户提供周到的售前售后服务。
-
大鼠ELISA检测试剂盒操作方法双抗分类
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
大鼠ELISA检测试剂盒原理： 免疫测定技术的基础在于抗原抗体大鼠ELISA检测试剂盒之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。 大鼠ELISA检测试剂盒操作方法： 双抗体夹心法： 1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。 2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。 3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。 4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在小鼠Elisa试剂盒检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 间接法： 1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜； 2.次日洗涤3次； 3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤； 4.（同时做空白、阴性及阳性
-
电子显微镜样品制备详解
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
关注“徕卡显微系统”官方微信 > 徕卡学院 > 课程回顾，注册即可观看完整视频。 近年来，随着新能源及半导体行业的蓬勃发展，涌现出大量新型材料及产品，其复杂的结构和组成、特殊的物理和化学性质，对这些材料的电镜制样过程带来巨大的挑战。具体如下：a. 材料尺寸分布范围大，对加工方法的通用性带来巨大挑战；b. 加工范围大、精度高，要求设备能够定点、大范围加工；c. 多层结构、组成复杂，对样品加工造成较大难度；d. 材料对热量敏感、或者极易与空气中的水汽或氧气反应，对加工、运输环境要求严苛。 针对上述材料特点和电镜制样难点，徕卡显微系统推出三种加工策略和两种设备，以便能尽可能真实地展现出材料表面及体相结构。 1.离子束切割/抛光(徕卡EM TXP → 徕卡EM TIC 3X) 对于绝大部分常见样品，无论是块材、片材、薄膜、颗粒或者粉末(包埋后)，均可使用精研一体机(徕卡EM TXP)对其进行精准的定点切割、研磨和抛光，接近我们所感兴趣的位置(预留~50 μm)，再使用三离子束切割仪(徕卡EM TIC 3X)进行无应力切割，直接暴露出目标位置。或者也可以在机械抛光后，使用徕卡TIC 3X对其进行大范围离子束抛光，去除应力损伤层，暴露出干净平整的样品表面。 2.超薄切片(徕卡EM TXP → 徕卡EM UC7/EM FC7) 对于高分子材料、晶体和较软的金属材料，我们能够先使用修块机或徕卡TXP对其表面进行修整，再使用钻石刀切出规整的表面，随后就能够借助超薄切片技术，加工出100 nm以下的薄片，进行透射电镜的观察。同时，该策略也能逐层去除表面材料，暴露出内部结构、缺陷或者杂质，再通过扫描电镜、能谱等仪器，表征确定其形貌与成分。 3.离子减薄(徕卡EM TXP → EM RES102) 对于块状、片状、甚至薄膜材料，我们可以使用TXP对其进行预加工，得到厚度小于30 μm，直径为3 mm的圆片，再通过离子减薄仪(徕卡EM RES102)进行中央的薄区加工，用于透射电镜观察。 4.高真空镀膜(徕卡EM ACE600) 高真空镀膜能够帮
-
细胞状态差的三大原因实例分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
我们在做技术支持时常常接到用户来电： “老师，我的细胞状态很差，不知道怎么了，您能帮我分析下原因吗？” 细胞状态很差，常常出现的现象是：细胞边缘不清晰、细胞不饱满、折光性差、背景比较脏、黑点很多、细胞碎片多（细胞凋亡后的细胞碎片）、单个细胞内有空泡（凋亡）且空泡比较多；如果细胞出现老化，也就是细胞比较扁平、增殖减缓、细胞核体积增大、细胞突触变多，此时观察到的细胞状态也是不正常的。 ▲ 左图：背景很脏；右图：有较多小黑点 因此细胞状态差只是对这些现象的一种笼统说法。 究其根本，细胞状态变差主要是由于两种原因： 1 细胞营养条件不够 2 细胞被污染了 今天我们将深入分析影响细胞状态的这些原因。 营养条件不够 细胞营养条件不够时，就需要从培养基方面考虑。 1. 血清 由于血清来源于动物，且含有细胞培养中所需的各种营养（血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等），这奠定了血清是细胞培养实验中最普遍的试剂的基础。 市面上的牛血清产品名称虽然五花八门，但根据其不同的特性，追其根本，大致可分为以下四种。根据牛的取血年龄可以区分： 胎牛血清（Foetal Bovine Serum，简称FBS）指的是取自未出生，母牛剖腹心脏穿刺采血得来的血清。 国产胎牛血清（并无明确定义，但通常用此命名）指的是出生4-6小时，且未进行哺乳（unsuckled）进食的新生牛，有时还称作国产新生牛血清。 新生牛血清（Newborn Calf Serum，简称NBCS，或称小牛血清）指的是出生14天-3个月进行取血的牛血清。 成年牛血清（Adult Bovine Serum，简称ABS）指的是取血时牛龄通常超过12个月的牛血清。 以上取血牛龄的差异主要是受当地国家畜牧业的发展及法规限制影响，因为牛血多为畜牧业副产业，并未有专门为取血而养的牛。 这几种不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。常规来说，牛龄越小的牛血清，细胞培养效果越好。
-
多磷酸化肽标记技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
蛋白质磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一种蛋白质翻译后修饰，20世纪50年代以来一直被生物学家看作是一种动态的生物调节过程。在细胞中，大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关，如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质及多肽的研究可以帮助人们阐述上述过程的机理，进一步认识生命活动的本质。近年来随着蛋白质组技术的不断发展，蛋白质磷酸化的研究越来越受到广泛的关注。 蛋白质磷酸化在细胞信号转导中的作用 磷酸化多肽主要指肽链中的Ser、Tyr和Thr残基的侧链羟基被修饰成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白质磷酸化过程的必不可少的工具，因此研究蛋白质及多肽的磷酸化反应并确定成熟简便的合成路线就变得非常重要。目前为止，多肽的磷酸化修饰主要有后磷酸化法和单体法两种合成方法。后磷酸化法是多肽序列在树脂上合成完后，再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化；单体法则是将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中，这种方法较后磷酸化法操作更为简便，已经成为多肽磷酸化修饰的主要方法。 单体法修饰时，磷酸化的氨基酸由于侧链修饰的较大基团产生的位阻而导致难以与肽链缩合，并且之后的氨基酸引入都会比较困难，尤其在含有多个磷酸化位点修饰时，合成将变得异常困难，并且最终产物成分复杂，难以分离，产率极低。因此，当肽链中多个位点进行磷酸化时，可以考虑采用后磷酸化法，其合成过程主要就是在多肽合成结束之后，选择性的脱去要标记氨基酸的侧链保护基，对于Tyr，Thr可以直接使用侧链不保护的氨基酸进行反应。侧链保护基在1% TFA/DCM条件下可以定量的脱除。后磷酸化时，可以采用双苄基亚磷酰胺，四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体，连接到羟基上，然后在过氧酸条件下氧化生成磷酰基，完成反应。
-
盘点2020文献接力赛，赛业生物多篇文章精选让您选
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
不平凡的2020年已悄然过去，赛业生物客户也实现了单年SCI文献发文量新高。 截至2020年底，赛业生物引用文献总数达到4750篇，IF合计达20853.78，文献被引用次数累计25043次。 其中，2020年共发表文献1380篇，赛业生物模式动物领域SCI文章发表96篇，细胞产品与技术SCI文章发表文章1284篇，数量和质量均稳步提升。 截至2020年底，赛业生物模式动物所有文献平均IF=9.19，干细胞产品及技术所有文献平均IF=2.03，充分论证了“用赛业小鼠，发高分文章”这一理论。 模式动物文献精选 1 赛业生物点突变小鼠荣登Nature，助力代谢疾病研究 胆固醇是必不可少的脂质，但是高水平的胆固醇和其他脂质是心血管疾病、非酒精性脂肪肝、肥胖和糖尿病的主要危险因素。在哺乳动物中，进食后胆固醇的生物合成增加，并且在禁食条件下受到抑制。但是，在空腹-进食过渡期胆固醇生物合成的调控机制仍然知之甚少。武汉大学生命科学学院宋保亮团队在国际顶级期刊Nature上发表了题为“Feeding induces cholesterol biosynthesis via the mTORC1-USP20-HMGCR axis”的文章，揭示了进食后胆固醇合成的调控机制，USP20抑制剂可用于降低胆固醇水平，以**包括高脂血症、肝脂肪变性、肥胖和糖尿病在内的代谢疾病。 2 赛业生物CHAPIR基因敲除小鼠助力心脏肥大研究 慢性心肌肥大及其相关的心肌重塑是发展心脏功能障碍的主要因素，从而导致严重的心力衰竭和死亡。RNA m6A甲基化/去甲基化机制与心脏的生理和病理过程密切相关，然而m6A修饰参与心脏肥大的分子机制尚不清楚。非编码RNA（ncRNA），尤其是ncRNA的心脏特异性表达，在生理和病理性心脏肥大中均具有独特的调节功能。在心脏肥大过程中，某种非编码RNA大量表达，且这种ncRNA可以和PIWI蛋白相互作用，称为piRNA，但它们在心肌肥大中的功能和分子机理仍然未知。青岛大学转化医学研究院王昆教授团队在Nature Cell Biology上发表了题为“The piRNA CHAPIR regulates cardiac hypertrophy by control
-
成人和儿童感染新冠病毒抗体临床表现应答的不同原因
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
新冠引起的临床表现差异与年龄相关。成人出现呼吸症状，最严重的形式是急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，而儿童多出现胃肠道症状而非呼吸疾病，但可发展为危及生命的多系统炎症综合征( multisystem inflammatory syndrome ，MIS-C)。 这些显示儿童和成人可能有不同的，针对SARS-CoV-2的免疫反应。 最近Nature Immunology发表来自哥伦比亚大学等多家单位的文章，阐述了成人和儿童对SARS-CoV-2不同的抗体应答。 文章 Stuart P. Weisberg et al,Distinct antibody responses to SARS-CoV-2 in children and adults across the COVID-19 clinical spectrum,Nature Immunology ,VOL 22,January 2021,25–31 研究摘要 成人COVID-19队列，可以检测到针对S蛋白的IgG、IgM和IgA抗体，以及抗N蛋白的IgG抗体；而有和没有MIS-C的儿童主要产生S蛋白特异性的IgG抗体，而不是N蛋白。 此外，与成人COVID-19队列相比，有和没有MIS-C的儿童抗体中和活性低，表明保护性血清学反应减少。这些结果表明，儿童有一个独特的感染过程和免疫反应，而不取决于他们是否发展MIS-C，这对制定针对年龄的检测和保护，预防接种等，有一定的参考意义。 病人基本情况 儿童和成人抗体水平 成人尤其是有急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome ，ARDS)的患者有更高的anti-S IgG，IgM和IgA，anti-N IgG。而儿童主要产生针对S蛋白的IgG，MIS-C和non-MIS-C儿童无明显差异。 与轻度和重度COVID-19的成人相比，儿童血浆的中和活性低 SARS-CoV-2抗体中和活性与症状后时间的关系 与成人不同，出现症状后，随时间推移，儿童的血浆的中和活性并不升高。 参考文献 Feldstein, L. R. et al. Multisystem infammatory syndrome in U.S. children and adolescents. N. Engl. J. Med. 383, 334–346 (2020) Stuart P. Weisberg et al,Distinct antibody responses to SARS-CoV-2 in chi
-
液体硫乙醇酸盐培养基注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
液体硫乙醇酸盐培养基注意事项: 1. 收到后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。 2. 仔细阅读说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。 3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。 4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度80%左右时正常传代。 5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。 6.建议客户收到后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 志伟技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
-
琼脂培养基S（R2A 琼脂）复苏操作流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
琼脂培养基S（R2A 琼脂）复苏操作流程: 1. 准备工作，开水浴锅，预热试剂，超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置 2. 紫外照射后风机吹 10min 后，酒精擦拭台面，放入试剂和离心管，取 15ml 离心管，加入 9ml 培养液 3. 在液氮罐中取出细胞，先拧松放液氮，再拧紧，将冻存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min 4. 将冻存管喷酒精后放入超净台内，擦干管壁，用 1ml 头将细胞转移到已加培养液的离心管中 5. 800-1000rpm 离心 5min,注意配平 6. 将离心好的细胞弃上清，加入 5ml 完全培养基重悬，用移液管吹打 8-10 次， 避免产生气泡，将细胞悬液接种到 10cm 培养皿中，补加 5ml 培养液 7. 混匀，十字法或者 8 字法 8. 将混好的细胞放入培养箱中培养
-
FITC&AMC等荧光标记技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简便等优点，使得荧光标记物在许多研究领域的应用日趋广泛。人们利用利用荧光标记的多肽来检测目标蛋白的活性，并将其发展的高通量活性筛选方法应用于疾病**靶点蛋白的药物筛选和药物开发（例如，各种激酶、磷酸酶、肽酶等）。肽谷生物经过长期开发，能够提供技术成熟的各种荧光标记多肽。 FITC&AMC等荧光标记技术简介 除了FRET荧光淬灭组合，肽谷生物还可以提供包括FITC, FAM, TAMRA, Biotin等种类齐全的多肽荧光标记服务。 下面是一些常见的多肽修饰荧光物质结构： 下表是一些荧光物质的激发光波长Ex(nm)和发射光波长Em(nm): · FITC修饰 FITC(异硫氰酸荧光素)具有比较高的活性，我们公司可以通过两种方式将FITC标记于多肽上：(1) 将FITC标记于赖氨酸（Lys）或被选择性地脱保护的鸟氨酸（ornithine）侧链氨基上；(2) 将FITC标记于多肽N端氨基。 当在N端标记时，建议在最后一个氨基和由异硫氰酸酯与氨基反应产生的硫脲键之间引入烷基间隔器（alkyl spacer）如氨基己酸（Ahx）。链接切割需要酸性环境，在N端标记FITC的多肽需经历环化作用来形成荧光素，通常会伴有最后一个氨基酸的去除，但当有一个间隔器如氨基己酸，或者是通过非酸性环境将目的肽从树脂上切下来时，这种情况可避免。空间位阻被认为是在荧光染料前使用Ahx的主要原因，而不是为什么FITC不能直接偶联在多肽上的原因。 Ahx或b-Ala均可作为间隔器用于FITC标记的多肽上。 · AMC修饰 AMC(7-氨基-4-甲基香豆素)是一种应用广泛的荧光标记试剂， 与其他荧光染料不同的是，AMC修饰多肽分子是从C
-
从冻干基本概念到发展历史详细介绍冷冻干燥的基本过程
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
【昊扩实验室】冻干玫瑰花，你get到了吗？ 冻干工艺知识系统化培训、如何用近似空间设计（QBD）的方法进行中式放大、冻干工艺摸索中常见问题解答、行业新技术动态分享等。 近几年，随着科技的发展出现了冻干技术，冻干技术凭借其它干燥方法无法比拟的优点，越来越受到人们的青睐，目前已经广泛应用于医药、生物制品、食品、活性物质等各大领域，其应用规模还在不断快速扩大，真空冷冻干燥必将成为21世纪的重要应用技术。 听起来如此高大上的冻干技术，是如何冻干玫瑰花的呢？下面来跟小编一起看看玫瑰花的冻干过程。 【昊扩实验室】冻干玫瑰花实验流程： 1.准备新鲜的玫瑰花 2.把花放入泰事达超低温冰箱进行冷冻 3.将花取出放入泰事达实验室冻干机中进行冻干 4.冻干结束，将花取出 外形 冻干玫瑰，外观不干裂，不收缩，保持玫瑰原有的外形。 冻干玫瑰前后对比图，基本保持原有外形 色泽 冻干玫瑰花，色泽艳丽。 香味 冻干技术只单纯的去除水分，保留了玫瑰本身95%以上的营养。就像把玫瑰浓缩了一样，因此，冻干墨红玫瑰的味道比烘干保存的玫瑰更加浓郁馨香。 营养成分 冻干的玫瑰花，其组织结构、营养成分基本不变，特别是生理活性成分保留率高。 采用冻干技术保存的玫瑰花不易褪色、香味不会消失、花形完整无损，营养保存较高。 冷冻干燥的基本过程是怎么样的呢？ 从冻干的基本概念，到发展历史。从预冻、一次干燥、二次干燥以及其他辅助步骤，我们来详细了解下。 1、冷冻干燥 冷冻干燥也叫冻干，是一个干燥过程，湿的产品先被冷冻成固体，随后通过将其暴露在低的水分分压下，溶剂直接通过升华变为气相，整个过程不经过液相。 冻干的英文“lyophilisation”，在希腊词根中： Lyo = Solvent Philo = Friend Lyo=溶剂 Philo=友好 通过冻干获得的干燥产品，具有很好地“溶剂亲和性” 2、历史 印加文明-在马丘比丘的高山上存储他们的马
-
订书肽简介及合成技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
订书肽合成技术 1. 订书肽发展简介 订书肽是基于多肽需形成α-螺旋通过细胞膜进入细胞的需求上发展起来的。生物体内的多种生命进程调节都是通过蛋白质与蛋白质之间的相互作用来实现的。例如病毒的自组装，细胞的生长，分裂，分化等过程。而通常蛋白-蛋白相互作用的界面太大，从而使小分子药物很难对其进行靶向定位，达到高效特异性地阻断这种相互作用，展现良好的**效果。蛋白类药物因为很难顺利通过细胞膜所以也达不到直接靶向细胞内相互作用的效果，因此，研究者们开始寻求一种能够克服这两种药物缺点的既能够进入细胞膜又能特异性靶向蛋白-蛋白相互作用的新的药物分子。 研究表明，具有α-螺旋结构和富含正电荷的多肽可以穿过细胞膜。因此，人们开发了利用二硫键与分子内酰胺键作为支架的α-螺旋结构，但是，这些支架在生理环境下均不能稳定存在。2000年，Verdine等发展了一种用碳碳键作为支架来稳定多肽α-螺旋结构的方法，由此方法得到的多肽成为订书肽(Stapled peptides)。订书肽有更高的α-螺旋程度，结合能力强，能通过细胞膜，难被蛋白酶水解，在生物体内半衰期长等优点。 2. 订书肽合成 订书肽合成策略为在固相合成肽链过程中引入两个含有α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸，然后两个非天然氨基酸之间发生烯烃复分解反应(RCM)环化构成稳定α-螺旋结构构象的全碳支架，从而合成订书肽。 1) α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸的合成： α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸的一般结构 通常，在三乙胺的催化下，手性辅基试剂(1R,2S)-2-氨基-1，2-二苯乙醇与2-溴丙酸乙酯发生亲核取代反应，并采用(Boc)2O保护自由胺基；接下来，在对甲苯磺酸的催化下，环状的含有手性辅基的丙氨酸前体得以高效生产，在碱性催化剂和低温下，烯基基团高效立体选择性的连接到氨基酸的α-位，最后，在氨基锂条件下脱去手性辅基，并采用Fmoc保护α-胺基。 α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸的合成路线 2) 订书肽的合成： 通常采用Fmoc-固相多肽合成方法
-
多肽FRET荧光标记技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简便等优点，使得荧光标记物在许多研究领域的应用日趋广泛。人们利用荧光标记的多肽来检测目标蛋白的活性，并将其发展的高通量活性筛选方法应用于疾病**靶点蛋白的药物筛选和药物开发（例如，各种激酶、磷酸酶、肽酶等）。肽谷生物经过长期开发，能够提供技术成熟的各种荧光标记多肽。 荧光共振能量转移（FRET)是一种非辐射能量跃迁，通过分子间的电偶极相互作用，将供体激发态能量转移到受体激发态的过程。此过程没有光子的参与，所以是非辐射的。该分析方法具有快速、敏感和简单等优点。 用于FRET试验的染料是可以相同的。但在大多数应用中其实是使用不同的染料。例如，一个供体基团（EDANS）和接受基因（DABCYL）匀被连接到一HIV蛋白酶的天然底物上，当该底物未被切断时，DABCYL可淬灭EDANS，从而检测不到荧光。当该底物被HIV-1蛋白酶切断后，EDANS不再被DABCYL淬灭，随即可检测到EDANS荧光。蛋白酶抑制剂的有效性可凭借EDANS荧光强度的变化进行监测。 FRET肽是研究肽酶特异性的便利工具，由于其反应过程可被连续监测，为酶活性的检测提供了一个便捷的方法。供体/受体对的肽键水解后产生的荧光可衡量纳摩尔级浓度的酶活性。当FRET肽是完整的，表现出的是内部的荧光猝灭，但当供体/受体对的任何肽键断裂就会释放出荧光，此荧光可被连续检测，从而可对酶的活性进行定量分析。FRET 肽可作为各类酶研究的合适底物，比如：肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的动力特征和功能特征；对新的蛋白水解酶的筛选和检测；对多肽折叠的构象研究等。 常用FRET的标准染料组合 Fluorescein and Dabcyl: FA
-
多肽磷酸化修饰及检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
磷酸化影响着细胞生命的方方面面。在细胞中，大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关，如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质及多肽的研究可以帮助人们阐述上述过程的机理，进一步认识生命活动的本质。肽谷生物依据自身原料优势和技术优势，可以合成含有磷酸化丝氨酸(pSer)、磷酸化苏氨酸(pThr)、磷酸化酪氨酸(pTyr)的多肽，并可以提供含有一个，两个，三个，四个，五个磷酸化位点修饰的高质量多肽。 1. 多肽磷酸化标记简介 磷酸化多肽主要指肽链中的Ser、Tyr和Thr残基的侧链羟基被修饰成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白质磷酸化过程的必不可少的工具，因此研究蛋白质及多肽的磷酸化反应并确定成熟简便的合成路线就变得非常重要。目前，多肽的磷酸化修饰方法主要有两种： （1）将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中； （2）多肽序列在树脂上合成完后，再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化。 1）将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中： 即事先将需要磷酸化的氨基酸（Thr,Ser或Tyr）磷酸化并适当保护，然后按照正常SPPS合成流程将磷酸化单体缩合到多肽指定位点。这种方法操作简便，已经成为多肽单位点磷酸化修饰的主要方法。 2）多肽序列在树脂上合成完后，再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化： 采用将磷酸化单体缩合到多肽中的方法进行磷酸化修饰时，磷酸化的氨基酸由于侧链修饰的较大基团产生的位阻而导致难以与肽链缩合，并且之后的氨基酸引入都会比较困难，尤其在含有多个磷酸化位点修饰时，合成将变得异常困难，并且最终产物成分复杂，难以分离，产率极低。因此，当肽链中多个位点进行磷酸化时，可以考虑采用将多肽序列在树脂上合成完后，再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化：其合成过程主要就是在多肽合成结束之后，选择性的脱去要标记氨基酸的侧链保
-
多肽稳定标同位素记技术与甲基化修饰技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
1. 多肽稳定标同位素记技术 随着多肽在生物医药领域越来越广泛和深入的应用，标记和修饰性的多肽种类的需求越来越多，质量需求也越来越高。稳定同位素标记(同位素示踪法)就是其中典型的一种。稳定同位素标记多肽是指用稳定同位素标记的氨基酸合成的多肽。与标准氨基酸相比，同位素标记是指用2H，13C或15N代替原有的12C和14N原子。 重标氨基酸是非放射性的，只是分子量比标准氨基酸大一些。这种分子量的区别能够让其在蛋白定量分析和、蛋白结构分析和MS（或NMR）鉴定中成为有力的工具。可以实现肽类代谢途径研究，可以随时追踪含有稳定同位素标记肽在体内或体外的位置及其数量的运动变化情况，其高灵敏度、定位简单、定量准确等特点使得同位素修饰在医学及生物化学领域越来越得到广泛关注。 稳定同位素标记多肽技术关键在于用于合成多肽的稳定同位素标记氨基酸的质量，肽谷生物为了提供高质量稳定同位素标记氨基酸，与先进同位素标记厂家达成战略合作协议，保证我们能提供品种齐全且质量稳定的同位素标记多肽产品。 下表是常用的同位素标记的氨基酸，其他同位素标记的氨基酸可以根据要求提供。 氨基酸名称 同位素标记位置 分子量差异 同位素丰度 丙氨酸 Alanine Ala(A) U-13C3,U-15N +4 da >99% 精氨酸 Arginine Arg(R) U-13C6,U-15N4 +10 da >99% 精氨酸 Arginine Arg(R) 4,4,5,5-13C +4 da >98% 异亮氨酸 Isoleucine Ile(I) U-13C6,U-15N +7 da >99% 亮氨酸 Leucine Leu(L) U-13C6,U-15N +7 da >99% 赖氨酸 Lysine Lys(K) U-13C6,U-15N2 +8 da >99% 脯氨酸 Proline Pro(P) U-13C5,U-15N +6 da >99% 苯丙氨酸 Phenyalanine Phe(F) U-13C9,U-15N +10da >99% 缬氨酸 Valine
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信