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考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理、步骤及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
蛋白质浓度测定的方法有很多，考马斯亮蓝测定蛋白质是实验室最常见的一种方式，它利用比色法和色素法混合方法、操作简便，下文介绍了考马斯亮蓝测定蛋白质浓度的原理、优缺点、操作以及注意事项。 实验原理 考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰(lmax)的位置，由465 nm变为 595 nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。通过测定595 nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。 考马斯亮蓝染色法的突出优点是： (1)灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1 mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。 (2)测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性**。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。 (3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。 此法的缺点是： (1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。 (2)仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)等。 试剂与器材 一、试剂 考马斯亮蓝
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A549（人非小细胞肺癌细胞）细胞培养的优点
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
A549（人非小细胞肺癌细胞）细胞培养的优点： 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备 细胞特性： 1)】EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0906价格组织来源于实验动物的正常眼组织。 2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。 3)经鉴定细胞纯度高于90%。 4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。 5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。 注意事项： （1）冻存前细胞状态，细胞**在对数生长期，细胞密度适合，刚刚发生细胞融合，过密或连成片的细胞状态不好，而且消化时不容易分散； （2）冻存的密度不宜过低，10的6次方-7次方的数量级比较好，我冻存的细胞一般T25培养瓶（5*107），一瓶冻一管（1.5ml冻存管），10cm培养皿（大概10的8次方个细胞）分成两管。 （3）消化和吹打，切忌胰酶消化过度，吹打不可太用力，**不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培养基吹打哦，不是加入冻存液再吹打。 （4）离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格，我从10%-90%都用过，问题不大，个人认为10%-20%可以了，能节约处就节约点嘛！另外，冻存液可以在处理细胞前配置，放在4度冰箱
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Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒说明书 Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒AlamaBlue 细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。AlamaBlue 通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应，将非荧光信号的染料转换成为一红色荧光物质，试卤灵（9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮），从而检测细胞的存活率。维持细胞生产需要还原性环境而抑制生长则表现为氧化型环境。细胞生长率相关的降低可表现为氧化还原指示剂从氧化型（非荧光素、紫色）转为还原型（荧光素、红色）。该荧光信号可以用530~560nm 的激发波激发，在590nm 处可以获发射波，检测570 和600nm 的的吸光度值，校正监测值，可以减去相应的570nm 和600nm 的背景吸光度值。检测所产生的荧光信号是与样品中的活细胞数成正比的。 AlamaBlue 细胞活性检测试剂盒的灵敏度相似于[3H]胸苷法检测细胞增殖法。根据不同类型的细胞，AlamaBlue 可以检测到至少40个细胞，同时保证很好的重现性和灵敏度。作为试卤灵（紫红、红色荧光）可以进一步被还原为水解化的试卤灵（无色、无荧光），当细胞数量增多，所有的刃天青（7-羟基-3-羰基-0-氧化-三氢吩恶嗪）被转换为试卤灵（9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮），试剂盒的信号反而会发生衰减。因此，对于您所用的试剂盒来说，针对不同的细胞类型，应该调整您的细胞数，做相应的优化，才能得到更好的结果。 操作说明 以下操作可用作通用指导建议。考虑不同细胞类型与培养条件的差异性，有必要根据实际情况优化您的操作步骤。 . 96 孔细胞培养板每孔00μL 培养基饲养细胞，控制细胞数目在40~0000 个/贴壁细胞，2000~500000 个/悬浮细胞。设置空培养基做对照。 2. 加入0μL AlamaBlue 溶液至培养基中，37 度孵育：24 小时（比色法读数）；5-6 小时（荧光读数）。 3. 检测570nm 和600nm 的吸光度，或者用荧光微孔板读数530nm 激发，590nm 发射波
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大小鼠气管插管的常用方式与指导
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
气管插管常用方法介绍 气管插管法是指将特制的气管内导管经声门置入气管，进而打开呼吸道，通气供氧，保持气道通畅，防止误吸，为肺部疾病造模及给药等提供最佳条件。 大鼠气管插管常用胸部透光插管法、盲插法以及气管切开法（小鼠气管插管方法与大鼠类似）。 胸部透光插管法操作繁琐，对经验不足的操作者不够友好，插管成功率低； 盲插法成功率不高，且容易造成气道损伤，气道分泌物多，甚至会让大鼠窒息死亡； 气管切开，虽插管准确，但容易损伤颈部神经血管，造成术后局部感染和并发症，影响数据稳定，不能进行延续性研究。 常用气管插管方法误进度，耗时间，何以解忧？ 用光纤引导下的可视化气管插管法 应用于大小鼠人工气道通路建立，无创操作，便捷高效。 即插即用式体位固定，光源精准引导，一人即可操作，节约手术时长； 无创式气管插管，术后感染风险更低，动物福利更具保障。 RWD气管插管套RE20：解锁高效插管新姿势 一、大小鼠气管插管固定台 45°、60°、90°三种倾斜角度可选，多方位满足手术操作习惯； 具有角度标识，便于直观快捷不同角度选择。 二、大小鼠插管 插管采用PU材质，软硬度适中，保证手感的同时保证不伤害动物气管。 三、气管插管光纤照明系统 具有专利技术； 无线可携带； 光源可精准引导且对动物不产生热源灼伤和视觉刺激应激反应，对人视觉观察不产生干扰； 放大镜配套，助力插管精准定位。 四、气管检查镜 金属手柄气管检查镜更具质感，人性化辅助判断气管插管手术结果。 结尾 RWD气管插管套装RE20，可触达多重应用领域：细菌性肺炎模型建立、肺功能测量、肺部疾病模型、开胸类手术、动物**、动物急救，贵重动物手术保护、动物PET体内成像、心肌梗死动物手术等。
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彗星试验原理及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
体内碱性彗星试验原理及注意事项 体内碱性彗星试验在化合物遗传毒性评价中的应用日益广泛。ICH S2(R1)已将肝脏彗星试验列为第2个组织/终点的体内试验；体内哺乳动物碱性彗星试验的指导原则（TG489）也已颁布。体内碱性彗星实验能够检测DNA链断裂、碱性不稳定位点、不完整切除修复引起的DNA链的断裂，能够制成合适细胞悬液的组织DNA损伤。与其他试验相比其检测的是单细胞水平的DNA损伤，因此该试验敏感性较高，操作简单，经济省时。 实验原理 彗星实验（comet assay）也称单细胞凝胶电泳试验（single cell gel electrophoresis.SCGE）,是一种有效评估DNA损伤的方法。其原理是器官或组织经处理（如辐射、重金属等）后，细胞中的DNA发生单链或双链断裂，经细胞及其核膜裂解后，DNA解旋，在电场作用下，DNA 断片迁移出细胞核，形成彗星状的电泳图谱。正常细胞的大分子DNA在电场作用下迁移距离较短，DNA仍保留在细胞核的范围，形成圆形或轻微拖尾的图谱。根据电泳缓冲液的pH值不同，可分为中性彗星实验（pH=8.4）和碱性彗星实验（pH＞13）。中性彗星实验主要用于检测DNA双链的断裂损伤，碱性彗星实验具有更高的灵敏性，可用于检测更少量的单链和双链断裂损伤。 需要注意的是，试验过程中的个方面，包括样品准备、电泳条件、视觉分析参数(如染色强度、显微镜光强度以及使用显微镜滤镜和相机动态和环境条件(如背景照明)已经被研究，可能影响DNA迁移。 碱性彗星实验指导原则 TG489 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay，2016，OECD Guideline for the Testing of Chemicals 试验能力验证 每个实验室都应证明能够为所使用的目标组织获得足够质量的单细胞或细胞悬浮液，从而在彗星试验（comet assay）中建立实验能力。汇智泰康拥有多年毒理学服务与产品研发经验，针对不同遗传毒性试验开发针对试剂盒，包括彗星试验试剂盒。首先通过%尾DNA的评价，对照处理组动物%尾DNA在低范围内。目前的数据表明,尾部DNA百分比(基于
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便携式成像光谱仪中光谱的分布特征
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
便携式成像光谱仪在高光谱测量的基础上，具有图谱合一的优势，可以到叶片一个点去探测作物不同胁迫症状的特征，又可获取受胁迫作物面状的光谱信息，点面结合综合地反映作物遭受胁迫的程度。所以，成像高光谱已经成为国内外研究的热点，学者们利用高光谱成像技术定量化地提取作物所遭受的各种胁迫特征，根据高分辨率的图像对叶片及叶片的局部区域进行分析，从而在更加微观的尺度上进行机理探测研究。正是因为便携式成像光谱仪可以得到波段宽度很窄的多波段图像数据，所以它多用于地物的光谱分析与识别上。特别是，由于成像光谱仪的工作波段为可见光、近红外、短波红外，因此对于特殊的矿产探测及海色调查是非常有效的，尤其是矿化蚀变岩在短波段具有诊断性和光谱特性。 光源的波长是便携式成像光谱仪的计量标准，因此其单色性应能满足测量精度及测量范围的要求。在非相干照明中，光源的光谱分布应与接收器的光谱响应相匹配，这不仅是节省能量问题，还是提高检测信号的信噪比的重要措施。因信号加载于光源的峰值波长上，故若接收器的峰值灵敏波长与光源匹配得很好，则在其他波长上出现“噪声”后引起的响应是很小的。在目视仪器中，视场的背景可以是适宜人眼的黄绿色，而将有害的红外辐射，它可能引起仪器的热变形，用滤色片滤去。高温气体被收集到一金属辐射管中，为保证被测气体不遇冷凝结，辐射管内壁与被测气体保持相同高温，前、后两端是由红外透光材料制成的圆形薄片，其前端位于透镜的焦平面上。 便携式成像光谱仪能够获得紫外至可见的所有谱线，可根据需求来选择分析谱线，易于实现多基体的分析；能根据元素的含量范围和基体种类选择的分析谱线，实现更准确的测量；易于扩展升级，用户若需增加新基体或新元素的分析，只需添加相应分析程序，无需改变成像光谱仪硬件；谱线信息丰富，结合扣背景、谱线分离等先进的算法，可以准确扣除各种光谱干扰；仪器校准方便快捷，只需通过智能校准算法，即可实现光谱
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扁豆凝集素（LCA）ELISA免费代测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
扁豆凝集素（LCA）ELISA免费代测试剂盒说明书 【中文名称】：扁豆凝集素（LCA）ELISA免费代测试剂盒 【产品规格】：96T/48T。 【保存条件】：2-8℃低温保存 【保质期】：6个月，所有试剂盒均提供批次。 【试剂盒成分】：酶标板，试剂，标准品等。ELISA试剂盒检测范围：人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。 主要用于科研方面，不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。 扁豆凝集素（LCA）ELISA免费代测试剂盒实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中维生素C(VC)水平。用纯化的维生素C(VC)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入维生素C(VC)，再与HRP标记的维生素C(VC)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的维生素C(VC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中维生素C(VC)浓度。 植物维生素C(VC)ELISA免费代测试剂盒索取说明书或有技术问题请的在线销售人员！凡在公司购买ELISA试剂盒的客户，可享受我司提供的免费代测服务、全程技术指导及完整的售前售中售后服务，如有问题请，我们会以zui快的速度为您解答！ 样本处理及要求 1.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 3. 不能检测含NaN3 的样品，因
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神经科疾病动物模型的制作经验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
脑缺血模型的制作： 制作脑缺血动物模型的方法很多，但常用方法主要有结扎法和栓塞法两种，结扎法是运用外科手段结扎脑的供血动脉，中止脑的血氧供应，它可以进一步分为颅内结扎和颅外结扎。颅外结扎主要是用于制作全脑缺血模型，可进一步分为：①4血管结扎，即结扎颈总动脉/颈内动脉和椎动脉； ②2血管结扎，即结扎两侧颈总/颈内动脉，同时抽取动物一定量的血液，使血压降低到50mmHg以下，达到造成全脑缺血的目的。 这种方法因为需要监视和控制血压，实验条件要求严格，且因椎动脉未予结扎，往往造成的脑缺血是不完全的。另一种两血管结扎法是用沙土鼠（Gerbil）进行，利用沙土鼠脑底Willis动脉环发育不全后交通动脉缺如的特点，结扎两侧的颈总或颈内动脉造成前脑缺血。栓塞法是用自体血凝块、塑料或玻璃微球来栓塞实验动物颈动脉、脑内大动脉或微动脉，造成脑组织缺血模型，该法简便易行，但可控性、可重复性差，且不能再灌流。 1. 实验动物 实验动物的选择对脑缺血模型是非常重要的，理论上兔、猫、狗和灵长类都可被用来制作脑缺血模型，但更多的人倾向于选择使用鼠作实验。这主要是基于如下认识：因为鼠是小动物，价格便宜，躯体小，消耗药品试剂较少；鼠的脑血管解剖和生理与高级动物无明显差异；一些在体的实验操作更容易进行，甚至在伦理学更容易接受等等。 2. 仪器和设备 制作脑缺血动物模型的仪器设备分为二类：一类是为动物手术服务，包括一套手术器械，手术显微镜，颅钻，脑立体定位仪，温度控制装置（控温仪、红外线灯和加热垫），呼吸机；另一类是用于监测和分析的仪器，包括脑电记录装置，血压记录装置，多谱勒血流记录仪，血气血糖分析仪。 3. 四血管结扎脑缺血模型的制作 这是一个广泛应用的脑缺血模型。最常用的为Pulsinelli的改良方法。该模型选用Wistar大鼠，可以在清醒和自由运动状态下制作严重的脑缺血和恒定的病理学改变。该模型分二个阶段制作，第一阶段：将动物麻醉，按置在脑立体定位仪上
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高效的单细胞打印技术加速稳定细胞系的开发
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
目前，在单抗制药领域，需要稳定高产的细胞株，用于下游的抗体稳定生产，因为稳定高产的细胞株不仅可以简化下游纯化工艺，还可以降低整个生产工艺的成本，确保高品质产品的获得，以应对复杂的临床应用和市场竞争环境。 Fig.1 细胞株构建经典流程 传统的细胞系开发的单细胞分离技术存在很多缺陷，如分离效率低，细胞存活率低等。由德国cytena公司开发的专利的单细胞打印技术（SCP technology），通过将单个细胞自动分离到标准的96孔板/384孔板中，大大加速抗体细胞株的开发且适用于各种细胞类型。 Fig.2 SCP 自推广以来，SCP单细胞打印机不负众望，深受广大客户的喜爱，获得一致好评，全国范围内的demo预约也是络绎不绝，诸如药明康德、信达生物、君实生物、齐鲁制药、昭衍生物、迈百瑞、杭州养生堂、丽珠生物、复宏汉霖、宜明昂科、泽璟生物、皓阳生物和三优生物等几十家中国知名制药企业在demo成功后都纷纷购买设备。在艾贝泰和客户的努力下，有的制药企业仅一个月时间便实现了仪器从demo试用到设备安装，从培训到最终投入使用，大大缩短了细胞株开发的时间。 应用案例展示 SCP和有限稀释（LD）分选单细胞的效率对比 为了评估SCP分选单细胞的效率，我们在用SCP分选细胞后，在day0天统计了单细胞的比例，并连续跟踪细胞的生长，在14天时分析了单细胞生长起来的克隆率。 Fig.3 比较SCP与LD的单细胞接种效率 为了避免周边孔的蒸发影响细胞的生长，我们只分选了96孔的中间60个孔。如图3所示，SCP实现了高效的单细胞接种效率。两个细胞和零个细胞发生的比例非常低。每块 96 孔板的平均分选时间为3-5分钟。经SCP分选的每块孔板中单细胞率和单克隆生长孔数显著优于有限稀释法。不管是单细胞率还是克隆生长率，SCP都是LCD的 3-4 倍，这意味着有更多的单克隆用于后续的高产细胞株筛选。 克隆成活率 在同样的细胞株和培养基条件下，我们比较了SCP和LD的单细胞克隆成活率。 Fig.4 比较SCP与LD的
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肥胖引起炎性疼痛的免疫学基础
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
肥胖影响了全球19亿成年人，6.5亿人达到临床肥胖诊断标准（BMI大于30），肥胖又可以分为三级，I (30–34.9), II (35–39.9), III (>40) (WHO, 2018)。 肥胖是胰岛素抵抗，II型糖尿病，心血管疾病，癌症和痴呆的关键危险因素。 研究显示，肥胖竟然和慢性疼痛具有高度相关性，而且涉及骨骼肌痛，膝盖痛，头痛，腹痛，骨盆痛等，甚至影响日常生活。 Neuro-Immunity Controls Obesity-Induced Pain. Front. Hum.Front. Hum. Neurosci. 2020，14:181. 疼痛 急性疼痛，通常是对外界刺激的保护性反应；持续3个月以上的慢性疼痛，往往是机体生理机能微弱，或者一些病理改变引起的。 分类 1）伤害性疼痛：与组织损伤危害相关 2）神经病理性疼痛：体感神经系统损伤或者疾病 3）神经功能异常性疼痛：伤害感受性神经系统疾病（如纤维肌痛） 4）炎症性疼痛：组织损伤，炎症激活相关等 伤害感受器检测到经典的疼痛信号（如化学，有害温度等引起),非典型性信号（细胞因子，真菌，微生物，免疫球蛋白等引起）。 炎症性疼痛的特点是免疫细胞因子、趋化因子和生长因素等流入，由危害感受器（GPCR或酪氨酸激酶受体等）介导，引起细胞激酶激活，进而引起离子通道转运体（TRPV1，TRPA1）和电压门控钠通道（NaV)激活。这个过程引起危害感受器致敏，对非有害刺激过敏，称之为触发发痛（ allodynia ）。 神经末梢“致敏”状态，加剧 对疼痛触发的反应（称为痛觉过敏），这些影响通常仅限于炎症部位，而全身过敏是由中枢敏化引起的。 危害感受器敏化剂包括：前列腺素E2（PGE2），神经生长因子（NGF）；危害感受器表达受体受到IL-1β，CCL3的致敏。此外还有哮喘的IL-5，AD：IL-4，TLSP，瘙痒：IL-31等。 肥胖是一种慢性炎症 炎症的四大表现：红，肿，热，痛都和神经感受器有关。 伤害性刺激引起的动作电位传播到大脑以引发痛觉，这些信号传递至神经元分支点，也有一些反向传播，回到外周末端。通过释放神经肽，引起局部神经源性炎症。这
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多肽的基本操作与保存知识
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
保存 大多数多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前，冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，**的方法是以小的工作样量存放。 对于含Cys, Met orTrP的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽可易空气氧化，在封瓶前，慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比，生命期有限。 溶解性 大多肽的道选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽，需要DMF、脲、guanidiniamchloride或acetonitnle来溶解，这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。 残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。 保存操作 包装 1mg或更少的多肽按净重包装，声明的小瓶重不含相关抗离子和水。 例如，氨基酸分析决定的肽含量是80%，在1mg样品中，那么瓶中毛重是1.25mg。 大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水，例如，25mg样品中肽百分比为90%，那么，实际肽量为25mg×90%=22.5mg 不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%， 而肽含量相关带电基团（如Arg, Lys）的抗离子量和肽新水性决定。这是合成肽的本身特性。 冻干肽的保存 所有产品应存于冰箱， **为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。 肽溶液的保存 溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性pH(pH5-7), -20℃保存的，为避免样品的反复冻融，**分成小样存放。一份样品融冻后未用完， 应扔掉，细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦， 为克服此，肽应溶于无菌水， 或肽溶液用0.2μM滤膜过滤。 多肽的重建和操作 多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时，要注意使初始浓度比要求浓度大，如果多肽仅有限溶解性，这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。 如果多肽在水中的溶解性有限，有几种选择可帮助溶解： 对碱性肽用稀乙酸（含Arg ,
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云序环状RNA研究策略在环状RNA研究的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
环状RNA作为新发现的RNA分子，从诞生之日起就是光环加身，屡屡登上Science、Nature、Cell等高分期刊。近期发表的《2019研究前沿》中，“环状RNA作为癌症新的生物标志物”成为生物科学领域6个新兴前沿之一。2019年环状RNA共发表SCI论文885篇，较2018年增长约20%，其中大于10分的文章约60篇，是2018年的3倍左右。2019年关于环状RNA的国自然审批金额高达8000多万，环状RNA的火热仍在持续。 那么如何研究环状RNA呢？云序客户的文章给出了答案。今天小编将近日云序客户新发表的6篇环状RNA进行了分类解析，帮助大家对环状RNA的研究有更清晰的认识！ 分类一|环状RNA表达谱 1.脓毒症诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞环状RNA表达谱 发表期刊：Journal of Cellular and Molecular Medicine 影响因子：4.658 发表时间：2019.10 研究方法：全转录组测序 、qRT-PCR等云序提供 文章链接：Characteristics of circular RNA expression of pulmonary macrophages in mice with sepsis‐induced acute lung injury 环状RNA(circRNAs)是一大类非编码RNA，在多种疾病的病理过程中发挥着重要作用。然而，它们在脓毒症肺损伤后的肺巨噬细胞中的作用尚不清楚。在本研究中，小鼠被分为两组：对照组和盲肠结扎穿孔(CLP)诱导ALI组。在SCLP/CLP后24小时从肺匀浆中分离出巨噬细胞。从巨噬细胞通过全转录组测序鉴定circRNA的变化，在接下来的实验中通过RT-PCR验证。在两组中共检测到4318个circRNA。其中，有11个circRNA与对照组相比显著上调和126个circRNA与对照组相比显著下调(p≤0.05，差异倍数变化≥2)。选取其中前10个的差异表达倍数高的circRNA(fold change >4, P
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多肽药物分析结构概述与色谱柱选型
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
多肽类药物作为大分子药物和小分子药物之间的过渡态，也一直是制药领域关注的热点。 多肽/蛋白质都是由氨基酸这个基础单元通过肽键（酰胺键-CO-NH-）及其他键键合而成的。目前，对于多肽并没有一个十分严格的划分规定，通常认为20个以下氨基酸组成的为短肽，也有认为5/10个氨基酸以下组成的为短肽；由20~50/60个氨基酸组成的肽为中等肽。而我们一般认为的肽类药物为2~60个氨基酸组成，更大的结构或者是更大的分子量（>5000）则会被归入大分子/蛋白类药物中。 氨基酸作为组成多肽/蛋白质的初级单元，每个氨基酸均由一个羧基（-COOH），一个氨基（-NH2）和一条侧链组成。而不同氨基酸之间的差异在于侧链的不同。 天然氨基酸都是α氨基酸，对于氨基酸特有的结构来说，其包含一个酸性基团-COOH，和一个碱性基团-NH2。其pKa如下图所示： 除去上述氨基酸特有的基团外，对常见的氨基酸根据侧链的不同性质进行分类（酸性、碱性、中性；脂肪族、芳香族等），如下图所示： 1、酸性 对于酸性的氨基酸，上图中所标pKa为红圈圈出位置，用红色圈表示酸。 2、碱性 对于碱性的氨基酸，上图中所标pKa为蓝圈圈出位置，用蓝色圈表示碱。 3、芳香族 对于苯丙氨酸和色氨酸来说，除氨基酸本身代入的α氨基酸结构，侧链可能带进酸性基团或者碱性基团。如上图中三个芳香族类的氨基酸中，酪氨酸的侧链就带进一个酚羟基的弱酸。 4、脂肪族 5、亚胺（成环） 6、脂肪醇类 7、含硫氨基酸 含硫氨基酸具有还原性，其较易氧化。另一个需要关注的地方是，当多肽链中因存在半胱氨酸、蛋氨酸而存在二硫键二级结构时，需要特别关注稳定性过程中二硫键交换的产物。 8、酰胺类 末端的酰胺作为一个非常弱的酸/碱，在一般的分析条件下，可处理为中性，在分析过程中不用过多的考虑。当然这里的不用过多考虑仅仅指分析方法design的时候。在多肽药物的稳定性过程当中，如果肽链中存在此类氨基酸，需要特别关注水解的杂质。 我们了解了形成多肽/蛋白质的基
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钟超课题组利用光响应生物膜，制备梯度活体复合材料
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
自然界中生物体的组成材料经过漫长的自然选择与进化，其结构与性能都令人惊叹。生物体可以利用简单的矿物质与有机质作为原材料，巧妙组装后满足不同组织器官复杂的力学与功能需求。其中，梯度组织是生物体在适应环境变化过程中形成的高度进化的结构形式。这些结构精巧的生物硬组织是通过生物矿化过程形成的。有别于实验室材料制备，生物矿化是一种温和且高度可控的自然过程，其最为显著的特征是通过有机大分子与无机离子的界面相互作用，在分子水平控制矿物的成核、生长、取向和组装，使所得材料具有特殊的分级结构和组装方式，并随之带来优异的力学强度与丰富的功能。尽管目前仿生矿化研究取得了不少进展，但仍难以生产出具有天然同类产品的结构特征和具有“活性”的矿化复合材料，如自修复的能力、环境响应性。因此，如何利用细胞控制的方法来生产具有功能梯度性的复合材料在很大程度上还是一个尚未探索的领域。 中国科学院深圳先进技术研究院/上海科技大学钟超教授与其合作者受天然功能梯度材料的启发，提出了一种实现可调控仿生矿化的新思路：利用细菌能够感知环境和分泌生物分子的能力，工程改造大肠杆菌生物膜这个活体功能材料平台来实现光调控的矿化，制备形状、厚度、密度可调控的复合功能材料。该工作以“Living materials fabricated via gradient mineralization of light-inducible biofilms”为题，于2020年12月21日在线发表在Nature Chemical Bioligy杂志上。 在该项研究中，研究人员首先筛选出了Mfp3S-pep作为羟基磷灰石（HA）矿化的蛋白质模块，通过透射电镜和选区电子衍射，发现CsgA-Mfp3S-pep生物膜在矿化5 天后形成了致密的矿物质，并具有明显的晶体特征，证实了该蛋白在促进HA矿化和结晶中的作用（图1）。随后利用石英晶体微天平（图2）和单分子力谱进一步说明了该蛋白与HA矿物之间具有较强的结合力。研究人员利用石英微晶天平分别测试了蛋白单体和自组装后的蛋白纤维在HA芯片表面的吸附量，结果显
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Nature子刊m6A修饰携手miRNA揭示脱氧胆酸在胆囊癌中作用机制的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
miRNAs是一类长约22nt的单链小RNA，已经成为多种疾病的关键调控分子。大量研究表明miRNA参与调节生物体内分子过程以及各种疾病的发生过程，但针对m6A甲基化修饰是否会对miRNA调节疾病相关过程产生影响的研究却微乎其微。为了解答这一问题，云序客户通过高通量测序以及多种分子机制研究手段对m6A影响miRNA分子机制的研究进行了揭示，并且在oncogene上发表了相应的研究成果（Deoxycholic acid modulates the progression of gallbladder cancer through N6-methyladenosine-dependent microRNA maturation），本文结合本文结合meRIP, miRNA-seq,qPCR等多种技术，揭示了脱氧胆酸可能在胆囊癌中发挥作用，为胆囊癌提供了一种新的诊治策略。 发表期刊：Oncogene 影响因子：7.971 实验方法: miRNA-seq ，m6A-meRIP-qPCR，双荧光素酶实验 文章链接：Deoxycholic acid modulates the progression of gallbladder cancer through N6-methyladenosine-dependent microRNA maturation 研究内容 (1) 人GBC标本中血清DCA水平分析 越来越多的证据表明，BA稳态的失衡是疾病的主要特征，因此作者对正常人和GBC患者的血清进行BAs检测，结果发现，与正常个体不同，GBC患者中大多数血清BA水平明显升高(图1a)，这表明BAs稳态被明显破坏，并可能影响疾病的发生和进展。与之相反，DCA（一种继发性游离性BA）被发现在GBC患者中明显降低。此外，与GBC相比，胆囊腺瘤(GA)是一种侵袭性较弱的胆囊疾病，其血清中DCA水平较高(图1b)，表明DCA下调水平依赖于癌症表型。这些发现显示DCA可能是一种新的GBC诊断生物标志物。 为了探讨使用血清DCA作为GBC患者诊断生物标志物的可能性，作者评估了受试者工作特征(ROC)曲线。作者发现血清DCA水平的ROC曲线下面积为0.87，高于CA19-9（常规诊断生物标志物）的ROC曲线0.71。此外，血清DCA水平越低，GBC越具有侵袭性，表现为肿瘤块更大且Ki-67表达更强(图1d, e)。因此，血清DCA水平可能是GBC的潜在诊断生物标志物
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