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Circulation Research |器官特异性血管遗传靶向技术及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
5月15日，中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组在国际学术期刊Circulation Research上发表了题为“Genetic Targeting of Organ-Specific Blood Vessels”的最新研究成果。该项工作建立一套新的遗传操作系统以实现更加精确的遗传靶向，可用于基因敲除和过表达。 南模生物为该研究构建了顺序交叉遗传靶向工具小鼠模型。 到目前为止，遗传靶向工具主要依赖于Cre-LoxP同源重组系统以解决细胞示踪问题，进行基因功能研究。该系统的精度在很大程度上取决于驱动Cre的启动子或基因表达的特异性。也就是指，如果将Cre表达元件插入到A基因中，那么在表达A基因的细胞中可以发挥Cre重组作用。而A基因往往并不能特异性地只在某种特定器官或组织中表达，所以这种传统方法具有固有的局限性。 例如：研究血管常用的遗传工具鼠有VE-cad-Cre、Tie2-Cre等，然而这些工具鼠标记的是所有的内皮细胞，而无法精确地研究特定组织器官的血管。不同器官的血管在结构及功能上是异质性的。不同器官的内皮细胞在损伤反应中的作用都是独特的。因此，如何提高遗传靶向的精度，开发组织特异性Cre工具鼠，对于研究特定细胞类型在某一种器官形成及再生过程中的深入功能研究具有重要意义。 在这项最新的研究中，研究人员精妙地利用Cre-loxP和Dre-rox两套系统，互相排他的重组系统进行顺序交叉遗传靶向操纵，实现精确地遗传靶向器官特异性的血管。 核 心：顺序交叉遗传靶向操纵系统 两个要素： 两种不同的启动子分别来驱动Dre和Cre —— A-Dre 和 B-CrexER（下图B）。 A-Dre：通过 knockin 方式，将 Dre 插入到 A基因座中，使 Dre 的表达与 A基因的表达谱一致。 B-CrexER：通过 knockin 方式，将 CrexER 元件插入到 B基因座中。CrexER是一种新型的诱导型工具鼠——将两个rox位点分别放置于雌激素受体（ER）的两侧，即Cre-rox-ER-rox。 按照这个顺序交叉靶向系统的设计（下图C），一般情况下，Cre-ER融合蛋白停留在细胞质中，无法入核进行
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粽子食品微生物检测方案说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
端午马上又要来了，又到吃棕子的时候了，各式各样的粽子已讲上市，粽子 是一种水分高、原料杂、做工较复杂的食品， 容易出现食品安全问题， 需要引起警惕。 为保障端午节期间人民群众能够吃到安全放心的粽子，各地食药局每年都会在端午节前进行粽子抽检，保障民众食用安全。由此，环凯公司列出粽子食品微生物检测专项检测推荐方案，助于开展监督检测工作，提高检测工作的高效性，便利性，及检测的准确性。保障粽子质量安全，为食品安全，保驾护航。 粽子微生物检测项目 菌落总数；大肠菌群；霉菌；沙门氏菌；金黄色葡萄球菌。 国家标准规定 根据《中华人民共和国商业行业标准 粽子》（SB/T 10377—2004），速冻粽子和新鲜类粽子需检验菌落总数、大肠菌群、霉菌总数及其它致病菌（系指肠道致病菌及致病性球菌），而真空包装类粽子的微生物指标应符合罐头食品商业无菌的要求。此外，《食品安全国家标准 速冻面米制品》（GB 19295—2011）对速冻粽子的菌落总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的限量都有相应规定。具体限量要求如下： SB/T10377—2004新鲜、速冻类粽子微生物指标 项 目 指标 新鲜类 速冻类 菌落总数（cfu/g） ≤50 000 ≤10 000 大肠菌群（MPN /100g） ≤110 霉菌计数（个/g） ≤50 致病菌（系指肠道致病菌及致病性球菌） 不得检出 GB19295—2011熟制品的微生物限量 项目 采样方案a及限度（若非规定，均以CFU/g表示） 检验方法 n c m M 菌落总数 5 1 10000 100000 GB4789.2 大肠菌群 5 1 10 100 GB4789.3平板计数法 金黄色葡萄球菌 5 1 100 1000 GB4789.10平板计数法 沙门氏菌 5 0 0/25g -
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真空抽滤装置的组成和的作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
真空抽滤装置是一种用于实验室减压过滤的仪器。一般来说过滤可以起到截留颗粒物、澄清滤液、除菌、固液分离、脱气、脱泡等目的。而真空抽滤则是在抽滤瓶的中间是用滤膜，滤膜将抽滤瓶分为上下两部分，上部盛装待过滤液体、下部盛装过滤后的滤液，由于滤膜会对液体的通过产生极大阻力，造成滤速变慢或者液体无法有效通过，所以所谓的真空抽滤就是将抽滤瓶连接真空泵，降低滤膜下方瓶体的真空度，使外界空气推动滤杯内的样品通过滤膜。所以真空抽滤是一套比较完整的系统，有多个部件组成，缺少任何一个部分都会影响仪器正常使用，下面以配置齐全的R300SS这款真空抽滤装置为例，简要介绍各个组成部分和作用： 1.真空抽滤泵：配置R300无油真空抽滤泵，无油泵是一种连接电源后直接可以用的干式真空泵。抽滤泵的进气端带有真空调节阀，真空调节阀带有真空表便于观察仪器工作状态，并根据需要调节压力和抽速。很多客户在购置抽滤装置时会咨询是都必须购买抽滤泵，由于滤膜、滤纸、滤布或者是滤网的孔径细小，会对液体通过产生很大阻力，造成液体无法有效通过滤膜，抽滤泵可以将抽滤瓶内部和外界形成压差，从而让外界空气快速推动滤液通过滤膜，不使用抽滤泵液体只能自然渗透过滤膜，一滴滴的滴入集液瓶。所以抽滤泵是必备件。 2.滤杯：盛装带过滤的液体，一般尽量选择带刻度线的杯子会更加方便。 3.自动吸液杯盖：用户只需要使用软管将其中一端连接在自动进液接口，另一端放入待过滤的滤液中，打开开关后滤液自动吸入滤杯开始过滤，不需要再手动倒入样品，操作方便。 4.滤膜放置基座：用于防止过滤膜，一般要求表面平整，不会划伤滤膜，和过滤杯连接尽量简单，不需要使用卡箍或者夹具。 5.抽滤瓶：用于盛装过滤结束后的滤液或废液。R300S真空抽滤装置的抽滤瓶底部设计有快速排液口，过滤结束后，不需要拆除抽滤瓶再倒出滤液，只需要松开底部配液口的夹具就可以快速排液，甚至可以变抽滤边排液。提高效率，
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细胞周期检测方法介绍大全Molecular Devices
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
细胞周期是一个重要的检测参数，对细胞周期变化的影响对于肿瘤的发展及药物研发有着重要的作用。例如，已知抑制有丝分裂的化合物大都用来减缓肿瘤细胞的生长。 细胞周期内有两个阶段最为重要：G1到S和G2到M；这两个阶段正处在复杂活跃的分子水平变化的时期，容易受环境条件的影响，如果能够人为地进行调控，将对深入了解生物的生长发育和控制肿瘤生长等有重要意义。如果能够方便有效地检测细胞周期的变化，对于药物研发和疾病研究等都会具有重要的意义。 FUCCI细胞周期标记物标记后与细胞周期变化关系。表达Cdt1-RFP红色为G1期，表达Geminin-GFP绿色为G2/M期，同时表达Cdt1-RFP红色和Geminin-GFP绿色的为S期。 测定细胞周期的方法有： ●同位素标记法 ●流式细胞仪法 ●基于细胞成像的荧光检测法等 我们整理的《细胞周期检测方法》手册详细介绍了常见的几种检测方法及原理，其中利用MD的MiniMax系统及高内涵成像分析系统基于成像的高通量检测方法更是可以结合2D及3D的检测手段，更精确的模拟癌症细胞在体内的生物学状态和有效评估新的抗癌策略。
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细胞周期的四种检测方法详解
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。细胞周期是一个重要的检测参数，研究细胞周期变化的影响对于肿瘤的发展及药物研发有着重要的作用。例如，已知抑制有丝分裂的化合物大都用来减缓肿瘤细胞的生长。 细胞周期内有两个阶段最为重要：G1 到 S 和 G2 到 M；这两个阶段正处在复杂活跃的分子水平变化的时期，容易受环境条件的影响，如果能够人为地进行调控，将对深入了解生物的生长发育和控制肿瘤生长等有重要意义。能够方便有效地检测细胞周期的变化，对于药物研发和疾病研究等都具有重要的意义。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。 那么，细胞周期的测定如何进行的呢？测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、流式细胞仪法、基于细胞成像的荧光检测法等。 一、同位素标记法测定细胞周期 标记有丝分裂百分率法 (PLM) 是一种常用的测定细胞周期时间的方法。其原理是对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。 测定原理： ① 待测细胞经 3H- 胸腺嘧啶核苷标记后，所有 S 期细胞均被标记。 ② S 期细胞经 G2 期才进入 M 期，所以一段时间内 PLM = 0。 ③ 开始出现标记 M 期细胞时，表示处于 S 期最后阶段的细胞，已渡过 G2 期，所以从 PLM = 0 到出现 PLM 的时间间隔为 G2期的持续时间。 ④ S 期细胞逐渐进入 M 期，PLM 上升，到达到最高点的时候说明来自处于 S 最后阶段的细胞，已完成 M，进入 G1 期。所以从开始出现 M 到 PLM 达到最高点 (≈ 100%) 的时间间隔就是 M 期的持续时间。 ⑤ 当 PLM 开始下降时，表明处于 S 期最初阶段的细胞也已进入 M 期，所以出现 LM 到 PLM 又开始下降的一段时间等于 S 期的持续时间。 二、流式细胞仪 PI 染色法 细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间
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ImageXpress Micro高内涵3D细胞球成像检测手册
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
一、概述 1 当前细胞培养和观察的常用方法 十九世纪起，当显微镜出现后，人们就开始尝试对细胞结构进行观察，并在二十世纪发展出细胞的培养技术。单层细胞的培养相对方便，而且商业化的显微镜非常适合于平面的、薄样品的观察，所以，在二十世纪的中后期，人们普遍采用 2D 的细胞培养方法，进行生物学的研究，以及进行药物的筛选、开发和疾病**的研究。 2 2D 和 3D 细胞培养及对细胞的影响 通常，2D 细胞培养不但被用来在体外研究不同类型的细胞，还被用来进行药物的筛选和评价等各个方面。这种单层的培养体系使细胞生长于聚酯或玻璃的表面，同时存在的培养液能够给细胞生长提供养分。无数的生物学家通过这种方式极大地推动了生物学和医学进展。 然而，其简单的操作方法也造成了这种模式无法准确的描述和模拟细胞在体内复杂的微环境和各种复杂生物学过程，如细胞信号传递，生化过程或几何学改变。另外通过 2D 细胞培养方法获得的数据应用于体内也会造成一些误导和不可预测性。这些原因促使很多科学家将目标转向了 3D 细胞培养技术，一种在体外能够更加准确描述细胞真实微环境的方法。细胞在体外三维环境下生长产生特殊的生物物理和生物力学信号，这些都会影响到细胞的功能，如细胞迁移、细胞粘附、增殖和基因表达等 ( 如下图 )。 我们知道，有多种不同的 3D 细胞培养方法，不同的方法有着各自的优点和缺点。与 2D 培养不同，3D 细胞培养具有微小结构的形成和复杂的环境特征，能够促进细胞的分化和组织形成。实际上，相比较于生长于 2D 环境，在 3D 环境中细胞能够承受更多的形态学和生理学变化。有研究发现，细胞基底的成分和结构不但能够影响基因表达，还能增强细胞间联系。如有些促进细胞增值的基因在 3D 培养环境下受到抑制，从而不会像 2D 培养下那样无限生长。3D 细胞培养还会促进共培养环境下的两种不同细胞群体的生长，从而能够准确重现组织功能。另外，3D 培养技术能够使细胞微环境参数 ( 温度、化合物浓度
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如何阅读基因载体图谱
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
基因载体是基因工程的核心，也是基因**中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体或是细胞培养中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。用于基因**和疫苗的病毒载体应具备以下基本条件： （1）携带外源基因并能包装成病毒颗粒； （2）介导外源基因的转移和表达； （3）对人体不致病； （4）在环境中不会引起增殖和传播。 非病毒载体一般是指质粒DNA。 2、按进入受体细胞的类型分类：原核载体、真核载体、穿梭载体（含原核和真核2个复制子，能在原核和真核细胞中复制，并可以在真核细胞中有效表达）。 3、按功能分类：克隆载体、表达载体 克隆载体：具有克隆载体的基本元件（Ori，Ampr，MCS等），可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并克隆和大量扩增DNA片段（外源基因）的载体。 表达载体：克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA顺序）有关的元件即成为表达载体。 载体组成元件 1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 3、多克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段，它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。还要再看
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最新云序生物m6A“RNA甲基化”研究汇总—癌症篇
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
一个月发表30多篇10分以上的文章，到底是何方神圣？答案：RNA甲基化。今天小编先来介绍一下m6A RNA甲基化。 m6A是真核细胞中mRNAs丰度最高的甲基化修饰，在包括组织发育、干细胞自我更新和分化、热休克以及DNA损伤应答，母本合子(maternal-to-zygotic)转化等多个重要的生物学过程中扮演重要角色。作为m6A的Writer，MTC（m6A methyltransferase complex，m6A甲基转移酶复合物，METTL3, METTL14, WTAP以及有待确认的VIRMA，RBM15）可以催化甲基化过程，相反Eraser（包括FTO，ALKBH5)可以催化去甲基化过程。发生m6A甲基化的mRNA要依赖于Reader蛋白来识别甲基化位点从而影响其稳定性、剪切行为以及靶标mRNA的蛋白翻译。考虑到m6A在正常生物学过程当中的重要意义，m6A甲基化修饰水平调控的紊乱也会导致疾病的起始、发展和耐药等问题的出现。云序生物为您带来最新m6A研究汇总，囊括了最新有关m6A生物学功能研究的重要成果，今天为您带来该系列的癌症篇，和您一同回顾m6A在癌症领域的最新研究进展。 图1：m6A 修饰机制相关总结示意图（doi:10.1038/s41422-018-0034-6） 1. Cancer Cell: m6A调控GSC成瘤性与细胞增殖系统 IF：27.407，2017.4.10 Cancer Cell报道芝加哥大学何川教授有关m6A与GSC（Glioblastoma Stem-like Cells）成瘤与细胞增殖的最新研究，ALKBH5在GSC中通过调控下游分子FOXM1来调控GSC的自我更新与成瘤能力。实验表明，ALKBH5的高表达预示着GBM（胶质母细胞瘤）病人的不良预后，其主要机制是通过ALKBH5的去甲基化活性让下游分子FOXM1初生转录本去甲基化从而提高其蛋白表达。此外，非编码RNA分子FOXM1-AS可以增强FOXM1新生转录本和ALKBH5的相互作用，从而间接调控GSC的自我更新和增殖系统。体内体外实验表明敲除FOXM1-AS和ALKBH5均可以影响与FOXM1分子相关的GSC成瘤性。该研究揭示了RNA m6A去甲基化酶ALKBH5和m6A在胶质母细胞瘤中的重要作用。 图2：ALKBH5调节GSC的成瘤性和增殖系统 2. Cell: FTO/m6A/MYC/
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云序生物最新m6A“RNA甲基化”研究汇总—病毒篇
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
RNA甲基化领域是当前最耀眼的国际科研明星，也是国自然申请的大热点；究其原因，是因为最近一两年，RNA甲基化的功能与分子机制方面取得了巨大的进展。RNA甲基化已被证实在癌症发生发展，病毒感染，神经发育，干细胞分化等过程中发挥着关键作用。今天，我们承接上一期的癌症篇，为您带来病毒领域的RNA甲基化研究进展。 1.Nature Immunology：DDX46影响抗病毒RNA的去m6A甲基化，抑制细胞的抗病毒免疫应答 影响因子：21.5，2017.8.28 中国医学科学院联合上海第二军医大学团队证实RNA解旋酶DDX46通过RNA去甲基化修饰，抑制水泡型口炎病毒（VSV）的天然免疫应答。那为什么作者会锁定DDX46来做研究呢？因为大多数DDX家族成员参与mRNA剪接，其中有三个成员（DDX1，DDX3和DDX41）作为胞质感受器还参与了抗病毒的天然免疫反应。于是，作者希望能够找到其它参与mRNA剪接且在核内影响宿主抗病毒反应的DDX家族成员。作者将DDX家族的7个成员（DDX5，17，23，39，42，46和48）作为候选，应用siRNA敲低其表达，发现只有敲低DDX46表达才能显著增加VSV病毒感染后干扰素的产生。为进一步揭示DDX46功能，作者应用CLIP测序，发现DDX46与抗病毒基因（Mavs，Traf3和Traf6）通过与共有保守结构域CCGGUU结合而起作用。在分子机制上，作者以去甲基化酶ALKBH5为研究对象，应用RIP测序，发现感染病毒后细胞核内DDX46与ALKBH5结合显著增加，使得与DDX46结合的抗病毒效应分子mRNA发生去甲基化修饰，导致复合物在核内滞留，抑制了抗病毒效应分子蛋白的表达，从而降低干扰素产生，最终抑制抗病毒天然免疫应答反应。 图1. RIP测序检测感染DDX46与ALKBH5结合的增加 2. Nature Microbiology：HIV病毒感染促进自身及宿主淋巴细胞的m6A RNA甲基化 2016.2.22 同样来自Nature的子刊，加州大学圣地亚哥医学院Tariq团队利用HIV感染CD4淋巴细胞（该细胞为艾滋病病毒的主要攻击对象），在病毒感染增殖期（感染后第3天）取样进行实验。作者应用m6A RNA甲
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土壤、肥料、植株养分快速定量检测仪特点
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
土壤检测项目：土壤中铵态氮、硝态氮、速效磷、速效钾、有机质、全氮、PH值、水分、碱解氮等九项；中微量元素（钙、镁、硫、铁、锰、锌、铜、硼、氯、硅、钼）；重金属（铅、铬、镉、汞、砷、镍、铝、氟、钛、硒）。 肥料检测项目：单质化肥中的氮、磷、钾；复（混）合肥及尿素中的铵态氮、硝态氮、磷、钾、缩二脲；有机肥中速效氮、速效磷、速效钾、全氮、全磷、全钾、有机质，PH、各种腐植酸、微量元素（钙、镁、硫、铁、锰、锌、铜、硼、氯、硅、钼）、重金属（铅、铬、砷、汞、镉）等。 土壤测试速度：可测干土和鲜土，公司研制的联合浸提剂3分钟即可完成氮磷钾的浸提，平均测试单个土样氮磷钾三个项目（含前处理时间）
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知识分享：维真 Cre-loxP 重组系统腺相关病毒产品说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
一．Cre-loxP重组系统作用原理 Cre重组酶和loxP位点 Cre重组酶（Cyclization Recombination Enzyme）由大肠杆菌噬菌体P1的Cre基因编码，是由343个氨基酸组成的38kD的蛋白质。它不仅具有催化活性，而且与限制酶相似，能够特异性识别loxP位点。 LoxP（locus of X-overP1）位点长为34bp，包括两个13bp的反向重复序列和一个8bp的间隔区域。其中，反向重复序列是Cre重组酶的特异识别位点，而间隔区域决定了loxP位点的方向。 图1. Cre重组酶和loxP位点 （http://2012.igem.org/Team:Tsinghua-A/Project/Design） Cre-loxP重组系统诱导基因重组的方式 Cre-loxP系统存在几种诱导重组的方式，这是基于Cre重组酶与loxP位点的相互作用而实现的。 当基因组内存在loxP位点时，一旦有Cre重组酶，便会结合到loxP位点两端的反向重复序列区形成二聚体。此二聚体与其他loxP位点的二聚体结合，进而形成四聚体。随后，loxP位点之间的DNA被Cre重组酶切下，切口在DNA连接酶的作用下重新连接。重组的结果取决于loxP位点的位置和方向。主要存在几下几种重组方式： 两个loxP位点位于同一条DNA链上且方向相同，Cre重组酶敲除loxP间的序列； 两个loxP位点位于同一条DNA链上且方向相反，Cre重组酶诱导loxP间的序列翻转； 两个loxP位点位于不同的DNA链或染色体上，Cre重组酶诱导两条DNA链发生交换或染色体易位； 四个loxP位点分别位于两条DNA链或染色体上，Cre重组酶诱导loxP间的序列互换。 图2. Cre-loxP诱导基因重组的方式 （https:///search/rolling%20circle%20replication） 二．维真 Cre-loxP重组系统的AAV载体构建和病毒包装服务 Cre-loxP重组系统AAV载体 Cre-loxP重组系统 腺相关病毒 Cre重组酶诱导表达的FLEX-ON系统 Cre重组酶反式剪接系统 依赖Cre重组酶诱导表达的FLEX-ON系统 结合组织
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知识分享：AAV在肺部的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
腺相关病毒（AAV）属于依赖病毒属，细小病毒亚科，是一类自然缺陷的单链DNA病毒。野生型AAV基因组约4.7kb，含有rep和cap基因以及两端的ITR序列。尽管人类对AAV易感，但临床还并未发现与AAV相关的疾病。根据AAV衣壳蛋白基因的变异，可将AAV分为不同的血清型。不同血清型的AAV具有不同的组织特异性。将兴趣基因取代rep和cap基因构建一个两段带有ITR的载体，并将rep和cap置于一个独立的载体上，加上带有腺病毒辅助基因载体，便可包装出带有兴趣基因的重组腺相关病毒（rAAV）。 目前rAAV已被广泛作为基因转导载体使用，rAAV在人体实验中的安全性也已被证实。早在1996年，科学家们就选择肺作为rAAV的第一个靶向实验器官。下面我们旨在介绍rAAV在肺部实验中的启动子、血清型的选择，及其小鼠肺部的AAV注射方法。 启动子的选择 根据不同的注射方式和实验目的，可选择不同的启动子以提高肺部表达效率。CMV在启动真核基因表达方面具有极高的效率，可高效感染小鼠肺部；CAG同样具有出色的感染气道的能力。 血清型的选择研究表明，针对肺部感染rAAV在血清 研究表明，针对肺部感染rAAV在血清型上的选择根据动物模型的不同而存在差异，主要体现在小鼠及较低等灵长类动物与高等灵长类动物中之间。 在小鼠及一些较低等的灵长类动物中，AAV5及AAV6是感染肺部的最佳选择。 血清型 感染表面 感染部位及水平 受体 rAAV2 基底层远大于表层 气道细胞：低水平或无 肺泡细胞：低水平或无 支气管上皮：低水平或无 气道平滑肌：中等水平 硫酸肝素（Heparin Sulfate） rAAV5 基底层大于表面层 气道细胞：中等水平 肺泡细胞：中等水平 PDGFR，2-5联唾液酸受体 rAAV6 表层 气道细胞：中等水平 肺泡细胞：高等水平
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单核细胞增生李斯特氏菌核酸检测试剂盒（一管式PCR-荧光探针法）使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
单核细胞增生李斯特氏菌核酸检测试剂盒（一管式PCR-荧光探针法） ◆ 产品说明 致病菌检测系列可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于单核细胞增生李斯特氏菌的检测。检出限为103 CFU/ml。 ◆ 产品组成（96测试） 011062LⅡ 试剂 含量 A-LM-P 20μL × 8管× 12排 NG-P 100μl× 3支 PG-LM-P 100μl× 2支 ◆ 适用仪器 ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600等实时荧光PCR仪。 ◆ 自备耗材和仪器 ①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属浴；⑥均质机、搅拌机或研钵等研磨器具；⑦电子天平。 ◆ 注意事项 1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。 1）第一区：样本制备区。 2）第二区：模板添加区。 3）第三区：扩增及产物分析区。 ★ 分区之间**进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。 2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。 3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。 4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。 5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。 6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。 ◆ 样品处理 参照 《GB 4789.30-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》中的5.1处理样品，对样品进行前增菌，制备的菌液保存待用。 以无菌操作取样品25 g（ml）加入到含有225 ml LB1 增菌液的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1 min～2 min；或放入盛有225 ml LB1 增菌液的均质杯中，8000 r/min～10000 r/min 均
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基于Naica 数字PCR平台三色检测Her2基因拷贝数变异
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
人表皮生长因子受体2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2，HER2）检测是预测HER2靶向疗法（如曲妥珠单抗）潜在效果的生物标志。 为了提高HER2检测有效性和临床实用性，美国临床肿瘤学会（American Society of Clinical Oncology，ASCO）和美国病理学会（College of American Pathologists，CAP）HER2检测专家组于2007年首次发布了推荐意见，并于2013年做出了更新。 随着临床应用的增多，逐渐出现了一些新问题，如部分实验室和临床研究者报告了2013年指南更新对实验室检测和临床实践的影响，并且观察到不少检测结果模棱两可、难以解读的案例。 针对临床应用中的相关问题，ASCO和CAP乳腺癌HER2检测专家组对2013年指南做出了更新，并于2018年5月30日在线发表于ASCO官方期刊《Journal of Clinical Oncology》。 · 如何更加精准的定义免疫组化HER2检测结果为2+？ 按照最新指南意见，免疫组化中HER2+被定义为＞10%的浸润性乳腺癌细胞呈现完整的细胞膜弱至中等程度着色。详见图1。通过Naica crystal数字PCR平台的三色荧光通道检测Her2基因拷贝数变异
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怎样在一个细胞培养室保持安全
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
研究工作场所，包括细胞培养实验室，都充满潜在的危险，可能对个人和环境造成严重伤害或损害。因此，安全是非常重要的。研究人员的职责是了解细胞培养实验室的安全性，并在开始任何研究工作之前评估和实施所需的安全措施。 细胞培养实验室的安全提示 1.在细胞培养实验室进行任何活动之前必须进行风险评估。 2.确定要实施的操作类型和是否需要大容量培养基的情况，要根据不同的情况来减少生物危害的风险。 3.限制人员和设备进出实验室。 4.确保工作区域整洁。 5.正确标记试剂并妥善保存。 6.在移液、刮取和倾倒时避免快速移动。 7.人类细胞必须从与实验无关的个体中获得。 8.严格的控制和规范是转基因生物（GMOS）产生和利用的必要条件。 9.必须进行培养废物、工作台面和设备的消毒或净化，这是将危害的风险降到的重要手段。 10.如果可能的话，的废物都应该被焚化和高温高压消毒。 来自Esco的友情提醒： 安全工作，安全生活。 为您提供满足您安全需求的一站式解决方案。 Learn more Request for quotation Email us 为您的细胞培养实验室购置我们的产品！ Biological safety cabinet CO2 incubator Centrifuge 生物安全柜 CO? 培养箱 离心机 参考文献： Public Health England – Culture Collections. (n.d.). Fundamental Techniques in Cell Culture: Laboratory Handbook, 3rd ed. Retrieved 30 January 2017 from Public Health England website: https://www.phe-culturecollections.org.uk/media/101902/fundamental-techniques-in-cell-culture-3rd-edition.pdf
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