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主被动回避实验原理及方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
主被动回避实验方法 一.实验原理 主被动回避实验是利用动物的好暗避光（明暗穿梭）、对厌恶刺激（如足电击）的恐惧和记忆而建立起来的。所以对实验者（而不是对动物）而言，回避实验在技术上与暗示关联条件恐惧相类似。所用的刺激为温和的足电击，发生的反应是动物逃避曾经受到电击刺激的地方。根据动物的逃避方式分为主动回避和被动回避（active and passive avoidance）。前者要求动物主动从有厌恶刺激的箱中逃离；后者则要求动物遏制自己而不进入有厌恶刺激的箱。根据所用仪器设备的不同又可分为穿梭回避、跳台回避、Y-形迷宫回避。这里主要介绍前两种回避。 二.实验设备 （一）穿梭回避实验设备 包括穿梭箱、刺激控制器和计算机(上海欣软信息科技有限公司生产的穿梭箱最具代表性)。它包括左右两个同等大小（20.3cm*15.9cm*21.3cm）的隔室（compartment）。其中一隔室用一黑色布套包裹，形成暗箱（主动回避可不用暗箱）。两隔室之间由一个拱形门（8.9cm*11.4cm）相联，门可由实验者根据实验需要关上或打开。隔室地板为不锈钢栅栏（直径：大鼠4.8mm，小鼠3.175mm）。暗箱一侧的栅栏地板与刺激器相联，并可给予电击；明箱一侧则不与刺激器相联，故没有电流通过。 （二） 跳台回避实验装置 将上述穿梭箱的中门移去，代之以一个平台（可随Med Associates穿梭箱配套），即可改装成跳台回避实验装置。这里介绍上海欣软信息科技有限公司生产的跳台回避装置。它包括一个15cm*25cm*10cm的透明有机玻璃跳台箱、一个隔音外箱（48cm*62cm*24cm）和一台脉冲电刺激器组成。跳台箱底部的栅栏与刺激器相联，中央固定一个3.5cm*3.5cm*2.5cm的木制平台。实验时，将跳台箱放入隔音箱内，以防外界干扰。 三.实验方法 （一）小鼠穿梭被动回避实验（mouse step-through passive avoidance） 1．单次电击刺激训练 （1）将小鼠放入明箱，10s后，将明暗箱之间的门打开。多数品系的小鼠有很强的探究行为，喜暗恶光。因此，小鼠会很快
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一次性搅拌生物反应器的特点及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
工艺开发与控制（质量属性和关键工艺控制）的有效工具 在过去十年中，一次性生物反应器已被广泛接受作为替代传统的不锈钢或玻璃生物反应器，应用于药物生产和工艺开发。在生物制药行业，玻璃生物反应器主要应用于工艺开发和优化，也会作为工艺参数确证的比例缩小模型。所以无论是重复性还是一次性反应器，重现生产规模反应器的设计特征对实现上游目的具有极其重要的意义。2-L，5-L和10-L工作体积的搅拌式生物反应器已在整个行业中获得了广泛的认可与接受。其中，2-L体积反应器是工艺开发的主要设备，作为代表性的比例缩小模型，这类反应器易于操作，且具有足够大的取样体积。 提高药物开发效率 工艺开发期间的时间表和工作量可能会发生显著的改变。在整个工艺开发周期内一直保持足够可用的实验反应器数量也是一个不小的挑战。对玻璃容器进行清洁、安装以及高压灭菌等操作都需要占据实验人员额外的时间和精力，使他们陷于日常的维护，而无法执行其它更有价值的工作。对工艺开发实验室而言，增加一次性反应器可以与玻璃容器互换使用，在实验高峰或维护期提供了显著的灵活性，使得生物反应器控制器的停机时间降低至了最少。 表1对比了玻璃和一次性反应器，预计一次性生物反应器的控制器运行时间比玻璃反应器提升25%。如果不使用一次性反应器，则需要增加玻璃反应器的数量以达到同样的主机使用率；不过这样做需要付出更多的改变和成本。此外，当使用微载体时，一次性生物反应器能够避免麻烦且有害的硅化操作。一次性台式生物反应器从根本上减轻了实验室工作人员的日常维护工作，就如20年前在哺乳动物细胞培养中引进一次性摇瓶一样。 模拟成熟玻璃反应器的设计 玻璃生物反应器已被使用了数十年，且 已被证明是不锈钢和最新的大规模一次性搅拌反应器可靠的比例放大和缩小模型。UniVessel®一次性培养容器模拟了传统玻璃台式生物反应器的设计，以确保新获取的数据与以前使用玻璃 系统时所获得的数据具有可比性。每台设备交
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闪式提取器原理及技术参数讲解
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
★★★★★★★★编辑：西安市碑林区洪辰水热设备供应部 一、 闪式提取器的释义 闪式提取器是一种用于植物软、硬材料快速提取的新型提取器。依靠高速机械剪切力和超动分子渗滤技术，在室温及溶剂存在下数十秒钟内把植物的根、茎、叶、花、果实等物料破碎至细微颗粒，并使有效成分迅速达到组织内外平衡，通过过滤达到提取之目的。 二、闪式提取器的优势 该仪器能最大限度保护植物有效成分，不会受热破坏，溶剂用量小，提取时间短，效率高，且刀具耐磨，结构紧凑，使用安全可靠。 三、闪式提取器特点 1、快速高效 1分钟内即可完成对容器内物料的彻底提取。 2、常温提取 该仪器在常温下于适当溶剂中工作，避免了有效成分因受热而遭到破坏。 3、适用广泛 ① 适用于植物的根（饮片）、茎（饮片）、叶、花、果实等各个部位的快速提取。 ② 适宜于多种溶剂。除乙醚等易燃易挥发溶剂外，可根据所需有效部位或化学成分，直接选用丙酮、乙醇、甲醇、冷热水等作为溶剂进行提取，使工艺流程更加简单方便。 ③ 可单品提取，也可多品种混合提取。 4、节能降耗 该型号电机功率1800瓦，完成一次提取所需时间只有一分钟，与回流提取相比，单位能耗显著降低，从而降低了研究和生产成本。 四、提取方法的收率比较 五、各种提取方法的比较 提取方法 主要优点 主要缺点 煎煮法 经济、安全、易行 选择性差、成分易破坏、后处理困难 回流法 选择性好、收率较高 受热长、效率低、成分易破坏 浸渍法 简单、投资小、安全 效率低、耗时长、易变质 蒸馏法 选择性强、处理方便 适用范围小、需专用设备 渗漉发 室温、简易、节能 费时、有污染 连续回流法 省溶剂、效率高 需有机溶剂、受热时间长、规模小、成分易破坏 超临界萃取法 近室温、安全、收率高 设备复杂、投资大、规模小 超声提取法 近室温、安全、收率高 投资大、规模小、较
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立式高压灭菌锅常见故障及处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
本文以自控型立式高压灭菌锅为例，就立式高压灭菌锅在使用过程中出现的常见故障进行分析并提出相应的故障处理办法及预防措。常见的故障有：加热功能失灵、水位器工作异常、联锁灯不亮、漏气、安全阀工作异常、无法正常排气、排液等。 （1）仪器使用时，加热功能失灵导致无法正常产生蒸汽。仪器运行时，面板上加热指示灯亮，但温度指示不上升，一直维持室温状态。 处理方法：打开仪器侧盖，面板显示正常表明220V 电源正常进入控制电路。将与加热管连接的电线拆下，用万用表检查加热管电阻，一般阻值在8~15Ω 之间，如阻值过大表明加热管内部断路，须更换。由于加热管烧坏是有原因的，所以无论第一步排查出加热管好坏与否，都应检查控制加热管的固态继电器。在通电情况下，其继电器输入电压应在12VDC 左右，输出电压应在220VAC 左右。如果输入正常、输出异常，则须更换此继电器；如果输入异常，须检查控制电路上的负载输出控制部分。一般常见的情况就是以上两种。 （2）仪器使用时，水位器工作异常。仪器一开机，控制电路就对水位器进行检查。控制面板上有“高水位”、“低水位”、“缺水”三个指示灯，正常使用时应保持水位在高水位，即“高水位”指示灯亮。如果在加入足量水的情况下水位灯不亮或一直是“缺水”灯亮并报警，则表明水位器工作异常。处理方法：打开仪器侧盖，先检查水位器与控制电路连线是否松动；用扳手旋开水位器上的旋盖，取出水位器，检查三个探针是否生锈，可用酒精棉进行去锈处理。在通电情况下，将三个探针依次与水位器外部钢管短接，检查控制面板水位指示灯工作是否正常。如正常表明水位器无损坏；反之须检查控制电路上水位控制电路；处理完毕后装好水位器，接通电源，加水检查指示灯。一般主要是由于水位器接线接触不良或探针表面生锈造成工作异常。 （3）联锁灯不亮，仪器不正常加热。联锁灯由仪器上盖处的联锁按钮、联锁杆及联锁控制器串联后与控制电路相连起到联锁保护功能。在仪器上盖关闭情况下
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高压反应釜的清洗方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
高压反应釜一般采用超声波清洗那么下来我们来讲讲具体的清洗流程： 1.高压反应釜要在指定的地点使用，并按照使用说明进行操作。查明刻于主体容器上的试验压力、使用压力及最高使用温度等条件，要在其容许的条件范围内进行使用。 2.高压釜属于精密设备，通过密封环采用锥面相接触密封形式，借拧紧主螺栓使他们相互压紧而达到密封的目的。必须对密封锥面特别加以爱护，避免各种碰撞而导致其损坏。在装盖时，先放置好反应釜釜体，然后将釜盖按固定位置，小心地装在釜体上，在拧紧主螺栓时，必须按对角，对称地分多次逐步拧紧，用力要均匀，不允许釜盖向一边倾斜，以达到良好的密封效果，不可超过规定之拧紧力矩，以防密封面被挤坏或加速磨损。 3.压力计所使用的压力，**在其标明压力的1/2以内使用。并经常把压力计与标准压力计进行比较，加以校正。 4.氧气用的压力计，要避免与其它气体用的压力计混用。 5.安全阀及其它的安全装置，要使用经过定期检查符合规定要求的器械。 6.操作时必须注意，温度计要准确的插到反应溶液中。 7.高压反应釜内部及衬垫部位要保持清洁。 8.盖上盘式法兰盖时，要将位于对角线上的螺栓，一对对的依次同样拧紧。 9.测量仪表破裂时，多数情况在其玻璃面的前后两侧碎裂。因此，操作时不要站在这些有危险的地方。预计将会出现危险时，要把玻璃卸下，换上新的。
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揭示物相鉴定中元素判定的重要性
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
X射线衍射是物相鉴定的最佳方法，是不是所有的晶体物质都可以通过衍射准确无误的鉴定出来？ 并不尽然，世界上的物质很难获得纯物质，该物质由于生成环境所致，均或多或少的进入其它溶质元素，并与其化合，所生成的物质难以找到标准数据，但是他又接近某些标准物相，因而给出错误的物相鉴定结果，同时，测量条件、样品制备条件、环境的变化都有可能让同一个物质产生不同的衍射谱图，从而形成误检。 如果没有化学判据，根本无法发现这一错误！ 元素判据可以避免由于元素不同和测量条件不同引起的误检错误。而实际的检测中，对元素判据的手段提出了很多要求：测试全部元素、分析数据准确、分析速度快、样品制备方便、而且仪器价格便宜。 帕纳科Epsilon1 台式XRF能谱一体机可以一次给出样品中的所有元素的分析结果，分析准确度极高（查看数据），分析速度快（3分钟），样品制备极其方便（只是将样品放置在表面上即可）每个样品用衍射仪测试出衍射谱图，与此同时，采用E1能量色散谱仪获得元素信息，便可以防止发生错误的检索结果，使物相鉴定结果准确无误。 更多特殊物相实例，点击下载《X射线衍射物相鉴定与物相的元素组成》分析报告。 Epsilon1 台式XRF能谱一体机 - 样品种类广泛 - 横跨元素周期表的分析范围 - 配套工厂预校准Omnian无标定量软件 一键式操作，无需操作人员具备完整的XRF分析基础，即可得到准确的元素组成，为科研用户物相鉴定提供强有力的元素信息。 帕纳科是全球X射线荧光光谱（XRF）仪器及软件的主要供应商。产品广泛应用于材料的分析和表征，包括水泥、金属、矿业、玻璃、半导体、制药等领域。
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分子生物学相关实验步骤及注意事项（二）--反转录篇
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
——反转录篇—— 反转录PCR（Reverse Transcription, RT-PCR）又称为逆转录PCR，是指扩增mRNA的一种实验技术。先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。 （一）逆转录酶的种类 AMV：有较强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适42℃。在高反应温度时可消除mRNA的二级结构对逆转录的阻碍，然而高水平的RNA酶H的活性既抑制cDNA产生也限制其长度。 MMLV：有强的聚合酶活性，而RNA酶H活性较弱。较弱的RNA酶H活性对获得2-3kb的mRNA的全长cDNA有很大好处。最适37℃。 Super RNaseH- Reverse Transcriptase：MMLV反转录酶的RNase H-突变体，它能将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的模板合成较长的cDNA，最适42℃。（商品名为SuperScript和SuperScriptⅡ） GoScript Reverse Transcriptase：专为 qPCR 而设计，利用 M-MLV 和先进的缓冲液技术获得均衡稳定和可靠的 cDNA 合成结果，适合各种大小范围的低丰度和高丰度的转录子，即使存在抑制剂也不受影响。 根据很多实验人员的经验反映，Promega的反转录酶效果杠杠滴，本人用过TaKaRa的，也是不错哒！大家可以根据自身情况进行选择。 （二）引物的选择 反转录引物有多种选择，Oligo(dT)、随机引物、基因特异性引物（GSP）等。 用来进行反转录的引物及其常用的推荐浓度如下表所示： 引物 常用终浓度 调整范围 Oligo(dT)15 0.025µg/µl 0.01–0.125µg/µl Random Primer 0.025µg/µl 0.01–0.1µg/µl Oligo(dT)15＋Random Primer 0.025µg/µl each primer Each 0.01–0.1µg/µl Gene-specific primer 1µM 0.5–0.1µM （表格引用Promega公司的 GoScript 反转录系统操作方法说明书） （三）优化及注意事项 1. 逆转录PCR时，提取RNA是关键，需分离高
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慢病毒行业新标准——绝对定量滴度测定
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
绝对定量时代——引领慢病毒行业新标准 高大上的慢病毒是怎样炼成的（一） 慢病毒活性滴度用什么单位？ 看TU！看TU！看TU！ TU=transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。其他的VG/mL，VP/mL都是所有病毒颗粒数，死的活的都算上，一片虚假繁荣，请自由玩儿去！ 慢病毒活性滴度怎么标定最准？ 绝对定量！绝对定量！绝对定量！ 又绝对又定量的方法，准到不要不要的！再说了，这“绝对定量”是医疗级病毒产品的公认滴度检测方法，诺华、Juno，这些CarT大佬们都用！不准？不准的话FDA能认吗？ 复杂又昂贵的方法，为了准，咱们忍啦！ 1.标准品检定绘制标准曲线，精确定量病毒基因组DNA拷贝数 2.测定插入细胞基因组的5’LTR—3’LTR病毒基因组拷贝数 3.工具细胞 293T基因组中的病毒特征单拷贝基因A和宿主特征单拷贝基因B 4.TU=N*C/V=（初始细胞/感染病毒体积）×（2×A基因拷贝/B基因拷贝），计算感染效率 5.不要反转录，不要受RNA降解或反转录效率影响。 6.如果病毒有荧光或者抗性，再结合表型联合判断 准！准！准！重复性杠杠滴！ 处女座实验狗都无法抵抗的滴度标定方法！ 慢病毒滴度标那么准，有用吗？ 我！@#￥%&*…… 有人问我，为啥我的细胞用慢病毒一感就死？ 为啥我的细胞用慢病毒感染后会出现小黑点？ 很可能是，过感染啦！过感染啦！过感染啦！ 有木有先做预实验确定细胞的MOI？有没有根据病毒滴度准确计算病毒用量？ 越是高浓度高纯度的病毒，越是需要精确计算滴度，以避免感染不足或者过量感染，保证**的细胞状态，以继续下游实验，这样才能省时省力省病毒啊啊啊！！！ 最后，附赠感染预实验步骤详解，请叫我雷锋！ 吉凯基因引领慢病毒行业新标准——慢病毒活性标定从此进入新时代，不绝对定量的慢病毒，拜拜！ 长按加关注
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由左颈总动脉导管经肾动脉的大鼠肾脏无创伤给药法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验动物模型给药中有很多给药途径~但大多数都是全身给药，不但造成了贵重药物的浪费，而且也造成了没有必要的全身药物影响~ 肾脏疾病模型的**常用给药方法之不足： 1、尾静脉注入：尾静脉注入不能锁定靶向器官，显像差 2、肾实质注入：干细胞转移率不高 3、肾包膜下注入：药物吸收不好，干细胞转移不均匀 4、肾动脉注入：肾动脉直接穿刺注射后难以止血及造成肾动脉血管内膜损伤引起的肾动脉血栓等原因导致实验侧肾脏低灌注，甚至失去血供，导致实验失败 因此。根据大鼠的心血管解剖结构小编成功的建立了导管经左侧颈动脉直视下介入肾动脉注入药物及干细胞的方法，简便易行，手术时间短，成功率高，小编总结此方法特点：远距离插管，零距离给药。 先从影像学了解一下血管解剖结构吧... ... 上图由美国拜耳公司Perry Liu提供，赵桂锋标识 特殊材料的准备 PE10导管：外径 0.5MM内径 0.3MM尖端剪成 75°斜角，尖峰略向内弯。 手术方法： 腹部开口 腹部剑突下 1cm处向尾端背皮 6cm常规皮肤消毒，铺巾展单，沿腹中线分层切口肤和腹肌，开窗 2cm生理盐水温湿纱布将肠道推开，充分暴露腹主动脉从横隔膜至左肾动脉分叉处。 颈部开口 暴露左颈总动脉，远心端永久性结扎，留牵引线， 近心端穿线备用，颈动脉斜 剪一小口，将 PE10 导管向近心端方向插入并轻度结扎近心端打活结，使导管和左颈总动脉轻度结扎，保证血管导管入口处不漏血为宜，导管经左侧颈动脉-主动脉弓降部-胸主动脉，进入腹主动脉。 导管导入肾动脉 用棉签轻压肾动脉,腹主动脉分叉处，确认管在腹主动脉里，将左侧肾动脉轻轻拉向右侧直到与腹主动脉平行位，调整导管头端插入左肾主动脉，根据实验要求可以调整导管插入肾动脉前支、后支及肾上腺动脉，以便将药物准确的注入靶器官。 导管导入路线示意图 此方法同样可以有效的扩展到其他靶器官精准给药，减少药物对其他脏器的损伤和贵重药物的损失~~~ 此论文于2011年已发表在《中国比较医学杂志》，论
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大鼠海马取材步骤详解
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
海马是研究大鼠神经生物学的重要结构，能够参与其行为反应、内脏活动、调节生物节律和内分泌，尤其与学习记忆密切相关。大鼠海马的研究也就随之火热起来，那么如何获得完整漂亮的大鼠海马呢？ 下面就是作者采集大鼠海马的图解步骤： 我们先来了解一下大鼠海马在大脑中的具体位置吧~~~ 上图来源于网络 上图来源于网络 通过以上两个图片可以清晰了解了海马在大鼠大脑中的具体位置了~~~ 下面我们拿实物笔划一下吧~~ 大鼠大脑背侧 小编一般都是使用手术刀片距离大脑皮质后缘向前约5mm位置，沿图中弧线深度约为2mm切开 将切开的皮质钝性向后剥离~~咦~~~好像看见海马了哦~~~ 沿海马边缘，钝性剥离海马~~~如下图 已经剥离完的海马~~~~~~ 钝性剥离，取出海马~~~~ 完成！！！！ 接下来做您想做的吧~~~~~~~~
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文献中遇到的实验动物知识：基因敲除小鼠
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
投稿人：郭晓冲 中国医科大学动物部 写给看文献的你们： 我在这里想写一些看文献时可能遇到的实验动物知识，希望对大家有帮助。为了便于理解，语言偏通俗，可能不够严谨。如果大家希望深入了解实验动物专业知识，欢迎选修实验动物学。 第一集，关于基因敲除小鼠。 基因敲除小鼠（Knockout Mice），人们使用复杂的方法使小鼠体内的某一个基因不表达，从而使小鼠呈现这个基因缺失的状态，可用于研究这个基因的功能。 但如果某个基因功能特别重要，这个基因缺失可能具有胚胎致死性，那我们就无法得到这种基因敲除的小鼠了，于是人们发明了条件性基因敲除技术。这一技术可以实现在特定的时间、特定的细胞或组织内使某个基因沉默。方法是首先在目的基因（就是打算敲除的那个基因）的两侧分别插入一段名为LoxP的DNA序列（LoxP序列是一段34bp的DNA序列，两端的13个碱基为回文序列，中间的8个碱基决定LoxP的方向。具体序列如下：5' - ATAACTTCGTATA - ATGTATGC - TATACGAAGTTAT - 3' 3' - TATTGAAGCATAT - TACATACG - ATATGCTTCAATA - 5'）。然后我们需要用到一种带有Cre酶的转基因小鼠了。 下面分别解释一下转基因小鼠和Cre酶。 转基因小鼠（Transgenic Mice），使用分子生物学方法使小鼠表达了一种小鼠本来没有的基因，这个基因是人为插入的，可能是人的，大鼠的或者其他物种的。这个星球上第一只转基因小鼠就表达了大鼠的生长素（growth hormone）基因，于是那只小鼠长到了大鼠的体型。 Cre酶是在噬菌体内发现的一种酶，它能特异性的识别LoxP序列，并把同方向排列的两个LoxP序列之间的DNA切掉。前面说了，我们把LoxP序列放到了打算敲除基因的两侧，那么我们如果把Cre酶放到细胞核里，目的基因就被Cre酶切掉，从而实现目的基因敲除了。于是人们制作了能够表达Cre酶的转基因小鼠。把Cre转基因小鼠和插入了LoxP序列的小鼠交配，就可以得到同时携带Cre和LoxP序列的小鼠了。当Cre在细胞核内遇见LoxP序列，目的基因就被敲除
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写给看文献的你们 系列四：小鼠、大鼠安乐死方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
写给看文献的你们 系列四：小鼠、大鼠安乐死方法！！！ 投稿人：郭晓冲 中国医科大学动物部 写给看文献的你们 系列四：小鼠、大鼠安乐死方法！！！ 当实验动物完成了它的使命后，它应该有权利没有痛苦的死去。安乐死是人类文明的产物，对实验动物进行安乐死也是文明的体现。 美国兽医协会推出的动物安乐死指南（AVMAGuidelines for the Euthanasia of Animals）提供了可以参考的安乐死方法。（为什么不用中国的？因为中国的指南还等待着各位去努力制定。）指南内推荐的方法，是被广泛接受和认可的方法，给动物带来的痛苦和紧张都很小。我把我认为有用的部分摘录如下，更多内容请大家查阅上述指南。 推荐的小鼠、大鼠安乐死方法： 1 过量麻醉：静脉或腹腔注射3倍麻醉剂量的巴比妥类药物。 2 颈椎脱臼：动物需小于200g。 3 二氧化碳窒息：将动物放入清洁的容器内，缓慢通入二氧化碳。随着二氧化碳浓度的升高，动物会慢慢的没有痛苦的死去。一般10分钟足以使动物死亡，但使用二氧化碳窒息法安乐死的动物必须逐一检查是否彻底死亡，如发现未死亡的动物，补充给予颈椎脱臼处理。需要注意的是新生鼠对缺氧比较耐受，二氧化碳窒息时间需要大于50分钟。 最后，希望中国尽快通过安乐死立法（人的哦！）。我希望自己老的时候可以选择死亡的方式。
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孔洞实验/孔板实验/洞板实验操作步骤及注意事项介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
孔洞实验/孔板实验/洞板实验（the holeboard test） 一.基本原理 孔板实验是Boissiex和Simon1962年首次建立的，此后被广泛用于药效研究。该实验是利用新奇(curiosity)和恐惧(fear)两个因素来控制动物在新环境下的行为，用逃避(escapes) 来反映这两个因素的作用结果。动物反复钻头(head一dipping)反映其新奇感和对逃避的渴望。一般认为，药物在不影响动物运动活性的剂量下，增加钻头次数和时间，表现为抗焦虑作用，减少钻头次数和时间则为致焦虑作用。 二.操作步骤 大鼠和小鼠的实验装置有所不同。大鼠装置为一个66cm x 56cm x 47cm的木箱，底板有4个直径为3 . 8cm、深1 cm的等大圆孔，其中两孔离最近壁14cm，另两孔17cm，孔板水平抬高12em;小鼠木箱为44cm x 40cm x 27cm , 4个孔的孔径均为3cm，厚1. 8cm，每孔中心离最近壁的距离为l0cm。 80年代之后，孔板箱壁及每一孔周边都装有红外光电管，并与微机相联，这样可同时自动记录动物的钻头次数和钻头时间、运动活性及站立数等多项指标，既提高了工作效率，又增加了实验的可靠性。实验用雄性成年的大鼠或小鼠。将动物置于孔板中央，背朝观察者。动物两眼消失在洞中为一次钻头(a head一dip)，记录5-10min的钻头次数及钻头持续时间。 三.注意事项与评价 （1）对孔板箱的形状和大小没有统一的标准，但常采用方型，其边长在大鼠一般60cm,小鼠为40c m左右。 (2)孔的数量早期多为16孔，现在通常采用4孔板。 (3)动物在上午的钻头数往往比下午多。因此，应尽量在每天固定的时间内做实验。 (4)本实验对致焦虑药(如BDZ受体反相激动剂)引起探究性钻头的特异性降低结果较为一致，而某些缺乏抗焦虑作用的药物(如BDZ受体拮抗剂氟马西尼)反可使探究性钻头增加。故在筛选未知药物时应结合其它焦虑模型进行评价。
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分子生物学相关实验步骤及注意事项（三）qPCR篇
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
——荧光定量PCR篇—— 实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料，每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。 一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段, 荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可以选择在这个阶段进行定量分析。 （一）荧光阈值和CT值 荧光阈值（threshold）是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般荧光域值的缺省（默认）设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。 CT值是指PCR扩增过程中，每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。 CT值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小，公式如下：Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex) n为扩增反应的循环次数，X0为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。 利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。 （二）荧光探针和荧光染料 荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。 SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但与双链 DNA 结合后，其荧光大大增强。SYBR Green I 用于qPCR无需探针，设计的程序通用性好，且价格相对较低。利用荧光染料可以指示双链 DNA 熔点的性质，通过熔点曲线分析可以鉴定有无PCR杂带、引物二聚体等。但是SYBR Green I 无模板特异性，因此会引起假阳性而影响定量的精确性。TaqMan探针是一种寡核苷酸
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实验动物体液采集方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验动物体液采集方法 一、 血液的采集 常用的采血方法有割（剪）尾采血、眼眶静脉丛采血、断头采血、心脏采血、颈静脉（动脉）采血、股动脉（静脉）采血、耳静脉采血、前肢头静脉采血、后肢小静脉采血等。 二、 尿液的采集 实验动物的尿液常用代谢笼采集，也可通过其他装置来采集。 （一）、用代谢笼采集尿液 代谢笼用于收集实验动物自然排出的尿液，是一种特别设计的为采集实验动物各种排泄物的密封式饲养笼，有的代谢笼除可收集尿液外，又可收集粪便和动物呼出的CO2。一般简单的代谢笼主要用来收集尿液。防在代谢笼内饲养的实验动物，可通过其特殊装置收集尿液。 （二）、导尿法收集尿液 施行导尿术，较适宜于犬、猴等大动物。一般不需要麻醉，导尿时将实验动物仰卧固定，用甘油润滑导尿管。对雄性动物，操作员用一只手握住阴茎，另一只手将阴茎包皮向下，暴露龟头，使尿道口张开，将导尿管缓慢插入，导尿管推进到尿道膜部时有抵抗感，此时注意动作轻柔，继续向膀胱推进导尿管，即有尿液流出。雌性动物尿道外口在阴道前庭，导尿时于阴道前庭腹侧将导尿管插入阴道外口，其后操作同雄性动物导尿术。 用导尿法导尿可采集到没有污染的尿液。如果严格执行无菌操作，可收集到无菌尿液。 （三）输尿管插管采集尿液 一般用于要求精确计量单位时间内实验动物排尿量的实验。剖腹后，将膀胱牵拉至腹腔外，暴露膀胱底两侧的输尿管。在两侧输尿管近膀胱处用线分别结扎，于输尿管结扎处上方剪一小口，向肾脏方向分别插入充满生理盐水的插管，用线结扎固定插管，即可见尿液从插管滴出，可以收集。采尿过程中要用38℃热生理盐水纱布遮盖切口及膀胱。 （四）压迫膀胱采集尿液 实验人员用手在实验动物下腹部加压，手法既轻柔又有力。当增加的压力使实验动物膀胱括约肌松弛时，尿液会自动流出，即行收集。 （五）穿刺膀胱采集尿液 实验动物麻醉固定后，剪去下腹部耻骨联合之上，腹正中线两侧的被毛，消毒后用注射针头接注射器
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