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冷冻离心机故障及解决方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验室冷冻离心机可以保证实验温度在4度左右，保证样品的的生物活性。冷冻离心机在使用过程中难免遇到故障，湖南吉尔森离心机为您总结下日常遇到的故障以及处理的方式。 1.实验室冷冻离心机在使用过程中经常出现电机不能起动的现象。如主电源指示灯不亮时，检查指示灯保险丝及室内配电板保险丝是否熔断，同时检查电源线是否接触良好。保险丝断则应更换保险丝并保持电路畅通如主电源指示灯亮，这时应检查炭刷磨损程度，如炭刷磨损超过总量的三分之一，应及时更换新的炭刷。还应检查真空泵表及油压指示值，如油压过高而主机也不能启动，必须检查各油路是否堵塞，特别是节流小孔是否畅通，如不畅通应清洗使之畅通。 2.实验室冷冻离心机启动及制冷效果差的原因之一是电源不通，应分别检查电源及保险丝。电压过低，安全装置故障也可使冷冻机不能启动，电压过低可能是电网电压低;配电板配线过多;电源线过长(理想长度为3米)等。电源线容量不够，不仅使电压降低，还会造成意外事故。当电源电压降到180―190VJ时，冷冻离心机不能启动，影响制冷效果。通风性能不好，如仪器安装在日光直射或通风不良处，散热器效果差，或散热器盖满灰尘，也中会影响制冷效果。离心管重量不平衡，放置不对称;转子孔内有异物，使负荷不平衡;转轴上端固定螺帽松动，转轴磨擦或弯曲;电机转子不在磁场中心会产生噪音;转子本身损伤等都可导致机体震动剧烈、响声异常。 3.实验室冷冻离心机轴承损坏或转动受阻，轴承内缺油或轴承内有污垢较多而引起摩擦阻力增大，电机达不到额定转速，应及时清洗或更换轴承。整流子表面有一层氧化物，甚至烧成凹凸不平或电刷与整流子外缘不吻合也可使转速下降，应清理整流子及电刷，使其接触良好。如转子线圈中短路或断路，可用万用表检查，重新绕制线圈。转子在使用时可因金属疲劳、超速、过应力、化学腐蚀、选择不当、使用中转头不平衡及温度失控等原因而导致离心管破裂，样品渗漏，转子损坏。对于以上情况主要要求操作
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酸性磷酸酶的显示方法实验步骤介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验试剂 1. 10％中性福尔马林(pH6．8～7．1)甲醛 10ml 蒸馏水 90ml 醋酸钠 2g 2. 酸性磷酸酶作用液 蒸馏水 90ml 0．2mol／L醋酸缓冲液(pH4．6) 12ml 5％硝酸铅 2ml 3. 2％β—甘油磷酸钠 4ml 先将蒸馏水和醋酸缓冲液混合，随后分成大致相等的两份，一份中加硝酸铅溶液，另一份加甘油磷酸钠溶液，然后再将两者缓缓混合，边混边搅匀后若酸碱度值不到pH5．0，可加少量醋酸的调整。此作用液**在临用前配制，不能贮存。配好后的作用液应透明无絮状悬浮物和沉淀，否则将严重影响实验结果。 4. 1％硫化胺溶液 硫化胺 1ml 蒸馏水 9ml 5. 姬姆萨染液(1：30) 姬姆萨原液 3滴 磷酸盐缓冲液(pH6．8) 5ml 6. 6％淀粉肉汤 牛肉膏 0．3g 蛋白胨 1.0g 氯化钠 0．5g 蒸馏水 100ml 高压灭菌9．9×104pa(15磅)20min，再加入可溶性淀粉6g，水温浴，促使溶解后置冰箱保存备用。 实验步骤 1. 取小白鼠一只，每日腹腔注射6％淀粉肉汤1ml，连续注射三天。 2. 在第三天注射后3～4h，再向腹腔注射生理盐水1ml，过3min后在原注射部位抽取腹腔液0．1～0．2ml。请注意!注射和抽液的进针部位和深度要保持一致。否则可能抽不出腹腔液。 3. 将腹腔液滴在预冷的载玻片上，每片1～2滴，涂片，将玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱内(4℃)，让细胞自行铺展。 4. 30min后，将玻片转入10％中性福尔马林，冰箱内4℃固定30min。 5. 自来水漂洗5min，把水甩干。 6. 转入酸性磷酸酶作用液中，37℃处理30min。 7. 自来水漂洗片刻。 8. 1％硫化胺处理3～5min。 9. 自来水冲洗，甩干。 10.用1∶30的姬姆萨染液染色15min。 11.自来水冲去染液，用磷酸盐缓冲液临时封片，镜检。 12.对照实验： 将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min，使酶失活，再进行6～11步的同样实验。
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RNAi实验原理与制备方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验原理 通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因，病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs)，每个片段的3’端都有2个碱基突出。 在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex, RISC）。激活RISC需要一个ATP依赖的将小分子RNA解双链的过程。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。尽管切割的确切机制尚不明了，但每个RISC都包含一个siRNA和一个不同于Dicer的RNA酶。 另外，还有研究证明含有启动子区的dsRNA在植物体内同样被切割成21-23nt长的片段,这种dsRNA可使内源相应的DNA序列甲基化,从而使启动子失去功能,使其下游基因沉默. 实验试剂 RNase III、 DNA Oligo、Taq酶、dNTP、氯化钙、磷酸缓冲液、克隆所需试剂、 siRNA合成试剂盒等 实验步骤 (一)siRNA的设计 1. 在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选： http://www.genesil.com/business/products/order2.htm http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html http://www.ic.sunysb.edu/Stu/shilin/rnai.html http://design.dharmacon.com/rnadesign/default.aspx?SID=45358710 2. RNAi目标序列的选取原则： (1)从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3'端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究结果显示GC含量在45%—55%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更为有效。 Tuschl等建议在设计siRNA时不要针对5'和3'端的非编码区（untranslated region
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长期社会隔离对雌性大鼠行为生理的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
摘要:为研究社会隔离能否导致雌性啮齿动物产生焦虑，将成年雌性大鼠分别进行单独隔离饲养(单养)和四只一笼群养，十周后进行行为学和生理测试。行为结果显示:与群养组相比，单养组大鼠在旷场中的直立次数减少，明暗箱测试中的暗箱停留时间增长，穿越次数减少;说明长期社会隔离使雌鼠产生了焦虑。虽然两组大鼠与应激和生殖相关的生理器官重量没有差异，但单养组血清皮质醇和孕酮水平比群养组低，说明长期社会隔离导致雌鼠下丘脑唾体一肾上腺轴和下丘脑-垂体-性腺轴的调节异常，可能会对雌鼠的生殖生理带来不利影响。 关键词:社群隔离;雌性大鼠;焦虑行为;血液激素;生理指标 正常的社会关系对生物个体的健康有着重要意义，一旦遭到破坏将对机体带来消极影响。长期社会隔离对群居动物来说是一种生存应激。这种应激模型为研究人类精神疾病提供了很好的切入点，被广泛用于人类精神障碍疾病的发病机制、新药研发和预防等的研究。 社会隔离能使群居动物脑的形态、激素水平以及神经化学通路发生改变，进而使该动物表现出异常的行为和生理特征。以往研究发现长期社会隔离会导致啮齿动物多动，攻击行为增加困，在新环境中缺乏正常的习惯化行为，前脉冲抑制(prepulse inhibition, PPI)缺失等。然而，社会隔离对啮齿动物的影响受到很多因素的制约，与被测动物的性别年龄、品系以及隔离持续的时间均有关系。例如，社会隔离能使成年的雌性小鼠(M。musculus)'肾上腺肥大，动情周期缩短，使成年雌性大仓鼠(Tscheskia triton)的卵巢和子宫增大，但是对雄性大鼠(Rattus norvegicus )、雄性小鼠(Musmusculus)}和成熟的大仓鼠则没有影响;3周龄的雄性bong Evan大鼠隔离12周可以增加其对酒精的偏好，但是在成年期进行隔离则不会出现此现象,最近的研究表明短期隔离或者每天隔离1h，持续四周会导致草原田鼠血清皮质酮显著升高;但是长期隔离四周则对血清皮质酮没有影响 社会隔离能否使鼠类产生胁迫和应激反应，与鼠类在自然条件下的生活方式也有
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Uhrf1通过Akt-mTOR途径调控iNKT细胞的生存和分化
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
研究背景 Uhrf1（或者被称为Np95）是一个DNA甲基化和组蛋白泛素化的调控因子，在胚胎发育（embryogenesis）以及肿瘤发生（tumorigenesis）过程中有着重要作用。近日，上海中科院生化细胞所刘小龙课题组联合上海科技大学以及中国科学与技术大学在国际权威期刊Cell子刊Cell Reports上发表题为Uhrf1 Controls iNKT Cell Survival and Differentiation through the Akt-mTOR Axis的研究型论文。研究发现，Uhrf1在自然杀伤T细胞（invariant natural killer T ［iNKT］ cell）的发育过程中有着重要作用。Uhrf1在iNKT细胞的Stage1种表达量显著提高。对Uhrf1的突变触发了细胞凋亡从而导致Stage1阶段转化的出现异常，最终在Uhrf1缺失的突变小鼠中，iNKT细胞受损。研究还发现，Uhrf1的突变可以显著增加Stage1过程中Akt-mTOR信号通路的活性。过表达Akt可以使得iNKT细胞的表型得以回复。研究人员认为，该研究表明Uhrf1调控的Akt-mTOR信号途径在iNKT细胞发育过程中是必要的。 技术路线 研究结果 iNKT细胞发育过程中需要Uhrf1 为了研究Uhrf1在T细胞发育过程中的作用，研究人员首先构建了CD4-cre-介导的Uhrf1条件性敲除的小鼠模型。研究人员使用了流式细胞（Flow cytometry）分析技术等实验手段对这两类细胞的分析表明，iNKT细胞在Uhrf1-/-的小鼠胸腺，脾脏以及肝脏中显著减少（图1A-C）。 图1: iNKT细胞发育过程中需要Uhrf1。 Uhrf1调控iNKT细胞的生存和分化 Uhrf1的缺失显著降低了iNKT细胞的数量。细胞数量的下降通常是由于细胞增殖降低，生存受到影响或者分化畸形导致的。为了验证这些可能性，研究人员首先对细胞增殖进行了研究。在Stage1与Stage2中，Uhrf1-/-的小鼠细胞密度与野生型没有显著区别（图2A,B）。因此，研究人员认为iNKT细胞数量的下降并非由于细胞增殖导致的。随后对细胞生存以及分化的研究发现，Uhrf1-/-的小鼠iNKT细胞更易发生细胞凋亡并且细胞的分化受到显著影响（图2C-G）。 图2: Uhrf1调控iNKT细胞的生
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Western Blot技术实验流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
Western Blot又称为蛋白质印迹，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。 基本原理：聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离，分离后的蛋白被转移到固相支撑物（杂交膜）上，抗体特异性识别目标蛋白，通过酶促反应或者化学发光等方法将目标蛋白可视化，从而对蛋白进行定性或者定量研究。 WB技术的基本操作流程如下： 配胶 1. 注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。 2. 分离胶及浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡（否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡，有条件者可真空抽吸3分钟），加入10%AP（0.7~0.8:100, 分离胶浓度越高AP浓度越低，15%的分离胶可用到0.5:100）及TEMED（分离胶用0.4:1000, 15%的可用到0.3:1000，浓缩胶用0.8：1000）即可。 3. 封胶：灌入2/3的分离胶后应立即封胶，胶浓度＜10%时可用0.1%的SDS封，浓度＞10%时用水饱和的异丁醇或异戊醇，也可以用0.1%的SDS。封胶后切记，勿动。待胶凝后将封胶液倒掉，如用醇封胶需用大量清水及ddH2O冲洗干净，然后加少量0.1%的SDS，目的是通过降低张力清除残留水滴。 4. 灌好浓缩胶后1h拔除梳子，注意在拔除梳子时宜边加水边拔，以免有气泡进入梳孔使梳孔变形。拨出梳子后用ddH2O冲洗胶孔两遍以去除残胶，随后用0.1%的SDS封胶。若上样孔有变形，可用适当粗细的针头拨正；若变形严重，可在去除残胶后用较薄的梳子再次插入梳孔后加水拔出。30min后即可上样，长时间有利于胶结构的形成，因为肉眼观的胶凝时其内部分子的排列尚未完成。 样品处理 1. 培养的细胞（定性） ⑴ 去培养液后用温的PBS冲洗2~3遍（冷的PBS有可能使细胞脱落）。 ⑵ 对于6孔板来说每孔加200~300μl，60~80℃的1×loading buffer。 ⑶ 100℃，1m
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如何有效分离提取cfDNA用于检测？
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
说起肿瘤、癌症，已经不再像多年前一样让谈癌色变，但仍旧为人们所恐惧。成功**肿瘤还是以早发现早**为主。那么尽早检测和发现肿瘤便是首当其冲的核心。液体活检(Liquid biopsy)的检测方法，可以捕获到进入血液的其它细胞或DNA，从而替代了疾病的诊断，例如肿瘤。最近比较火热的液体活检有：cfDNA（Circulating cell-free DNA）、CTC和外泌体的检测。 对于CTC和外泌体的信息，我们已发表过2篇文章描述，欲知详情，请浏览： 循环肿瘤细胞（CTC）：http://www.bio-review.com/cytoquest-liquid-biopsy/ 外泌体（Exosomes）: http://www.bio-review.com/exosomes-extract/ 游离循环DNA（cfDNA）存在于血液，包含双链DNA片段，绝大多数是短链，而且通常浓度很低。在健康人体中，血浆cfDNA被认为来自于正常的造血细胞。cfDNA的循环半衰期很短，这提示它需要在细胞凋亡时被持续的释放。在特定的生理条件或疾病过程中，有相当一部分cfDNA会与在健康的时候不同，基于这一结果，近年来cfDNA已被用于无创性诊断。在孕妇中，约有10%-15%的cfDNA来自于胎盘滋养层，现在cfDNA多用于在高危孕妇中筛查胎儿的遗传缺陷，这就是是当前火热的无创唐氏筛查的基础！在肿瘤病人中，通过cfDNA的量化突变来检测肿瘤已被越来越多的人认可。而在移植方面，移植排斥反应也与供体移植器官中的cfDNA水平相关。 Figure.2 血液中的复杂组分 而循环肿瘤DNA（ctDNA）是来源于肿瘤细胞的cfDNA，属于cfDNA的一种类型。两者为包含关系，ctDNA仅为cfDNA很小的一部分。ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变，不同于遗传突变的是其存在于体内每个细胞。往往在提到循环肿瘤DNA的时候，大家往往简单的将它认为是肿瘤患者外周血中游离的DNA。其实不然，虽然ctDNA所占cfDNA的比例波动范围非常大，约0.01％～90％，但实际上，大多数ctDNA在cfDNA中的占比约为0.2%。 如何有效分离提取cfDNA(ctDNA)用于检测，已成为科研工作者必须突破的问题！ 作为全球领先的创新技术和表
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实验室化学品泄漏事故的安全措施
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
化学品的泄漏处理 化学品的泄漏对实验室用户来说是很危险的。在发生化学品泄漏事故时，必须严格执行应急预案。预案指导原则是必须能够提供有关如何遏制化学品泄漏和适当消毒程序的解决方案。 实验室发生化学品泄漏时需遵循以下这些安全措施： 处理程序 1报警 事故现场 — 无论何人何时发现化学品存储容器或装置发生大量泄漏、着火、爆炸事故，应立即通知保安人员、当值班长或上级领导，保安或当值班长在接到报警后应立即前往事故现场查看同时通知安全专员，在安全专员不能及时到场的情况下，当值班长为主要安全专员并在时间判断是否需要启动报警电铃，报警电铃一启动应立即根据应急预案流程开展应急处理。 2泄漏处理 2.1小量泄漏： 如发现小量的稀释剂、油墨等液体化学品容器发生泄漏或在使用和运输过程中不慎泄漏，设备因检修或故障发生漏液等情况，则应及时通知相关岗位人员、当值班长或安全专员，相关岗位人员在做应急处理时尽可能将溢漏液体收集在专用的容器内，准备好相应的吸水材料（如干净的抹布、海绵、沙土等），待大部分泄漏积液回装容器后，立即用沙土或其它吸水材料吸收残液，防止化学液体流入土壤或排水管道，此类泄漏事故无需启动报警电铃。 如发现小量的固体化学类原材料散落（如：乙烯类原材料）则应及时通知相关岗位人员、当值班长或安全专员，相关岗位人员应及时回装散落的原材料，并清理清洁地面，尽可能的减少残留物质留存土壤或进入排水管道，此类泄漏事故无需启动报警电铃。 2.2大量泄漏： 如在危险品存放处发现大量液体化学品泄漏（比如：危险品仓库和生产车间临时存放点有多桶稀释剂或油墨等化学品发生泄漏，危废仓库废液容器发生大量泄漏等）则应及时通知保安、当值班长和安全专员，安全专员判断是否需要启动报警电铃，若发生火灾或爆炸的可能性较小的情况下，应竭力开展应急处理措施，如危废仓库的废液容器发生泄漏，首先应疏散临近的其他人员，采取隔离措施防止不知情人员进入，
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低速离心机轴承发热原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
轴承是低速离心机一个非常重要的组成部分，蜀科仪器非常重视低速离心机中轴承的设计，因为在使用过程中，轴承容易遇到发热的现象。引起低速离心机轴承发热的原因主要有： 1、在使用中过载或是超载，也有可能是由于机械摩擦产生的热量以及散热风扇出现了问题，但是不管其故障的表现形式如何，最终还是由于轴承质量不好。有些厂家为了节约成本，往往会购置一些低价的离心机轴承，这些轴承的使用会产生一系列如同发热发烫等问题，严重者还会导致轴承烧毁，对离心机造成无法挽回的损失。蜀科仪器在购置离心机轴承的时候都是选择质量过硬的轴承，选择的技术水平高的厂家。 2、在使用中忽视了对轴承的润滑也是导致离心机轴承发热的原因之一，对于机械的润滑我们一般选用高温锂基脂，高温锂基脂选择不当也会是轴承发热，此外，我们要观察低速离心机在使用中是否伴随着噪声，这说明了机械部件已经存在磨损，轴承已有松动，建议用户进行更换。 3、最后一个原因就是离心机主轴同心度不准确，很多情况下我们都会忽视离心机主轴的同心度，殊不知主轴同心度倾向大很容易构成轴承发热。这个问题在我们使用中需要重视。 低速离心机属于精密仪器，为了防止上述发热和其他问题，保持其工作效率和使用寿命，此文章由实验室仪器--湖南吉尔森科技发展有限公司编辑整理。
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去甲肾上腺素调控恐惧记忆消退训练的研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
条件性恐惧模型是研究恐惧记忆的获得 、储存 、提取 、消退等过程 ， 以及这些过程的中枢机制的重要行为模型。此模型程序以典型的巴普洛夫条件反射为基础 ， 即先对动物进行厌恶性刺激与中性刺激的联结匹配训练（US － CS） ，其中厌恶性刺激即无条件刺激（Unconditioned Stimulus ，US ，如电击） ，中性刺激即条件性刺激（Conditioned Stimulus ， CS ， 如灯光 、声音或训练环境） ，当动物再次接触这个中性刺激时 ， 就会表现出条件性恐惧反应 。 然而 ，若条件性线索反复单独呈现，而不匹配厌恶性刺激时 ， 动物先前习得的对 CS 的条件性恐惧反应会逐渐弱化 ， 这即是条件性恐惧的消退（CS － no US ） 。 目前条件性恐惧消退在临床上的应用多为创伤后应激障碍 （Post －traumatic Stress Disorder ，PTSD）的心理** ，即暴露疗法。 大多数研究认为 ，消退记忆并不是抹除了原有的 CS 与 US 之间的联系 ， 而是形成一种 CS 和无 US的安全环境之间的新条件反射。 目前 ，对消退记忆形成的神经生物学机制还不完全清楚 。 最近研究发现去甲肾上腺素 （NE）在记忆消退的长期维持中有重要作用，现对其研究进展进行综述 。 1 NE 对消退记忆的影响 NE 细胞信号系统在消退记忆学习的调节中发挥重要作用。早期研究发现 ，在逃避性抑制模型中 ，给予 NE 能够增加消退成功几率，同时阻滞 β 受体可以减弱消退记忆的形成，提示 NE 增加消退记忆学习是通过 β 受体信号系统起作用的，并且 NE 可通过作用于中枢神经系统增强消退，破坏蓝斑的 NE 神经投射或者过度消耗蓝斑中的 NE 可以抑制其对消退记忆的作用。 但是，抑制作用在某些条件下是不起作用的，提示 NE 在消退记忆学习中不一定起到决定性作用，只是在与 US 相关的 CS 变化时起到一种增强联系的作用，包括奖赏记忆模型和恐惧记忆模型 。 近些年的研究更加侧重于恐惧记忆的消退 ，在恐惧记忆消退前或消退后给予 NE 能药物所得到的试验结果是相反的 。在消退训练前系统注射
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细胞凋亡检测方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
细胞凋亡是指细胞在生长到一定阶段及某些生理过程中，会受到多因素和机制的严格调控而进入死亡。这是一个动态的过程,会涉及一系列复杂的生化反应, 是一个需要酶参与的级联反应,同时也涉及不同基因的表达及调控、信号传导。其中有几项生理过程能被用来检测凋亡的发生，因此多参数分析法对于准确检测这一过程十分重要。同时，了解细胞死亡和存活机制也是毒理分析和药物研发应用中一个非常关键的内容。 Sigma®联合Roche®提供多种分析细胞凋亡的研究方法。包括：Caspase活性检测；DNA片段化分析和检测；膜变化检测（AnnexinV染色、膜电位、线粒体功能完整性分析检测实验）及细胞形态学检测。 Caspase活性检测 Caspase (cysteinyl-aspartic acid proteases)是一个家族的蛋白酶，它的活化是细胞凋亡的典型特征。一旦一个Caspase 酶被激发，就会激活一系列其他的Caspas酶,裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase 3 活化发生在凋亡早期，并在凋亡过程中起重要作用。Caspase 3 Activity Assay (CASP3C) 基于荧光免疫酶测定，能在体外特异性地对Caspase 3进行定量。 膜变化检测 凋亡细胞另一个生化特征是细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸从胞质转至胞外。膜联蛋白中的Annexin V，是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有强亲和力。通过使用Annexin V FLUOS Staining Kit (11988549001) 或Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit (APOAF) 方法进行凋亡细胞早期检测。可使用流式细胞仪或荧光显微镜监测。同时使用PI，根据细胞膜的通透性区分早期凋亡细胞和坏死细胞。 线粒体膜电位和膜通透性的变化也是凋亡细胞一个重要特点。可使用Cytochrome c Oxidase Assay Kit (CYTOCOX1) 试剂盒检测凋亡细胞线粒体所释放的细胞色素C。也可使用Mitochondria Isolation Kit 1 (MITOISO1) 分离凋亡细胞线粒体，其膜电位可通过Mitochondrion Membrane Potential Kit (MAK146-1KT) 检测。 DNA片段化分析 DNA降解也是细胞凋亡的典型标志之
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有关癌细胞的10大真相
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
癌细胞是能快速繁殖再生的异常细胞，这种不受遏制的细胞生长速度会促使组织块和肿瘤的生成及恶化。肿瘤持续生长恶化，其中一些被称为恶性肿瘤，它们可以从一个部位扩散到其它地方。癌细胞与正常细胞在很多地方都存在不同表现。癌细胞不会生物性老化，可以持续分裂，也不会响应细胞终止的信号。 以下关于癌细胞十个有趣真相可能会让你大吃一惊。 1.癌症的类型超过100种。 癌症的类型多种多样，这些癌症有可能会演变成任何类型的体细胞，通常根据病变的器官、组织或细胞命名。最常见的癌症类型是恶性肿瘤或称其为皮肤癌，它在上皮组织内发生病变，上皮组织覆盖身体外部并将身体器官、血管和腔洞排列起来。肉瘤形成于肌肉、骨头和软结缔组织内，包括：脂肪组织、血管、淋巴管、肌腱和韧带。生成白血细胞的骨髓细胞发生病变的癌症称为白血病。而淋巴癌是白血细胞，即淋巴球发生了病变。这类癌症影响B 细胞和T细胞。 2.一些病毒可以滋生癌细胞 促使癌细胞发展的因素有很多，其中包括：接触化学物质、辐射、紫外线以及染色体复制错误。 除此之外，病毒也可以通过改变基因来促使产生癌细胞。据估测，在所有癌症类型中，癌病毒导致的癌症占到15%到20%。这些病毒通过将自身遗传材料和宿主细胞的DNA相结合，来达到改变正常细胞的目的。病毒基因可调节细胞的生长、让细胞接受异常生长速度。伯基特淋巴瘤与EB病毒有关， 乙型肝炎病毒可以引起肝癌，人体乳头瘤病毒则可以引起宫颈癌。 3.约三分之一的癌症是可预防的。 根据世界卫生组织数据，约30%的癌症是可预防的。据估计，只有5-10%的癌症是由于遗传基因缺陷引起的。其它癌症都与环境污染、传染以及生活方式（吸烟、不健康的饮食习惯、缺乏运动）有关。预防癌症的最有效措施就是戒烟。约70%的肺癌是吸烟导致的。 4.癌细胞极度需求糖分 与普通细胞相比，癌细胞的生长需要更多葡萄糖。细胞呼吸时需要葡萄糖这种简单的糖分来产生能量。为了能持续分裂，癌细胞吸收糖分的速度
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有关癌细胞的10大真相
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
癌细胞是能快速繁殖再生的异常细胞，这种不受遏制的细胞生长速度会促使组织块和肿瘤的生成及恶化。肿瘤持续生长恶化，其中一些被称为恶性肿瘤，它们可以从一个部位扩散到其它地方。癌细胞与正常细胞在很多地方都存在不同表现。癌细胞不会生物性老化，可以持续分裂，也不会响应细胞终止的信号。 以下关于癌细胞十个有趣真相可能会让你大吃一惊。 1.癌症的类型超过100种。 癌症的类型多种多样，这些癌症有可能会演变成任何类型的体细胞，通常根据病变的器官、组织或细胞命名。最常见的癌症类型是恶性肿瘤或称其为皮肤癌，它在上皮组织内发生病变，上皮组织覆盖身体外部并将身体器官、血管和腔洞排列起来。肉瘤形成于肌肉、骨头和软结缔组织内，包括：脂肪组织、血管、淋巴管、肌腱和韧带。生成白血细胞的骨髓细胞发生病变的癌症称为白血病。而淋巴癌是白血细胞，即淋巴球发生了病变。这类癌症影响B 细胞和T细胞。 2.一些病毒可以滋生癌细胞 促使癌细胞发展的因素有很多，其中包括：接触化学物质、辐射、紫外线以及染色体复制错误。 除此之外，病毒也可以通过改变基因来促使产生癌细胞。据估测，在所有癌症类型中，癌病毒导致的癌症占到15%到20%。这些病毒通过将自身遗传材料和宿主细胞的DNA相结合，来达到改变正常细胞的目的。病毒基因可调节细胞的生长、让细胞接受异常生长速度。伯基特淋巴瘤与EB病毒有关， 乙型肝炎病毒可以引起肝癌，人体乳头瘤病毒则可以引起宫颈癌。 3.约三分之一的癌症是可预防的。 根据世界卫生组织数据，约30%的癌症是可预防的。据估计，只有5-10%的癌症是由于遗传基因缺陷引起的。其它癌症都与环境污染、传染以及生活方式（吸烟、不健康的饮食习惯、缺乏运动）有关。预防癌症的最有效措施就是戒烟。约70%的肺癌是吸烟导致的。 4.癌细胞极度需求糖分 与普通细胞相比，癌细胞的生长需要更多葡萄糖。细胞呼吸时需要葡萄糖这种简单的糖分来产生能量。为了能持续分裂，癌细胞吸收糖分的速度
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Western Blot实验相关试剂的配制
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
30%(w/v)丙烯酰胺溶液 丙烯酰胺 29g 甲叉双丙烯酰胺 1g 加去离子水，定容至 100ml 调整溶液 pH 值不超过 7.0，置棕色瓶中贮存于室温或4℃。 10%SDS SDS 10g 蒸馏水至 100ml 50℃ 水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 1.5mol/L Tris·HCl （pH8.8） Tris (MW121.14) 45.43g 超纯水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。 0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8） Tris (MW121.14) 15.14g 超纯水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。 10% 过硫酸胺（AP） 过硫酸胺 0.1g 超纯水 1.0ml 溶解后，4℃避光保存，保存时间为1周。（可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在EP管中，一次性多装几管，使用时加入超纯水即可） 20%Tween20 Tween20 20ml 蒸馏水至 100ml 混匀后4℃保存。 1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g 异丙醇 100ml 溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。 单去污剂裂解液（PMSF） 1mol/L Tris·HCl （pH8.0） 2.5ml NaCl 0.438g TritonX-100 0.5ml 蒸馏水至 50ml 混匀后4℃保存。使用时，加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。 RIPA裂解配方 50 mM Tris-HCl pH 7.4 150 mM NaCl 1 mM PMSF （用前加） 1 mM EDTA 1% Triton x-100 1% 脱氧胆酸钠 0.1% SDS G250 考马斯亮蓝溶液 （蛋白定量专用） 考马斯亮蓝G250 100mg 95%乙醇 50ml 磷酸 100ml 蒸馏水至 1000ml 配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料
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综述：高通量测序技术的原理及各平台优势和实践应用的分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
随着人类基因组计划（human genome project ）在2003年顺利完成，基因组测序技术取得了长足的进步，这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊，这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以获得更多的数据量。与之对应的是，还有一些技术的进步使得单条序列的测序读长变得更长——这对解析结构性的复合区段是极其必要的。这些进展给科研人员以及医疗诊断人员提供了一个绝佳的平台使得人们对基因组变异导致的表型变化以及疾病发生有了进一步的了解。 近日，美国冷泉港实验室联合加州大学戴维斯分校的研究人员在国际著名评论型综述杂志Nature Reviews Genetics（影响因子41）上发表了一篇评论型综述。该综述对高通量测序的技术原理以及各平台的优势比较和实践应用进行了深入浅出的分析。 介绍 自从DNA的双螺旋结构被人们解析开始1，人们在探究健康与疾病的基因组的复杂性与差异性上做出了巨大的努力。为了支持人类基因组计划的顺利进行2，人们在仪器和试剂上做出了巨大的改进。该计划的完成使得人们强烈的意识到人们需要更多更好的技术与数据分析能力来回答随之而来的一系列生物学问题。然而，通量的限制以及居高不下的测序成本成为了人们进一步了解基因组的一道坎。2000年之后推出的高通量测序平台很好地解决了这个问题，人类基因组测序的成本直接因此下降50000倍，并且由此产生了一个新的名词：下一代测序（next-generation sequencing，NGS）3。在过去的十年中，NGS技术不停的在进步——测序的数据量增加了100-1000倍4。这些技术上的进展使得人们甚至可以在一条read上读出整条基因组序列。根据Veritas Genomics的数据5，人类基因组测序的成本也已经下降到1000美元/人。不仅如此，该技术已经广泛在临床诊断上得到应用3,6。 但是，尽管NGS技术非常重要，却并非完美。与NGS技术一道出现的是该技术带来的一系列问题。NGS
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