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新一代萃取材质下的“C8+SCX”
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
固相萃取柱广泛应用在药物代谢及动力学、药物分析、生物检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析等众多领域，这导致固相萃取型号各异、种类繁多，但是以硅胶基质的C8+SCX混合床固相萃取柱是所有固相萃取产品中应用最为广泛的，就像液相色谱中C18一样，C8+SCX混合床固相萃取柱占有统治地位. Chrom-Matrix 公司生产的硅胶基质的C8+SCX混合床固相萃取柱及SCX固相萃取柱拥有其他固相萃取柱(包括聚合物固相萃取柱例如MCX)不可比的许多优点: (1)Chrom-Matrix 公司研发出 C8+SCX混合床固相萃取柱及SCX固相萃取柱有通用的应用方法, 针对具体的应用, 客户不必要在方法研发上花费大量的时间。(2) 对碱性化合物萃取级分背景清除效果**。(3) C8+SCX混合床固相萃取柱特别适用在“全盲”条件下对血样、尿样、组织等生物介质萃取后全部小分子化合物(碱性、中性、酸性及两性化合物)"无一遗漏"的捕获, 以用作进一步的GC-MS或LC-MS/MS等分析。(4) 硅胶基质的C8+SCX混合床固相萃取柱和硅胶基质的C8+SAX混合床固相萃取柱搭配使用, 构建了“全盲”条件下预临床药物代谢研究, 临床药物代谢研究, 兴奋剂检测、刑侦、国际禁毒组织及海关毒品检测、赛马、食品安全分析、未知样品的成分分析、中草药有效成分分析等非常完全、清晰的图象。(5) 彻底消除LC/MS或LC-MS/MS分析中的介质效应（这一应用为Chrom-Matrix公司PCT专利保护）。 针对不同的应用，硅胶基质的C8+SCX混合床固相萃取柱有三套完整的使用方法： 第一套：“全盲”条件下的全扫描 应用范围：兴奋剂检测、刑侦、国际禁毒组织及海关毒品检测、赛马、食品安全分析、药物代谢研究、未知样品的成分分析、中草药有效成分分析等。 第一步： 1克/6毫升C8+SCX固相萃取柱先用6毫升甲醇再用6毫升0.1M HCl活化 第二步：将血浆、尿样和0.1M HCl等体积混合上样（组织样品或食品等须先以有机溶剂萃取） 第三步：用6毫升0.1M HCl洗涤至干 第四步：用6毫升甲醇洗涤，收集酸性和中性化合物成分, 吹干后
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免疫球蛋白（IgG）临床相关意义及检测试剂
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
免疫球蛋白（IgG）是人体免疫的主要作用分子，在健康人血浆中占免疫球蛋白总量的75%。人ＩgG分为4组不同的亚型：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。人IgG亚型的相对血清浓度是 IgG1＞IgG2＞IgG3＞IgG4。这4种IgG 亚型在重链不变区的氨基酸序列95%以上相同，在绞链区（hinge region）的氨基酸组成和结构有明显的不同。这个区域位于Fab臂部与二条重链C-末端（CH2和CH3）之间，决定了IgG作用分子的可变性。特别是绞链区的长度和可变性是不同的，这些结构和可变性的差异与IgG不同的功能有关，如补体的激活和调理素作用（即：诱导吞噬细胞作用）。这些功能通过不变区Fc片段的作用是由于抗体与抗原在Fab部分互相作用的结果而形成的。 临床相关意义 IgG亚型异常是免疫反应不正常的表现，各种疾病均会造成IgG亚型的减少或增多。某一种IgG亚型的缺乏最常见的后果是体液免疫的不足，虽然这不一定会有临床表现。由于一种IgG亚型水平降低可以伴有一种或几种其他的IgG亚型水平的增高，从而使IgG总量水平仍然正常。因此，即使IgG总量在正常范围或者稍低于正常值范围，也需要测定IgG亚型水平。一些研究表明IgG亚型选择性的缺乏与疾病有关，特别是在支气管扩张、严重复发性中耳炎、鼻窦炎、肺炎、和支气管炎等有关。IgG2缺乏与包涵体细菌如B型流感嗜血杆菌引起的小儿呼吸道反复感染和链球菌性肺炎有关。这造成检测小儿IgG亚型的需求增加。 检测IgG亚型的主要临床指征是，经常发生长期或严重的感染而不能够为一般的临床和实验室检查结果所解释。总体上讲，当临床上怀疑有免疫功能不足时应该检测IgG亚型。 测定人IgG亚型水平的检测试剂和试剂盒 定量检测IgG亚型有各种方法。Sanquin 生产的检测试剂盒和试剂,最常用的检测方法：放射免疫扩散（RID）、ELISA和散射比浊计 (nepholometry)。 Sanquin 的原则是不论是哪种方法，从某一血清样品中测得的数值应当相同，因此Sanquin检测IgG亚型各种试剂盒有非常好的相关性。 I
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RNAi技术研究进展
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是多种生物体内由双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)介导同源mRNA 降解的现象。RNAi现象先后在不同生物中被发现，植物学家称它为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing，PTGS)；线虫和果蝇的研究人员称它为RNAi；真菌的研究者称它为消除作用(quelling)。现在人们己经意识到RNAi现象在生物体中普遍存在，而且可能有着共同的生物学意义和相似的作用机制。 1、RNAi的发现与发展 1990年，在转基因植物牵牛花( Petunias)的研究中发现，将色素合成基因置于一个强启动子后，导入牵牛花中，试图加深花朵的紫颜色，结果是不仅转入的基因未表达，而且自身色素合成也减弱了。当时将这种现象称为PTGS或“共抑制”(cosuppression)。Ramamor N等在粗糙脉孢菌中导入合成胡萝卜素基因后，约30%的被转化细胞中自身合成胡萝卜素的基因失活，他们称为基因静止(quelling)。康乃尔大学的Guo S 等用反义RNA 技术阻断秀丽新小杆线虫中parl 基因的表达时，发现正义RNA 和反义RNA 均能阻抑基因功能表达，而且两者的作用是相互独立的，机制各异。华盛顿卡耐基研究院的Fire A 等首次在秀丽新小杆线虫中证明上述现象属于转录后水平的基因沉默，并将这一现象称为RNA干扰，于2006年荣获诺贝尔生理医学奖。在1999年短短的一年间，发现RNAi 现象广泛存在于从植物、真菌、线虫、昆虫、蛙类、鸟类、大鼠、小鼠、猴一直到人类的几乎所有的真核生物细胞中。2000年，又先后发现小鼠早期胚胎中和大肠杆菌中也存在RNAi现象。 2、RNAi的作用机制 Hamilton等和Ketting等分别在发生共抑制的烟草和西红柿中鉴定了一些大约25 个碱基大小的与沉默基因的正义链和反义链互补的RNA。Zamore 等在果蝇细胞中发现被注射进入的双链RNA被切割为21～23 碱基长短的双链RNA片段。他们认为这些siRNA 在RNAi 过程中起着重要作用。这些siRNA一般为长21～23 个碱基对的双链 3’端具有2个突出的碱基，多为
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人颗粒酶-B酶点检测
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
酶点（ELISPOT）技术是最近几年发展起来应用于抗病毒免疫和抗肿瘤免疫的一种新型测定方法。 Sanquin 提供的颗粒酶-B酶点检测试剂盒应用最新技术，灵敏度高，仅一个阳性细胞即可测到存在的颗粒酶-B。特异性强，结果重复性好。为抗病毒和抗肿瘤研究提供新型强有力的检测工具。 酶点技术与酶标技术比较 1、酶点技术明显的特点是灵敏度增加 2、酶点技术仅需要1 个阳性细胞 / 孔即可,灵敏度达到1 :1,000,000的阳性准确分析 3、酶标技术需要至少要有400 细胞 / 孔才可达到有意义的检测水平 4、能在单细胞水平上分析产生细胞因子的T细胞 颗粒酶-B介绍 颗粒酶是外切丝氨酸蛋白酶，来自细胞毒T淋巴细胞（CTLs）和自然杀伤细胞（NK）释放的细胞浆颗粒。这些颗粒含有颗粒酶原及其它蛋白酶原，包括穿孔蛋白。由于CTL细胞与靶细胞结合（经CTL受体和靶细胞表面的抗原肽-MHCⅠ类分子复合物结合），通过颗粒的胞吐过程，颗粒酶进入了靶细胞，穿孔蛋白在细胞膜聚合而进入靶细胞形成跨膜的小孔，使靶细胞膜穿孔。穿孔蛋白通过使粒酶-内体膜穿孔释放出粒酶。颗粒酶B激活了细胞内caspases反应, 最后引起靶细胞的死亡. 颗粒酶A也能诱发靶细胞的凋亡。 在许多疾病中，用流式细胞术和免疫细胞可测定颗粒酶B阳性的CTL百分比。 部分颗粒酶也可 “漏”入外周血液和其它体液。 在健康者体内也可测得颗粒酶。.这些可溶性的颗粒酶可以用ELISA测定。 PeliSPOT人颗粒酶 B 试剂盒用于重复性 特异性定量测定人CTL细胞和NK细胞分泌释放的颗粒酶B频数。 方法 细胞孵育在预包被的微孔板内过夜，微孔内有预包被的高亲和力抗颗粒酶-B单克隆抗体。分泌的颗粒酶-B与预包被的抗颗粒酶-B抗体结合。洗涤去除未结合的成分，然后加入生物素标记的抗颗粒酶-B抗体。分别加链霉亲和素—HRP 聚合物和底物，存在分泌的细胞因子处可见有蓝色/ 紫色的斑点。 颗粒酶-B临床意义 病毒感染 EBV, HIV, CMV, 肝炎病毒和登革热病毒感染可增强患者CTL反应，
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大麦根的质膜转运体控制盐胁迫后的Na+/K+平衡
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
质膜转运体控制离子平衡 大麦根的质膜转运体控制盐胁迫后的Na+/K+平衡 p{text-indent:2em; margin:6px 3px 6px 3px; line-height:23px;} 植物的耐盐性是一个由遗传、发育、生理，以及植物与环境之间的相互作用引起的多基因性状。胞内的Na+/K+平衡是植物耐盐性的关键因素，在盐环境中植物会阻止胞内Na+的过度积累，维持胞内的K+浓度，保持一个合适的胞内Na+/K+比率来抵御盐胁迫，然而，这一过程是怎么实现的我们知之甚少。 2007年，澳大利亚的科学家采用“非损伤微测”等技术研究了盐胁迫下大麦的K+流和Na+流，揭开了Na+/K+平衡实现的过程。耐盐基因型大麦实现抗盐这一过程是多种机制综合作用的结果，这些机制包括：（1）通过控制膜电压来保持更高的负电势；（2）提高H+泵的活性；（3）提高细胞的排Na+能力；（4）增加对Ca2+的敏感性。同时，对照品种的单向22Na+流入或者去极化激活后的外流K+通道的密度和电压依赖性不存在显著差异。研究结果和K+/Na+是植物耐盐性的决定因素相一致，说明植物的耐盐是由多种途径控制。这个研究结果为品种筛选提供了一种有效的方法。 将非损伤微测技术应用于离子转运机制的研究中，检测离子的动态平衡和其他信息，已经被科研人员广泛接受并实际应用，取得了突破性的进展。 上图：不同基因型的大麦在320mM的NaCl处理后表现出了显著差异，盐忍耐型(T)的大麦长势较盐敏感型(S)的好很多。NaCl处理后，T品种的K+外流明显低于S品种。施加外源的Ca2+，能够有效降低K+外流。正直为内流，负值为外流。 .tmp_b1{ margin:6px 6px;} 关键词：盐胁迫(salt-stress); 大麦(barley); 非损伤离子选择性微电极技术(MIFE); K+ flux; Na+ flux. 参考文献：Zhonghua Chen, et al, Plant Physiology, 2007,145, 1714-1725 全文下载： ABSTRACT: Plant salinity tolerance is a polygenic trait with contributions from genetic, developmental, and physiological interactions,
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小型冷库的设计与选用方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
一、小型冷库一般分为室内型和室外型两种 1.冷库外的环境温度及湿度：温度为+35℃；相对湿度为80%。 2.冷库内设定温度：保鲜冷库：+5～-5℃；冷藏冷库：-5～-20℃；低温冷库：-25℃ 3.进冷库食品温度：L级冷库：+30℃；D级、J级冷库：+15℃。 4.装配式冷库设备的堆货有效容积为公称容积的69%左右，贮存果蔬时再乘以0.8的修正系数。 5.每天进货量为冷库有效容积的8～10%。 二、小型冷库的库体 小型冷库一般以喷塑彩钢板做面板，硬质聚氨酯泡沫塑料或高密度聚苯乙烯做保温料，库体具有刚性好、强度高、隔热保温性能好、阻燃等特点。小型冷库库体一般采用板壁内部预埋件偏心挂钩式连接或现场发泡固合，密封性好装拆搬运方便，现场施工安装工程量小、省工省力、质量好、见效快。小型冷库选配先进的制冷机组，库容量与制冷设备匹配全理，降温速度快，省电节能，且全部自动化操作，运作安全可靠。小型装配式冷库适用广泛，冷库库温范围5℃--23℃，特殊装配式冷库可达-30℃以下，可满足不同用途的需求，适用于各种行业各部门使用。 三、小型冷库制冷设备选用 小型冷库制冷设备的心脏是冷库门机组,常用小型制冷机组通用的机型选用先进的氟机制冷设备，氟机制冷设备多利用对环境影响小的制冷剂R22和其他新型制冷剂。氟机制冷设备一般体积小、噪音小、安全可靠、自动化程度高、适用范围广，适于乡村小型冷库用制冷设备。 小型冷库用的制冷机与冷凝器等冷库板设备组合在一起常称作制冷机组，制冷机组有水冷机组和风冷机组之分。小型冷库以风冷机组为**形式，它有简单、紧凑、易安装、操作方便、附属设备少等优点，这种制冷设备也是较易见的。 制冷机组的制冷机是制冷设备的心脏，常见的压缩式制冷机有开放式、半封闭式和全封闭式之分。全封闭式压缩机体积小、噪音低、耗电少、高效节能。它是小型冷库的**机型，由全封闭式压缩机为主组成的风冷式制冷机组，可以做成象分体空调那样的形
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透明塑料注塑过程中应注意的问题有那些呢?
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
透明塑料由于透光率要高，必然要求塑料制品表面质量要求严格，不能有任何斑纹、气孔、泛白。雾晕、黑点、变色、光泽不佳等缺陷，因而在整个注塑过程对原料、设备。模具、甚至产品的设计，都要十分注意和提出严格甚至特殊的要求。其次由于透明塑料多为熔点高、流动性差，因此为保证产品的表面质量，往往要在机高温度、注射压力、注射速度等工艺参数作细微调整，使注塑料时既能充满模，又不会产生内应力而引起产品变形和开裂。 因此从原料准备，对设备和模具要求、注塑工艺和产品的原料处理几方面都要进行严格的操作。 （一）原料的准备与闪蒸干燥机由于在塑料中含有任何一点杂质，都可能影响产品的透明度，因此和储存、运输。加料过程中，必须注意密封，保证原料干净。特别是原料中含有水分，加热后会引起原料变质，所以一定要干燥，并在注塑时，加料必须使用干燥料斗。还要注意一点的是干燥过程中，输入的空气**应经过滤、除湿，以便保证不会污染原料。其盘式干燥机工艺如表2， 透明塑料的干燥工艺： 材料工艺 干燥温度（℃） 干燥时间（h） 料层厚度（mm） 备注 pmma 70～80 2～4 30～40 pc 120～130 >6
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微卫星DNA分子标记及其应用
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
微卫星（Microsatellite，MS）又称短串联重复（Short Tandem Repeats，STR）或简单序列重复（Simple Sequnce Repeat，SSR），是指基因组中以少数几个核苷酸（多数为2-4个）为单位多次串联重复组成的长达几十个核苷酸的序列。其中最常见的是双核苷酸重复，如（AC）n、（TG）n等，微卫星DNA广泛分布在真核生物的基因组中，大约每隔10-550kb就存在一个微卫星。微卫星DNA由于具有特异性的PCR扩增、多态信息容量（PIC）高、引物通用性好、突变率高、共显性等特点，已经被广泛应用。 1.微卫星DNA的特点及分类 微卫星DNA具有丰富的多态性，主要表现在核苷酸重复单位数目的多态性和重复序列中核苷酸的替换多态性。一般认为，一个微卫星DNA核心序列重复数目越高，其等位基因数目也就越多，多态性就越丰富。微卫星DNA遵循孟德尔遗传规律，能够稳定地从上一代传给下一代，且等位基因间呈现共显性遗传。除此以外，微卫星标记还具有DNA用量少、反应速度快、操作简易、结果重复性好等特点。 根据重复结构的不同可将微卫星DNA分为3类：完全重复型（perfect），单一序列单元无中断或无颠倒；不完全重复型（imperfect），单一序列单元有中断或有颠倒；混合型（compound），多个序列中单位有或无中断和有或无颠倒的混合。一般说来，微卫星DNA的重复序列两侧都有物种特异性的保守序列，所以，通过设计引物对基因组DNA进行PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳（或聚丙烯酰胺凝胶电泳）和放射自显影（或银染），就可以检测到在简单重复序列重复单位数不同的DNA区域的多态性，这就是微卫星DNA分子标记。 2.微卫星分子标记方法的优点 微卫星在基因组中是均匀分布的。Winter 等人的研究表明, 除着丝粒及端粒区域外, 染色体的其他区域均广泛分布有微卫星位点。Litt 和Luty以及Weber 和May各自用热稳定Tag 酶的PCR 方法证明, 微卫星具有丰富的多态性。用微卫星作为遗传标记与其他DNA分子标记(包括RFLP、RAPD 和小卫星DNA等) 相比具有以下优点。 2.1 微
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实验室常用微生物菌种的分离和纯化方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。 1、用固体培养基分离和纯化 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。 1.1 稀释倒平板法 首先把微生物悬液作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 1.2 涂布平板法 因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌
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七大特点确立 300Å C18的优势应用地位
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
近年来,随着基因组和蛋白质组计划的实施,对不同蛋白质的快速分析,定性以及定量的需求更大,反相液相色谱以其快速简便,灵敏度高,重复性好,分辨率高等优势受到人们的重视,已成为一种常备的不可缺少的分析手段,并用于多肽药物分离中。反相液相色谱与各种质谱技术的结合也已成为蛋白质结构分析的重要手段和发展方向。 Chrom-Matrix公司所研发的InnovationTM 300Å C18依靠七大创新特点，确定了其在应用中的优势地位。 第一， InnovationTM 300Å C18色谱柱在100%水流动相中的稳定性，生物分离实际应用中经常遇见非常极性多肽。如果只有极性多肽, 可以使用InnovationTM HP Amide亲水色谱进行分离, 但是实际应用中经常是极性多肽和不同疏水性多肽混合物。特别是全盲条件下肽图谱, 希望线性梯度能从100%水流动相开始, 从而最大限度地获取酶切后不同极性肽的信息， Chrom-Matrix公司研发的InnovationTM 300Å C18色谱柱能100%在水流动相中稳定性非常好。 第二，碱性多肽在InnovationTM 300Å C18色谱柱上有对称峰形，InnovationTM 300Å C18通过成熟的超临界流体封端技术, 最大程度了消除硅醇基的酸性效应, 因此变成"名符其实"高品质的纯粹反相机理的高效液相色谱柱。因此所有的多肽，包括困难的多肽都能够获得对称峰形。相反, 许多碱性多肽在主要竞争对手色谱柱上峰严重拖尾甚至不出来。 第三，在InnovationTM 300Å C18(C8或C5)色谱柱上多肽LC-MS分析无需使用三氟乙酸，在多肽或蛋白质反相高效液相色谱分离纯化或分析中,三氟乙酸经常被使用作为离子对试剂维持峰形。如果只使用紫外检测,虽然没有问题，但是，随着液质联用技术变得越来越流行,生命现象中许多问题越来越依赖液质联用技术痕量分析蛋白质的结构和组成的变化(蛋白质组学), 科学家迫切需要在多肽或蛋白质LC-MS分析中避免使用三氟乙酸, 因为三氟乙酸严重降低了质谱检测灵敏度。InnovationTM 300Å C18(C8或C5)通过成熟的超临界流体封端技术, 最大程度了消除硅醇基的酸性效应, 因
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红锥蝽卵子发生过程中胞外H+转运动力学的研究
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
The Journal of Experimental Biology H+动力学调控卵子发生 红锥蝽卵子发生过程中胞外H+转运动力学 p{text-indent:2em; margin:6px 3px 6px 3px; line-height:21px;} 卵子发生在生物体形成过程中非常重要，影响到胚胎的发育以及个体的形成，在这个过程中，H+动力学起到一个关键的调节作用，细胞通过H+转运维持膜电势和产生跨膜的化学梯度来驱动次级代谢，但是在昆虫滋养型卵母细胞成卵过程中发生的H+流的变化和H+流引起的pH值变化所起到的调节作用却了解很少。利用“非损伤微测技术”可实现对H+流在不同时间和空间的实时监测，从而揭示H+流在昆虫滋养型卵母细胞生成过程中所起到的调节作用。 美国Wadsworth中心神经系统失调研究实验室科学家Bjornsson C. S.等采用“非损伤微测技术”对红锥蝽（Rhodnius prolixus）在相同生长部位的不同生长阶段进行胞外H+流实时监测发现，卵黄生成中期卵巢管中分离相邻卵泡囊的主茎表现出显著的H+外流，而在卵黄生成后期H+外流减弱。H+外流的现象不仅在主茎生成之前已经产生，而且先于邻近卵泡囊的卵黄生成起始阶段。另外在生成绒毛膜的末端卵泡囊和卵泡囊排卵后也分别检测到了H+的外流现象，这揭示了躯体的卵泡上皮细胞控制着H+的外流。 上图： 上图是通过非损伤微测技术在卵巢管不同部位不同生长时期检测到的H+流的变化情况。正值为外流，负值为内流。 该研究通过非损伤微测技术检测昆虫成卵过程中H+流的变化，揭示了H+流在卵黄生成的起始阶段、内吞、卵泡细胞骨架动力学及滤泡反馈机制调节中的重要作用，跨膜H+流可促使胞内pH值的改变。这为昆虫成卵过程的机理研究提供了新颖的思路和方法。 .tmp_b1{ margin:6px 6px;} 关键词：H+, 离子选择电极(ion-selective probe) , 卵子发生(oogenesis) 参考文献：Bjornsson CS, et al. The Journal of Experimental Biology,2004, 207, 2835-2844 全文下载： Abstract: The spatiotemporal dynamics of trans
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PCR Array 简单实用的检测基因表达的高通量方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
PCR Array 简单实用的检测基因表达的高通量方法 简介：什么是PCR芯片？ 实时定量PCR是检测基因表达最灵敏，最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内参基因，因此，每次实验只能检测少数几个基因的表达水平，若要检测大量基因，则工作量巨大，耗时长久。 通过简单的，经过优化的实时定量PCR体系，如SuperArray的RT2ProfilerTM PCR芯片，研究者可以同时研究大量基因，既可以进行某些特别感兴趣的信号通路的研究，也可以作为验证芯片结果的方法。 为了获得理想的实验结果，PCR芯片面临以下挑战：高特异性，高灵敏度和可重复性。高灵敏度或低检出限，在样品的总RNA量少，基因表达量低的情况下，也能检测出目的基因。高特异性，扩增产物严格保证基因特异性，避免非特异性产物，如引物二聚体的产生。可重复性，通过标准化的反应体系和实验方法，使得多人多次重复实验均能获得可靠的基因定量结果。 PCR芯片实验操作步骤 采用PCR芯片进行实验只需2小时。PCR芯片实验过程如图1所示：首先将RNA样品反转录为cDNA第一链，作为PCR模板；接着，将模板加入到反应体系（RT2 Real-TimeTM SYBR Green PCR Master Mix）中。在已经固定好基因特异性引物的96孔板各孔中，加入等量的PCR反应体系，进行PCR反应。采用仪器配套的软件计算PCR芯片中的每个基因的循环阈值（Ct）。最后，采用△△Ct方法比较对应的两个样本中同一基因的表达量变化。通过分析看家基因Ct值的一致性，可确定合适的标准化方法。芯片所设置的对照，可以检测PCR体系中是否存在DNA污染，或者是否有影响反转录或PCR实验步骤的因素存在。 图一 PCR芯片实验流程 PCR芯片的设计和所包含的基因 96孔模式的每种RT2Profiler PCR芯片，含有基因特异性引物，可用于研究
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RNAi的机理与应用
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
RNAi 技术的机理与应用 关于 RNAi 技术 RNA 干扰（RNA interference,RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链 RNA( double-stranded RNA，dsRNA) 诱发的、同源 mRNA 高效特异性降解的现象。 RNAi 受到追捧的原因主要有两个方面，一方面， RNAi 可以说是基因功能检验的试金石，利用 RNAi 技术可以缩短人类对人类基因功能的了解和认识的时间，在不久的将来有望将人类大部分基因的功能和作用全部弄清楚；另一方面，科研人员有望利用这种技术获得使致病基因失活的新型基因药物，而基因药物一直是生物技术界追捧的对象。 2002年，《自然》及《科学》两本重量级学术期刊把 RNA干扰技术视为生命科学领域重大突破，认为足以比肩 20 世纪早期发现抗生素，开启了基因**的另一个方向。 2006年10月，2006年度诺贝尔医学奖被授予美国斯坦福医学院病理学和遗传学教授安德鲁·菲尔和马萨诸塞州医学院分子医学教授克雷格·梅洛，表彰他们发现 RNAi机理。 RNAi迄今已对制药业和生物技术工业产生巨大影响。这也是诺贝尔奖评审委员会为什么不坚持研究成果要经过数十年实践验证的“惯例”，破格为菲尔和梅洛颁奖的原因之一。 目前，RNA干扰**技术正在快速进入人体试验阶段，已有多个 siRNA 药物进入临床试验，其中第一个RNAi药物 Bevasiranib（美国 Acuity Pharmaceuticals 公司）已处于Ⅲ期临床试验阶段，有望于 2009 年获准上市。 RNAi 机理 遗传物质 ，化学名称是“脱氧核糖核酸”，简称 DNA 。 DNA 包含约二万多个蛋白质的密码。当细胞决定要制造某一个蛋白质之时，属于该蛋白质的 DNA 密码便会被“影印”（专业上称为转录 Transcription ），做成一份核糖核酸的“副本” RNA ，又叫 mRNA 。 mRNA 副本会去细胞内的蛋白质“工厂”（核糖体〔 Ribosome 〕），然后，按次序将二十种胺基酸组合成一个蛋白质。 一些病毒觑准上述机制，把病毒的 RNA 送入细胞，借其核糖体，生产自己的蛋白质。这些以 RNA 储存遗传讯息的病毒，进入细胞后，会
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唾液检测----未来的诊断方式
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
唾液检测----未来的诊断方式 唾液可用于口腔和牙科疾病的早期诊断和**，这个概念不难理解。但若说唾液中可能存在反映全身健康状况的生物标志物，有些人的心里难免要打个问号。事实上，唾液检测并非是新近被提出的概念，早在几年前就已经有“唾液诊断艾滋病”的新闻报道。 2008年，美国南加州大学的丹尼（Denny）等在《蛋白组学研究杂志》[J Proteome Res 2008，7（5）：1994]发表文章指出，人的唾液中有1166种蛋白质。其中大部分蛋白质能同时在血浆和泪液中找到。当时研究者就提出，从这些蛋白质中可以找到与疾病相关的生物标志物，从而为今后的临床诊断提示一种新方式 随后有研究陆续发现，人唾液中的C反应蛋白、α -1B糖蛋白、肌酐等水平与心血管疾病、癌症、肾脏病等相关。 唾液与糖尿病 在不久前发表于《蛋白组学研究杂志》[J Proteome Res 2009，8(1):239]的一项研究证实，唾液蛋白质与2型糖尿病相关。 通过对2型糖尿病患者和对照者的唾液蛋白组学分析，印度学者发现了唾液中487种与2型糖尿病有关的蛋白。其中33%的蛋白以前从未被报告出现在人类唾液中。在这些蛋白中，有65种蛋白的水平在患者和对照者唾液中能相差2倍之多。进一步分析显示，一些蛋白水平在2型糖尿病患者的唾液中显著升高，在糖尿病前期患者中也有相应升高趋势，因此，可能作为未来无创诊断2型糖尿病和发现糖尿病前期患者的生物标志物。 唾液与癌症 早在2007年，美国M.D.安德森（Anderson）癌症中心的研究者就曾在《国际肿瘤学杂志》上报告[Int J Oncol 2007，30(3):743]，在头、颈部鳞癌患者的唾液中，α -1B糖蛋白和补体因子B蛋白水平显著升高，而对照者唾液中几乎检测不到这两种蛋白。相应地，胱蛋白S、腮腺分泌因子等蛋白的水平在对照者唾液中存在，但在头、颈部鳞癌患者唾液中检测不到。 当时研究者就在报告中写道，这些蛋白将来可能作为临床诊断此类癌症的标志物。 通过一项动物研究，科学家们试图挖掘唾
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InnovationTM高效强阳离子交换液相色谱柱为基因工程提升效率
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
基因工程是当前科技发展最为迅速的领域之一，随着基因组学和分子工程学的发展，特别是“人类基因组计划”的初步完成，标志着基因工程发展到一个新的历史阶段，更展示出基因产业的巨大潜力。然而在基因产业，尤其是基因药物产业中其成本的70%甚至更高应用于蛋白质药物的分离纯化，可见分离纯化再次的重要作用。 然而，在基因工程的大规模蛋白质药分离纯化工艺优化过程中, 软胶柱效过低, 平衡和纯化时间太长等众多瓶颈问题无法解决,导致了分离纯化成本高, 效率低的恶果。如果大规模高效离子交换色谱柱(柱效8-12万)可以代替传统软胶柱, 不仅是发酵产生的基因工程蛋白质药(纯化体系简单)还是自然界(纯化体系复杂)天然蛋白质, 一个线性梯度纯化即可能获得完全提纯的蛋白, 时间缩短了10倍。这一理想的高效离子交换色谱柱一定是硅胶基质的! 事实上, 生物下游工程(biological downstream engineering)的未来一定是以高品质硅胶基质的高效离子交换色谱柱和廉价的假亲合配基亲合色谱柱为纯化核心, 配合用于粗纯化的膨化床吸附和用于脱盐常规的凝胶体积排阻色谱。 因此，Chrom-Matrix公司经过系统地调查，充分了解了为什么近几十年来硅胶基质的高效离子交换键合相产品质量没有取得质的突破的原因, 并且逐步的解决，最终研发出新型键合化学生产高品质硅胶基质的SCX, WCX, DEAE和SAX高效离子交换键合相。 Chrom-Matrix公司生产的InnovationTM SCX高效强阳离子交换液相色谱柱(适合于小分子和多肽的应用) 和InnovationTM BioSCX高效强阳离子交换液相色谱柱(适合于多肽和蛋白质的应用)。它们的稳定性、柱寿命、重现性绝对在硅胶基质高效强阳离子交换液相色谱中具有优势地位的色谱产品。InnovationTM SCX高效强阳离子交换液相色谱柱主要有以下产品特征。 (1)InnovationTM SCX键合相是一种最重要的离子交换键合相。非常稳定，非常可靠, 键合产品批次之间的差别小于5%。特别适合碱性或两性小分子化合物和多肽分离。键合相没有泄漏! (2)在许多
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