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苏醒：细胞复苏的方法及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞复苏即使细胞恢复生长的过程，是将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养。当恢复到常温状态时，细胞的形态结构保持正常，生化反应即可恢复。 细胞复苏方法: ①将冷冻管从液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率，复苏过程中一般细胞死亡率在20%～25%之间。 ②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒，然后放置在冰浴上。 ③小心开启瓶盖，把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中，然后把培养瓶移至培养箱，26℃～28℃培养1h，让细胞贴壁。 ④细胞贴壁后，小心移弃培养基，主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、还有死细胞及其碎片，加5mL新鲜培养基，26℃～28℃培养。 ⑤细胞培养24h后，更换新鲜培养基，继续培养直到形成单层，便可以传代。 ⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。 注意事项： 1、注意无菌操作。 2、应在1-2min内使冻存液完全融化。如果复温速度太慢，则会造成细胞损伤。另外，细胞复苏后的操作在4℃冰浴中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。 3、细胞复苏过程中，升温的速率要大，把从液氮或-70℃水箱中取出的细胞在zui短的时间内放入水浴锅。 4、细胞放入水浴中注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动，使其受热均匀，并防止水浴时水进入细胞冻存管污染细胞。打开细胞冻存管之前要用酒精棉球将冻存管消毒并晾干。 5、液氮操作有一定的危险性，打开液氮罐取出细胞时，戴上防护眼睛。 6、如果冻存管密封不严，液氮可被吸入。由于解冻时冻存管中的气温急剧上升，将可能发生爆炸。复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖。 上海恒远为广大客户提供高质量的免疫学和生命科学相关产品。质量可靠，被全国各大院校科研机构认可并为Elisa试剂盒标准品对照品长期供应商。我们将以专业执着，精益求精的精神服务于广大科研用户。
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索莱宝抗体新发布（NFKB1 Antibody）
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
NFKB1 Antibody Rabbit Polyclonal| Catalog number: K002146P Applications:WB IHC IF IP| Species specificity:HumanWestern blot analysis of extracts of various cell lines, using NFKB1 antibody.Immunoprecipitation analysis of 150ug extracts of MCF-7 cells using 3ug NFKB1 antibody . Western blot was performed from the immunoprecipitate using NFKB1 antibody at a dilition of 1:500.Immunohistochemistry of paraffin-embedded human tonsil tissue using NFKB1 antibody at dilution of 1:100 (x40 lens).Immunohistochemistry of paraffin-embedded human gastric cancer tissue using NFKB1 antibody at dilution of 1:100 (x40 lens).
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elisa试剂盒白介素类实验时常出现的错误及对策
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
elisa试剂盒白介素类异常：白板结果描述：显色步骤结束后酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。原因分析：试剂已过有效期，或不同试剂盒组分混用，检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。elisa试剂盒白介素类对策：不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用。整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成，如同时操作两对半试剂时，测HbsAb板用于测HBsAg等；实验前检查试剂的组分及批号，确认所有组分均属于对应的试剂盒。如盛标本的试管四周常有血痂，易脱落，应远离酶标板。elisa试剂盒超过有效期的产品可能会产生很弱的信号；试剂盒没有按规定进行留存，受高温影响；实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作，保温期内不宜多开门，以免影响保温。花板，一般是由于临床标本的收集、处理和留存方法不当造成，放置时间（自 然放置 1~2h）及离心转（3000r/min）、离心时间（15min）应引起注意。试剂、样品用前未平衡至室温从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平 衡，20分钟左右。错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B 严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象。实验结束后，阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱，待测 标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的，如有怀疑，可复检标本加入叠氮钠作为防腐剂，酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂，阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。 不同试剂盒或不同批号的试剂不能 混用酶标对吸头的污染以及对盛放显色剂容器的污染都易造成黄板现象；避免试剂组分间的交叉污染，确保吸头、容器的干净，显色剂在光照条件下放置过久，实验 前已变蓝，显色剂A、B未使用前避光留存，孵育温度过高或孵育时间过长；孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。标本在一周内
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噬菌体滴度测定的操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
亮发光杆菌在宿主细胞过量的情况下，噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因，在感染以前，要将噬菌体进行稀释，而不是将宿主细胞稀释。以低MOI(感染重复性)铺板，也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA序列。 材料和试剂 1. 微波炉 2. LB/IPTG/Xgal培养板 3. lb培养基 4. 顶层琼脂糖凝胶 操作步骤 1. 在5~10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆，振摇孵育直至对数生长中期(OD600~0.5) 2. 在细胞生长时，微波融化顶层琼脂糖凝胶，分装至无菌培养管内，每管3ml。维持在45℃备用。 3. 37℃预热LB/IPTG/Xgal培养板，备用。 4. 以LB培养基10倍比稀释噬菌体。 亮发光杆菌建议稀释范围：对扩增的噬菌体培养上清，108-1011;对未扩增的筛选洗脱液，101-104。每次稀释都换用新的加样枪头，使用气溶胶阻隔枪头以避免交叉污染。 5. 一旦ER2537培养物长至对数生长中期，分装至微量离心管中，每管200ml。 6. 将倍比稀释的噬菌体上清加入含细菌培养物的微量离心管中，一支微量离心管中仅加入一种稀释液10ml，快速涡旋，室温孵育1-5min。 7. 转移至含有45℃顶层琼脂糖凝胶的管中，快速涡旋混匀，立即倾倒至预热的LB/IPTG/Xgal平板上，轻缓摇动平板使顶层胶均匀分布。 8. 冷却平板5min，37℃倒置培养过夜。 9. 亮发光杆菌噬斑计数以噬斑数为100左右的平皿为准，噬斑数乘以稀释度即可获得每10ml噬菌体的滴度-噬斑形成单位(pfu)。
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羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒试剂配置
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒解决该情况的办法是：ELISA试剂盒①用F（ab）2替代完整的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用等加入到标本稀释液中，使RF降解。（2）补体ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从而造成假阳性。解决的办法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。（3）嗜异性抗体人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig （s） 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动物Ig （s） ，但加入量不足或亚类不同时无效。（4）嗜靶抗原的自身抗体抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。（5）医源性诱导的抗鼠Ig （s） 抗体临床开展的用鼠源性CD3等单克隆抗体**，用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向**等新技术，均有可能使这些病人体内产生抗鼠抗体；另外，被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠Ig （s） 抗体。这些病人ELISA测定时均可产生假阳性。解决的办法是：测定抗原时，在标本中加入足量的正常鼠Ig （s） ，从而克服由于上述原因造成的假阳性。（6）交叉反应物质ELISA试剂盒类、类AFP样物质等，是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大，但在用单克隆抗体测定抗原时，如果交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时，也会出现假阳性结果。（7）标本中其它成分的影响 血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等，羊源性成分核酸检测PCR-荧
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elisa酶联免疫试剂盒价格实验常用的规则和步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
elisa酶联免疫试剂盒价格是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。它是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。以下是对ELISA实验的通用步骤的简单说明。 elisa酶联免疫试剂盒价格实验通用步骤： （1）、要保证移液枪的性，偏差不能超过2%。可用水和电子天平进行判定。如果有专业人员进行纠正更好。 （2）、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。提取不一样的液体后，要更换枪头。即使是提取标准品时也一样。 要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使效果更安稳。 （3）、实验时，要使底物避光储存。 （4）、用枪提取液体时速度不能太快，避免生成气泡而使提取量不。 （5）、提取液体时，要用量程和需要量相近的枪去吸，减小偏差数值。 （6）、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。 （7）、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻摇晃30秒，是液体缓和均匀。也可以用酶标仪的晃动功用。 （8）、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，避免水分的蒸发。 （9）、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。 （10）、洗液不够时，可用蒸馏水自行制作PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长时间保存。 （11）、底物是光敏感的，需要在临用前现配。 （12）、检测前，要翻开酶标仪，使之稳定10分钟以上。 （13）、底物有一定的毒性，中止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。 （14）、待检样品要澄清，否则会影响效果的性。 （15）、温浴时间应遵循试剂盒规定。 （16）、应尽量做双孔实验，这样才华保证数据的性。 （17）、elisa酶联免疫试剂盒价格对效果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
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ATCC菌种活化需要以下几个步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ATCC菌种活化需要以下几个步骤： *配置菌种适宜生长的培养基 第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻 第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮 第四步挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落 ATCC菌种经过这四个步骤就到达将菌种从保藏状态活化的目的 耻垢分枝杆菌 Mycobacterium smegmatis 金龟子绿僵菌小孢变种 Metarhiziumanisopliaevar.anisopliae 黏质沙雷氏菌 Serratia marcescens 蜡样芽孢杆菌 Bacillus cereus 肠炎沙门氏菌 Salmonella enteritidis 甲型溶血性链球菌 Streptococcus hemolytis-α 表皮葡萄球菌 Staphylococcus epidermdis 金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureussubsp. 甲型副伤寒沙门氏菌 Salmonella paratyphi A 凝结芽孢杆菌 Bacilluscoagulans 大肠埃希氏菌 EscherichiacoliCaslani&Chalmers 产朊假丝酵母 Candidautilis(Henneberg)LodderetKreger-vanRij 白色假丝酵母 Candidaalbicans(Robin)Berkhout 伊氏李斯特氏菌 Listeria ivanovii 肠侵袭性大肠埃希氏菌 Escherichia coli EIEC 纳豆芽孢杆菌 Bacillus natto 马红球菌 Rhodococcus equi 英诺克李斯特氏菌 Listeria innocua 肠致病性大肠埃希氏菌 Escherichia coli EPEC 铜绿假单胞菌 Pseudomonasaeruginosa(Schroeter)Migula 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 肠产毒性大肠埃希氏菌 Escherichia coli ETEC 胶冻样类芽孢杆菌 Paenibacillus mucilaginosus 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 荧光假单胞菌 Pseudomonas fluorescens 梭形芽孢杆菌属 Lysinibacillus sp. 具核梭杆菌具核亚种 Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum 鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella typhimurium 血链球菌 Streptococcus sanguinis ATCC菌种
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人正常组织来源细胞的稳定转染
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1、人正常组织来源细胞pcDNA3.1＋-gD的线性化: pcDNA3.1＋使用说明书推荐了以下几个酶作为线性化酶(BglⅡ MfeⅡ Bst1107Ⅰ Eam1105Ⅰ PvuⅠ ScaⅠ SspⅠ),通过DNAMAN分析gD序列发现其带有MfeⅡ酶切位点。 2、转染前一天,在60mm的dish中接种8×105个细胞,加入5ml培养基(含血清,不含抗生素),37℃,5%CO2培养,至转染时要求细胞40%-80%汇合。 3、通过分光光度计测定pcDNA3.1＋-gD的浓度,用不含血清、抗生素、蛋白质的培养基稀释2.5ug的pcDNA3.1＋-gD至总体积150ul，其zui小浓度不低于0.1ug/ul,稀释后应颠倒几次EP管以混匀混合物。 4、向混匀的混合物中加入15ul转染试剂(PolyFect Transfection Reagent Qiagen),用加样器吹打5次。 6、人正常组织来源细胞在室温下(20-25℃)孵育混合物5-10分钟。 7、在孵育的同时，吸出dish中的培养基，用PBS液洗涤一次，加入3ml的培养基(含血清，不含抗生素)。 8、孵育完成后加入1ml培养基(含血清),用加样器吹打2次，将产物全部加入60mm的dish中，轻轻摇动dish以混匀。 9、37℃,5%CO2培养，在细胞汇合度不超过50%时加入G418进行筛选。 转染时转染两组细胞，组一在转染后细胞汇合度不超过50%时（一般是24小时）加入G418进行筛选；组二在转染后待细胞汇合度达到80%时1/4000、1/1000、1/300分别接种于dish中，48小时后加G418筛选。 10、加入G418后，每3天更换一次含有筛选浓度的G418。当有大量细胞死亡（5-7天）时，可以把G418的浓度减半维持筛选（此时可以加入适应性培养基1：4来改善细胞对培养基的同化作用）。 11、筛选10-14天后，可见有抗性的克隆出现，停药培养，待其逐渐增大后，制备细胞悬液，记数，用培养基稀释细胞到1个/10ul。在96孔板中加入培养基150ul/孔，再加入细胞悬液10ul/孔。待其逐渐增大后转入48孔板中增殖（为了减少实验失误带来的风险建议冻存部分增殖细胞）。 12、人正常组织来源细胞大量扩增后，提取总DNA，做PCR检测目的基因是否存在。
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显色培养基制备方法分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1. 显色培养基肝素溶液制备 配制浓度20 mg/100ml 生理盐水肝素液，9 磅10 分钟高压或滤过灭菌，每小瓶中分装入0.5 ml 贮4 ℃冰箱中备用； 2. 动物准备 缚鸡于手术架上，令仰卧，从鸡翅取血；展开鸡翅，拔除翅根局部羽毛，选血管粗大部位，碘酒和酒精棉球消毒； 3. 采血 取20 ml 无菌注射器，先吸入肝素液少许，湿润注射器内壁后，用16号针头刺入静脉，吸血10 ml，立即注入离心管中，摇匀； 4. 分离血浆 3000 转/分 离心10 分钟后吸出上清血浆，分装入小瓶中，－20 ℃冰箱贮存备用。 显色培养基也可采用从鸡的心脏穿刺取血，方法是从锁骨上窝部进针，直接穿入心脏；取血量大而快，用此法采血亦可。 酵母提取物琼脂 进口、国产 250克 Yeast Extract Agar 水中细菌总数的检测 乳糖蛋白胨肉汤 进口、国产 250克 Lactose Peptone Broth 饮用水中总大肠菌群多管发酵法检验 Cary-Blair氏运送培养基 进口、国产 250克 Cary-Blair Transfort Medium 运送肠道致病菌标本 MFC培养基 进口、国产 250克 MFC Medium 饮用水中大肠菌群滤膜法检验 亮绿乳糖培养基 进口、国产 250克 Brilliant Green Lactose Medium 饮用天然矿泉水中大肠杆菌检验 卵磷脂吐温80营养琼脂 进口、国产 250克 Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 化妆品检验中细菌计数 乙酰胺琼脂 进口、国产 250克 Acetamide Agar 绿脓杆菌的选择性分离培养 SCDLP液体培养基 进口、国产 250克 SCDLP Broth Medium 化妆品检验中样品制备、增菌 假单胞菌属选择琼脂 进口、国产 250克 Cetrimide Agar 用于绿脓杆菌的分离培养 普通琼脂斜面培养基(PH8.0-8.2) 进口、国产 250克 Common Nutrient Agar 一般细菌的培养，分离培养霍乱弧菌，埋迪霉菌鉴定用
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ATCC细胞肉眼观察检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ATCC细胞一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。 培养细胞的观察检测方法 大多数细胞适于在pH 7.2～7.4条件下生长，低于pH 6.8或高于pH 7.6对细胞有害，甚至造成细胞退化或死亡。细胞对碱性不如对酸性的变化耐受，偏酸的条件比偏碱的环境对细胞生长有利。 随细胞数量的增多、代谢加强，释放CO2增多，使pH 降低。为了维持培养基恒定的pH ，多在培养基中加入磷酸盐等缓冲剂。 对细胞无毒性，也不起缓冲作用，主要作用是防止pH迅速变动，在开瓶通气培养或活细胞观察时能维持较恒定的pH值。 若培养瓶、瓶塞漏气， 使CO2溢出，或者由于洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，致使ATCC细胞难以生长，甚至死亡。 ES114 Aliivibrio fischeri (Beijerinck) Urbanczyk .. yD1432 Homo sapiens, human WB 4983 [QM 8896] Emericella heterothallica (Kwon et al.) Mal .. YGR236C BY4743, heterozygous diploid [25889] Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans .. 353 [IMI 117688] Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorok .. yD166 Homo sapiens, human 2176 Rhizopus microsporus van Tieghem, eomorph YLR363C BY4742, mating type alpha [15272] Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans .. 165 [CCM 3308, NCMB 2053, NCTC 11159, U.S. 2 .. Iodobacter fluviatilis (Moss et al.) Logan YGR059W BY4743, homozygous diploid [34689] Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans .. TSHR-R5T-44 Mus musculus (B cell); Mus musculus (myeloma .. YOR124C BY4742, mating type alpha [12380] Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans .. Alternaria atra (Preuss) Woudenberg et Crous freeze-driedATCC细胞
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冰冻干燥技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
冰冻干燥就是使蛋白样品液在预先冰冻的状态下，用抽真空的方法，不经液态，直接升华，除去其中所含水分，并使样品蛋白成为干燥制剂的过程。在免疫酶技术中，所用的血清、酶等在溶液中容易变性，制成干燥制剂后可长时间地在室温或冰箱（4℃）内保存而不失活，并且便于携带。 之所以要在冰冻是因为被干燥样品所含水分或溶剂由于周围空气压力的减少而增加蒸发速度，并且真空度愈高，溶液沸点越低，蒸发越快。 冰冻真空干燥与真空干燥和喷雾干燥相比，在实验中应用得更多更普遍。 1． 冰冻干燥血清的程序 （1） 先将适量血清倾倒在适当大小的培养皿中（样品液厚度在1cm以下），在低温—20℃以下）下冰冻成固态。 （2） 在冰冻干燥装置中，分别放置固体氢氧化钠和五氧化二磷，真空干燥器上端抽气管通过五氧化二磷干燥管与真空泵相连。 （3） 将冰冻血清块连同培养皿放进真空干燥器内，立即封闭干燥器（事先在盖沿涂上凡士林），开动油泵，一般经5－10h后，即可得冰冻干燥制剂。 （4） 冰冻干燥完毕。首先逐渐打开干燥器顶盖玻璃阀，慢慢放气，待整个系统中压力上升到大气压后，取下样品干燥容器，zui后关闭真空油泵。 2.讨论 （1）冰冻干燥的效果，取决于真空泵的真空度与口径合适的管道。真空油泵选用抽空容量大的，所有接管应力求粗短。 （2）样品如果是溶液，则是水溶液，以避免有机溶剂降低冰点，进入泵内。浓度要适中，不低于1.5%。 （3）样品如用缓冲液作为溶剂，用有挥发性的，例如碳酸盐或醋酸盐缓冲液;若是非挥发性的，则要考虑pH和盐浓度对样品的影响。例如用pH7.0磷酸盐缓冲液，由于冰冻干燥时Na2盐比Na盐先结晶，pH降至约3.5，对样品有害。在样品液中加入少量的明胶、乳糖或葡萄糖等，有利于保存活性。 （4）样品预冻时先放在普通冰箱冷至0℃后，迅速移入一20℃以下的冰箱骤冷冻结。 （5）在抽真空时，样品万一融化，必须重新预冻，并要检查原因。 （6）抽真空约30min，如盛有预冻样品的容器
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昆明动物所等发现藏族人群血红蛋白浓度的海拔拐点
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
藏族人群的血红蛋白浓度与红细胞增多症检出率随海拔变化的非线性模型。A，血红蛋白浓度；B，红细胞增多症检出率。虚线指示的是血红蛋白浓度与红细胞增多症检出率在人群中出现快速上升的海拔拐点值。近日，*昆明动物研究所宿兵实验室与西藏大学、青海高原医学科学研究院等开展合作，研究发现了藏族人群血红蛋白浓度的海拔拐点。这是该团队在藏族高原适应机制研究中的又一阶段性成果，提出 4500 米可能是世居藏族人群对高原低氧环境适应的临界海拔，初步回答了藏族人群究竟能适应多高海拔的问题。该研究成果于 6 月 7 日在线发表在《美国血液学杂志》上（American Journal of Hematology, doi: 10.1002/ajh.24809）。世居青藏高原的藏族人群可以较好地适应高原低氧环境。与移居高原的平原汉族人群相比，世居高原的藏族人群在生理上表现为具有较高的通气量、较低的肺动脉压以及相对较低的血红蛋白浓度。其中，血红蛋白浓度可以间接地反映人群对高原的适应情况。宿兵实验室与西藏大学高原医学研究中心崔超英实验室、青海高原医学科学研究院吴天一实验室等通过 10 多年的紧密合作，深入当地村镇，实地采集了 20 多个地理区域的不同海拔藏族人群的各项血液、生理和生化指标数据，涵盖从zui低海拔（墨脱县，1,900 米）到极限高海拔（浪卡子县普玛江塘乡，5,018 米）的世居藏族人群。研究人员系统分析了这些藏族人群的血红蛋白浓度随海拔高度变化的模式，发现藏族人群的血红蛋白浓度和红细胞增多症检出率在 4500 米左右是一个拐点，4500 米以上呈现快速的增长。研究结果提示，藏族人群通过调控血红蛋白浓度来适应高原低氧环境的调控机制在 4500 米以上的极限高海拔低氧环境中可能不再有效。西藏大学首届博士生张慧、中科院昆明动物所博士生和耀喜、西藏大学教授崔超英为论文共同*作者，昆明动物所研究员宿兵与副研究员祁学斌为论文共同通讯作者。该研究得到中科院先导 B 项目、国家自然科学基金委“微进化”重大研究计划项目和地区
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流式细胞技术实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
流式细胞技术实验方法 PI 染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。 2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。 3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。 4、离心，弃上清液。 5、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。 6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min，离心。 7、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。 8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室温避光孵育30min。 9、混匀，过300目筛网，置流式管中， 4℃冰箱保存，待测。 GFP PI染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。 2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。 3、加入2ml预冷PFA，PFA的浓度根据细胞的特点进行调节，4℃固定30min。 以下步骤同PI 染色操作步骤的（4-9） 细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。 2、以冷PBA 1ml，离心洗涤，弃上清液。 3、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul。用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。 4、离心弃上清液。 5、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。 6、向细胞中加入冷PBS 500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。 细胞表面间接免疫荧光染色操作步骤 1-2、同细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤 3、 用PBA稀释的*抗体200ul，对照管加入对应于一抗的正常实验动物IgG，轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育1、5-2h。离心，弃上清。 4、 PBS 1ml离心洗涤1次，以去除多余的未结合的特异性抗体。 5、 PBA适当稀释的荧光素标记的第二抗体200ul。吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min，避光。 6、 PBS 1ml离心洗涤2次。 7、将细胞重新悬浮于500ulPBS中，混匀，置流式管中，避光，4℃冰箱保存，待测。 胞内直接免疫荧光染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，15
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ELISA试剂盒空白孔的设置
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1. 空气空白水空白：一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。2.底物空白：一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高，同样所有孔数值减掉该孔数值（只加底物和终止液）3. 酶空白：一般在2步法实验中使用，主要是看酶是否和板有非特异性结合的，一般不做这个 。 ELISA空白孔一般设一个，这是为了减除显色液的OD值。而阴性和阳性标准品是设2个复孔，虽然有点浪费，但为了确保实验的可靠性，我认为还是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般两个做法，看个人习惯或者说看你们实验室的习惯：1，什么都不加，然后那个孔按照操作流程来做，这个说法的根据就是空白，也就是什么都没有。2，加样本稀释液，然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的，加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔一致。
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ELISA实验18条通用规则
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA实验18条通用规则 1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。 2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。 3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。 4、实验时，要使底物避光保存。 5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。 6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。 7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。 8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。 9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。 10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。 11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。 12、底物是光敏感的，要在临用前现配。 13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。 14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。 15、待检样品要澄清，否则会影响结果。 16、温浴时间应遵守试剂盒规定。 17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。 18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
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