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ELISA试剂盒常见的定量方法策略
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒测定原理：现在皮质醇ELISA试剂盒除非是测定抗体的以外，一般使用的是双抗体夹心法，此种方法大多数用的是增强的双抗体夹心法，即使用生物素-亲和素系统，及少数的指标可能使用竞争法，这类方法适用于半抗原的测定。具有复杂结构的多表位蛋白抗原，其双抗体夹心法中的一个抗体必须用单抗，否则背景很高。当然如果两个都是单抗(这两个单抗针对不同表位)，那么测定的线性范围就较宽，试剂盒性能就较好；一个用单抗，一个用多抗，测定的灵敏度会较高。ELISA试剂盒测定时：因为没有两个或以上的表位，一般只能作为半抗原，只能用竞争法测定。如果你发现有测定简单化合物(如雌激素、NO、)用双抗体夹心法作测定原理时，这个试剂盒你就要怀疑了。另外还要说明一步双抗体夹心法与两步双抗体夹心法的区别。一步双抗体夹心法的吸光度-剂量曲线呈钟形，随着待则标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后，测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直至不显色所以当使用一步双抗体夹心法时，样品浓度太高，有时会出现测不出来的现象，此时要作适当的稀释才能准确测定。ELISA试剂盒的组成：用双抗体夹心法作为测定的方法时，试剂盒的组成一般包括：已包被单抗的酶标板：一块，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，铝箔袋密封，打开后有干燥剂，实验时暂未使用的酶标条要连带干燥剂密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。
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细胞冷冻保存的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO（Sigma D-2650）、无菌塑料冷冻保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机（KRYO10SeriesII）。 2、冷冻保存方法： （1）传统方法：冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16～18小时（或隔夜）→液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 （2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 3、步骤： （1）冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。 （2）配制冷冻保存溶液（使用前配制）：将DMSO加入新鲜培养基中，zui后浓度为5～10％，混合均匀，置于室温下待用。 （3）依细胞继代培养之操作，收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液（约0.1ml）计数细胞浓度及冻前存活率。 （4）离心，去除上清液，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。 4、注意事项： （1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好（logphase）且存活率高之状态，约为80–90％致密度。 （2）冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 （3）注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色（以0.22micron FGLP flon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650），以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。 （4）冷冻保存之细胞浓度： ①normal human fibroblast:1～3×106cells/ml ②hybridoma：1～3×106cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死*。 ③adherent tumor lines：5～7×106，依
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夏季ELISA试剂盒的保存有决窍
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
夏天，当一切都变得成熟而显得有些老成的时候，它带着狂热，顷刻间席卷了整座城市。偶尔刮起的夏风，扫过这个城市的每个角落，也都蕴涵着袭人的热量。ELISA试剂盒匆匆从炽热的太阳底下飞奔过的人，也忘不了抱怨几句“这个天好热哟，晒死人了。"关于夏天的记忆，从这里开始。 那么对于我司产品保存温度在试剂盒保存：-20℃(较长时间不用时)；2-8℃(频繁使用时)我司提示炎热夏季试剂盒需重点保存保存如下：1．ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，ELISA试剂盒计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。
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植物NADP-ME ELISA Kit-上海仁捷生物
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
植物NADP苹果酸酶（NADP-ME）试剂盒（ELISA） 使用说明书 l 本试剂盒用于体外定量检测组织、细胞及相关液体样本中植物NADP苹果酸酶（NADP-ME）的活性。 l 有效期：6个月 l 保存条件：2-8℃ 实验原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物NADP苹果酸酶（NADP-ME）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物NADP苹果酸酶（NADP-ME）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 酶标仪（450nm） 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 37℃恒温箱 蒸馏水或去离子水 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 8孔×12条 8孔×6条 无 标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 无 样本稀释液 6mL 3mL 无 检测抗体-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释 底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液 6mL 3mL 无 封板膜 2张 2张 无 说明书 1份 1份 无 自封袋 1个 1个 无 备注： 1. 标准品浓度依次为：2400、1200、600、300、150、75 mIU/L 2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过zui大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。 注意事项 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽
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BIM试剂盒带您回首七月新客户问题汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
新客户一：我用TMB显色15min后，加入2M硫酸100ul终止反应，然后读数。发现加入阳性血清的OD值不稳定，呈上涨的趋势，同时阴性和空白却稳定，这是什么原因呢？ 上海恒远：这说明没有终止完全，降低TMB的用量。一般情况下是不会涨太多的。 新客户二：我用夹心法ELISA测细胞因子, 检测标准抗原敏感性只能到 ng/ml水平,我应该从那些方面着手来提高敏感性呢? 上海恒远：如果单用双抗体夹心法测细胞因子，ELISA灵敏度能到1ng上下，这是方法学决定的。有三种方法可以提高灵敏度：一是用发光法或荧光法，有一种发光底物可直接替代TMB，效果明显；二是用生物素亲和素放大，三是用抗抗体法即包被抗体－细胞因子－单抗－抗鼠抗体接酶。zui后一种可以提高灵敏度到0.05ng。 新客户三：我看别人洗板时，用500ml瓶接输液器直接滴满，然后倒掉，洗板，会不会因为满了滴到其他孔，造成相互干扰。3％BSA不能高压，用蒸馏水稀释溶解后需要过滤吗？我的预实验先用方正棋盘法一次摸索一抗，二抗的浓度，而HRP-Avidin先用他的说明书：1：10000 或1：5000可以吗？再次预实验则固定一抗，二抗浓度，HRP-Aaidin浓度作一系列稀释，确定HRP-Aaidin浓度，对吗？阳性阴性值怎么确定？有的用S/P>=2.1,或大于阴性对照OD值的2.1倍，或阴性对照OD值+-2SD，到底那个对？我是双抗体夹心测抗原，无标准品。谢谢！ 上海恒远：1）如果这样洗板的话，只要*次先把孔内液体甩去，再加洗涤液即可，不容易互相干扰的。zui后所有孔全部加满后，放置30-60秒再甩去，这样洗涤的更彻底。 2）BSA溶解后基本不用过滤，除非您的BSA质量不好。 3）没有标准品，那您有没有一些基本的标本，或者自己用纯化抗原稀释的质控品。您必须先对您的试剂定一个要求，比如说您希望将该抗原 1ng/ml测到0.2，那您就自制一个质控品，2ng/ml或5ng/ml都行，对应当OD就是0.4或1.0。阴性就用您被测的阴性血清。用质控品和阴性血清来摸索浓度，尽量把阳性质控品做高，阴性血清值做低。您摸浓
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牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒实验标本的采纳和保留
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
优异的牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒，良好的仪器和的操作是确保ELISA检查成果牢靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的构成不一样而有所区别，国内医学查验通常均用板式点。这篇文章将叙说板式ELISA试剂盒各个操作过程的留意关键，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特别仪器合作使用，两者均有详细的使用说明，严格遵循规则操作，必能得出的成果。可用作ELISA测定的标本非常广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、大便）等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如大便和某些分泌物）。大多数ELISA检查均以血清为标本。血浆中除尚富含纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只需待血清自然凝结、除特别情况外，在医学查验中均以血清作为检查标本。在ELISA中血浆和血清可同等使用。血清标本可按常规办法收集，应留意防止溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本也许会添加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检查。如有细菌污染，菌体中也许富含内源性HRP，也会发作假阳性反应。如在冰箱中保留过久，其间的可发作聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。通常说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超越一星期测定的需低温冰存。冻住血清融解后，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充沛混匀宜轻缓，防止气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检查。牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒重复冻融会使抗体效价下跌，所以测抗体的血清标本如需保留作多次检查，宜少数分装冰存。保留血清自收集时就应留意无菌操作，也可参加恰当防腐剂。Anti-GAPDH 规格: 规格： 0.1ml 产品名称: 3-磷酸甘油醛脱氢酶Anti-GASR 规格: 规格： 0.1ml 产品名称:
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微生物菌种几种方法简便、效果好的保存方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
一、微生物菌种需要4℃冰箱保存 1、液体石蜡保存法 先将液体石蜡灭菌，然后放于37℃恒温箱中，使水汽蒸发掉备用。再将需要保存的菌种在zui适宜的斜面培养基中培养，用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡，注入已长好的斜面培养基上，用量以高出斜面顶端1cm为准。试管需直立，置4℃或室温下保存，一般无芽胞细菌可保存1年左右。 2、蒸馏水保存法 取灭菌蒸馏水6-7ml加于试管斜面上，用吸管研磨，洗下菌苔充分混匀，将此菌液分装于灭菌的螺旋小瓶中，或用胶塞密封，置4℃保存可存活数年。 3、高层半固体琼脂石蜡保存法 将需保存的菌种经平板划线分离后，挑单个菌落用接种针反复穿刺接种到高层半固体琼脂培养基中，经37℃12小时培养后取出，用无菌操作将灭菌的液体石蜡滴加半固体琼脂菌种管表层约0.5cm高度，存放4℃冰箱，1年转种1次。 二、微生物菌种需-20℃冰箱冷冻保存 1、甘油保存法 甘油一生理盐水保存液的制备：取甘油(分析纯)8份加入生理盐水2份，充分混合后，经121.3℃30分钟灭菌备用。 将纯化后的菌株根据菌种不同分别划线接种于其zui适宜生长的培养基上培养后，用接种针取典型菌落接种肉汤管37℃培养6-8小时(链球菌和奈瑟氏菌接种血清肉汤管，5-10%CO2环境下8-10小时培养，真菌直接用接种环取菌洗入肉汤管，不培养)。此为培养液。 将此培养液与保存液以5：2的比例混合分装于灭菌的微量离心管，置-20℃冰箱保存(链球菌、奈瑟氏菌置-80℃冰箱保存)。使用时需37℃水浴中快速解冻。 用上述方法保存一般菌株可存活3年以上，链球菌、奈瑟菌可存活12-15个月，且性状未发生变异。此方法采用幼龄肉汤培养物效果好，且适用于链球菌、奈瑟氏菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种。 2、低温保存法 微生物菌种保存液的配制：K2HPO412.6g，柠檬酸钠0.98g，MgSO4·7H2O0.18g，KH2PO43.6g，甘油88g加蒸馏水至1000ml，103.4KPa灭菌30分钟，4℃保存备用。 将细菌接种于肉汤培养基中，37℃培养16-18小时，或斜面培养物刮取于生理盐水中，然后加入等体积的
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大肠杆菌培养基的灭菌
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
大肠杆菌培养基灭菌方法主要有两种，高压除菌及过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。1、高压灭菌某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可用耐高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的zui小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。2、过滤除菌目前培养工作中采用的培养用液包括人工合成培养液、消化用酶等，常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用过滤消毒以除去细菌。可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。目前常用的滤器有Zeiss滤器、玻璃漏斗式滤器和针式微孔滤器。其中，Zeiss滤器为不锈钢的金属结构，中间夹有一层石棉制成的一次性纤维滤板。滤板具有一定的厚度，可承受一定的压力，因此是过滤粘稠液体较理想的滤器。滤板有不同的规格，进口的型号为EKS，EKS2，EKS3等。国产的有甲1、甲2、甲3等，其中以EKS3及甲3过滤除菌的效果较好，但因孔径很小，过滤速度较慢。Zeiss滤器可分为抽滤式或加压式抽滤式滤器与抽滤瓶相连，真空泵抽气形成负压以过滤液体，其效率不如加压式。由于抽气造成负压抽吸，操作使用时要防止倒流而引起污染，因此要注意避免将出、入管道接错；停止抽气时应使用气体缓慢
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次利用荧光探针解析干细胞膜的奥秘
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
近日，来自日本、美国和印度的科学家们在干细胞中观察到了细胞膜中的筏区域，即细胞膜中携带特殊分子群体的活性部位，相关研究刊登于杂志Nature Chemical Biology上。文章中研究人员Naoko Komura说道，对于俗称为筏区域的特殊细胞膜结构域的推测已经超过25年了，但科学家们从来没有在活细胞中真正观察到该结构，而本文中研究者就做出了重大的突破。 文章中研究人员观察了神经节甘脂的行为，神经节甘脂是一种特殊的脂质分子，其在机体多种生物学过程中扮演着重要角色，包括脂质筏区域的形成、毒素进入细胞以及化学信号的接收等。然而科学家们并不很清楚神经节苷脂的工作机制，截至目前为止研究者们缺少可以追踪神经节苷脂运动的探针。 此前研究中研究人员并不能够在人工模型系统中模拟天然神经节苷脂的行为，而本文研究中研究者们就在神经节苷脂上吸附了一种荧光标记物，随后他们就利用吸附在特殊位点的荧光标志物合成了四种整体性的神经节苷脂；利用这种新型的荧光类似物并且结合独特的高分辨率荧光分子成像技术，研究者们就实现了在活细胞中记录特殊的神经节苷脂的活动。 研究者揭示了神经节苷脂如何形成携带胆固醇和CD59蛋白的脂质筏区域，CD59属于GPI锚定受体蛋白家族中的一员；Kenichi Suzuki博士表示，利用正常的技术很难观察干细胞中脂质筏区域的动态行为，而本文研究中我们就利用荧光神经节苷脂探针实现了这一目的，如今很多科学家就可以开始进行深入的研究来揭示毒素、细菌和病毒如何通过脂质筏区域来入侵到细胞中了。Anti-HCV-HCBP1/ACY-3 规格: 规格： 0.1ml 产品名称: 丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白-1抗体Anti-HCV-NS1 规格: 规格： 0.2ml 产品名称: 丙型肝炎病毒-NS1抗体Anti-HCV-NS3 规格: 规格： 0.2ml 产品名称: 丙型肝炎病毒-NS3抗体Anti-HCV-NS4a 规格: 规格： 0.2ml 产品名称: 丙型肝炎病毒-NS4a抗体Anti-HDL-R
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转化细胞培养液的成分分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
转化细胞培养液的成分： 体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 1、动物细胞培养液的特点：液体培养基、通常含动物血清。 2、动物细胞培养的条件： ①无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。 ②营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等）。 ③血清和血浆 (提供细胞生长必须的营养成份) 。 ④温度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4） 。 ⑤气体环境（95%的空气+5%CO 2的混合气体） 。 转化细胞其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定 。 Anti-HSP-90α 规格: 规格： 0.1ml 产品名称: 热休克蛋白90α抗体 Anti-HSP-90β 规格: 规格： 0.1ml 产品名称: 热休克蛋白-90β 抗体 anti-HtrA2/Omi 规格: 规格： 0.2ml 产品名称: 丝氨酸蛋白酶/线粒体丝氨酸蛋白酶抗体 Anti-hTRT omerase catalytic subunit 规格: 规格： 0.1ml 产品名称: 端粒酶抗体 Anti-Human serumAnti-Human serum 规格: 规格： 1ml 产品名称: 兔抗人血清抗体抗血清 转化细胞
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配制微生物培养基, 应该注意什么问题？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
威正翔禹/缔一生物为您分析配制微生物培养基, 应该注意什么问题？1、根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。2、注意各种营养物质的浓度及合适配比，保持合适渗透压。3、将培养基的 pH 控制在适宜的范围之内，以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。4、要注意各种原料的配比，每种培养基的配比合适的配比，可以按照老师的要求去做。5、如需要加热的时候注意时间的把握。 步骤：(一)准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。(二)校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1NNaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。(三)过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。(四)分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100～150ml)，塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。(五)灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。综上所述，您是不是已经对配制微生物培养基, 应该注意什么问题，有所了解。如果还有其他疑问，请咨询威正翔禹/缔一生物资深专家。
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秋色渐近:恒远介绍形状各异的ELISA载体
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
八月，秋天，一笔一划皆是情；秋景，一字一句皆是意。秋，就是这么一个令人心醉的节气。那么在这凉爽的天气中，来看看我司今天的内容吧，2017秋色渐近：上海德尔塔生物为您介绍形状各异的ELISA载体。 1. 微量滴定板；2. 小珠；3. 小试管。 以微量滴定板zui为常用，于ELISA的产品称为ELISA板，上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板特点： 可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。 八月才刚刚开始，秋季的意味也慢慢明显，上海恒远【ELISA试剂盒】提醒朋友们：由于早晚温差大，夜里注意盖被，以免着凉。
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实验室技巧:给生化试剂加热与过滤的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
我公司供应的高质量实验科研【生物试剂】种类有：其他生化试剂、缓冲剂试剂、表面活性剂、分离材料及耗材试剂、维生素试剂、色素试剂、碳水化合物试剂、植物激素及核酸试剂、抗生素试剂、蛋白质试剂、酶试剂、氨基酸试剂。质量有保证，可助您的实验一臂之力！ 今天上海恒远带给您的实验室技巧是：给其加热与过滤的方法。 ·物质的加热 1.加热固体时，试管口应略下倾斜，试管受热时先均匀受热，再集中加热。 2.加热液体时，液体体积不超过试管容积的1/3，加热时使试管与桌面约成45°角，受热时，先使试管均匀受热，然后给试管里的液体的中下部加热，并且不时地上下移动试管，为了避免伤人，加热时切不可将试管口对着自己或他人。 ·【生物试剂】的过滤 1.“一贴二低三靠”“一贴”：滤纸紧贴漏斗的内壁。 2.“二低”：①滤纸的边缘低于漏斗口；②漏斗内的液面低于滤纸的边缘。 3.“三靠”：①漏斗下端的管口紧靠烧杯内壁；②用玻璃棒引流时，玻璃棒下端轻靠在三层滤纸的一边；③用玻璃棒引流时，烧杯尖嘴紧靠玻璃棒中部过滤后，滤液仍然浑浊的可能原因有：承接滤液的烧杯不干净、倾倒液体时液面高于滤纸边缘、滤纸破损。 ·蒸发 1.在加热过程中，用玻璃棒不断搅拌（作用：加快蒸发，防止由于局部温度过高，造成液滴飞溅）。 2.当液体接近蒸干（或出现较多量固体）时停止加热，利用余热将剩余水分蒸发掉，以避免固体因受热而迸溅出来。 3.热的蒸发皿要用坩埚钳夹取，热的蒸发皿如需立即放在实验台上，要垫上石棉网。 上海恒远【生物试剂】安全可靠，价格合理，国庆、中秋将至近期还有优惠活动哦！了解详情。
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如何真正有效的杀死支原体
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
现在，市面上的支原体清除剂大多是抗生素类的，主要是三种：四环素类、大环内酯类和喹诺酮类。本文威正翔禹/缔一生物为您分析如何真正有效的杀死支原体。 它们对支原体的清除作用主要是抑制，而非直接杀死支原体。因此它们的效果不能持久，还会产生支原体的耐药和细胞毒。要想真正有效的杀死支原体，只有德国Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold产品。 Mynox®取自枯草杆菌发酵后的提取物。由于支原体没有细胞壁，只有简单的质膜。Mynox®基于生物物理原理，只与支原体膜特异性结合，改变支原体膜的通透性，导致支原体破裂死亡，而哺乳动物细胞能迅速返回它的原来形态，并保持正常的增殖速率。直至今日，Mynox®还没有显示任何导致正常细胞特性的改变。 注意：Mynox®用于清除细胞培养和病毒培养以及生物样本中的支原体和无胆甾原体，于基础研究使用。 下面，简单介绍一下Mynox®及其用法： Mynox®：无菌即用型，pH7.4，220µl/管，每管用1次 货号#10-0200 2 管 货号#10-0500 5 管 货号#10-1000 10 管 2-8°C保存。室温运输 建议采用DMEM或RPMI 1640培养基，5%FCS。如果清除病毒中的支原体，应使用无血清培养基。如果是贴壁细胞，应用胰酶消化，把细胞打散为单细胞，保证细胞与Mynox®充分接触，从而更有效地杀除支原体。 Mynox®的细胞毒效应在10%~80%，依赖于作用时间长短。通常能保证有充分存活的细胞应用于继续培养。支原体的高清除率带来更高的细胞增殖速率，能够弥补细胞毒带来的损失。 Mynox®用法： 1、贴壁细胞 150px培养皿中，先后加2.8ml培养基（5%FCS），Mynox®200 µl，2 ml 细胞（1x104~1x105）。细胞继续培养2小时，即完成**，即可换液。**可持续3-8天，不过需注意观察细胞状态。 2、悬浮细胞 无菌离心管里先后加1.6ml 含0.125%胰酶和5mM EDTA PBS，Mynox®200 µl，1.6 ml细胞（细胞数1x104~ 1x105，10%FBS）。室温孵育30分钟即完
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目前普遍使用的支原体检测方法有几种？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
当我们在养细胞的时候，有可能会出现如下的状况：细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点。本文威正翔禹/缔一生物为您分析目前普遍使用的支原体检测方法有几种？ 1、支原体的分离培养 它是支原体污染鉴定的金标准，准确，价格便宜。但支原体在分离培养的过程中，要长出明显克隆至少需要4周时间，所需时间较长。 2、ELISA方法 检测步骤复杂，出现误差的几率较高，对实验者操作技巧有要求。同时试剂盒成本较高，普遍不被选用。 3、DNA荧光染色法 它采用荧光染色剂Hoechst 33258和支原体DNA富含A-T的区域结合。价格适中。由于DNA检测需要将可疑样品与指示细胞共同培养，因此一般需要几天后才出结果。有假阳性和假阴性，需要与其他方法结合使用。 4、PCR技术 它根据支原体核糖体16s-23s rRNA的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过对扩增产物的大小分析作出诊断。操作简单、速度快，只需2-3小时即可出结果，通量高，价格适中。但是，不同厂家生产的PCR检测试剂盒由于引物及内在设计的不同，其准确度和敏感度有天壤之别。 目前，被各大实验室及生物药厂普遍选用的是德国Minerva Biolabs公司开发生产的支原体PCR检测试剂盒。试剂盒在267bp的条带，涵盖了欧洲《药典》中zui易感染细胞的26种支原体亚型，保证了其*的敏感度；通过内控条带的设计，防止了假阴性的发生。我国农业部在2008年猪蓝耳病疫苗研制的重点项目中，实验者用此检测法与培养法做了超过100次的平行比对实验，结果全部一致，假阳性率和假阴性率为零。 因此，用PCR方法检测支原体，其准确性与选择的试剂盒的质量有直接相关性。 综上所述，您是不是已经对目前普遍使用的支原体检测方法有几种，有所了解。如果还有其他疑问，请咨询威正翔禹/缔一生物资深专家。
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