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苏醒:细胞复苏的方法及注意事项

发布时间:2022-04-02     作者:德尔塔   分享到:

【产品介绍】:

细胞复苏即使细胞恢复生长的过程,是将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养。当恢复到常温状态时,细胞的形态结构保持正常,生化反应即可恢复。                细胞复苏方法: ①将冷冻管从液氮中取出,迅速投入37℃水浴融化,细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率,复苏过程中一般细胞死亡率在20%~25%之间。 ②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒,然后放置在冰浴上。 ③小心开启瓶盖,把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中,然后把培养瓶移至培养箱,26℃~28℃培养1h,让细胞贴壁。 ④细胞贴壁后,小心移弃培养基,主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、还有死细胞及其碎片,加5mL新鲜培养基,26℃~28℃培养。 ⑤细胞培养24h后,更换新鲜培养基,继续培养直到形成单层,便可以传代。 ⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。                        注意事项: 1、注意无菌操作。 2、应在1-2min内使冻存液完全融化。如果复温速度太慢,则会造成细胞损伤。另外,细胞复苏后的操作在4℃冰浴中进行,以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。 3、细胞复苏过程中,升温的速率要大,把从液氮或-70℃水箱中取出的细胞在zui短的时间内放入水浴锅。 4、细胞放入水浴中注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动,使其受热均匀,并防止水浴时水进入细胞冻存管污染细胞。打开细胞冻存管之前要用酒精棉球将冻存管消毒并晾干。 5、液氮操作有一定的危险性,打开液氮罐取出细胞时,戴上防护眼睛。 6、如果冻存管密封不严,液氮可被吸入。由于解冻时冻存管中的气温急剧上升,将可能发生爆炸。复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖。     上海恒远为广大客户提供高质量的免疫学和生命科学相关产品。质量可靠,被全国各大院校科研机构认可并为Elisa试剂盒标准品对照品长期供应商。我们将以专业执着,精益求精的精神服务于广大科研用户。