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PEI细胞转染液使用方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
使用方法 接种细胞：用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。转染前18-24小时进行细胞的铺板，以便在转染时，贴壁细胞的密度大约在80%左右。注：培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。 2. 准备 EZ Trans-DNA 复合物 （1）转染前将所有试剂置于室温10分钟。下面，以转染24孔板培养皿为例，说明转染的具体方法（如果在别的培养器皿中进行转染，各试剂建议使用量见表1.： （2）将1 μg 质粒DNA稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基，用移液枪吹吸3-4次。 （3）将3 μL EZ Trans转染试剂稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基，用移液枪吹吸3-4次。 注：无血清的高糖DMEM培养基是稀释液，不能使用含血清的培养基（包括Opti-MEM）进行DNA和EZ Trans转染试剂的稀释！因为EZ Trans-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。 （4）将稀释好的EZ Trans转染试剂一次性全部加入到已稀释好的质粒DNA中，立即用移液枪吹吸3-4次。 注：此混合的顺序不能反向进行！ （5）室温放置10-15分钟，以形成EZ Trans-DNA复合物。 表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZ Trans、稀释液用量 培养器皿 培养液体积（mL） DNA量（μg） EZ Trans (μL) 稀释液(μL) 48孔板 0.3 0.5 1.5 2 × 25 24孔板 0.5 1 3 2 × 40 12孔板 0.75 1.5 4.5 2 × 60 6孔板 1 3 9 2 × 125 35 mm培养皿 1 3 9 2 × 125 60 mm 培养皿 3 6 18 2 × 250 100 mm 培养皿 9 12 36 2 × 500 3. 转染细胞 将上述80 μL EZ Trans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，让EZ Trans-DNA复合物分散均匀。 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞，转染后12-18小时，去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液。（若细胞形态欠佳，可在转染3-5h后，
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小鼠透明质酸（HA）ELISA检测试剂盒现货供应
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
小鼠透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒现货供应 参数规格： 产品规格：48T/96T 产地：国产/进口 适用范围：仅供科研使用 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月 产品品牌：酶远生物 检测波长：450nm 所需样本体积：50-100ul 产品用途：用于测定血清、血浆及相关液体样本 样本类型：适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞上清、组织匀浆等样本 酶远生物供应的其他种属有：人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、兔子、猪、犬、牛、样、鸡、鸭、植物、猫、马、鱼、猴、农残ELISA试剂盒等 仅供科研使用,不得用于临床诊断。 可检测样本:体液（血清、血浆、唾液、胃液、尿液、细胞上清液、细胞裂解物等）,组织（肝脏、肾脏、心脏、脾脏等）,粪便以及天然孔排泄物,植物的根、茎、叶等组织液 酶远生物博业生物科技有限公司是一家专门从事研究、生产、销售elisa试剂盒、高保真KOD试剂盒、甲基化试剂盒、血清、抗体、甲基化亚硫酸氢盐修饰通用试剂盒等生化试剂的综合性公司,在行业发展中所承担的角色是一种沟通科研和市场的媒介,我们致力为行业提供高品质的科研产品及专业的服务,为科研事业提供了有力的硬件支持,有效地促进了科研和市场需求的结合,更提高了科研成果的转化效率,使得科研更具活力。 小鼠透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒现货供应 产品选型： 1、37℃恒温箱 2、 标准规格酶标仪 3、 精密移液器及一次性吸头 4、 蒸馏水 5、 一次性试管选 6、 吸水纸 小鼠透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒现货供应 操作流程： 1，试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。 2，实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3，不用的其它试剂应包装好或盖好。 4，使用一次性的吸头以免交叉污染，避免使用带金属部分的加样器。 5，使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6，洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7，避免长时间打开盖子。
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研域技术人员告诉你怎么处理买回来的ELISA试剂盒
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
对于科研工作者购买回来的elisa试剂盒，关于储存及有效期，相信大家都是根据盒子上的日期决定它的有效期的，但是我们实验开封过的试剂盒，怎么确定它有多久的有效期呢？科研工作者在使用后的试剂盒，剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。我司提供免费检测服务：使用我司elisa试剂盒,只收取试剂盒的费用,其他辅助试剂全部免费。我们将根据实验工作量和难易程度，双方协定实验周期，保质保量完成委托实验，并将实验结果和材料用特快专递免费寄送到您手中。订购！ 我司未开封的elisa试剂盒请注意，所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。
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大鼠纤连蛋白（FN）ELISA检测试剂盒目前价格
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
大鼠纤连蛋白(FN)ELISA检测试剂盒目前价格 参数规格： 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。 保存温度：2-8℃低温保存 用途：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断 应用领域：科研项目实验 操作流程：稀释——加样——温育——配液——洗涤——加酶——温育——洗涤——显色——终止——测定 常见问题： 参数规格：48T/96T 产品资料：有PDF形式、WORD形式说明书 产品优势：灵敏度高、重复性强 储存方式：2-8摄氏度（保存到冰箱里就行） “ELISA试剂盒"实验操作流程（具体请参照说明书）： ① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干 ② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干 ③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干 ④ 加底物液 → 37℃ 15分钟，加终止液 ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值我公司拥有完善的售前、售中、售后服务，以及实验技术指导服务，欢迎您上海酶远ELISA试剂盒，第二季度八五折优惠，可为您节省时间提供免费代测服务。 “ELISA试剂盒"特点：① 准确度高，灵敏度高，特异性强；② 检测时间短；③ 操作简便；④ 安全可靠，。 大鼠纤连蛋白(FN)ELISA检测试剂盒目前价格 酶联免疫吸附实验（ELISA）基本原理: 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应
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ICR小鼠下颌*磨牙牙胚发育的动态组织学观察
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
目的： 了解ICR小鼠下颌*磨牙牙胚的发育时序特点，为使用小鼠研究牙齿发育机制和相关影响因素提供实验基础。方法： 分别取E（胚胎）11.5、E12.5、E13.5、E14.5、E15.5、E16.5、E17.5和E18.5 d的胎鼠和PN（出生后）2 d的新生小鼠的头部或下颌骨，固定脱钙包埋后行连续切片，进行HE染色，在显微照相系统下进行观察记录，分析ICR小鼠磨牙牙胚发育的动态变化规律。结果： E11.5 d为牙胚发育始动，E12.5 d牙胚向蕾状期过渡，E13.5 d进入蕾状期，帽状期为E14.5～E15.5 d，钟状期开始于E16.5 d，出生后2 d牙体硬组织开始逐渐形成。结论： ICR小鼠胚胎11 d至出生后第2天是研究下颌*磨牙牙胚发育机制的*时机。
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小鼠关节软骨细胞培养方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1、细胞简介小鼠关节软骨细胞分离自正常小鼠关节软骨组织，软骨细胞主要功能：（1）软骨是人身体中*不会发生癌变的组织。（2）骨骼在发育初期大部分是由软骨构成的。（3）软骨一般起到承重负荷，减少关节间骨骼摩擦等作用。体外培养的软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。2、储存条件请于2-8℃保存，有效期6个月。请在严格无菌环境下操作使用，打开后的试剂2-8℃保存。3、注意事项：实验要保证在严格无菌环境下进行。避免重复使用吸头和试管，以避免交叉污染。4、操作步骤：a. 75%的酒精消毒表面，并在无菌条件下分离大腿腿骨，尽可能去除筋膜、肌肉和结缔组织；b. 将从关节处分离出软骨组织，将其剪成小于1 mm3（尽可能的小）的组织块，吸取7ml左右①号试剂 小鼠关节软骨细胞组织洗液反复吹打清洗2-3次，静置5 min后，弃去上层液体及漂浮组织，将剩余组织移入15ml离心管中；c. 往离心管中加5ml②号试剂 小鼠关节软骨细胞组织处理缓冲液同时加入③号试剂 小鼠关节软骨细胞组织解离液A 250ul，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化15-20 min；d. 4℃静置5 min；弃上清，加入5ml②号试剂小鼠关节软骨细胞组织处理缓冲液同时加入④号试剂 小鼠关节软骨细胞组织解离液B 500ul，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化30～60min（显微镜下观察至大量单细胞呈现）；e. ⑦号试剂 小鼠关节软骨细胞完全培养基使用前每瓶需加入⑤号试剂 小鼠关节软骨细胞成纤维抑制剂和⑥号试剂 小鼠关节软骨细胞生长因子各1管，混匀；f. 加入混合好的⑦号试剂 小鼠关节软骨细胞完全培养基终止消化，反复吹打后依次通过200目滤网。收集滤液1500rpm 离心5min，弃上清，吸取5ml混合好的⑦号试剂 小鼠关节软骨细胞完全培养基重新悬浮细胞 转入T25方瓶，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；g. 培养24h后换用新鲜混合好的⑦号试剂 小鼠关节软骨细胞完全培养基继续培养。
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JCI：自身免疫性疾病为何发生？科学家找到新机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
自身免疫性疾病即免疫系统攻击并破坏宿主自身的器官和组织。在美国，数十种自身免疫性疾病影响了数百万人。一些自身免疫性疾病，包括狼疮，类风湿性关节炎和多发性硬化症，女性发病率比男性高出二至十倍。总体来说，约 80%的自身免疫性患者是女性，目前自身免疫性疾病没有治愈方法。近日，来自国立犹太医学中心的研究人员发现了引起自身免疫性疾病的因素。研究结果发表于 2017 年 4 月的 Journal of Clinical Investigation，有助于解释为什么女性比男性更容易患有自身免疫性疾病，并提出预防人体自身免疫性疾病的**靶点。 “我们的研究结果证实，年龄相关的 B 细胞（Age-associated B Cells，ABCs）驱动自身免疫性疾病发生，” 国立犹太医学中心生物医学科学教授 Kira Rubtsova 博士说，“我们发现 B 细胞内的转录因子 T -bet 导致年龄相关的 B 细胞的发育，当我们删除 B 细胞内的 T -bet 时，容易发生自身免疫性疾病的小鼠就能够保持健康，我们认为同样的过程也发生在自身免疫性疾病患者中，通常在老年妇女身上出现。” B 细胞在自身免疫性疾病中扮演着重要角色。在此之前，由生物医学科学主任 Philippa Marrack 博士领导的国立犹太医学中心研究小组确定了自身免疫性疾病患者，自身免疫性老年雌性小鼠中累积的 B 细胞亚群。他们将其命名为年龄相关的 B 细胞。随后的研究表明，转录因子 T -bet 在年龄相关的 B 细胞的出现中起关键作用。 B 细胞存在内源性 T -bet（A）和删除 T -bet（B）时的自身免疫反应 转录因子与细胞内的 DNA 结合并驱动一个或多个基因的表达。研究人员认为，当 B 细胞表面受体（TLR7，干扰素 -γ和 B 细胞受体）被激活时，T-bet 就会在细胞内表达。 通过育种和遗传技术，研究团队消除了自身免疫倾向小鼠在其 B 细胞内表达 T -bet 的能力。结果，年龄相关的 B 细胞没有出现，小鼠保持健康。B 细胞中有 T -bet 小鼠 80% 都会出现肾损伤，而缺失 T -bet 的小鼠只有 20% 会出现肾损伤。 携带 T -bet
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分析ELISA试剂盒进口大鼠浸泡式洗涤方式步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒进口大鼠测定的标本十分广泛，体液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体 或抗原成份。ELISA试剂盒有些标本可直接进行测定（如血清 、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏 水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。ELISA试剂盒进口大鼠的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。 一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度，建议孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物ELISA试剂盒酶的活性。ELISA试剂盒进口大鼠的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，ELISA检测试剂盒珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用。
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光合细菌进行菌液的配制繁育操作说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1、费氏弧菌发光杆菌以一袋的培养基量进行计算：一袋培养基重900g，培育200斤光合细菌菌液，按照1：4的比例进行配制，就是40斤菌种加上160斤水（含培养基溶液），那么就是200斤菌种；如果一次用不完，可采取平均分配法进行计算，得出所需要的培养基然后重复步骤即可；2、水源的选择：选择水源为含杂菌量较少的地下井水或者自来水（城市用自来水需曝气2到3天去除二氧化氯），不能够采用盐碱水或者海水等含有杂质的水源；3、盛放器皿的选择：盛放的器皿要选择透明型的，可采用瓶子或者袋子等物品，建议初次培养采用透明塑料瓶子（减少折扣率，提高成功率和适应率，二次培育可采用袋子等物品），瓶身预留5%的空气量，利于摇动瓶身，使菌体动起来，然后密闭瓶口或者袋口（属于微厌氧培育）瓶身必须要干净，可采用热水冲洗下；采用的器皿盛放菌液进行繁育期间，厚度不要太厚，可维持在20到25公分的厚度，长度可以无限；这样的选择是以为主要接受光照利于繁殖，如果厚度太大，则一天时间内部菌液的温度提升是比较慢的，而导致外部温度很高，内部温度很低，不利于菌液的整体繁殖；立足实践出发；4、水温的选择：溶解培养基的水温建议在25——30度之间适宜，接种菌种的水源温度也控制在这个温度，这个温度是zui有利于光合细菌菌种迅速增强自身活力适应水质环境进行繁育的一个温度，切勿达到38度以上（需要采取降温措施及搭盖防晒网等）；如果发现器皿外壁类似产生白色的丝状物，则有可能是被晒死了，需要及时进行降温处理，注意观察；5、费氏弧菌发光杆菌接种比例选择：一瓶真正的高活力光合细菌菌种，搭配培养基，操作得当，一年只需要购买一次菌种即可，接种繁育菌种，由于各个地区的水质差异（水质的硬度、酸碱度等因素）都会对菌种的繁育造成一定的影响，为此，如果您*次自己着手繁育菌种可以采用1:2的比例进行（一斤菌种两斤水【含培养基溶液】）；以后可以按照1:4的比例进行接种；6、环境的选择：配制菌液的环境尽量找没有浮
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分析抗原elisa试剂盒阳性对照与阴性对照控制试验条件
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
抗原elisa试剂盒做好对照：正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。实验条件的选择：在抗原elisa试剂盒中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:(1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。(2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。(3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。(4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。抗原elisa试剂盒底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
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牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒制备与使用技巧
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒的制备：1、抗原表位的计算机筛选；2、抗原的制备；3、血清的采集；4、间接ELISA方法的建立；5、间接ELISA方法的敏感性和特异性验证；6、试剂盒的稳定性验证；7、对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出感染猪的戊型肝炎病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝病毒的流行和阻断戊肝病毒由猪向人传播。牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒的使用：1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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原基组织脱毒法说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
微生物菌种该技术zui大程度革除了原有组织分离时子实体处于生长中后期，携带病毒、病菌可能性极大等弊端，真正实现了分离组织的脱毒目的。具体操作为： 常规配制基料，调破氮比为30∶1。碳氮比不可小于25∶1，以免菌丝过度旺盛生长结成菌皮，不易现原基。大口罐头瓶洗净、备用。准备数块又11厘米×11厘米的纯棉纱布。装料至瓶口下1厘米时，从瓶口处铺上一层纱布，用平口螺丝刀将纱布边缘插至瓶下，使之紧贴瓶劈。封口灭菌、接种、培养等操作按常规进行。待菌丝发满瓶后，施行温差、湿差、光照等刺激，一般约7天即可现出原基。此时原基的形态是白疙瘩 。待原基高至1厘米时，即可进行脱毒分离。 将微生物菌种瓶用75％酒精擦洗后，移入已消毒的接种箱，箱内不再进行常规熏蒸。同时准备接种针（或接种钓）、多个刀片（以备交替使用），与菌瓶一同放入接种箱中，喷洒新洁尔灭以确保无菌操作。两手用75％酒精擦洗，伸入接种箱，将刀片进行灼烧灭菌后手持冷却。打开菌瓶封口，两手配合用无菌镊子取出原基。由于料面覆盖一层纱布，故不会将基料带出，操作方便。用刀片将原基表层削去约1毫米，然后用尖刃刀片将原基划切，使每块大小1毫米2左右。用接种针将分离的原基块移入平板或大型试管进行常规培养。微生物菌种操作要点：一是用刀片进行削、切时，每切一刀须更换一次刀片；二是分离块接入时须靠边缘投放，可接在平板的边缘或试管的zui前部，一般不居中接入。
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哪些方法可以使细胞适应无血清培养基
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1．细胞株直接适应法式—将细胞直接从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。2．连续适应或循序隔绝法—分几步将细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。与直接适应法相比较，连续适应法对于细胞更温和些。为了使细胞适应无血清培养基，关键是细胞培养应满足以下条件：1．处于对数生长中期2．存活率大于90%3．在适应期间，以较高的初始细胞株接种量进行接种下面列出了常规适应步骤。初始细胞接种量、细胞产量和培养周期是连续优化的良好开端。直接适应有些类型的细胞可以直接从含有血清培养基适应无血清培养基。对于直接适应，细胞接种量应在2.5 x 105 -3.5 x 105细胞/ml范围内，当细胞密度达到1 x 106-3 x 106细胞/ml时，传代培养细胞。培养4至7天后，当细胞密度达到2 x 106 -4 x 106细胞/ml时，细胞已完全适应了无血清培养基。当细胞密度达到1x 106 -3 x 106细胞/ml且存活率为90%时，应当每隔3到5天再次将适应了无血清培养基的贮存细胞株在无血清培养基中进行传代培养。
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分析干细胞的几大特点
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1.生命的起源细胞人体起源一个单细胞受精卵（*代干细胞），经历卵裂（干细胞持续扩增，增加细胞数量）、胚层出现（干细胞开始分化出功能细胞）、组织器官形成（功能细胞的有序排列）及胚后发育这样一个连续过程。2.维持人体动态平衡的种子细胞人体通过干细胞增殖和分化来实现细胞更新。成年并不意味着细胞增殖和细胞分化的结束，而仍然存在着受调控的组织更新过程。在一些组织中，如骨髓、表皮等，新细胞可不断地产生，以补充因分化而衰老、死亡的细胞。干细胞的增殖保持着机体内细胞的动态平衡。3.干细胞功能表达体现出生命发育、成熟、衰老的不同阶段由于早期的干细胞，增殖分化能力强，新生的细胞数量大于死亡的细胞数量，使生命处于生长发育的*状态。随着个体发育的成熟，干细胞增殖分化能力趋于稳定，这时的干细胞能及时分化出新的细胞替代衰老的细胞，保证了体内细胞的稳态更新，维持各系统的功能稳定，使生命处于成熟阶段。4.移植的干细胞归巢与分化干细胞归巢是由干细胞及其外围细胞，以及其增殖分化调控相关因子所组成的、并且具有动态平衡特性的局部环境。移植的自体干细胞，按机体需求迁移到体内所需的位置，自行定位于各个组织器官的干细胞巢当中，这一过程称为干细胞的归巢。
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Elisa试剂盒实验这样操作不会失败
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
在Elisa试剂盒操作过程中总是会出现或大或小的问题，比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。今天上海劲马为大家带来了一些实验经验总结，Elisa试剂盒实验这样操作不会失败： 1.有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法扼要的列出如下： 2.亲和素生物素：先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。 3.小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保留抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。 4.脂类物质：可将其在有机溶剂中溶解后加入Elisa板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质天然干固在固相表面。 5.应留意以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下*可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。 6.但*选用什么，要依据试验详细来实践。常用封锁剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用(5%－10%)；还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲，从而排斥ELISA试剂盒后的
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