【产品介绍】：

使用方法 接种细胞：用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。转染前18-24小时进行细胞的铺板，以便在转染时，贴壁细胞的密度大约在80%左右。注：培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。     2.   准备 EZ Trans-DNA 复合物         （1）转染前将所有试剂置于室温10分钟。下面，以转染24孔板培养皿为例，说明转染的具体方法（如果在别的培养器皿中进行转染，各试剂建议使用量见表1.：        （2）将1 μg 质粒DNA稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基，用移液枪吹吸3-4次。        （3）将3 μL EZ Trans转染试剂稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基，用移液枪吹吸3-4次。       注：无血清的高糖DMEM培养基是稀释液，不能使用含血清的培养基（包括Opti-MEM）进行DNA和EZ Trans转染试剂的稀释！因为EZ Trans-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。        （4）将稀释好的EZ Trans转染试剂一次性全部加入到已稀释好的质粒DNA中，立即用移液枪吹吸3-4次。      注：此混合的顺序不能反向进行！       （5）室温放置10-15分钟，以形成EZ Trans-DNA复合物。 表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZ Trans、稀释液用量 培养器皿 培养液体积（mL） DNA量（μg） EZ Trans (μL) 稀释液(μL) 48孔板 0.3 0.5 1.5 2 × 25 24孔板 0.5 1 3 2 × 40 12孔板 0.75 1.5 4.5 2 × 60 6孔板 1 3 9 2 × 125 35 mm培养皿 1 3 9 2 × 125 60 mm 培养皿 3 6 18 2 × 250 100 mm 培养皿 9 12 36 2 × 500 3.   转染细胞 将上述80 μL EZ Trans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，让EZ Trans-DNA复合物分散均匀。 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞，转染后12-18小时，去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液。（若细胞形态欠佳，可在转染3-5h后，添加1/2体积的包含30%血清的生长培养基，在转染12-18小时后完全去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液，用含血清和抗生素的新鲜培养液。） 转染后zui快7h即可检测到转入基因的表达，可根据需要在24-48小时内检测转染效率。       注：筛选稳定转染细胞株，可在上述操作后（转染细胞24小时后），将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下，约 1～2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 运输与保存方法        常温运输，4℃保存，保质期12个月。 使用注意事项        质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA 浓度，260nm / 280nm比值确定 DNA 纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。       细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。 特别提醒 1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70～80%。 2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。 3. 即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。 4. 对大多数细胞来而言，每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1 μg DNA使用 1～4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。 EZ Trans转染液用于不同细胞转染时用量参考（以96孔板为例） 细胞型号 培养基 每孔细胞数 DNA的量  转染试剂量 293H DMEM 3×104 0.2µg 0.5µL 293FT DMEM 3×104 0.2µg 0.5µL 293E DMEM 3×104 0.2µg 0.5µL 293F DMEM 3×104 0.2µg 0.5µL COS7 DMEM 1.5×104 0.4µg 0.5µL hela DMEM 2×104 0.3µg 0.5µL Caco2 MEM 3.5×104 0.3µg 0.75µL BHK21 MEM 2×104 0.2µg 0.5µL CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×104 0.5µg 0.5µL RAW264.7 DMEM 3×104 0.2µg 0.5µL MCF7 MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat 2×104 0.1µg 0.25µL SW480 IMDM 3×104 0.4µg 0.5µL MDCK DMEM 4×104 0.6µg 1µL CHO-K1 IMDM+Pro 3×104 0.2µg 0.5µL HepG2 DMEM 3×104 0.5µg 0.75µL A549 DMEM 2×104 0.3µg 0.5µL NIH/3T3 DMEM 1.5×104 0.1µg 0.75µL vero DMEM 3×104 0.3µg 0.75µL sf9 SIM SF 5×104 0.4µg 0.75µL