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原代细胞的培养操作
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
原代细胞的培养步骤 一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养要求 1、细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性； 2、细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5×108细胞/L； 3、培养基可用Eagle(MEM)或DNEM培养； 4、小牛血清浓度为10%-80%； 5、应在37℃5%CO2的培养箱中培养； 6、在起始的2天中尽量减少振荡，以防止刚贴壁的细胞发生脱落，漂浮； 7、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状，应将原代细胞换液； 8、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时，应将细胞悬液经低速离心后换液。 二、悬浮细胞的培养要求 1、原代培养时要尽量去除红细胞； 2、短期培养，可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行； 3、细胞浓度可在5-8×109/L范围内进行分瓶试验； 4、长期培养时，淋巴细胞中要加入生长因子，白血病细胞中要加入少量的原患者血清，以利细胞生长； 5、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次； 6、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。 三、原代细胞的维持 1、贴壁细胞长成网状或基本单层时，未达到饱和密度，需采取换液方式来更新营养成分以满足细胞继续生长繁殖的需要； 2、换入等量完全培养基或换成含2%小牛血清的维持液； 3、悬浮细胞细胞培养基中不仅会发生转化而且会发生分裂繁殖，此时培养基中的营养成分并不能维持细胞的营养需求，需进行换液。通常采用半量换液的方法； 四、原代细胞培养的首次传代 原代培养后由于悬浮细胞增殖，数量增加甚至达饱和密度；贴壁细胞的相互汇合，使整个瓶底逐渐被细胞覆盖，细胞难以继续生长繁殖，需要进行分瓶培养，这种使原代细胞经分散接种的过程称之为传代。 首次传代应注意以下几点： (1)细胞生长密度不高时，不能急于传代。 (2)原代培养的贴壁细胞需控制消化时间。 (3)吹打已消化的细胞应减少机械损伤。 (4)首次传代时细胞接种数量要多一些。 (5)首次传代培养的pH应偏低些。小牛血清浓度可加大至15%～20%左右。 一、悬浮
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细胞周期检查点及其正向、负向调节机制和重要性
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
细胞周期检查点及其调节机制中的细胞周期检查点： ●众所周知，细胞通常在体积翻倍时进行分裂，但实际上细胞分裂过程的控制非常复杂且精确。细胞分裂的所有过程或步骤都是按顺序发生的，并且细胞知道何时进行以及何时等待和停止细胞分裂。 ●在 DNA 复制完成之前或当染色体或纺锤体纤维受损时，连续的细胞分裂会给细胞甚至有机体带来灾难性的后果。因此，在进行细胞分裂之前，细胞的各个方面都要通过其内部机制进行检查。 ●检查点是真核细胞周期中的几个点之一，在这些点上，可以停止细胞向细胞周期下一阶段的进程，直到条件有利。 ●在循环期间会发生许多停止，以评估下一步是否应该进行，这些停止称为检查点。 ●一种称为成熟促进因子 (MPF)的复杂蛋白质在细胞成熟和有丝分裂方面具有重要作用。它也被称为有丝分裂促进因子。 ●MPF物质由细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶组成，这两种蛋白质分子结合在一起时会被激活，并负责细胞周期跨越各个检查点。 ●在细胞周期中，细胞周期蛋白依赖性激酶 (cdks) 的检查点。每个 cdk点 都有自己特定的细胞周期蛋白，可启动细胞周期的 G1 期、S 期或 M 期。细胞周期中的检查点非常重要，因为如果存在遗传损伤，它有助于停止细胞分裂过程，让细胞在细胞分裂前修复损伤。如果损伤无法修复，则细胞会发生凋亡，如果检查点机制失败，则细胞会癌变。 细胞周期中的各种检查点： 一、G1检查点： ●G 1 检查点确定所有条件是否有利于细胞分裂继续进行。例如对 DNA 的损伤和细胞的其他外部因素在此检查点进行评估。如果条件不充分，则不允许细胞继续进入S期。 ●G 1 检查点也称为细胞不可逆地进入细胞分裂过程的限制点。单元格设置了单元格必须满足的某些要求才能通过检查点。 ●外部因素如生长因子在携带细胞通过 G 1 检查点方面起着至关重要的作用。电池只有在大小合适且能量储备充足的情况下才能通过检查点。 ●此时，细胞也会检查 DNA 损伤。 ●不满足所有要求的单元将不会进入 S 阶段。这些
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精密位移传感器技术之间的比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
精密位移传感器技术比较 PIEZOCONCEPT 在其压电级中使用什么类型的位移传感器？为什么它优于其他传感器技术？ PIEZOCONCEPT 使用单晶硅传感器，称为Si-HR 传感器。尽管它是应变仪传感器大系列的一部分，但它的性能优于其他两种常用技术（电容式传感器和金属应变仪）。这两种位置传感技术有其自身的特定缺点。 电容式传感器与 PIEZOCONCEPT 公司Si-HR 传感器的比较 电容式传感器非常常用。他们提供了不错的表现，但他们对以下情况很敏感： • 气压变化：空气的介电常数取决于气压。电容测量将受到任何压力变化的影响。 • 温度变化：同样的，空气的介电常数会随温度变化 • 污染物的存在 以上所有都会导致一些纳米级的不稳定性，因此如果您想实现真正的亚纳米级稳定性，则需要将它们考虑在内。即使可以对气压和温度进行校正，也无法校正其他因素（污染物、脱气）的影响。这解释了电容式传感器在真空环境中性能不佳的原因。此外，电容式传感器非常昂贵且体积庞大。因此，带有电容传感器的位移台不可能做的有像的 BIO3/LT3 这样薄，即使设计的好也会在稳定性方面进一步牺牲性能。 因为它是一种固态技术，所以Si-HR 传感器的电阻不依赖于气压或污染物的存在。其次，温度变化会对测量产生影响（主要是因为材料的热膨胀），但这可以通过使用传感器阵列来纠正。基本上，我们为每个轴平行使用 2 个硅传感器 - 一个用于测量，另一个用于考虑由于温度变化导致的材料膨胀。 金属应变计与 PIEZOCONCEPT Silicon HR 技术的比较 金属应变计与我们的 Silicon HR 技术（也是应变计）之间的差异更大。金属应变计和硅传感器应变计之间存在两个巨大差异。 竞争对手试图说所有的应变仪都具有相同的性能，因为它们测量的是应变。这是不正确的。半导体应变计在稳定性方面与金属应变计有很大不同。 金属应变计和Si-HR 传感器（PIEZOCONCEPT 使用）之间的第yi个区别是应变系数：半导体应变仪（Si-HR）的
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原位测序技术的原理和应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
原位测序 (ISS) 是一种新方法，通过该方法直接在固定组织或细胞样品的切片中对 mRNA 进行测序。原位测序原理关键是测序信息与其位置之间的联系—在一些情况下，是亚细胞位置。这与传统测序不同，后者在将样本从内源环境中移除后分析样本，从而丢失位置信息。 ISS由斯德哥尔摩大学开发，可同时量化数百个 mRNA 转录本，并以单细胞分辨率在空间上解析它们。该方法使用四种荧光染料来指示核酸碱基、 RNA 挂锁探针和催化在挂锁探针位置形成环化 DNA 的酶，这种机制称为滚环扩增。使用成像技术读取产生的荧光 DNA。 空间检测技术 斯德哥尔摩大学研究的新的测序方法，称为原位测序 ( HybISS )。与以前的 ISS 方法一样，HybISS 使用挂锁探针的滚环放大。HybISS原位测序除了具有较大的灵活性和多路复用性外，还提高了空间检测的灵敏度。 HybISS原位测序可用于为细胞图谱项目创建全面的空间参考地图。然而，建立完整的器官或组织的完整基因表达谱仍然需要大量时间，这对于研究器官/组织图谱是必不可少的。 原位测序原理与应用 除了不同类型的肿瘤外，Cartana 已将这种生物技术用于小鼠和人类的至少 12 种组织类型，主要作用是识别组织内的免疫细胞。例如，如果通过这种技术可以绘制和识别肿瘤中的免疫细胞，那么您就可以查看肿瘤的浸润情况并评估免疫反应的程度，这也是一个热门应用. 与靶向 ISS 方法相比，荧光原位测序 ( FISSEQ ) 的非靶向方法也被开发应用。生物科学家曾进行过多种不同版本的原位单细胞测序进行开发，包括 RNA、基因组 DNA、病毒 RNA 和条形码的靶向分析针对蛋白质的抗体。 原位测序技术 和 RNA 结合蛋白 冷泉港实验室曾使用 INSTA-seq的新方法使用双向配对末端测序，这种测序方法可以原位读取单个 cDNA 分子的短分子条形码。在对细胞或组织进行荧光成像后，再使用 12 个碱基的条形码来沉淀cDNA 分子，从而在成像中进行基因表达分析，读取长度超过 300 个碱基。这种原位测序的方法还可以用来检测 RNA 结
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紫外光谱的基本原理、工作原理及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
紫外光谱是紫外分光光度计等分析化学中的重要工具。UV（紫外线）光谱的另一个名称是电子光谱，因为它涉及将电子从基态提升到更高的能量或激发态。在本文中，我将解释紫外光谱的基本原理、工作原理和所有应用。 一、紫外光谱简介 紫外光谱是一种吸收光谱，其中紫外线区域（200-400 nm）的光被分子吸收。紫外辐射的吸收导致电子从基态激发到更高能态。被吸收的紫外线辐射的能量等于基态和高能态之间的能量差（deltaE = hf）。 通常，有利的跃迁是从MAX占据分子轨道 (HOMO) 到LOW未占据分子轨道 (LUMO)。对于大多数分子来说，LOW能量占据的分子轨道是s 轨道，对应于 sigma 键。p 轨道处于较高的能级，具有未共享电子对的轨道（非键轨道）位于较高的能级。未占轨道或反键轨道（pie *和sigma *）是能量High的占据轨道。 在所有化合物（除了烷烃）中，电子都会经历各种跃迁。一些随着能量增加的重要转变是：非键到派*，非键到 sigma *，派到派*, sigma 到 pie *和 sigma 到 sigma *。 二、紫外光谱学原理 紫外光谱遵循比尔-朗伯定律，该定律指出：当一束单色光通过吸收物质的溶液时，辐射强度随吸收溶液厚度的下降率与入射辐射成正比：以及溶液的浓度。 Beer-Lambert 定律的表达式为 - A = log (I 0 /I) = Ecl 其中，A = 吸光度 ，I 0 = 入射到样品池， 目的光强度 I = 离开样品池的光强度C = 溶质L 目 的摩尔浓度= 样品池长度 (cm.) ，E = 摩尔吸光率 从比尔-朗伯定律可以清楚地看出，能够吸收给定波长的光的分子数量越多，光吸收的程度就越大。这是紫外光谱的基本原理。 三、紫外光谱的仪器和工作 可以同时研究紫外光谱仪的仪器和工作。大多数现代紫外光谱仪由以下部分组成 ： 光源：钨丝灯和氢氘灯是广泛使用的光源，因为它们覆盖了整个紫外区域。钨丝灯富含红色辐射；具体地说，它们发出 375 nm 的辐射，而氢氘灯的强度低于 375 nm。 单色器：单色器通常由棱镜和狭缝组成。大多数分光光度计是双光束分光光度计. 从
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新型重组鲎试剂检测方法PSNG、rFC与LAL之间的比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
在制药过程中，细菌内毒素的检测依赖于鲎血资源。随着注射剂、疫苗类、化学药品类等制剂品的需求不断增长，鲎血资源的使用率越来越高；同时，鲎试剂中含有B因子、C因子、G因子、凝固酶原，存在由1,3-β-D-葡聚糖激活G因子导致的假阳性结果。所以，建立一套不依赖鲎生物进行细菌内毒素检测的快捷、高效的补充替代方法尤为重要。 作为新型的重组鲎试剂检测方法：PSNG、rFC则备受关注。 一、PSNG和rFC的概念 01 PSNG PSNG（基因重组鲎试剂）是一种基因工程技术合成的细菌内毒素定量检测试剂，该试剂不依赖鲎血资源，满足可持续发展的目标。 它完全模拟了天然鲎试剂LAL的酶联反应，包含C因子、B因子、凝固酶原，是唯一一种拥有与传统鲎试剂相同酶联反应,同时又消除了与1,3-β-D-葡聚糖交叉反应造成假阳性结果的内毒素检测试剂。 PSNG（上图右侧）成功去除了天然鲎试剂 （上图左侧）的G因子干扰。 02 rFC 重组C因子法（rFC）是通过体外重组鲎凝血级联反应的第一个组分：C因子，激活的C因子直接剪切一个荧光底物，产生的信号被荧光酶标仪识别。相较于传统的动态LAL法，重组C因子法只有一种反应机制。 反应机制：左侧为基因重组鲎试剂 右侧为重组C因子试剂 二、LAL、PSNG、rFC 对比情况 作为新型的重组鲎试剂PSNG、rFC，与传统的鲎试剂LAL进行细菌内毒素检测时又会有什么不同呢？ 01 PSNG与LAL在检测内毒素上比较 （图1） 由图1所示，通过研究在显色底物存在下，使用三种重组酶原的多种组合，确定三种重组酶原是否能重建反应步骤。 结果证实，当三种重组酶原同时存在时，内毒素才能激活蛋白酶活性，得出了PSNG与LAL在检测内毒素上具有等效性。另外，研究证实了，三种重组酶原的蛋白酶活性大大增强，信号放大。 02 LAL、PSNG、rFC 对内毒素敏感度比较 （图2） 从反应机制上看，rFC缺少了级联放大的两个环节（加速反应），只能通过荧光检测人为放大（减少了来源于自然反应的特异性）。 如图2
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3D打印技术之微球体详解
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
微球体是在增殖过程中排列成球形的三维（3D）细胞培养物。1970年代就开始使用这项技术了，当时科学家观察到悬浮生长的仓鼠肺细胞以接近完美的球形形式排列。 在二维单层细胞培养中，细胞与其生长的基质相互作用，而3D细胞培养可以长成球形，从而促进细胞间的连通性，并可以嵌入天然组织的细胞外基质（ECM）中。它们有助于更好地了解其微环境中的细胞，并为研究提供更现实的细胞方案。 微球体研究在再生医学，癌症研究和药物筛选中特别有意义。间充质干细胞的球状体（骨髓中具有形成和修复骨骼组织能力的多能细胞）已显示出增强的组织再生和修复特性，并且移植后的生存期更长。 在癌症研究中，将微球体用作多细胞肿瘤球体模型（MCTS），用以研究实体肿瘤生物学。MCTS内独特的细胞组成特别适合研究细胞如何生长，相互作用，增殖和吸收营养物质和化学化合物，这也使它们成为候选药物的理想临床前测试培养物。 ▍用于球体形成的3D生物打印自动化 微球体研究最大的挑战是找到最合适的技术和工作流程，用以生成易于复制且尺寸均匀的球体。由于球体内的细胞功能与球体的大小密切相关，因此大小均匀性对于获得可重现的结果尤为重要。 通过改善空间控制，减少人为错误，提高材料灵活性和提高速度，3D生物打印自动化可以实现更大程度的尺寸均匀性和可重复性。如今的生物打印机可以同时打印多种类型的细胞，并可以进行高精度液滴分配。 高级的3D生物打印允许同时使用不同类型的生物材料，例如水凝胶，生物膜和颗粒。可扩展，具有成本效益的3D生物打印系统可以更快地进行大量打印，因此可以帮助研究实现高效率的进一步创新。 但同样重要的是，3D生物打印使科学家能够开发标准的工作流程，避免耗时且重复的任务，并收集更一致的数据，以为微球体研究建立更好的预测模型。 ▍在您的实验室中创建微球体 在微球体研究继续推动3D细胞培养向前发展的同时，在CELLINK，我们认识到需要简化这些细胞簇容易且可重复形成的工具。
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如何测定微透析探针的回收率
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
微透析技术是近年来发展起来的动态生物取样技术，具有“活体、微创、实时、高效”等特点，其与现代分析技术联用，实现了连续取样和动态测定，可进行微量的定性、定量分析。微透析探针回收率的准确校正，是测定生物体中待测组分确切浓度的关键步骤，可提高大分子、难溶性物质的回收率，使微透析的应用更为广泛。 一.微透析技术的原理: 物质沿浓度梯度扩散和半透膜对小分子化合物具有通透性，将微透析探针置于组织中，当灌流液通过探针时，细胞外液中相对分子质量合适的物质便会顺浓度梯度通过半透膜进入灌流液中。由于透析管中的灌流液不断流动更新，因此，跨膜浓度梯度始终存在，微透析得以持续进行。 二.回收率的测定方法 1 体外校正体外校正实验是把探针放入已知浓度的样品溶液中，按体内微透析方法进行操作，一段时间后收集灌流液，测定灌流液中的药物浓度，并与溶液标准浓度相比，即得相对回收率。体外法没有考虑体内的生理因素对回收率得影响，所以，只有在体内因素对实验结果影响不大，或只需知道药物在体内的变化而不要求绝对含量时，体外校正才满足要求。 2体内校正相对回收率可以进行体外校正(in vitro calibration)和体内校正(invivo calibration)，在血液或胆汁微透析实验中，因为药物在其中扩散速度快，不影响探针的收率，所以只进行体外校正即可;而在一些实体组织中，如脑、肝脏、肌肉等，通常山于取样部位的曲度增加导致扩散距离变长，扩散空间变小10]，使得药物在其中的扩散比通过半透膜慢，回收率下降，因此必须进行体内校正。一般体内校正的方法有如下几种: 2.1内标法(Internal technique)是在灌流液中加入一已知浓度且性质与被分析物质相似的另一种物质（一般为结构类似的化合物）做内标物，通过体外实验求得药物和内标的回收率比，并且假设体内实验中，两者的回收率比不发生变化，通过测定内标在体内的相对回收率来计算药物的回收率。 2.2反透析法(Retrodialysis)是把已知量的药物加入灌流液中，
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慢性间歇性酒精暴露模型的神经生物学机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
杏仁核在大脑中属于较小的脑区，但是解剖结构精细（分为中央核、基底外侧核等）、功能强大（参与调控焦虑、抑郁、成瘾、恐惧等）。基于解剖结构的相似性，进一步将杏仁核中央核（CeA）、终纹床核 (BNST) 和伏隔核的相邻区域构成了单一系统，称为extended amygdala。 暴露在应激环境中激活 DYN/KOR 系统，引发焦虑和焦虑行为。全身性或在CeA区域注射KOR 拮抗剂能够降低大鼠的酒精摄取行为。CeA脑区富集表达强啡肽和к阿片受体，敲除该区域的PYDN（强啡肽前体）后降低酒精摄入。 2022年1月8日南卡罗来纳医药大学精神与行为科学系Howard C. Becker研究团队揭示了杏仁核DYN/KOR信号通路参与压力促进酒精使用。 图1：小鼠酒精摄入行为学流程 研究人员通过慢性间歇性酒精暴露模型（每天给与1小时的15%的酒精，连续一个月）结合强迫游泳实验模拟应激环境下的饮酒行为（图1），发现应激能够显著促进成年小鼠的饮酒行为，CeA区域的PYDN基因的mRNA表达增加，这种增加仅发生在同时接受慢性应激和酒精暴露的环境下，单独应激或酒精暴露均不会引起PYDN基因表达的变化。简单来说，慢性应激的这种促进酒精饮用的效应仅仅发生在曾经有过慢性酒精暴露史的小鼠中。 图2;抑制CeA区域表达PYDN的神经元活性 通过化学遗传学技术特异性抑制CeA区域表达PYDN的神经元或在CeA区域注射KOR 拮抗剂后能够阻断应激的促进饮酒效应。这就表明CeA区域PYDN能神经元活性在调控应激促进酒精摄入过程中发挥关键作用。 以往研究表明BNST区域注射KOR 拮抗剂也能够降低酒精成瘾模型小鼠的饮酒行为，此外，CeA区域PYDN能神经元投射到BNST。研究人员发现BNST区域注射KOR 拮抗剂也能够阻断应激的促进饮酒效应。这就说明DYN -KOR信号在应激增强酒精使用中的重要作用。 中枢神经系统的阿片类受体主要为μ、κ、δ、σ受体，其中μ受体在酒精成瘾中研究较多，本文揭示了杏仁核脑区к阿片受体信号介导压力驱动的酒精使用增加。 康森特生物科技（长沙）有限公司
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实验室安全小贴士
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
安全操作 在教师的指导下，综合评估实验及其环境的安全性，佩戴相应的个人安全防护用品，操作使用公共仪器设备的人员，佩戴不同的个人专用手套。 公共用品用具应当保证卫生安全，可以反复使用的用品用具应当一人一换一消毒，禁止重复使用一次性用品用具。 实验前后均需洗手，实验过程中不触摸眼、鼻、口，实验完毕后清理实验用具，并做好身体的清洁与消毒。 严格执行电气安全、危险化学品安全、生物安全、辐射安全、机械安全和特种设备安全等工作管理要求，严格按照操作规程开展实验。 实验过程(特别是生物实验)需进行详细的记录，有异常情况，及时向指导老师汇报，特殊情况需向学院和学校报告。 使用过的实验物品、手套、纸巾以及其他废物按规定分类放置在专用垃圾袋进行处理。废弃口罩投放在标识“废弃口罩专用”字样的带盖收集容器。 实验室安全“八防” 实验室的安全管理至关重要，关系到一众实验人员的生命安全以及常年累月的心血结晶。 注意防护的有防水、防火、防毒、防爆、防腐蚀、防辐射、防触电、防环境污染等等。 化学品 化学品采购： 1.危险化学品分为:爆炸品、压缩气体和液化气体、易燃液体、易燃固体、自燃物品和遇湿易燃物品、氧化剂和有机过氧化物、有毒品和腐蚀品、放射性同位素物品等。 2.化学品应从具有化学品经营许可资质的公司购买。 3.不得通过非法途径购买(获取)、私下转让危险化学品。 化学品储存： 1.所有化学品和配制试剂都应贴有明显标签，杜绝标签丢失、新旧标签共存、标签信息不全或不清等混乱现象。配制的试剂、反应产物等应有名称、浓度或纯度、责任人、日期等信息。 2.存放化学品的场所必须整洁、通风、隔热、安全、远离热源和火源。 3.化学品储存柜与冰箱需明示化学品清单。 4.实验室不得存放大桶试剂和大量试剂，严禁存放大量的易燃易爆品及强氧化剂；化学品应密封、分类、合理存放，切勿将不相容的、相互作用会发生剧烈反应的化学品混放。 5.实验室需建立并
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利用凝胶膜过滤器进行洁净环境中的空气监测
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
Overview 生物污染控制策略是最新标准和指导方针如EN17141及欧盟GMP附录1的修订版本的关键要求。欧盟和英国已采用了2020年发布的EN17141取代ISO14698。EN17141附录E章节对基于培养技术的微生物监测方法和取样器验证指南作了详细的说明。 Download 本篇《根据EN17141和ISO14698，使用凝胶膜过滤器进行洁净环境中的空气监测》应用说明重点关注活性微生物的监测，并证明通过凝胶膜过滤技术进行的微生物空气监测符合EN17141和ISO14698的要求。 扫描二维码下载全文 简介 无菌和生物制药生产中必须实施生物污染控制策略。要实现这些控制，就需要精心设计工艺流程以免污染、实施监测系统以监测污染、以及实施补救策略以迅速解决污染事件。 空气污染物可通过主动采样进行测量，而主动采样需要使用专业的设备主动抽取规定体积的空气。这便于准确测量每立方米（m3）的空气中的微生物菌落形成单位的数量（CFU）。 采样器效率可分为物理效率和生物效率。物理效率是采样器收集的微生物数量与取样空气体积中存在的总数量的比率。生物效率是从空气样本中回收的活性微生物数量与预期收集的数量的比率。 物理采样效率 枯草杆菌黑色变种芽孢（1.2μm x 0.8μm）是一种能够承受雾化压力的强健微生物。 在受控环境室中使用旋转顶部气溶胶发生器生成含有不同大小的活枯草芽孢杆菌孢子颗粒的微生物气溶胶。将含有 0 - 7 %（重量/体积百分比）碘化钾（Kl）的 80%乙醇的孢子悬浮液（约 106CFU/ml）注入气溶胶发生器中。颗粒的大小可通过旋转顶部的速度和悬浮液中的KI浓度来调节。与气溶胶发生器等距放置的采样器可同时采集样本。 截留率 通过使用雾化枯草芽孢杆菌孢子进行的细菌激发试验（BCT）测定出了凝胶膜过滤器的截留率。在BC试验中，使用了 1.2 * 105 CFU/cm² 枯草芽孢杆菌孢子来挑战凝胶过滤器，然后检测过滤后的空气是否受到枯草芽孢杆菌的污染。凝胶过滤器对枯草芽孢杆菌孢子的最高截留率 > 97.996%（图1）。
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细胞培养的注意事项及常见问题与解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
一、无菌操作 细胞培养最看重的就是无菌操作，无菌操作是细胞培养是否成功的关键点。 1、使用前用75%的乙醇擦拭细胞间的桌面、超净台、孵箱和离心机等；紫外照射细胞间和超净台30分钟以上才可以进入使用。 2、进入细胞间必须穿上隔离服或者细胞间专用的白大衣，戴上手套和口罩，换上拖鞋，严格意义上来说，帽子也是要带的。除了隔离服，其他穿着物品**一次性使用。 3、凡是放入超净台中的不是一次性使用的物品事先都需要经过高压灭菌；不能进行高压处理的物品也需要经过75%的乙醇消毒。包括酒精灯、吸管、移液器、试管架、培养皿、废液缸等。 4、操作过程中尽量接近酒精灯；用镊子拿取枪头、离心管、吸管等物品时，避免碰到使用端；不要在开口器皿的上端进行操作。 5、细胞间的设计都是一层层的隔间，每一层隔间的拉门都必须关好；当有人在超净台工作时，其他人员不允许进入操作区域。 二、培养基 1、培养基的选择依细胞种类而定。如果是从别的实验室借来的细胞，最初阶段一定要保持细胞原有的培养条件；特殊种类的细胞，比如内皮细胞，可以借鉴网上培养成功的条件，添加一些特定成分。 2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。小六儿见过有的大实验室细胞量多，一次性购买的培养基瓶数也多，有些人可能觉得-20冰箱保存时间会更久一些。但是经过冷冻后的培养基再溶化时，你会发现培养基的颜色发生变化，颜色变深，这就是培养基的PH值升高了。 3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺，用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。但是谷氨酰胺在溶液中不稳定，保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。所以尽量不要大批量购买培养，也不要一次配太多的培养基。 4、细胞适合的培养基PH值是7.2-7.4，偏高或偏低都不好，但相对于碱性条件而言，细胞更耐酸。原代细胞对PH值的变化很敏感，而永生性细胞相对来说忍受力更强一些。 5、造成皿或瓶内培养基PH值变化的原因有很多：细胞增殖速度的快慢、孵箱内二氧化碳的浓度不准
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细胞培养基的质量标准和检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
一、细胞培养基的质量标准 二、细胞培养基的检测方法 1、澄清度 水是细胞培养基的溶剂。细胞培养基中的营养成分只有完全溶解于水才能被细胞吸收摄取，细胞才能生长增殖，因此细胞培养基是否溶解以及培养液是否透明澄清直接影响培养基使用。该项目是通过对水溶解后的细胞培养基的澄清度检查，判断细胞培养基的澄清度。 2、pH 值 哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度，pH过高或者过低都会导致细胞死亡。pH值的测定也可以检查细胞培养基的批间差。清大天一标准规定取规定量供试品，用注射用水（水温20℃-30℃）溶解至1L，加入规定量碳酸氢钠到上述溶液中，用与细胞培养基溶液pH值相近的两点标准缓冲液校准后的酸度计进行测定。 3、干燥减量的质量分数 细胞培养基具有吸湿性，在空气中放置水分会很快升高，干燥减量的质量分数表示产品中含湿量。细胞培养基是有菌制剂，其丰富的营养成分有利于微生物生长，控制细胞培养基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持细胞培养基的养分。 4、渗透压 溶剂通过半透膜由低浓度向高浓度溶液扩散的现象称为渗透，阻止渗透所需施加的压力，称为渗透压。细胞必须生活在等渗环境中，动物细胞借助K＋、Na＋维持渗透平衡。大多数细胞对渗透压有一定的耐受性。但是培养液渗透压过高容易使细胞脱水萎缩，培养液渗透压过低容易使细胞膨胀破裂，因此要控制培养基的渗透压范围。 5、细菌内毒素 细菌内毒素是许多病原性细菌所产生的毒素。它的特殊性在于不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有生物活性的物质。培养基细菌内毒素过高，对生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程药品等注射用的药品都需要检查细菌内毒素。因此本项目的检验符合生物制品质量控制要求。常规细胞培养基的细菌内毒素标准定为＜10 EU/ml。称取本品规定量（见表4-12）的1/100，加入细菌内毒素检查用水10 mL溶解，吸取该溶液0.1 mL加细菌内毒素检查用水3.9 mL，混匀即得
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干细胞的相关知识
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
1．何谓干细胞。 人体的绝大部分细胞因为高度分化往往会失去再分裂的能力。但是，机体在发展过程中会保留一定数量的尚未分化、具有自我更新能力的原始细胞，这些就是干细胞，也称为“源泉细胞”。 按照生存阶段划分，干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞。当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团的细胞就是胚胎干细胞。胚胎干细胞具有很强的分化能力，可以无限增加，并且可以分化成全身２００多种细胞类型，也就是说它能长成动物的任何组织和器官。 成年动物的许多组织和器官，比如表皮和造血系统等，都具有修复和再生的能力，这是由于成体干细胞在起关键作用。在特定条件下，成体干细胞可以产生新的干细胞，也能够按一定的程序分化，形成新的功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的平衡。除了皮干细胞和造血干细胞，最新研究表明，人体干细胞普遍存在，包括以往认为不能再生的神经干细胞。也就是说，只要能培育出某个器官或组织的干细胞，这个器官或组织就可以再生。 2．干细胞的作用与获取。 对于干细胞的作用，科学家认为，绝大多数疾病，包括糖尿病、中风、艾滋病，都可以利用干细胞技术得到**；干细胞的应用还包括体外制造人体器官，比如通过形成嵌合体，在严格的控制下，使动物的某些器官来源于人体干细胞，即长出人体器官来，以用于移植。 人体从哪里分离出干细胞呢？除了脊髓和胎盘外，毛囊、人脑、胰腺、脂肪以及视网膜等部位也都有干细胞。而且在脂肪中的大量干细胞可以转化为一系列不同类型的细胞。 3.干细胞是决定生命衰老的关键因素 成人体是由大约1800万亿个不同生理特性的细胞组成个体的"细胞社会"，每天都有1%-2%的细胞死亡，同时每天也有1%-2%的细胞新生。所有新生的细胞都来自干细胞，干细胞就是机体"细胞社会"的母亲。 新生细胞数小于衰老死亡的细胞数，人体就逐渐衰老。因此，干细胞的功能和数量是维持人体器官生长和新陈代谢的源泉动力，同时也是机体修复衰老退行性变的最重要、最基本的生
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粉末保形包覆：PALD 技术的基本实现方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
技术的变革需要创新精神，更依赖创新者之间的合作。Alan Weimer 与 Steve Geogre 两位教授自本世纪初起的合作，造就了全新的粉末工程加工技术：PALD（粉末原子层沉积）。而由此衍生的两家 ALD 技术公司 ALD Nanosolutions 以及 Forge Nano （二者在 2020 年完成合并）已经成为全球最大的粉末 ALD 技术推行者，实现从克级到千吨级的粉末表面保形涂层加工。 关于 ALD 以及 PALD 技术 与传统的表面改性不同，PALD 是真正可以实现原子级/分子层级控制精度的粉末涂层技术，并保持良好的共形性。原子层沉积技术是一种基于自限制性的化学半反应将被沉积物质以单原子膜的形式一层一层的镀在物体表面的薄膜技术。与常规的化学气相沉积不同，原子层沉积将完整的化学反应分解成多个半反应，从而实现单原子层级别的薄膜控制精度。由于基底表面存在类似羟基这样的活性位点，因此前驱体可以形成单层的饱和化学吸附，从而实现自限制性反应。而在经过单个周期反应后，新的位点暴露出来，可以进行下一个周期的反应。而 ALD 反应的特点决定了： 1. 反应具有自限制性，因此每个周期理论上最多只有一层目标涂层形成 2. ALD 反应具有较好的绕镀性，可以实现其他方法无法达到的保形，均匀的涂层 3. 厚度可控，通过控制反应的周期，从而实现原子层级的厚度控制 ALD 的原理：氧化铝涂层的生长 PALD 诞生自工业经验与学术精神的碰撞 20 世纪末，在美国的科罗拉多大学博尔德分校，刚刚从工业界转回学术界的 Alan Weimer 开始重拾科学研究的乐趣。这位特立独行的研究者在偶然听到 Steve Geogre 教授关于原子层沉积技术的报告后，立马投入到这一研究中。二人的合作产生了良好的化学反应，在短短几年内，他们就申请了大量的相关专利，其中就包括对大规模的粉末颗粒表面进行 ALD 包覆。当时，ALD 技术在半导体行业得到越来越多的重视，但没有人相信可以实现大量粉末材料的 ALD 涂层沉积。很多质疑者的疑问在当时看起来无
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