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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的工作原理

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的工作原理

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

电泳是分离蛋白质和其他物质如核酸、嘌呤、嘧啶、一些有机化合物甚至无机离子的主要技术。目前的大部分电泳是将样品分离到固定介质中的流动相中。聚丙烯酰胺凝胶是主要介质之一。它是一种多孔凝胶,其孔径接近蛋白质分子的大小,提高了蛋白质的分辨率。此外,聚丙烯酰胺凝胶化学稳定性好,重复性强,对pH和温度变化稳定,颜色观察容易。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在蛋白质分子量测定、特异性蛋白质检测、菌种鉴定等方面具有操作简单、重现性好等特点,因此广为使用。 SDS-PAGE的工作原理是什么? 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂N,N'-亚-CH3双丙烯酰胺在催化剂过硫酸铵(AP)和N,N,N',N'-四-CH3乙二胺(TEMED)的作用下组成。它是一种具有三维网络结构的凝胶。PAGE可以根据蛋白质分子的电荷和分子量不同而引起的迁移率不同,将蛋白质分成若干条带。SDS是一种阴离子表面活性剂,它可以在还原剂DTT存在下破坏蛋白质的氢键和疏水键,并与蛋白质分子按一定比例结合形成短棒状复合物。相同的密度,与蛋白质的分子量呈正相关,不同分子量的蛋白质所形成的复合物的长度是不同的。SDS使带负电荷的蛋白质的数量远远超过其原始电荷,掩盖了各种蛋白质分子之间的天然电荷差异。因此,各种蛋白质-SDS复合物在电泳过程中的迁移率不再受原有电荷和分子形状的影响,而只取决于相对分子质量。 聚丙烯酰胺凝胶 聚丙烯酰胺凝胶通常由上层的浓缩胶和下层的分离胶组成。上下凝胶的区别在于丙烯酰胺的浓度和 Tris-HCl 的 pH 值。在电泳过程中,向凝胶施加电场,带负电的蛋白质从负极迁移到正极。最常见的电泳缓冲液由 Tris 和甘氨酸组成。浓缩胶中的 pH 值为 6.8,只有少数甘氨酸分子解离。因此,经 SDS 处理的蛋白质分子在上层甘氨酸分子和下层 Cl- 离子之间移动。这个过程将凝胶中的蛋白质样品压缩成比最初加载的体积小得多的条带。随着电泳的进行,蛋白质移动到分离凝胶(pH 8.8),甘氨酸分子在此解离,随着运动

小鼠胎儿表皮角质形成层细胞的培养方法与注意事项

小鼠胎儿表皮角质形成层细胞的培养方法与注意事项

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

细胞简介   细胞名称:小鼠胎儿表皮角质形成层细胞   规格:1×10⁶Cells/T25培养瓶   细胞信息:原代细胞   培养条件:原代细胞取组织现分   产品特点:多种细胞现货供应,代次低,状态好,现货。   储存:接收到冻存细胞时请立即从干冰转入液氮中保存。   运输:冻存的细胞干冰运输,复苏的细胞冰袋运输。   用途:研究   注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或**,非药用,非食用(产品信息以出库为准)   小鼠胎儿表皮角质形成层细胞培养方法   1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。   2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。   3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量*,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。   对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:   1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。   2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。   3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。   4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。   对于悬浮细胞,可参考以下方法:   一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度可先离心10

浅析条件性恐惧实验的建立、场景恐惧实验表达测试方法

浅析条件性恐惧实验的建立、场景恐惧实验表达测试方法

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

01 小鼠条件性恐惧模型的建立 小鼠购入后适应性饲养6d,实验当天提前1h放入实验间。不同品系小鼠放入电击箱内(A环境) 自由探索 2min(适应期)后,给与30s声音刺激 (85dB,5000Hz),后2 s伴随给与不可逃避的足底 电击(0.6mA,持续2s),声音-电击共配对5次,每 次间隔2min。计算机软件记录各个阶段(包括适应期、5轮声音刺激期和5轮间歇期)的僵住时间,僵住 时间百分率(%)=僵住时间(s)/总时间(s)×100%。 僵住行为是啮齿类动物表达恐惧的方式,表现为除 呼吸运动外全身其余的肌肉运动均消失。 02 场景恐惧和声音线索恐惧表达的检测 场景恐惧表达检测:条件性恐惧训练24h后, 将小鼠再次置于接受过电击的装置(环境A:足底电 栅栏+白光)中,不给与任何刺激,进行环境重现,使用VisuTrack软件(上海欣软)记录5min内的僵住时间(Freezing时间),计算僵住时间百分率,评价小鼠场景条件恐惧表达的特点。 声音线索恐惧表达检测:场景恐惧检测2h后, 将小鼠置于新环境(环境B:三角形半透明黑色套 盒+白色底板+无白光)中,2min适应期后进行30s声音刺激,声音刺激结束30s后将动物取出,记录各个阶段(包括适应期、声音刺激期和间歇期)的僵住时间,计算僵住时间百分率,用于评价3种品系小鼠线索条件恐惧表达的特点。 条件性恐惧实验系统,型号:XR-XC404,上海欣软 03 条件性恐惧的自然消退 以C57小鼠为研究对象,分别于条件性恐惧训练后第2,7,14,21和28天对其场景恐惧和声音线索恐惧进行检测,以评价该品系小鼠条件性恐惧的自然消退特点。其中,场景恐惧检测5min内僵住 时间(环境A,无声音信号,不电击),声音线索恐惧检测 30s声音刺激期内僵住时间(环境B,不电击, 2min适应+30s声音信号+30s间歇),计算僵住时间百分率。 如需详细了解VisuTrack条件性恐惧实验系统的性能和规格参数,可在线咨询:     欲详细了解VisuTrack动物行为分析软件性能,微信扫码联系周老师远程演示   04 声音线索

小鼠震惊反射实验的测试方法

小鼠震惊反射实验的测试方法

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

震惊反射(startle reflex, SR)是动物对威胁性刺激的保护机制。在突发的强刺激(如声、光等)下,动物产生全身肌肉屈曲伸直的反射,即震惊反射,在行为上表现为惊跳。听震惊反射(acoustic startlereflex, ASR)特指由强烈的声音刺激产生的震惊反射。震惊反射虽然能够使动物快速对威肋、性刺激做出反应,但是会干扰正常的行为活动和认知加工。中枢神经系统天然具有过滤和筛选信息的能力,来保证思维的连贯性,这个机制称为感觉运动门控的“加工保护”理论认为,感觉运动门控的意义在于大脑利用此机制对感觉信息进行过滤,减少后出现的震惊刺激对前脉冲刺激的干扰,保护对前脉冲刺激信号的早期知觉编码。具体来讲,当多个刺激信号分先后出现时,中枢神经系统优先处理先出现的刺激信号,即使后出现的信号强度较大也会得到抑制,这就是所谓的前脉冲抑制(prepulse inhibition, PPI)现象。 前脉冲抑制效率((PPI,)是目前评估感觉运动门控功能是否完善的重要行为学参数。在强声音刺激之前的一定时间(几十至几百毫秒)内,先出现一个弱的阂下声音刺激(即前脉冲),会降低动物对强声音刺激的听震惊反射幅度((startle amplitude, SA),对震惊反射幅度的抑制率即为PPI。对于啮齿类动物,震惊反射幅度和PPI数值可以通过震惊反射系统(startle response system)获得。当感觉运动门控功能正常时,动物具有明显的PPI现象;当该功能缺损时,PPI的数值会显著下降,称为PPI缺失。 在很多精神疾病中都发现有感觉运动门控失调和前脉冲抑制缺失的现象,如精神分裂症、躁狂型抑郁症、强迫症、成年自闭症以及其他与皮质-纹状体五脑环路紊乱相关的精神疾病等。由于前脉冲抑制在哺乳动物中是保守的神经生物学过程。因此可以采用啮齿类动物模型研究感觉运动门控和前脉冲抑制失调的机制,这对研究和**此类精神疾病有重要意义。本文中我们以C57BL/6小鼠品系为例,建立了用震惊反射系统(即惊恐箱,startle box)测定小鼠震惊反射和前脉冲抑制的实验方法,并构建了

聚合物包衣对水稻种子萌发的影响

聚合物包衣对水稻种子萌发的影响

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

Effects of Polymer Coating on Rice Seed Germination 聚合物包衣对水稻种子萌发的影响   摘要:种子公司努力为种子增加价值并保护它们免受假冒。另一方面,买家寻找高质量和有保证的种子。因此,包衣技术为提高种子质量提供了各种可能性。它还支持识别和可追溯性。蔬菜作物种子常用的三种包衣技术;薄膜包衣、结壳和造粒。 种子包衣过程涉及将材料粘附到种子表面的所有方面,而不会显着增加种子的大小或重量。将聚合物应用于种子作为额外的外壳,以提供所需的种子特性,即快速或延迟吸水和增强发芽,这将有利于在给定条件下更好地出苗和建立。因此,进行了一项研究,以确定聚合物涂层对水稻种子萌发的影响。   结果表明,当用5 ml 60%、70%和80%的聚合物涂覆时,水稻种子表面的聚合物涂层覆盖率 >99%,合适的包衣配方可在种子表面提供均匀的包衣(图 1)。当涂层覆盖率高 (>99%) 时,聚合物粘附良好,并为种子提供有吸引力的外观。   图1.水稻种子表面聚合物涂层的视觉效果   未包衣和包衣种子的最终发芽率都很高(>85%)(图 2)。它表明聚合物包衣不会对种子造成任何植物毒性作用。   图2.施用不同浓度和用量的聚合物后水稻种子萌发   涂有60%和70%聚合物的种子与对照(表2)具有相似的发芽率(MGT≈4.0,T50≈1.5 和 GI≈22.2)。然而与对照相比,用较高聚合物浓度(80、90和100%)包衣的种子具有较低的发芽率(MGT>4.0,T50>1.5 和 GI

使用灰度共生矩阵和机器学习技术识别单倍体玉米种子

使用灰度共生矩阵和机器学习技术识别单倍体玉米种子

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

摘要:双单倍体(DH)技术在玉米育种中得到了有效的应用。该技术在时间和纯合度方面均优于传统玉米育种。 DH技术的重要过程之一是单倍体种子的选择。选择单倍体的最常用方法是 R1-nj(纳瓦霍)颜色标记。这种颜色标记出现在种子胚乳和胚胎中。仅选择胚乳有色种子并持续到发芽阶段。这种选择通常是手动完成的。单倍体种子选择的自动化将增加成功率并减少劳动力和时间。在这项研究中,我们使用了 87 个单倍体和 326 个二倍体玉米种子作为数据集。使用了玉米种子胚的质地特征。这些特征是从灰度共生矩阵中获得的。特征向量使用决策树、k-最近邻和人工神经网络进行分类。机器学习技术的分类性能通过使用 10 折交叉验证方法进行测试。测试结果表明,决策树的性能**,分类成功率为84.48%。   关键词:玉米;单倍体识别;纹理特征;GLCM;决策树;kNN;ANN   在这项研究中,使用了为之前的工作创建的数据集。该数据集包括 413 粒玉米种子,共 87 个单倍体和 326 个二倍体。 所有样品均作为玉米研究所2016年“国家玉米育种研究”项目的一部分收获。所有样品均来自RWS、RWK-76和“RWSxRWK-76”母源单倍体诱导剂150个基因型的杂交结果。样品的选择在胚胎和胚乳中具有不同的R1-nj表达(浅深色,无密色)。 根据 R1-nj 颜色标记手动完成样本的类别标签分配。 图 1 给出了数据集中单倍体和二倍体玉米种子的样本图像。   图1.(I)单倍体和(II)二倍体玉米种子的样本图像   确定在对数据集中随机选择的80粒玉米种子进行的测量中,统计学上的35像素半径代表胚孔。图2显示了二倍体玉米种子样本的种子质心和特征提取区域。   图2.样品种子、种子的质心和分割的胚区   单倍体和二倍体玉米种子在结构上彼此不同。纹理特征经常用于解决许多不同的模式识别问题。在这项研究中,纹理特征用于分离单倍体和二倍体玉米种子。从数据集中,样品单倍体和二倍体玉米种子胚的图像已在图3中给出。   图3.(I)单倍体和(II)二倍体玉米种子的胚胎图像  

动物疼痛模型——鼠尾光照测痛实验

动物疼痛模型——鼠尾光照测痛实验

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

尾闪试验( tail-flick test)也叫鼠尾光照测痛实验,是一种用热作刺激的急性伤害性知觉疼痛的实验,即用热刺激动物(鼠类)的尾巴,当其尾部受到伤害性刺激时会产生明显的躲避反应,这是一种脊髓的屈曲反射。该疼痛模型最早由D'Amour和Smith在1941年描述,它可测试轻度麻醉的动物而且不受动物运动协调性的影响,因而比热板试验具有一定的优越性,但是尾闪试验的尾巴温度可能会影响实验结果,容易造成假阳性或假阴性,试验最终的行为反应也较为复杂(如舔其后爪)。Janssen等(1963)根据尾闪试验用温水(49度)替代热光源来刺激动物的尾巴测试其反应时间,更新的实验装置则可用较局限的热点刺激,专门刺激菜一个单一的脚爪,然后测定其反应潜伏期,这比热板试验刺激的4个全部的脚爪或尾闪试验刺激的尾部更为精细。 (一)实验材料 1.实验动物健康成年雄性小鼠(30 - 35g)或大鼠(200 - 250g),分组饲养。 2.实验药物生理盐水(对照)与镇痛药物(如吗啡,l0mg/kg,皮下注射)。 3.带27((大鼠)或30G(小鼠)针头的1.0ml注射器。 4.带自动计时器或秒表的尾闪试验装置。 5.限制大鼠或小鼠活动的包括毛巾或塑料小筒。 (二)实验步骤 1、从动物房取出实验动物,称重后,让动物在实验室适应30min,将对照组与实验组分开; 2、药物准备对照组(生理盐水等)及给药组(如吗啡等,计算药物浓度,如大鼠按2mg,kg绐药,小鼠按10mg/kg给药); 3、测定动物的基础反应潜伏期( baseline latencies) 用尾闪试验测试仪(即在一小孔的平板下有一个发热光源,将大鼠(尾尖部前50mm左右)或小鼠(尾尖部前约15mm)的尾部放在小孔的上方,启动发热光源开始计时,直到尾巴躲避为止,调整光源的强度,设大多数鼠的尾部躲闪时间在3- 4s,如果没有躲避反射则把试验终止时间设定为10s,以免烧伤; 4、药物注射将不同的药物包括对照溶液,随机顺序注射到实验动物体内。注意计算好给药时间与试验测试的时间间隔,试验持续时间,同时给出足够

在新冠疫苗注射后人体内的各种细胞的反应与作用

在新冠疫苗注射后人体内的各种细胞的反应与作用

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

相信随着新冠疫苗的普及,很多身边的朋友或是已经预约了医疗,或是已经完成一次接种。那么新冠疫苗打在体内,人体内的各种细胞又经历了什么呢?   01 淋巴T细胞 来自T细胞的情况汇报: “嫌犯的遗体(灭活疫苗)已收到,已指派在各处血管和淋巴管中巡逻的兄弟们加紧巡逻,会注意样貌体征相似的嫌犯同党(新冠病毒)。同时也已经把嫌犯遗体上的防弹衣(抗原糖蛋白)扒下来交给军工厂(B细胞)研究,抓紧生产能够击穿嫌犯同党防弹衣的武器(抗体),并尽快派发给一线巡逻的兄弟们”。 淋巴T细胞 是由来源于骨髓的淋巴干细胞,在胸腺中分化、发育成熟后,通过淋巴和血液循环而分布到全身的免疫器官和组织中发挥免疫功能。T细胞按照功能和表面标志可以分成很多种类,如细胞毒T细胞、辅助T细胞、调节/抑制T细胞、记忆T细胞等,分别起到消灭感染细胞、辅助其他免疫细胞工作、调节免疫反应强度、保持免疫记忆等作用。 02 淋巴B细胞 来自B细胞的情况汇报:   “来自T细胞转送的嫌疑人信息(新冠病毒抗原信息)已收到,目前正加班加点生产对应的强效武器(抗体),会早日把装备送上一线的兄弟手中,痛殴敌军。”   对此,正在一线巡逻的T细胞的评价是: (早期产生的IgM抗体免疫效果差、存在时间短,属于“应急产物”)   好吧,其实应该是这个表情: (其后产生的IgG抗体拥有更强大、更靠谱的免疫效果, 图为拿到趁手武器(IgG抗体)的T细胞一脸欣喜)   淋巴B细胞 是由来源于骨髓的淋巴干细胞,在胸腺中分化、发育成熟后,通过淋巴和血液循环而分布到全身的免疫器官和组织中发挥免疫功能。T细胞按照功能和表面标志可以分成很多种类,如细胞毒T细胞、辅助T细胞、调节/抑制T细胞、记忆T细胞等,分别起到消灭感染细胞、辅助其他免疫细胞工作、调节免疫反应强度、保持免疫记忆等作用。(本段有误,与T细胞雷同,感谢读者指出)   03 树突状细胞(DC)   树突状细胞: “正在连夜绘制嫌疑人及同党的高清无码相

新型冠状病毒2019-nCoV及SARS入侵宿主途径解析

新型冠状病毒2019-nCoV及SARS入侵宿主途径解析

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

2019-nCoV和SARS疫战中的特洛伊木马—ACE2 2019-nCoV袭来,扰乱了很多人的“原计划”,不禁让人回想起2003年的“SARS非典疫情”(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS),以及肆虐中东地区的中东呼吸综合症MERS(Middle East Respiratory Syndrome,MERS)。以上两种疫病的爆发均与冠状病毒有关。 那么冠状病毒到底是什么呢? 冠状病毒直径约60-220nm,病毒内包含正向的单链RNA,单链的RNA长度约27到32kb,分为两大组成部分:复制酶编码区和结构蛋白编码区。 复制酶编码区主要表达编码两个大基因,ORF1a和ORF1b,它们编码16个非结构蛋白(nsp1-nsp16),在整个冠状病毒中高度保守(图1A)。结构蛋白编码区主要编码冠状病毒四个结构蛋白:刺突糖蛋白(Spike Protein,S),是受体结合位点;包膜糖蛋白(Envelope Protein,E),帮助病毒进入宿主细胞;膜糖蛋白(Membrane glycoprotein,M),负责营养物质的跨膜运输、新生病毒的出芽释放;核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N),保护RNA的稳定性[1](图1B) 。 改自Cui J, Li F, Shi ZL (2019). Origin and evolution of pathogenic coronaviruses. Nat Rev Microbio. 17(3):181-192.  冠状病毒是如何入侵宿主细胞的呢? 以SARS-CoV为例,SARS-CoV表面的Spike蛋白由与受体结合的S1亚基和介导膜融合的S2跨膜结构域组成,S1亚基中的受体结合区(Receptor Binding Domain, RBD) 结构域与粘膜细胞表面的受体血管紧张素转换酶2(Angiotensin-Converting Enzyme 2,ACE2)结合,促使SARS-CoV进入宿主细胞(图2),随后暴露病毒RNA,翻译出病毒RNA复制酶,形成RNA复制酶-转录酶复合物。这种复合物通过复制和转录来形成RNA负链,在转录过程中,通过不连续转录产生7-9个RNA的子集,包括编码所有结构蛋白的RNA,翻译成病毒的结构蛋白。细胞质中的RNA和结构蛋白组装成新的病毒颗粒,经胞吐作用从被感染的细胞中释放出来,以感染新的细胞,由此逐渐蔓延至支气管,肺部(图3

抗2019-nCoV候选药物瑞德西韦研究热点

抗2019-nCoV候选药物瑞德西韦研究热点

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

2020年1月31号,《新英格兰医学杂志》报道了美国的第一例2019新型冠状病毒[2019-nCoV]感染肺炎病人[1],住院第7天开始使用吉利德科学[Gilead Sciences]在研药物瑞德西韦[Remdesivir],次日退烧,症状减轻!   图片来自于参考文献[1] 《新英格兰医学杂志》 Remdesivir[瑞德西韦,  C27H35N6O8P, CAS号:1809249-37-3],  图片和数据来源: https://www.drugbank.ca/drugs/DB14761 《吉利德科学关于应对2019新型冠状病毒(2019- nCoV)的声明》显示[2],在体外和动物模型中,Remdesivir(瑞德西韦)证实了对非典型性肺炎(SARS)和中东呼吸综合征(MERS)的病毒病原体均有活性,它们也属于冠状病毒,且与2019-nCoV在结构上非常相似。将Remdesivir(瑞德西韦)紧急用于**埃博拉病毒感染者的临床数据也有限。 这个瑞德西韦[Remdesivir]是何方神圣? 2016年3月《自然》(Nature)上发表一篇题为“Therapeutic efficacy of the small molecule GS-5734 against Ebola virus in rhesus monkeys”( 小分子化合物GS-5734在恒河猴体内抗埃博拉病毒的**效果)的文章[3],文章中提到小分子化合物GS-5734也就是Remdesivir(瑞德西韦)在普通猕猴体内抗埃博拉病毒的效果。 图片来自于参考文献[3]《自然》 瑞德西韦如何起作用? 文章[3]中采用SCIEX液质联用技术对药物在细胞内的代谢过程进行了研究,上图为该药物的代谢过程,其主要的活性物质为三磷酸核苷[Nucleoside Triphosphate, NTP],作用于依赖RNA的RNA合成酶[RNA replicase, RdRp],之所以瑞德西韦效果好的原因之一是因为瑞德西韦由核苷(酸)类似物[nucleos(t)ide analogues, NUC]药物单磷酸化得到,单磷酸化物绕开了体内第一步磷酸化更有效地代谢成为活性三磷酸核苷,采用LC-MS/MS检测结果表明瑞德西韦代谢成活性物质三磷酸核苷的浓度是NUC的30倍,表明瑞德西韦有更好的效果。   图片来来自于参考文献[3] 《自然》 瑞德西韦[Remdesivir]对冠状病毒效果如何? 此文

ACE2的主要功能以及在新型冠状病毒中作用

ACE2的主要功能以及在新型冠状病毒中作用

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

2019年12月以来,武汉新型冠状病毒感染引起的肺炎传播迅速,疫情紧急,基础研究也一直在推进中。中科院巴斯德所郝沛等学者及武汉病毒研究所石正丽团队研究发现新型冠状病毒的受体蛋白为血管紧张素转化酶2(ACE2)。在这项研究基础上,上海同济大学医学院研究团队连日利用高通量单细胞测序分析技术,研究了共计四万三千多个肺部细胞,进一步发现80%ACE2受体主要在II型肺泡聚集。表达ACE2的II型肺泡占其总数量的1.4%。在其他细胞类型如I型肺泡、支气管上皮细胞、成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞中零星可见。而且通过对基因功能的分析,研究者还发现,这1.4%的ACE2+ II型肺泡细胞还表达至少20多个与病毒组装复制相关的功能基因。   然而抗体研发所需的关键信息和结合表位,尚未被揭示。同济大学曹志伟教授团队与上海市公共卫生临床中心合作,研究表明,S蛋白是冠状病毒与宿主细胞表面ACE2受体结合、进而介导病毒入侵宿主细胞的关键蛋白,是抗体研发的重要靶点。因此,针对该表位区域研发抗体,空间位阻效应可能阻断病毒与ACE2受体的结合,有望起到病毒感染保护作用。同时,针对该表位区域,对2019新型冠状病毒抗体研发提供了重要的研发思路。   上述研究成果只是最近研究中的一部分,相信在医护和科学家的努力,一定可以战胜此次疫病。 综上所述,我们知道武汉新型冠状病毒的受体蛋白为血管紧张素转化酶2(ACE2),在这个阶段了解ACE2就显得至关重要了,现在就让小编给大家做一个基本介绍吧~ 1.概述 血管紧张素转换酶(ACE) 2是羧肽酶ACE的同源物,羧肽酶生成血管紧张素II,这是肾素-血管紧张素系统(RAS)的主要活性肽。在2000年克隆ACE2之后,迄今为止已经描述了三种主要的ACE2功能。 ACE2是RAS的一个强力负调节因子,可平衡ACE的多种功能。通过靶向血管紧张素II,ACE2在心血管系统和许多其他器官中显示出保护作用。    ACE2被鉴定为引起SARS冠状病毒也是此次武汉新冠状病毒的主要结合受体,在SARS中ACE2的下调在病毒

新型冠状病毒肺炎细胞因子风暴检测方案Ella Simple ELISA技术

新型冠状病毒肺炎细胞因子风暴检测方案Ella Simple ELISA技术

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

新型冠状病毒细胞因子风暴特点 新冠状病毒引起细胞因子风暴综合征(Cytokine Storm Syndrome,CSS),导致多器官功能不全(MOF),因而重症患者预后不良。须在临床**及药物临床实验中,进行细胞因子风暴快速,准确检测。 1月24日,顶级医学杂志柳叶刀在线发表曹彬教授和王建伟教授文章,系统阐述武汉新型冠状病毒感染病人临床特点,详细报道了新型冠状病毒引起的细胞因子风暴特点: 1)  初期:IL1B, IL1RA, IL7, IL8, IL9, IL10, basic FGF, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IP10, MCP1, MIP1A, MIP1B, PDGF, TNFα和VEGF,均有升高。IL5, IL12p70, IL15, Eotaxin, RANTES无改变。 2)  ICU(重症)和非-ICU病人(轻症)比较:IL2, IL7, IL10, GCSF, IP10, MCP1, MIP1A, TNFα升高。  3)  机制:IL1B, IFNγ, IP10, MCP1激活Th1, G-CSF, IP10, MCP1, MIP1A, TNFα与疾病严重程度相关。抑制免疫的Th2细胞因子IL-4, IL-10也升高。 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸与危重症医学科魏双等总结了29例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者资料,发现炎症因子IL-2R,IL-6,CRP升高,且强调L-2R和IL-6与传统指标(淋巴细胞计数和hs-CRP)相比,在预测病情严重程度方面具有一定的优势。由于IL-2R、IL-6表达水平与病情的严重程度有明显的相关性,病情越重,表达水平越高,因此这两项指标有望用来预测患者的预后。 二、  Ella Simple ELISA技术特点 Ella Simple ELISA技术将微流控、自动化检测、超敏荧光检测技术整合,彻底颠覆了 传统的ELISA技术。 传统ELISA问题: 1.     过多手工操作,需要大量检测人员 2.     步骤多,结果偏差大 3.     动态范围窄:2-3个数量级无法覆盖病人样本浓度范围 4.     无法同时进行多因子检测,多因子工作量巨大 Luminex检测技术问题: 1.     过多手工操作,需要大量检测人员 2.     步骤多,结果偏差大 3.     多因子检测时,因为交叉反应,导致灵敏度降低1-2个数量级 Ella Simple ELISA技术特

全景组织细胞定量分析系统技术在新冠肺炎相关方向研究

全景组织细胞定量分析系统技术在新冠肺炎相关方向研究

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

TissueFAXS Cytometry技术在新冠肺炎相关方向研究 2月17日,上海交通大学医学院附属瑞金医院新冠肺炎病因诊断专家组踏上征程。该专家组由国家卫健委委派,赴武汉开展新冠肺炎病理学和病因诊断研究工作。他们的主要任务是进行新冠肺炎病例的病因分析,深入研究疾病发生发展的病理生理过程,并为后续研究提供重要科学支撑。与此同时,全国首批新冠肺炎逝者遗体解剖也已在武汉金银潭医院完成。 为什么病理学信息至关重要? 目前,临床上对于新冠肺炎的了解和认知大都来源于临床症状、影像学、检验分析、病毒分析等方面研究。但要真正直观地了解器官的损伤、如何损伤、体内器官损伤如何相互关联影响等问题,都需要通过病理学信息来解决。 病理学家指出,「对于新冠肺炎而言,通过病理解剖研究疾病发生机理,有助于帮助临床纠正可能的错误诊疗方案。此外,超微结构、分子病理等方面研究也可以帮助其他领域的专家做很多事情。」 COVID-19患者的病理学特征 SARS-CoV-2感染患者的双肺、肝脏及心脏组织病理标本(Zhe Xu, Lei Shi, Yinjin Wang.etal. Pathological findings of COVID-19 associated with acuterespiratory distresssyndrome. Lancet Respir Med 2020) 根据解剖完成的肺组织切片镜下可见,COVID-19的患者存在弥漫性的肺泡损伤,伴有支气管上皮剥脱、纤毛脱落、鳞状上皮化生等病变;以及肺泡壁大量的炎性渗出,导致患者呼吸困难、血氧含量降低。死者大部分肺泡和肺间质巨噬细胞浸润、肺泡上皮细胞增生,形成双嗜性胞浆丰富的多核巨细胞。 病理学信息是重大疾病确诊的最终诊断标准,组织图像中细胞不是独立存在的,而是交织、混杂在一起,同种细胞形态上有时也会存在较大差异,要想做到组织图像中每个单细胞标记marker的准确量化、准确的单细胞识别是后续量化的基础。TissueFAXS Cytometry专利的单细胞识别技术,可以做到组织内不同大小、染色强度、形态等差异性非常大的细胞核、质、膜多组分准确识别,保证

手性世界拆分的创新之路

手性世界拆分的创新之路

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

手性世界   手性一词来源于希腊语“手”(Cheiro)。自然界中存在的手性物质是指具有一定构型或构象的物质与其镜像物质不能互相重合,就象左手和右手互为不能重合的实物和镜象关系类似。 手性是宇宙间的普遍特征,体现在生命的产生和演变过程中。首先组成地球生命体的基本结构单元,氨基酸几乎都是左旋氨基酸,而没有右旋氨基酸。也就是说,生命最基本的东西也有左右之分。为什么自然界选择左旋氨基酸而不是右旋氨基酸作为生命的基本结构单元一直是个迷。而更加复杂的蛋白质和DNA的螺旋构象都是右旋的。海螺的螺纹和缠绕植物也都是右旋的。因此生物体内存在着手性的环境,使得生物体可以识别常规化学和物理性能完全一样的手性异构体分子。作用于生物体内的手性药物及农药,其药效作用多与它们和体内靶分子间的手性匹配和手性相关。因此,手性药物的不同对映异构体,在生理过程中会显示出不同的药效。甚至会出现一种对映异构体对**有效,而另一种对映异构体表现为有害性质这种现象。 自然界中的手性表现形式(图片来自于网络)   在手性药物未被人们认识以前,二十世纪六十年代的“反应停(Thalidomide)悲剧”就是一个突出的例子。当时欧洲一些医生曾给孕妇服用没有经过拆分的消旋体药物(由一对等量对映异构体分子组成)对作为镇痛药或止咳药,很多孕妇服用后,生出了无头或缺腿的先天畸形儿。仅仅四年时间,导致世界范围内诞生了1.2万多名畸形的“海豹婴儿”。这就是被称为“反应停”的惨剧。后来经过德国波恩大学研究人员发现,反应停的R-构型的单一对映体有镇静作用,而S-构型对胚胎有严重的致畸作用。惨痛的教训使人们认识到,手性药物必须对它的两个异构体进行分别考察,都要经过严格的生物活性和毒性试验,以避免其中所含的另一种手性分子对人体的危害,慎重对待一些药物的另一对映异构体。所以手性拆分技术越来越多用于手性药物开发和生产。 自然界生物体本身具有手性环境,因此对手性药物的不同对映异构体,会显示出

数据化在实验室管理和效率提升中的应用

数据化在实验室管理和效率提升中的应用

作者:德尔塔 日期:2022-04-13

以数据驱动决策,提升实验室效率 作者:Philippe Desjardins     随着效率需求的不断提升,科研机构正在采用数据智能系统,着力提升实验室运营的可视化,助力制定更加明智的决策。   根据安捷伦一项针对制药实验室负责人的调查结果显示,实验室负责人越来越注重速度、优化和效率的提升:  随着人们对样品处理能力的要求持续激增,工作速度在制药实验室负责人关注的问题中排名第一  此外,83%的受访者认为实验室的工作流程需要优化,63%的受访者十分欢迎创新的方法以提高实验室效率   提高实验室效率主要分为两个层面:样品分析处理能力和实验室运营效率。在本文中,我们将围绕实验室运营效率和朝向全新数据智能范式的根本性转变,来探讨当前和未来的解决方案。   先进的实验室监控体系   由于科研实验室的复杂性越来越高,实验室亟需实现对所有资产的全面可视化管理。先进的实验室监控和管理系统能够满足实验室的上述需求,持续提升实验室运营的清晰度和可控性。   实验室负责人经常提出的问题包括: 实验室有哪些仪器资产? 为什么会有这些特定的仪器资产? 这些仪器资产的使用情况如何   仪器资产的利用率程序(Asset Utilization Program)可以帮助回答上述问题,这些程序可以提供有关实验室库存控制、资产规模调整以及许多其他方面的信息,帮助实验室负责人改进实验室运营。   实验室可视化面板可以清晰地显示实验室资产的使用情况。仪器热图(Instrumentation Heat Map)可以基于使用情况提供整个实验室资产的快照。对仪器使用情况的全面了解构成了数据驱动决策的基础。除此之外,这些程序还可以识别实验室工作流程的瓶颈、产能题和其他低效率问题。     此类信息的获取和使用相对来说比较简单。只需要将适当的过滤工具应用于感兴趣的区域,例如特定的实验室场所或仪器组,然后设置所需的时间范围,可视化程序即可自动确定精确的使用频率和使用模式。这一过程既可以提供细化至单个仪器的可视化数据,又可