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体积是CRISPR-Cas9的一半的新型基因编辑工具-CasΦ
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
基因编辑（gene editing），又称基因组编辑（genome editing）或基因组工程（genome engineering），是一种新兴的比较精确的能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的一种基因工程技术。基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行定点“编辑”，实现对特定DNA片段的修饰。 目前广泛使用的基因编辑技术是CRISPR-Cas9，它是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。而CRISPR-Cas9基因编辑技术，则是对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，这项技术也是用于基因编辑中前沿的方法。该技术在一系列基因**的应用领域都展现出极大的应用前景，但过大的蛋白分子成为CRISPR未来应用方式中最重要的瓶颈之一。 最近，来自美国加利福尼亚大学伯克利分校创新基因组学研究所的研究人员发现了一种新型基因编辑工具——CasΦ，它是一种功能最小的CRISPR-Cas系统，由1〜70 KD的CasΦ蛋白和一个CRISPR阵列组成，且仅在巨型噬菌体的基因组中编码，其体积是CRISPR-Cas 9的一半，这项研究成果于7月16日发表在《Science》杂志上。 DOI: 10.1126/science.abb1400 本研究中，CasΦ（Cas12j）是巨型噬菌体分枝中编码的Cas蛋白家族，巨型噬菌体用它来诱使细菌抵抗自身而不是自身的病毒。它使用单个活性位点进行CRISPR RNA（crRNA）加工和crRNA指导的DNA切割，以靶向外来核酸。从进化关系而言，CasΦ或许更为“古老”，其与V型CRISPR-Cas蛋白的同源性不足7%，但与V型CRISPR-Cas蛋白的源头TnpB核酸酶超家族的部分蛋白有更高同源性。研究发现，CasΦ借助于单一向导RNA的引导，并依赖于PAM位点的指引以实现目标DNA的识别（其中CasΦ-2所识别的PAM序列为5’-TBN-3’（B=G,T,C））。 研究人员在论文中还研究了来自宏基因组的三个不同的CasΦ直系同源物：CasΦ-1，CasΦ-2和CasΦ-3。为了检验CasΦ在细菌细胞中识别和靶向DNA 的能力，他们测试了CasΦ 是否可以保护大肠杆菌免于质粒转化。他们首先试图确认核酸酶是否像其他C
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胞外RNA实现跨物种转移-exRNA
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
人类仍然被笼罩在新冠肺炎的阴影之下，没有人能够告诉我们将口罩脱下的明确日子，难以呼吸的困境，让我们对生命和非生命形式的物质进行探索的视野逐渐扩大，新冠疫苗的研发在病毒变异的追赶下面临着极大的挑战，而旧药使用和新药研发也并不轻松，中草药（其中包含有效的miRNA成分）的重要性在此次疫情爆发的过程中逐渐被广泛接受，中西药结合使用来应对突发病毒的感染或许是一种更好的方式。此时胞外RNA（extracellular RNA, exRNA）应对疾病的研究被重新提上了日程。在此，我们从胞外miRNA跨界转移的角度着手讲述一下exRNA是如何实现跨物种“裸奔”的。 01 胞外miRNA是实现细胞间交流的新方式 我们知道，RNA很长一段时间被认为仅存在于细胞内，后来发现，其实RNA在胞外囊泡（extracellular vesicles, EV）的保护下遍布于全身，因此exRNA的出现并非偶然。南京大学生科院院长张辰宇教授团队一直致力于该方向的探究，其对胞外miRNA如何从细胞中释放、又是如何被检测、怎样在疾病**中发挥功能等一系列研究结果证明了miRNA在机体中的存在具有重要的临床价值。 细胞间交流方式以及miRNA介导的基因调控网络 （Xi Chen et al. 2011） miRNA是一类由19至24个核苷酸组成的内源性非编码RNA，调节真核生物中蛋白质编码基因的转录后沉默，而机体无细胞循环中的miRNA在不同疾病中的存在有着很大的差异。目前认为胞外miRNA来源于以下三种途径： ①由组织损伤、慢性炎症、细胞凋亡/坏死或细胞半衰期短而从破碎的细胞中被动分泌，如血小板； ②通过微囊泡的主动分泌，包括外泌体和脱落的囊泡，在正常和病理条件下几乎所有的细胞都会释放膜包裹的细胞碎片； ③与RNA结合蛋白结合，从供体细胞释放。 细胞与邻近细胞之间的交流和感知局部微环境的能力构成了多细胞生物机体协调细胞活动的基础，细胞连接、黏附和可溶性信使的作用构成了细胞间交流的几种主要方式。随后的研究表明，胞间miRNA的水平转移也是实现细胞间交流的
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尿液Titin N片段-无创性肌肉损伤潜在生物标记物
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
尿液Titin N片段——无创性肌肉损伤潜在生物标记物 Titin（肌联蛋白）是一种蛋白质，由34,350个氨基酸组成，在横纹肌中特异性表达。人肌联蛋白的分子量为3,816 kDa，是生物体内现有蛋白中最大的蛋白，是肌小节结构蛋白之一，是肌原纤维蛋白的最小单位，具有作为肌原蛋白的功能。弹性蛋白可通过收缩来恢复缩短的肌节的长度。 众所周知，如果肌肉受损，则肌蛋白会被钙蛋白酶和基质金属蛋白酶等蛋白水解酶裂解。Titin N-Fragment，这些片段之一，是26kDa N-terminus片段，被排泄到尿液中，因此，我们认为Titin片段是可靠且无创性肌肉损伤生物标记物的有希望的候选者。在肌肉营养不良，运动医学，心脏病，NAFLD，肌肉减少症和体弱领域进行了研究，被认为是反映肌肉状态的分子。 NAFLD（非酒精性脂肪肝）与非NAFLD，肥胖症，糖尿病患者相比，NAFLD患者的尿中Titin N片段水平升高。据报道，肌肉减少是NAFLD患者发展NAFLD和肝纤维化的风险，而肌肉增加与NAFLD病理状况的改善有关。 尿中TiN-N片段的水平是： 1）随着年龄的增长而增加，但男女之间没有区别。 2）与骨骼肌质量和膝盖伸展力量呈负相关。 3）与肌肉回声强度，肌外脂质和肝纤维化评分（NAFLD纤维化评分，FIB-4指数）呈正相关。 4）与NAFLD患者的肝病理状况密切相关，因为多变量分析显示，骨骼肌质量指数，腿部骨骼肌质量，肝硬度，NAFLD纤维化评分受尿中Titin-N片段水平的影响。 ICU-AW（获得性肌无力）是一种由肌力，肌肉质量下降和/或神经病组成的疾病，见于ICU的重症患者。由于其对出院后生活质量和长期预后的影响，这种健康疾病引起了紧急和重症监护医学的广泛关注。但是，到目前为止，还没有有效的ICU-AW生物标志物。鉴于Titin N片段最近在心脏病，肝病和运动医学中得到报道，因为它反映了尿液中的肌肉损伤。 该报告显示，日立综合医院重症监护病房（ICU）的重症患者尿Titin N片段水平较高，并且在观察期间该水平持续较高，所有这些患者的CT均显示肌肉
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阿尔茨海默病学习记忆相关行为学疑问的解答汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
Q1: 行为学表现与预期不同时的处理方法？ A: 我不知道您说的预期是指阳性对照和阴性对照之间没有检测出差异，还是处理组差异，我先假设您阳性对照和阴性对照是有差异的，造成检测组没有差异的可能无非有5种：①本来处理组就没有明显作用（这个需要文献或者是把实验做到极致才能确定）；②N不够，没有统计差异（加N）；③实验难度过高，造成地板效应（降低难度，如缩短训练和检测之间的时间等）；④实验难度过低，造成地板效应（提高实验难度）；⑤组内变异太大（小鼠年龄，性别等的统一）。 Q2: 水迷宫实验时要提前对动物进行初筛，排除异常行为或视力的动物吗？ A: 年轻的动物一般可以不用初筛，而年老（12个月以上）则需要对动物的视力和异常行为进行检测。不过一方面平台可见期的实验除了对动物进行运动能力和视力的检测以外，还有帮助小鼠确定水池中有逃生平台，帮助其下水后尽早确立行动目标，所以个人认为**提前做。 Q3: 造模中动物的死亡问题？ A: 这个问题我理解为行为实验时动物的死亡。这主要涉及动物的年龄和转入/编辑基因的状态，水迷宫实验要特别注意水温以及游泳完成后小鼠的保温，如果是电刺激相关的实验，需要降低电刺激持续的时间。基因编辑动物需要注意文献中报道的小鼠生存曲线。 Q4: 常用模型都有哪些，可以做什么行为学实验？评价指标是什么？ A: AD四大模型：Tg2576，APPPS1△E9，5×FAD，3×Tg。 主流行为实验包括：水迷宫，新物体识别，Y/T迷宫，巴恩斯迷宫，放射迷宫，恐惧记忆箱。AD还会做一些情绪相关实验，如矿场，高架迷宫等。 Q5: 在行为学实验中通常使用什么行为实验，各有什么优缺点，和实验的注意事项？ A: 1. 水迷宫 优点：驱动力强，可获得数据多，不用每次换小鼠清洗设备，认可度高；缺点：小鼠应激性较强，设备搭建和数据分析要求较高，年老小鼠容易中途死亡。 2. 新物体识别 优点：设备搭建相对简单，可获得数据较多，小鼠应激性小；缺点：物体选择需要谨慎，驱
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当你使用自动纯化仪时，你需要进行哪些操作？
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
传统情况： 1、购买配套的深孔板、磁棒套、所需试剂：选型号、选试剂、选数量、选价格…… 2、每块深孔板加入试剂：板1加试剂、板2加试剂、板3加试剂…… 3、加样，上机，出结果。 或者 购买NEST核酸提取试剂盒产品，撕去封膜。 2、加样，上机，出结果。 就是这么省时、省事、方便！ NEST MagPureTM核酸提取试剂盒专门为96孔自动化平台而设计，为磁珠法核酸提取试剂，采用独特磁珠和缓冲液系统，此法能快速分离纯化DNA/RNA的目的，并可最大限度的去除蛋白质等杂质。适用于从样本中提取细菌、病毒、寄生虫的基因组核酸DNA和RNA。提取所得的高质量核酸可用于PCR、RT-PCR、基因测序等系列实验。 试剂盒组成 点击下方视频查看 视频链接: https://v.qq.com/x/page/i31240pfo6e.html NEST核酸提取试剂盒之所以这么方便，有以下几点： 所有试剂均已预分装，撕开封膜即可使用。 所使用的为高粘度封膜，无漏液担忧。 配有可常温保存的蛋白酶K，整套试剂均可常温保存和运输，降低环境条件要求。 品名 数量 体积 预灌装溶液成分 磁棒套 1 个 / / 样品板 1 块 400μL×96 孔 胍盐、表面活性剂、EDTA和缓冲液等 磁珠板 1 块 200μL×96 孔 磁珠、缓冲液等 洗涤1板 1 块 600μL×96 孔 胍盐、EDTA等 洗涤2板 2 块 600μL×96 孔 75% 酒精 洗脱板 1 块 100μL×96 孔 TE缓冲液 蛋白酶 K 1 mL x 2 支 / 蛋白酶 K 那么您可能会担忧，提取质量如何？不必担心，我们同样给您保证！ 1. 不同类型样本核酸提取验证 样本编号 样本类型 样本量 A260/280 A260/230 核酸得量(μg) 1 鼻咽抽吸物 200 µl 1.84 1.95 4.2 2 人血清 200 µl 1.84 2.03 1.8 3 鼻拭子 1 swab 1.87 2.19 2.3
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呼吸代谢测量技术与农作物病虫害科学防治
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
人类活动的全球化和全球气候的变化使得病虫害的爆发及传播愈发频繁和快速。作物病虫害肆虐的地域不断扩散，造成一些发展中国家的农作物和粮食安全面临巨大风险。近年来国外的一些入侵害虫如草地贪夜蛾等引发的虫口夺粮战引起国务院高度重视。害虫防治过程中无论是采用生态控制、化学灭杀还是基因编辑技术控制其种群数量，都需要实时监测害虫生理过程（呼吸代谢），进而开发出先进的害虫管理方法。 昆虫呼吸代谢测量技术主要由三气（氧气、二氧化碳、水汽）分析仪、八通道气路转换器、数据采集器、呼吸室、活动检测器、标准或高级版软件等组成，可以连接8或16个或更多呼吸室进行昆虫的活动与呼吸代谢测量实验。下面将介绍一些典型应用研究案例： 案例一玉米象 Guedes R N C , Oliveira E E , Guedes N M P , et al. Cost and mitigation of insecticide resistance in the maize weevil, Sitophilus zeamais[J]. Physiological Entomology, 2006, 31(1):30-38. 杀虫剂耐药性研究不仅在害虫管理方案中具有实际重要性，而且作为新适应的表型及其相关的生理（和遗传）变化的进化模型也很重要。氧气消耗代表了昆虫生理过程能量需求，可通过昆虫的呼吸速率来证明昆虫种群对不同环境条件的适应性。昆虫呼吸速率的变化有助于检测与无杀虫剂环境中的杀虫剂耐药性相关的可能适应成本，以及在接触有毒化合物时，生物体脂肪体形态能量储备的可用性和动员力。 本研究结果表明玉米象种群杀虫剂抗性与脂肪体细胞形态及呼吸频率之间存在相关性，导致更高的储存能量随时动员起来抵抗杀虫剂。此外，抗杀虫剂的高能源需求可能会带来额外的能源成本，从而阻止缺乏一个杀虫剂的抗性表型固化，除非其储存能量的能力动员他们的力量足以满足潜在的相互冲突的生理过程需求（如抗药性和发育）。 另外的研究见：Eugênio E.Oliveira,R N C.Guedes, Marcos R.Tótola, PauloDe MarcoJr. Competition between insecticide-susceptible and -resis
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荧光素酶报告基因用品的选择与应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
一 、什么是荧光素酶报告基因？ 报告基因（Reporter Gene）：通常指可编码某种蛋白或酶，其表达产物容易被检测，并且能与内源性背景蛋白相区别的基因，通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控。 而理想的报告基因必须具备以下几个条件： 1.编码的表达产物必须与细胞内源性的所有基因相区别，编码产物的活性不受宿主细胞的干预。 2.有快速简便、经济、灵敏的检测方法，且重现性好、结果可靠，测量数据应该有较宽的线性范围。 3.细胞内的其他基因产物不会干扰报告基因产物的检测，同时报告基因的表达也不改变宿主细胞的生理功能。 常用的报告基因有： 氯霉素乙酰转移酶 （CAT），氯霉素乙酰转移酶 （CAT），人生长激素（hGH），分泌型碱性磷酸酶（SEAP），荧光素酶（Luciferase），荧光蛋白。今天我们就来说说荧光素酶报告基因。 荧光素酶（Luciferase）是自然界中能发出荧光的酶的统称。他们可以通过酶促反应催化底物产生自发荧光。荧光素酶因其便于检测和灵敏度高等特性常做为报告基因被广泛用于生化检测实验中。 其中应用最广泛的是萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase ）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase），两者可分别催化各自的底物发出不同颜色的荧光，且两种光吸收波长不同，检测互不干扰，因此可在同一个化学反应体系中同时使用，由此双荧光素酶报告基因系统受到广泛青睐。 了解了什么是报告基因和荧光素酶后，我们来看看什么是荧光素酶报告基因。 荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。这种报告系统，是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。分单荧光素酶报告基因和双荧光素酶报告基因。 双荧光素酶报告基团主要应用方向有： 1.
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期刊对Western Blot数据要求的四大要点
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
2018年，PubMed 中共有194,262 篇蛋白相关的论文，其中有16,196（8.3%）篇用到了 WB。WB 的使用比例在过去30年中稳定在8%到9%左右，而更为现代和准确的蛋白质谱技术（MS），在过去十年中应用比例则稳定在4%，仅仅是WB的一半。四十年后的今天，WB依旧是应用率最高的蛋白质分析技术。但是重现性和稳定性的问题，也使Western Blot技术处在风口浪尖上。因此2014年，美国国立卫生研究院提倡提高科研重现性，呼吁研究界、科学出版商、大学、工业界和其他领域推动这一变化。率先响应的期刊有Science，Cell，Nature和JBC。那让我们来看看期刊都有哪些具体要求： 一、不建议跑平行胶，因为平行胶和剥离膜孵育体系，操作条件的不一致，影响定量的准确性，因此**内参和目的蛋白要在同一张印迹膜上。 二、选择宽动态范围的方法，确认信号强度与所上样量之间的线性关系，例如用胶片做化学发光方法的动态范围就很窄，不建议使用。 三、强烈推荐使用总蛋白进行归一化，因为看家蛋白容易受处理条件影响而发生变化，影响定量的结果，使用总蛋白定量更真实地反映目标蛋白表达量的变化。 四、提交原始数据，例如：JBC，PLOS和CELL等杂志都要求要提供原始数据。 Azure Sapphire多光谱激光成像系统如何满足期刊要求 ☑ Sapphire是多荧光检测系统，可多达4个激光光源，同时进行4通道荧光检测，获得更快的工作流程和更可靠的定量数据。 ☑ Sapphire配合AzureRed总蛋白荧光染色剂可以做总蛋白归一化和定量三个靶标蛋白，生成可以信赖的定量Western Blotting数据。 ☑ Sapphire配有独特的三种检测器设计，最大限度地提高仪器的检测动态范围，保证结果的准确性。☑ Sapphire提供原始数据16bit的tiff图给到期刊，这里的tiff原始数据是指未经裁剪，像素修改，对比度调整等任何操作的图，保证结果的真实性和可靠性。
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感官评价中的干扰因素及解决方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
随着市场经济的发展，感官评价作为一种认知、测量和检测手段，在食品研发的不同活动中发挥着重要的作用。感官评价实际上是以人作为测量仪器进行品尝分析。因为人和仪器相比有个人感情，更容易受到环境的影响，为了保证科学和准确，我们需要避免感官分析中的干扰因素，那么常见的干扰因素有哪些呢？ 1.期望错误：样品附带的信息导致人产生先入为主的印象，干扰测试准确度。 2.刺激错误：样品的其他特征误导品评员。 3.宽容错误：根据研究者的反应或态度，导致品评产生误差。 4.暗示效应：团队成员间互相交流导致的误判。 5.位置误差：产品品尝顺序对品评员造成误导。 6.对照效应和集中错误：样品间浓度或口味的影响，夸大或掩饰样品间的差异。 7.近似错误：相似特征间的关联比其他特征间的关联度可能高一些。常见于同品类品尝，如近似品种的大米品尝。 8.中心化错误：所有打分都聚集在中间标度，导致结果没差异。 那么常见的干扰因素如何避免呢？上海瑞玢感官分析整体解决方案帮您梳理并解决这一难题。 1. 期望错误解决方法：样品制备时，感官分析软件自动分配三位随机数字编码，一一对应每个样品，样品只有编号标识，不让品评人员见到产品身份信息。 2.刺激错误解决方法：样品等量分装，当需要时，可用三色光源对颜色进行屏蔽掩盖等。 3.宽容错误解决方法：上海瑞玢可建标准感官实验室，品评员拥有独立空间，不干扰他们的决定。 4.暗示效应解决方法：感官品评小间具有格档，实现评测员独立品评，禁止相互交流。 5.位置误差解决方法：上海瑞玢专业感官分析软件在统计学上使样品总量中某种样品出现的位置均一，即科学实验设计。 6.对照效应和集中错误解决方法：感官小件配置有专用水龙头，漱口杯，每组样品品尝间清口（用水/饼干/等），控制品尝间隔。 7.近似错误解决方法：可对测评人员进行挑选，筛选更敏感的人员完成此项任务。 8.中心化错误解决方法：长期规范训练品评员，尤其给予特定强度和打分的训练。
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脂质体制备中使用最多的磷脂辅料-阳离子脂质材料DOTAP
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
说起DOTAP，这是一款带正电荷的阳离子脂质材料，阳离子脂质体作为如今最火热的研究方向之一，如何选择制备材料是我们需要了解的首要部分。本期AVT小编要介绍的即是在阳离子脂质体制备中使用最多的DOTAP，制备脂质体不可或缺。 根据包载的API不同，可将阳离子脂质体分为两大类，一类是包载以mRNA、siRNA为代表的核酸类药物的脂质体，是基因**中研究最多、应用最广的一种非病毒载体；另一类是包载如紫杉醇、喜树碱等小分子抗癌药的脂质体制剂，具有肿瘤新生血管靶向性，对癌症也有双重机制作用下的好疗效。DOTAP是在阳离子脂质体制备中使用最多的药用辅料。 常见的DOTAP（Cl），化学名为(1,2-二油氧基丙基)三甲基氯化铵，分子式C42H80NO4Cl，分子量698.6，是一种季铵盐，是带正电荷的两亲性类脂化合物。因为生产工艺的不同，有些性状呈淡黄色蜡状，而工艺好的公司生产的DOTAP则是白色粉末，更便于称量等实际操作。它是两亲分子，结构主要由极性头部(亲水基团)、连接基团、疏水尾部三部分组成。极性头部通常由叔胺或季铵盐构成，后来又研究出咪唑头部、氨基酸头部等。其极性头部情况对核酸分子的包载效率以及细胞毒性均有重要的影响。因含双键和正电荷，DOTAP光敏易氧化易吸湿，氧化后会发黄、变黏，因此实验时操作需快。 DOTAP最早应用的商业化产品是转染试剂。DOTAP的极性头部通过静电作用与带有负电荷的DNA分子稳定结合，两者混合后可自发形成稳定的复合物。这种转染方法非常温和，可避免脂质转染或者其它方式转染带来的细胞毒性作用，并且转染效率高于其它的脂质试剂。 对于核酸药物脂质体而言，处方中DOTAP用量越大载药量及转染效率自然越高，但随之而来细胞毒性也越大，制剂安全性受影响，因此两者需平衡。学术部的同事曾做过小鼠实验研究即毒性：当zeta电位高于+50mV时即有可能出现注射立即死亡现象。对于包载化疗药物而言，载药并不依赖DOTAP，处方中可添加其它中性磷脂如DSPC、DPPC等，使用剂量方面受限较小。
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不考虑可用性的设计就是糟糕的设计
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
人因和可用性工程应该在医疗器械开发早期纳入医疗器械的设计过程。 制造商应当确保医疗设备能够被医疗工作者和患者安全、有效地使用。但在开发新产品时,有时会丢失这个关注点，或者没有足够重视。Loring Human Factors Inc.的创始人和负责人Beth Loring将在即将举行的波士顿生物医药会议(BIOMEDevice Boston conference)上发表演讲，讨论为什么应该在设计过程的早期将人因和可用性工程(HF/UE)结合起来。与此同时,她还将介绍成功的可用性工程流程是什么样子的,为什么监管部门要审查,并讨论FDA的审查员希望在流程结束时看到什么。 Loring在接受MD+DI的采访时说:"可用性工程流程的全部意义在于保护医护人员和患者不会因为不良的设备设计而受伤或死亡。" 她说，她所看到企业犯的最大错误是在开发过程中没有遵循可用性工程HF/UE流程，而在最后因为注册审批的需要，仓促地进行人因确认研究。Loring还提到:"这样做的结果总是很糟糕,因为如果没有将人因工程融入到设计中,也没有一直邀请用户进行测试,那么就不可能在Chu次尝试人因确认研究时就通过。"这种情况发生时,制造商将不得不回去进行成本更高昂的设计更改,而这将最终推迟产品的发布。 Loring认为，公司可能会犯的另一个错误是把人因当作一种"随便做做"的流程。也许他们做了一些用户研究,或者他们向一些用户展示了一个原型,但从来没有正式记录下来,他们也从来没有把它和设计需求联系起来→基本上是走捷径。根据Loring本人的经验,FDA会看到这一点,他们会知道这是否是"随便做做"的,这可能会导致他们更仔细地审查你提交的内容。 当被问及她希望参会者从她的演讲中得到什么收获时,Loring说:"对于那些不熟悉的人，我希望他们在离开时能够理解为什么它(可用性工程)如此重要,以及为什么它具有良好的商业意义。"除了安全方面,特别是在成熟市场,如果你的设备好用,并且人们喜欢使用,那么它将比难用的设备更成功。 对于已经遵循良好的人因流程的公司,Loring希望他们能够
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AD认知记忆实验中的常用方法-水迷宫
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
水迷宫（Water Maze）是目前阿尔茨海默病（Alzheimer Disease, AD）研究中使用得最多的行为学实验方法，主要用于检测啮齿类动物的空间记忆能力。该方法是由理查德-莫里斯（Richard Morris）于1981年发明，并在三年后对其实验流程进行了进一步的完善，为了表示对发明者的纪念和尊重，人们把这种实验叫做“莫里斯水迷宫（Morris Water Maze，WMW）”。 从80年代初被发明之后，水迷宫逐渐成为AD认知记忆实验中的“主力”。当我们同时以阿尔茨海默症和行为学实验名称进行搜索时，水迷宫的检索所得项目要远多于其他任何行为学实验（图1A）。而且水迷宫对AD行为学研究的统治地位是与日俱增的，在1995年之前，水迷宫实验占列入统计的7种行为学文献总数的44%（图1B），但是到了2020年，这一比例已经增长到了54%（图1C）。由此可见AD研究中水迷宫所处的“统治地位”。 图1. 水迷宫是AD研究中最重要的行为学实验 但是和许多动物行为学实验一样，不同的论文中该实验无论是在器材规格，实验流程以及数据统计方面都有很大的差异，往往令人疑惑不解，搞不清楚水迷宫实验到底有没有统一的标准，哪些参数是可以更改的，哪些参数是需要慎重考虑的。为了解答这些疑惑，我们计划从设备、主要流程和统计分析三个篇章来对水迷宫进行解析，希望能让大家对水迷宫实验有一个大致的了解，对影响水迷宫实验的各种因素做到心中有数。需要注意的是，为了叙述方便，这里我们所采用的流程和实验器材规格都是针对小鼠的，虽然大鼠实验中参数会有一定的变化，但是原理是一样的。今天我们从设备即器材的选择开始讲。 水池（Tank） 水迷宫实验的主体是一个圆形的水池，水池的内径一般为120-130cm之间。虽然也有研究采用的是直径100cm或者180cm规格的水池，但水池过大会造成小鼠需要探索的面积增大，学习时间过长，并且小鼠的娇小体型不利于热量的保存，在水中焦躁地游泳进一步加剧了热量的消耗，过长的游泳时间不利于小鼠身心健康，甚至危及生
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抗体多样性的缘由与衍生-基因重组与体细胞高突变
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
这是一个缤纷多彩的世界，众生各得其时，恣意生长；又是一个危机四伏的世界，万物相生相克，终归尘土。世界因多变而精彩，又因未知而危险。各种各样的病毒、细菌、真菌和寄生虫让人防不胜防，是各类呼吸系统、循环系统、消化系统或皮肤黏膜疾病的元凶之一。导致中世纪欧洲人口骤减的鼠疫阴魂不散，疟疾、霍乱弧菌、流感病毒仍然施虐人间，而今2019-NCOV的狰狞面孔又展现在我们面前，历史上每一次疾病大流行都将乐土变炼狱。在历史长河的慢慢旅途中我们注定会遇到数不尽看不清摸不着的各种“敌人”的侵袭，但幸运的是我们的祖先在进化过程中给我们早已准备好了一款应对各种异源入侵的强有力武器，就是抗体。具科学家推算，保证应对各类抗原的最低多样性是107，然而抗体的多样性已经远远大于这个数值，那么是什么让抗体具有如此多的多样性，下面让我们一一道来。 抗体多样性产生原因[1] 抗体属于后天免疫系统的一部分，最早的脊椎动物鱼类就已经进化出抗体以抵御病原体的入侵。抗体本质是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构。天然的抗体由2条相同的重链和2条相同的轻链构成异源4聚体，分子量150KD左右。抗体CH1、CH2、CH3区的序列具有高度的保守性，轻重链的可变区V区具有高度的变异性。轻重链V区中的氨基酸序列的变异性在不同的位点又有差异，根据每个位点氨基酸变异的频率可将抗体轻重链V区划分为框架区（FR1 、FR2 、FR3）和互补决定区（CDR1、CDR2、CDR3），CDRs是决定抗体与抗原特异性识别的关键区域。抗体V区序列的变异性决定了抗体的多样性，而这种多样性主要来源于抗体基因的V（D）J重组、重组过程中发生的非同源末端修复，以及在抗体亲和力成熟过程中的体细胞高突变。 抗体V（D）J基因重组 抗体的两条链分别由不同的基因编码。人类重链的基因位于14号染色体，由38 至 46 个功能性 VH片段、23个功能性 D 片段、6个功能性 JH 基因片段和9个CH片段构成。人类抗体的轻链有κ和λ两个亚型，分属于
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连续断层3D重构中的超薄切片制备
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
当需要以纳米级分辨率观察样品超微结构时，科学家通常借助电子显微镜（观察表面结构的扫描电镜 SEM 和观察内部结构的透射电镜 TEM）——它们是当前科研界可使用的最大显微成像工具。 电镜成像要求对样品进行通常 20-150 nm的超薄切片，使用超薄切片机切割的切片厚度薄、表面平整、光滑且无人为干扰因素，因此可以满足电镜成像对制备样品的严苛要求。如果大量超薄切片具有样品结构的前后连续性，SEM 成像采集的图像就可以进行样品内部结构的 3D 重建，形成可用于分析的完整超微、精细立体图像，即连续断层成像技术（Array Tomography, AT）。 今天，小编简要介绍一下 AT 成功的关键环节：连续超薄切片样品制备。 超薄切片之重要性 AT 常用于细胞、蛋白质等生物 / 生物大分子结构的纳米分辨率、3D 结构观察和分析，主要步骤为包埋样品连续（超薄）切片、TEM / SEM 或光学显微镜对其进行成像、对获得的一系列图像进行重建分析。AT 可以获得的有效信息包括超微结构的定量、体积分析和细胞 / 蛋白的形态学数据等，相较于共聚焦显微镜获得的图像，具有更高的水平和空间分辨率（可达 0.2 nm）。 超薄切片主要用于 TEM 成像前的样品制备，以纳米分辨率观察样品内部结构信息。无污染且获取快速的超薄切片的主要优势在于： 整个切片均可用于电镜成像，适合大尺寸样品分析； 单张切片电子透射均一性好，保证结果可靠性； 制备速度快，短时间即可获得大量切片； 适用样品范围广，生物样本和工业材料均适用。 超薄切片的基本原理 对于 TEM 或者 3D 结构重建，样品高质量连续切片是前提。因此，一台如 Leica EM UC7 或者 EM ARTOS 3D（20-50 nm）（见图 1）一样稳定可靠的超薄切片机是开展实验的必备工具。 ▲图 1. Leica 连续超薄切片机新品 —— EM ARTOS 3D 样品被安装在可上下前后精准移动的电动机械臂上，机械臂垂直上下移动、遇到固定的玻璃刀或钻石刀时，第一条样品带被切下（图 2），然后刀台自动向左移动，按照设
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Buccutite™-全新一代的蛋白交联技术的原理与运用
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
Buccutite™交联技术提供了一种将蛋白质与另一种大分子（例如抗体或酶）偶联的有效方法。与常用的SMCC交联技术相比，Buccutite™交联技术更结实，产率更高，它利用两个独特的排他性的接头：Buccutite™MTA 和Buccutite™ FOL，每个基团末端都具有一个与胺反应的基团，该基团专门与所需标记蛋白质上的伯胺反应。另一端包含我们专有的Buccutite™反应性基团，该基团仅结合其各自的Buccutite™MTA / FOL交联剂对应物具有高度亲和力。当两种基团同时存在时，两种结合物会在Buccutite™反应位点共价连接在一起，形成蛋白质-蛋白质结合物。 我们的Buccutite™交联技术提供了最方便，最有效的交联方法，以高共轭产率连接两种生物分子。我们的方法使用一对交联剂：Buccutite™MTA和Buccutite™FOL。MTA被添加到一个分子上，而FOL被添加到另一分子。通过混合Molecule-1-Buccutite™MTA和Molecule-2-Buccutite™FOL引发交联反应。该交联反应在极其温和和中性的条件下发生，不需要催化剂，这些独立产品可以适应研究人员的特定材料和要求。 目前，我们提供独立的Buccutite™MTA和Buccutite™FOL试剂，以扩展Buccutite™交联技术的应用，MTA被添加到一个分子，而FOL被添加到另一分子，然后通过混和1分子的Buccutite™MTA和1分子的Buccutite™FOL引发交联反应，共轭试剂类型包括NHS酯，scavengers和Dye 650。 1. 单独的Buccutite™FOL和MTA产品： 货号 产品名称 规格 5350 Buccutite™FOL，NHS酯 2 umoles 5355 Buccutite™MTA，NHS酯 2 umoles 5360 Buccutite™FOL scavengers 2 umoles 5365 Buccutite™MTA scavengers 2 umoles 5370 Buccutite™MTA-Dye 650 2 umoles 5372 Buccutite™FOL-Dye 650 2 umoles 2. HRP抗体偶联试剂盒 Buccutite™过氧化物酶（HRP）标
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