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恒温核酸扩增反应引物探针设计问题合集
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术（由英国公司开发）。以此为基础的核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。 酶促重组等温扩增（Enzymatic Recombinase Amplification，ERA），由苏州先达基因科技有限公司独立自主开发，拥有全球自主知识产权，在低温条件下(25-42℃)可对痕量的靶DNA片段进行特异性的扩增，在最适温度35-40℃时，扩增反应时间仅需15分钟，以此达到核酸快速检测的目的。该技术同样对硬件设备的要求很低，现已应用于研究诊断、公共卫生、食品安全、水产畜牧等各个领域。 RPA和ERA的扩增引物可以说是整个反应的关键所在，那么怎样才能设计好其引物呢？ 1、RPA引物需要多长？ RPA引物一般在32至35个核苷酸之间。某些情况可能用到少于30个核苷酸的引物，但扩增过程会显著减缓。 ERA 引物需要多长？ 为了充分利用 ERA 的检测速度和灵敏度，我们建议客户使用 29-32 个核苷酸长 度的引物。通常情况下，PCR 引物可用于 ERA 反应体系，但这类引物的检测速 度和灵敏度可能不及较长的引物。 2、RPA引物应当相距多远？ 这取决于你的具体应用。标准试剂盒适用于不超过500bp的扩增产物。RPA扩增产物的大小是没有下限的，不过RPA引物一般需要扩增子超过80bp。扩增产物在100-200bp之间，可以实现最快的RPA扩增。 ERA 引物应当相距多远？ 一般而言，我们建议两个 ERA 引物产生的扩增片段不应超过 300bp。ERA扩增片段的大小或许没有下限，不过根据 ERA 引物最小长度，扩增片段的大小最小 约 80bp。为了获得最快的检测速度，最终的扩增片段长度应为 100-200bp。 3、RPA 我需要筛选多少引物？ 这取决于你对检测灵敏度的要求。举例来说，如果目标分子上千，那么绝大多数引物都够用了。对灵敏度要求很高的话，**是进行系统性的
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血球计数板的误差来源
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
血球计数板一直是实验室细胞计数的金标准。早在18世纪的法国，医生就开始用血球计数板分析病人的血液样本。经过100多年的不断改进，如今的血球计数板相比其原型在准确性和便捷程度上都有了大幅提高，成为了现代细胞学研究的重要工具之一（对该历史感兴趣的小伙伴，请参考《血球计数板的前世今生》）。然而，因血球计数板固有的设计和使用方法带来的计数误差依然存在。相信不少小伙伴都有为忽高忽低的计数结果抓狂和被巨大的CV值所震惊的经历…… 今天我们就来谈谈血球计数板的误差来源以及如何避免或降低这些误差。 血球计数板的计数误差主要来自于三个方面： ● 随机误差 ● 人为误差 ● 系统误差 随机误差 随机误差又叫偶然误差，是即使在完全消除系统误差这种理想情况下，多次重复测量同一对象，仍会由于各种偶然的、无法预测的不确定因素干扰而产生的测量误差。简言之，这类误差是一种自然规律，是无法避免的。 1881年，统计学家Lyon和Thoma推算出血球计数板的随机误差公式为： 其中n为所计算的细胞数 1907年，以发明了Student’s t-test而闻名的Willian Seal在一篇文献中推导出了同样的公式 [1, 2]。下表是用标准Neubauer型血球计数板测量不同浓度的细胞样本时4个大方格的细胞数和理论随机误差： 可见细胞浓度越高，检测细胞数越多（即样本量越大），随机误差越低。因此，为了降低随机误差，我们可以： - 提高细胞浓度（浓缩样本） - 增加检测细胞数量（多数几个大方格） - 增加重复检测的次数 增加细胞浓度和计数总数可以降低随机误差，但是浓缩步骤会引入新的误差，操作者也需要花更多的时间用于计数。流式细胞仪或基于成像原理的自动细胞计数仪可在短时间内分析大量细胞（比如Cellaca MX一次计数的视野要远远大于血球计数板，分析最快只需2秒），提高效率的同时降低了随机误差。另外，仪器可以测量的浓度范围比血球计数板更广（比如Cellometer细胞计数仪的检测范围为1x1
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流式细胞术方案设计解析（上）
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
我们时常会遇到，明明染色Marker都来自一篇文献，但是最后实验结果却变成“买家秀与卖家秀”。 产生这种现象的原因是什么？以及我们为什么要如何优化我们的染色方案呢？我们先看具体的例子。 方案1与方案2，所选择的marker都完全一致，所选用的荧光素种类一样，但是搭配不一样。那么我们看看同一个样本，最后各个细胞亚群的结果一样吗？ 方案1与方案2，CD4+CD25+ 的百分比接近（A与C比较），可是CD8+CD69+的百分比却相差很多（C与D比较）。 造成这种原因其实就是我们平时说到到spreading现象。 Nguyen, Richard, et al. "Quantifying spillover spreading for comparing instrument performance and aiding in multicolor panel design." Cytometry Part A 83.3 (2013): 306-315. 如果要优化流式染色方案中，由spreading现象产生的分辨率降低，我们可以使用SWOFF方法。通过如下流程，就可以很快找出究竟是由于那个通道的配色不合理，导致分辨能力下降。 在不同的检测平台，元件的光电转化效率会直接影响仪器总体分辨率。 不仅如此，科技的进步带来的还有更小的spreading现象，这使得配色也更加的轻松，结果也更加的准确。 你想知道如何检查自己的染色方案么？利用SWOFF的方法，可以帮您发现并且优化，使检测更加准确。点击下方阅读全文，获取SWOFF的详细步骤。
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m6A甲基化的疑难杂症与**方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
表观遗传相关的研究近年来也是一大研究热点，我们知道的表观遗传修饰有组蛋白修饰，DNA甲基化，RNA甲基化等等。之前的推文也有专门介绍RNA甲基化相关的研究现状和优势http://www.bio-review.com/m6a-rna/，以及相关的产品推荐http://www.bio-review.com/rna-methylation-studies/。我们力荐的m6A检测试剂盒p-9005也因其独特的优势和性能被广大研究者偏爱，也是如今热卖的产品，而今天小编就给大家复盘一下关于p-9005 检测m6A甲基化相关的疑难杂症和**方法。 一、 相关概念 RNA甲基化是RNA的可逆翻译后修饰，其表观遗传地影响许多生物过程。它发生在不同的RNA中，包括tRNA，rRNA，mRNA，tmRNA，snRNA，snoRNA，miRNA和病毒RNA。不同的RNA-甲基转移酶具备相应的催化策略，用于RNA甲基化。 6-甲基腺嘌呤（m6A）是在存在于真核生物的RNA分子中最常见的和丰富的甲基化修饰和占所有RNA甲基化的80％以上。它可以被称为“第五RNA碱基”并且在调节胚胎发育和细胞命运中具有广泛的作用。 而我们推荐的p-9005产品是Epigentek公司的力荐产品，Epigentek集团公司是全球领先的创新技术和表观遗传学相关研究产品的开发商和供应商，专门做表观遗传方面产品，可以说在表观遗传方面，他们是专家。 二、 p-9005产品性能和优势 性能：EpiQuik™m6A RNA甲基化定量试剂盒（比色）是一整套优化的缓冲液和试剂，用于比色定量RNA中的N6-甲基腺苷（m6A或6mA）。它适用于使用从任何物种（例如哺乳动物，植物，真菌，细菌和病毒）中分离的总RNA直接检测m6A RNA甲基化状态。 EpiQuik™m6A RNA甲基化定量试剂盒优势： 1. 检测物种多样化，无物种限制； 2.操作简便快速，3~4h即可完成整个实验 3. 高灵敏度，其检测极限可低至10 pg m6A 4.独特的结合溶液—可从mRNA和ncRNA（例如tRNA，rRNA和snRNA）中定量m6A 5.高特异性
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三阴性乳腺癌潜在的生物标志物-Matreya的神经节苷脂GD2
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
神经节苷脂（gangliosides）存在并集中在细胞表面，神经酰胺部分的两条烃链嵌入质膜中，寡糖位于细胞外表面，在此处它们代表细胞外分子或邻近细胞表面的识别点。它们主要存在于神经系统中，占所有磷脂的6％。 神经节苷脂是酸性糖鞘脂，其在细胞质膜的外部小叶，特别是在中枢神经系统的神经元细胞中形成脂质筏。它们参与细胞增殖，分化，粘附，信号转导，细胞间相互作用，肿瘤发生和转移。神经节苷脂的积累与几种疾病有关，包括Tay-Sachs 病和Sandhoff病和癌症。通常在中枢神经系统中发现双唾液酸神经节苷脂GD2，而在周围神经和皮肤黑素细胞中却很少。然而，在各种癌症中，异常糖基化在肿瘤细胞表面上产生相对大量的GD2，并已显示出可增强肿瘤的增殖和转移。GD2的相对肿瘤特异性表达使其成为使用抗GD2抗体进行免疫**的良好候选者，并且该方法在过去的几十年中一直备受吹捧。 双唾液酸神经节苷脂GD2是一种含有唾液酸的糖鞘脂，具有重要的临床和病理意义。 GD2在内质网和高尔基体中合成，然后转移到质膜的外层。在细胞表面，GD2参与细胞间粘附和信号转导，通过驱动增殖，新血管生成，免疫逃逸和侵袭，在生理和病理过程中均发挥关键作用。它主要在细胞表面表达，通常主要在中枢神经系统中发现，在周围神经和皮肤黑素细胞中很少见。GD2的最重要的病理学含义之一是它在许多类型的肿瘤（包括乳腺癌细胞）中的含量较高。 在恶性细胞中，GD2在神经母细胞瘤和大多数黑色素瘤中均匀表达，并在多种其它肿瘤中以不同程度表达，包括骨和软组织肉瘤，小细胞肺癌和脑瘤。GD2被认为在肿瘤细胞与细胞外基质蛋白的附着中起重要作用，从而增加了肿瘤的发生。由于其在各种肿瘤细胞中的普遍性，GD2可潜在地用作各种癌症的有用的生物标志物。在最近的研究中，已发现GD2在许多乳腺癌患者中持续升高。这一发现促使研究人员评估了其作为乳腺癌生物标志物的有用性。 研究人员发现，与其它几种
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如何成为流式细胞高手之方案设计解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
目前已经有很多OMIP与one study的方案可以供大家所使用。直接获取经过多次优化的结果。 如果不清楚荧光素与通道的搭配关系，还可以访问：https://www.beckman.com/flow-cytometry/fluorescence-spectrum-analyzer 选择自己的仪器型号，并且选择自己的荧光素，就可以直接查看荧光光谱与仪器配置的搭配程度。 当然在网站上您还可以找到非常多的学习材料与教学视频，即便是疫情期间，专家也成主播，隔离在家为大家讲解配色技巧，点评配色方案。点开下面视频感受一下吧。 已经商品化的dura系列产品。不仅方案设计经过优化与验证，使用的干粉技术，产品即便在60摄氏度，30天也能保持稳定。对于激活实验，刺激剂也是预先加好。分析方案一应俱全。 而作为商品化的Dura系列产品，结合one study的配色优点与最新干粉试剂的优点，是无论是分型还是功能实验都快速，准确，稳定的完成。而在OMIP中找不到到方案，也可以选择CDS系列产品。 点击阅读全文，获得更多配色相关的信息
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ELISA试剂盒三大特点与步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
ELISA试剂盒特点： 一、特异性 ELISA试剂盒的特异性与试剂盒的要害组分，抗体对有关。若抗体对中为多抗，另一个有必要为单抗，建议运用双单抗。挑选一个好的ELISA试剂盒，咱们首先要考虑的就是特异性。 二、灵敏度 ELISA试剂盒的好坏往往就取决于灵明度的高低，因而灵敏度也是咱们挑选ELISA试剂盒的一个重要技术参数。灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的量的才能，用户可根据自己样本中待检目标的量挑选合适的试剂盒，假如待检目标量很低，一般的试剂盒不能满足要求，可挑选高敏的ELISA试剂盒。 三、重复性 科学实验讲究重复性，一般 ELISA试剂盒，其板内和板间变异系数应该控制在 15% 以内。 公司以诚信为主旨，以商场为先导，以质量求生存，本着高效节能的产品特征，诚挚为广大企业用户服务，力求真诚合作，携手并进，共创辉煌。服务是办理企业的产品，是办理企业的重要服务内容，服务质量的好坏，关系到物业办理企业的兴衰存亡，只有企业好，所研制的产品才会更好！ ELISA试剂盒操作步骤： 1. 跟着病况的进展或由其他因素影响，某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇，因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中，标本恰当稀释还可下降非特异性反响。 2. 加样一般运用加液器，在ELISA试剂盒中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加间断液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶结合物、底物和间断液时则不需更换吸嘴。 3.在成批手艺检测中，还应留神操作时差的影响。加样及混匀时间的差异，使抗原抗体反响和酶促反响时间不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不留神可能会导致过错效果或定量不准。 4. 洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的免疫反响物，间断抗原抗体反响，除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。 5. 断定效果须运用ELISA试剂盒测读仪，比色法判读可选择单波
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台盼蓝(Trypan Blue)染色法技术要点
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
台盼蓝 (Trypan Blue) 染色法是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，细胞不被染色；而死细胞的胞膜不完整，通透性增加，可使台盼蓝渗入将细胞染成蓝色。因此，借助台盼蓝染色可以简单、快速地区分活细胞和死细胞。 想当年小编还是初入实验室的小白时，以为台盼蓝染色的效果应该是这样的（左），然而现实却是那样的（右） 不是说好的“金标准”吗？染成这样哪里还能准？ 如果你是Nexcelom的粉丝，从往期文章中应该了解过台盼蓝染色法的局限性，以及当前最受认可的AO/PI荧光染核法的原理和优越性（参考小知识）。 细胞的死亡状态 在细胞实验中，我们一般会遇到两种类型的细胞死亡：一种是自然状态下的死亡，即细胞自身的老化或营养耗尽造成的死亡，通常会经历比较长的过程；另一种是诱导的瞬间死亡，比如药物处理、热水浴等，通常会在短时间内发生作用。两种不同状态的细胞死亡会让台盼蓝染色出现不同效果吗？ 自然死亡 为了模拟细胞在自然状态下的死亡，研究者将Jurkat细胞放置在常温下，并在0，6，12，24，48，72，96和168小时后取出部分细胞和0.4%台盼蓝1：1混合染色。 从图片中我们可以看到，从0-12小时，死细胞大多被染成较深的蓝色；而从24小时起，我们会观察到一些浅蓝色呈弥散状态的物体（红色箭头）。对于这样的未知物，研究者们起了一个可爱的名字 – “气球” [1]。这些“气球“到底是什么呢？是细胞变的还是某种杂质？ 在下面的小视频中，台盼蓝染料被缓缓加入在室温培养了168小时的Jurkat细胞。大家可以清楚地看到部分细胞被染成蓝色后迅速膨胀和破裂，染色随即变浅，细胞失去形态变成“气球“。整个过程仅几秒钟。 有视频为证，这些“气球“状物体就是死细胞的残骸。但当我们在显微镜下计数时，这些“气球”由于颜色太浅通常不会被计在内，因而导致死细胞的漏数和存活率的高估。研究者们将同样的样本用荧光核酸染料AO/PI或P
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乐枫Genie G纯水超纯水一体机在ICP-MS供水的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
第十一版《中华人民共和国药典》已经颁布并将于2020年12月30日正式实施。新版药典在药品安全性有效性控制、推广先进分析检测技术应用等方面做了进一步强化，尤其是进一步规范了对中药材中重金属、农残等有害物质和化药元素杂质限度，受到了行业的高度关注。借鉴国际先进标准经验，新版药典不断完善药品检验方法学体系建设，扩大了高灵敏度、高可靠性的检测技术在药品质量控制中的应用，以此提升药品行业的监管能力。随着药品评审及质控要求的进一步提高，越来越多高端的分析仪器将被采用，为相关检测部门提供高效，高准确度的技术支撑。 电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）是一种将ICP技术和质谱技术结合的高端分析仪器，因其高灵敏度，低检出限，元素覆盖范围宽，检测效率高等优势，自2015版《中国药典》起，就成为药品中金属杂质分析的重要手段，随着2020版新药典的实施，其应用也会更加广泛，成为药品检测分析中的关键角色。 ICP-MS检测限可以达到ppt乃至亚ppt级别。因此对于配套纯水设备的要求很高，产水中金属杂质含量要求低至ppt水平，才不会干扰ICP-MS的检测分析。 用户都理解ICP-MS检测必须使用超纯水。但是，在挑选不同配置的超纯水设备时，还是有这样或那样的困惑。 最近，一位乐枫的用户，就在选择Genie G（以自来水作为进水，生产EDI纯水和超纯水）还是Genie PURIST（以纯水作为进水，产超纯水）两款不同的超纯水设备上犹豫不决。 他们自认为已经有了产RO纯水的进口设备，配合Genie PURIST应该是理想的选择，和Genie G使用效果应该相当。但ICP-MS的测试图谱却显示，只有Genie G的测试结果令人满意，完全达到要求。虽然Genie PURIST产水指标也很好，但无论是在ICP检测结果的准确性和重现性上，都不及使用Genie G。这个现象让他们非常不解。 为什么ICP-MS检测必须使用 Genie G 呢？ 乐枫的技术人员为他们解开了背后的原因。问题的关键在于制备超纯水时的进水！
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Celigo成像分析技术在细胞增殖中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
细胞增殖是肿瘤研究的必备实验之一。最简单直接的检测细胞增殖的方法就是在不同时间点进行细胞计数，但是在96孔板甚至384孔板的实验设置下，这无疑是难以操作的。于是，研究者们更倾向于用间接方法研究细胞增殖，比如基于线粒体内脱氢酶还原能力的MTT, MTS, CCK-8法，还有基于胞内ATP水平的CellTiter-Glo, ATPlite等。原理上，这些方法都是以细胞的代谢水平来代表细胞数量。但是大家有没有怀疑过这些间接方法真能准确反映细胞的生长状态吗？ 美国Genentech公司的科学家对这一问题进行了深入的研究。在2013年发表的一篇文献中，作者选择了两种最常见的检测细胞增殖的方法 – MTS和 CellTiter-Glo和直接细胞计数法进行比较，得到了意想不到的结果。 如上图所示，HT29细胞被6种不同药物处理48小时后用不同方法对细胞增殖进行了分析。从生长曲线来看，这三种方法得到的结果之间有不小的差异。比如Etoposide（ 细胞周期特异性的抗肿瘤药），虽然最高与最低剂量得到的杀伤效率分别相同，但细胞计数与另两种方法的曲线趋势完全不同，所得IC50也小得多。又比如Gemcitabine（DNA合成抑制剂）, 细胞计数所测得的最高剂量杀伤效率比另两种方法测得的要高得多。总体来说，与细胞计数相比较时，MTS和CellTiter-Glo会不同程度地低估药物杀伤效率。 那造成这些差异的原因是什么呢？在文章的开头我们提到了，MTS和CellTiter-Glo都是基于细胞代谢水平的检测方法。这就出现了一个bug: 如果一种药物直接对细胞代谢有影响，会有什么样的结果呢？作者随后进行了一系列深入研究，得出结论：当药物造成细胞周期阻滞时，反映细胞代谢水平的信号与细胞数之间不再成线性关系。此时细胞内的ATP和脱氢酶水平均会显著上升，导致MTS和CellTiter-Glo得到更高的信号值，从而高估细胞数量。 谜题解开了，不过也给小伙伴们带来了一个烦恼：今后如何再愉快地做细胞增殖实验呢？手动数细胞实在太痛苦了。 美国Nexcelom公司的一款名为Celigo的神
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让病毒无所遁形-徕卡电镜解决方案在新冠肺炎病毒鉴定的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
徕卡显微系统 应用专家 肖丽国 2020年，似乎来得更艰难一点。从去年12月份开始，新冠肺炎疫情（COVID-19）就像龙卷风一样席卷全球，当前已在217个国家地区蔓延，全球确诊超2402万例，死亡破82万例。新冠肺炎疫情构成大流行的威胁“已经变得非常真实”。 WHO Coronavirus Disease (COVID-19) Overview 数据来源：World Health Organization，Date by 2:44pm CEST, 27 August 2020 疫情之下，奔跑在一线的有我们的白衣天使，也有争分夺秒的科研人员。而在整个疫情的防控防治过程中，电镜技术，让病毒无所遁形。 负染色技术—鉴定病毒形态 为什么是冠状病毒？ 电镜给了一个很重要的指标：病毒形态。 1月6日，中国疾病预防控制中心通过对临床患者分离毒株样品进行电镜负染色，发现了病毒的存在，且形状与冠状病毒相似，直径80-120nm，表面有皇冠一样的突起，这就给我们一个很重要的方向指示。随后，根据核酸序列比对以及其他鉴定方法，宣布新型冠状病毒肺炎疫情爆发。 图片来源：中国疾病预防控制中心 负染色技术可以鉴别病毒形态、纯度和浓度 负染技术流程简单，检测速度快。一般几分钟就可以完成。 载网要求： 1、载网亲水：商业化载网表面有油脂，悬液样品铺不开 2、碳膜载网：促进样品颗粒均匀分布 徕卡高真空镀膜仪，一机两用：镀膜+辉光放电 EM ACE系列镀膜仪（Leica EM ACE200） 负染技术—徕卡解决方案 冷冻电镜技术—指导药物和疫苗设计 新冠病毒表面的S蛋白，是侵染宿主的关键蛋白，与SARS病毒S蛋白一样，都将宿主细胞表面的“血管紧张素转化酶2（ACE2）”作为侵入细胞的关键受体。了解S蛋白的结构，弄清楚S蛋白与ACE2的作用方式，是药物开发和疫苗设计的重点。 2月15日，德克萨斯大学奥斯汀分校McLellan团队获得了新冠病毒S蛋白三维结构，分辨率达3.5埃，确定了该S蛋白是由S1和S2组成的三聚体。RBD是受体结合区域，存在多种构象状态。与SARS病毒S蛋白比较，两者是
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白细胞介素（Interleukin）的家族秘密
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
白细胞介素（interleukin，IL）简称白介素，是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于最初是由白细胞产生又在白细胞间发挥作用，所以由此得名。现在泛指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有重要调节作用而统一命名的细胞因子。目前发现了38种白细胞介素，分别命名为IL-1——IL-38。其功能复杂，成网络，复杂重叠，在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用，此外它们还参与机体的多种生理及病理反应。 主要功能： （1）刺激活化B细胞增殖，分泌抗体； （2）刺激T细胞增殖及CTL(细胞毒性T淋巴细胞)活化； （3）刺激肝细胞合成急性期蛋白，参与炎症反应； （4）促进血细胞发育。 白细胞介素-1 (IL-1) IL-1主要由巨噬细胞产生，此外几乎所有的有核细胞，如B细胞、NK细胞、体外培养的T细胞、角质细胞、树突状细胞、星形细胞、成纤维细胞、中性粒细胞、内皮细胞以及平滑肌细胞等均可产生IL-1。正常情况下只有皮肤、汗液和尿液中含有一定量的IL-1，绝大多数细胞在受到外来抗原或丝裂原刺激后才能合成和分泌IL-1。IL-1有两种不同的分子形式，一种称IL-1α,由159aa组成；另一种称为IL-1β，含153aa；两者由不同的基因分别编码。虽其氨基酸顺序仅有26%的同源性，然而IL-1α和IL-1β以同样的亲和力结合于相同的细胞表面受体，发挥相同的生物学作用。 白细胞介素2 (IL-2 ) IL-2是T细胞和NK细胞产生的15.5kD糖蛋白，在机体的免疫应答中起重要作用。IL-2最重要的作用是诱导T淋巴细胞增殖（从G0期进入S期）和分化。人胸腺中的T细胞前体表达IL-2Rß并分泌低水平的IL-2，这种自分泌作用可促进胸腺细胞增殖。IL-2参与调节T细胞受体基因的重排和表达。IL-2能诱导NK细胞增殖，增强NK细胞的活性，诱导LAK细胞和TIL，并刺激它们产生细胞因子。高剂量IL-2能引起单核巨噬细胞增殖和分化，并增强
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阿尔茨海默症行为学金标准-水迷宫之统计分析篇
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
水迷宫可统计的项目非常多，表征的记忆指标也十分丰富，废话不多说，容我逐一道来。 这里以Jove上一篇文章中的结果作为例子，分组（具体什么转基因小鼠就不说了），前三个很常规，分别是对照组（阳性对照），AD组（阴性对照）和用药组，还有MA(Manual Acupuncture)组是针灸组，这个实验目的大概是看看针灸是不是能达到用药的效果。 图1. 水迷宫数据统计举例[1] 上图是水迷宫实验的标准展示方法，A图是平台可见期的找到平台的时间和游泳速度；B图展示的是动物学习找到平台的能力；C图是比较各个组跨越平台的次数和在原平台区域滞留的时间百分比。在上图的基础上我们再补充一些其他的可检测项目就得到了下表： 图2. 水迷宫统计数据汇总 01 可见平台期实验中需要统计的数据包括： ☑ 从放小鼠入水到小鼠爬上平台所需时间（较重要，这个主要是检测动物的运动能力） ☑ 从放小鼠入水到小鼠爬上平台的路径长度（较重要，检测动物寻找平台的策略，特别是检测老年小鼠是否视力有问题） ☑ 小鼠游泳的游泳速度（重要，由前面两个数据相除得到） 需要关注的行为（用于排除部分无用小鼠数据）： ✓ 小鼠漂浮不动的时间和次数 ✓ 小鼠是否会爬上平台后跳下来 ✓ 小鼠是否围绕水池边缘游泳并试图攀爬 02 隐藏平台实验中需要统计的数据包括： ☑ 从放小鼠入水到小鼠爬上平台所需时间（最重要，最核心的数据，因为有分组和时间两个维度，需要用到Two-Way Anova进行统计） ☑ 从放小鼠入水到小鼠爬上平台的路径长度（同样也是动物的搜索策略问题） ☑ 小鼠游泳的游泳速度（同可见平台期） ☑ 在整个过程中小鼠与平台中心的距离之和（另一种判断学习能力的方法，比较少见） ☑ 小鼠刚入水后的第一次向中心游动时的方向与起点-平台直线的夹角（这个就更少了） 在这里可以根据前人的研究发现，水迷宫平台隐藏期的寻找平台的所需时间、路径长度以及与平台的距离三者之间是高度相关的。而首次游动方向
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唾液样本处理系列三：唾液RNA提取试剂盒
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
【前情回顾】： 【1】唾液DNA/RNA/外泌体等收集保存“一站式”服务，点击了解 【2】唾液样本处理系列二：唾液DNA/外泌体提取试剂盒，点击了解 【3】Norgen Biotek助力新型冠状病毒COVID-19研究，上新啦，点击了解 2020年4月中旬，美国罗格斯大学宣布，美国食品和药物管理局（FDA）在其紧急使用授权（emergency use authorization，EUA）下批准了首个采用唾液作为SARS-CoV-2（新冠病毒）检测生物材料的新检测方法。 2020年8月中旬，美国FDA宣布，授予耶鲁大学（Yale University）公共卫生学院开发的SalivaDirect新冠诊断测试紧急使用授权（EUA），在FDA发布的新闻稿中，FDA局长Stephen M. Hahn博士表示，在提高测试效率和避免试剂短缺方面，这一检测取得了突破性的进展。 正是因为速度快、价格便宜，这项测试得到了NBA的资助，NBA球员已试用。NBA已经重新开打，并即将进入季后赛。快速简易，且低成本地对NBA球员和相关工作人员进行核酸监测，是保证NBA顺利进行的关键。 利用唾液样本来检测新冠病毒的概念并不新颖，FDA此前也已经为4款基于唾液样本的分子诊断检测颁发了EUA。说到唾液，其实它是一种很好的检测取材。 新冠刚刚爆发的时候，据报道此病传染性要远远超过SARS。新闻报道中描述一个患者上了公交，几乎三分之一人会被传染。它超级快速地传播，令人谈虎色变。专家分析病毒病原体可能是存在于一个比较表浅的部位，如通过呼吸，说话就可以传播。那么，口腔中的唾液就是最有可能的。而通过飞沫传播是最容易的方式。 SARS-CoV-2病毒是COVID-19的主要病原体，是一种严重且可能致命的病毒。鼻咽拭子采集，然后进行病毒RNA提取和RT-qPCR是目前检测SARS-CoV-2感染的金标准工作流程。作为一种侵入性的样本采集方法，这种样本采集策略需要现场有接受专业训练的人员，这些人员有被感染的危险。在过去的几个月中，全球范围内还存在棉签短缺
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豚鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒性能与技术原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
豚鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒技术原理： 1、抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。 2、结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。 3、酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。 4、受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。 5、此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。 6、加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平)，并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。 100mg 氯霉素 效价测定 130303-200614 200mg 土霉素 效价测定 130305-200720 200mg 四环素 效价测定 130306-200918 200mg 红霉素 效价测定 130307-200716 200mg 链霉素 效价测定 130308-200713 200mg 新霉素 效价测定 130309-200811 100mg 多粘菌素B 效价测定 130313- 200mg 卡那霉素 效价测定 130319-200710 100mg 杆菌肽 效价测定 130320-200709 实验结果计算： 以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。 试剂盒性能： 1. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 2. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。
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