-
ELISA实验操作要点：样本的收集及保存操作不当会影响ELISA实验结果
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA（酶联免疫试验）以其灵敏度较高、特异性好的特点已广泛用于科研实验及临床，越来越多科研单位选择用ELISA实验方法完成研究课题。优质的试剂、好的仪器和正确的操作是保证ELISA试剂盒检测结果准确可靠的必要条件，但样本的收集及保存操作不当也会影响ELISA实验结果。样本的收集跟保存听上去貌似很简单，但不乏有许多科研工作者因为样本的收集跟保存没做好而影响实验结果。 下面针对样本收集及保存德尔塔生物提几点建议： 1. 严重溶血，以HRP为标记的ELISA测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性； 2. 混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应： 3. 标本凝固不全，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果； 4. 采血试管洗涤不彻底、反复使用易交叉污染：塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。 血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存；使用一次性玻璃试管或真空管采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当
-
ELISA实验操作要点：液体样本处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
液体样本处理原则： 所有的液体样本，用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），如果以后碰到其他的液体样本，也按这个方法，纳入汇总表。 1、血 清：用无菌管收集，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2、血 浆：应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3、尿 液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 4、胸腹水：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5、脑脊液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 6、唾 液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 8、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 9、蜂蜜：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 样本收集注意事项 1、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 3、我们通用处理方法，无法涵盖各
-
针对小分子物质的竞争法ELISA试剂盒的质量优势
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试剂盒在环境监测、食品安全、药物监测、激素监测等领域的应用，获得长足的发展，大量的竞争法ELISA试剂盒被开发，质量控制越来越严格，德尔塔生物经过10年ELISA试剂盒技术的积累与沉淀，不断创新突破，针对激素类的小分子物质，我们主要通过以下几个途径保证竞争法 竞争法ELISA试剂盒 一、精心筛选配对抗原抗体 抗体的性能直接决定了试剂盒的特异性，我们通过评价大量抗体，筛选最适合的抗体进行生产。 二、抗原的改造 竞争法抗原改造是提高试剂盒灵敏度的最直接方法，通过延长连接臂等方法，对抗原进行改造，再偶联辣根过氧化物酶（HRP）。 三、用二抗包被，充分暴露一抗位点 用二抗（羊抗兔或者羊抗鼠）包被，跟一抗的（兔抗或者鼠抗）Fc端结合，充分暴露一抗的Fab端，降低空间位阻，有利抗原抗体结合。 四、完善的产品配方 试剂盒中各种重要的缓冲液，如校准品稀释液、酶标稀释液等，都是经过负责的配伍与严谨的实验，保证试剂盒的稳定性和重复性。 五、可靠的制备工艺 整个产品制备工艺，充分考虑了质量影响因素。 竞争法ELISA试剂盒，做为一种较为复杂的方法设计，在操作过程中，也有许多因素影响实验结果，因此操作过程有疑问可以直接联系我们技术人员进行技术指导，或查询本网站的ELISA技术专题查找解决方案。数据处理方法也对结果有很大影响，如有疑问请与我们技术人员联系。
-
ELISA实验操作要点：ELISA检测做好这7步，得出完美结果
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题，比如说花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空白还低.....。德尔塔生物为您总结7步ELISA检测实验经验，做好这7步您就能得出完美的实验结果。 1、包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保存抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，方法简要的列出如下: ①亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。 ②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。 ③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。 2、包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理：由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。 3、封闭：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂
-
elisa可以应用于哪些检测？Elisa试剂盒评价标准与曲线
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
Elisa生物检测是一种敏感度高，同时特异性强，重复性好的实验检测方法，由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。 目前市面上的Elisa试剂盒检测原理主要有以下四种：直接法，间接法，夹心法，竞争法。 Elisa试剂盒评价标准： ① 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，应大于等于0.9900。 ② 灵敏度：反应试剂盒的最低检测浓度 ③ 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 ④ 重复性：板内、板间变异系数 ⑤ 回收率：判断实验的准确性和特异性 Elisa试剂盒的标准曲线： 标曲R值是几个9才合格？ 实验室应按检测标准（方法）的要求使用标准溶液或标准物质建立标准曲线。所用标准溶液或标准物质应覆盖被测样品的浓度范围。检测标准（方法）如无具体的要求，至少使用5个标样（除空白外）建立线性标准曲线，每个点重复测定1-3次，对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不应低于0.98，对于确证方法，相关系数不应低于0.99。 其实，大于0.99是判断是否为线性相关的一个标准，实际应用中线性大于0.999才是比较理想的。线性在0.99到0.999之间的监测结果只用接近最高浓度一半（中间浓度）的位置才比较准确，如果线性大于0.999的话，在整个线性范围内都会有一个比较满意的结果。 如果检测的线性不好，可以减少标准的覆盖范围，将标准的浓度调整到待测样品浓度附近，这样结果也是非常准确的。例如，样品的浓度约20ppb,但在0~50ppb范围建立标准曲线，但线性非常不理想，这时可以将标准范围调整到15~25ppb之间，作五个标准。 可以检测检测各类食品，饲料，组织及生物液体中真菌毒素、抗生素、食品添加剂以及其他细菌蛋白的ELISA试剂盒： 1.抗生素类：氨苄青霉素，货号：E4350，样本：血清，尿液，牛奶，组织 检测食品中抗生素的残留 样本类型：组织、血清、牛奶、鸡蛋和其他生物样本 真菌毒素是真菌产生的低分子量次级代谢产物 2.真菌毒素：总黄曲霉毒素，货号：E4747，样
-
北美圣草素的药理作用、用途及主要检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
北美圣草素又名圣草酚，来源于芸香科植物柠檬的果实。为淡黄色结晶性粉末，其具有较强的抗氧化效果。 中文名：北美圣草素 外文名：Eriodictyol 别 名：圣草酚 分子式：C15H12O6 分子量：288.252180 Cas No：552-58-9 熔 点：267°C 北美圣草素（7-O葡萄糖苷）同柚皮素-7-O葡萄糖苷存在唇形科(Labiatae)青兰属(Dracocephalum)植物中，这些青兰属植物主要分布于亚洲温带，多在高山及半干旱地区，少数延至中欧及北欧，1种分布于北美。我国约有32种7变种，分布于东北、华北、西北及西南。该属植物在民间被广泛应用，尤其是新疆维吾尔自治区多种该属植物被用作气管炎和心血管疾病的**药物。 特性描述： 外观 淡黄色结晶性粉末 用途 用于含量测定/鉴定/药理实验等。 提取来源 田麻科植物圣草 溶解性 易溶于甲醇,略微溶于沸水、热乙醇及冰醋酸，溶于稀碱。 药理作用： 抗氧化、抗辐射、降血脂、降血糖。 用途： 具有较强的抗氧化效果,长用作饮料,食品和酒类的抗氧化剂。 主要检验方法： 建立HPLC法测定岩青兰中柚皮素-7-O葡萄糖苷及北美圣草素-7-O葡萄糖苷的含量的方法,考察岩青兰地上全草与不同部位中两种二氢黄酮类成分的含量.采用Phenomenex C18柱,甲醇-乙腈-水(32:8:60)为流动相,流速1ml/min,紫外检测器284 nm波长进行检测.测得岩青兰叶中两种二氢黄酮含量最高,茎中含量极低,根中未测到.建立的方法分析简便、灵敏、准确。
-
Elisa试剂盒实验原理、技术特点及操作流程介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
Elisa试剂盒试验原理： Elisa试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。 Elisa试剂盒操作流程： 1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。 2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。 3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。 4. Elisa试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。 5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。 6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。 7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。 8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。 9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。 Elisa试剂盒技术特点： 1准确可靠，临床双盲对照试验＞1000例，结果与金标准测序法比对，结果*性大于99%。 2高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。 3快速：整个检测流程只需3小时。 4简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。 5防污染 6高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中
-
如何选择ELISA试剂盒？正确选择ELISA试剂盒的步骤
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
如何选择ELISA试剂盒？elisa试剂盒的选择有许多考虑的因素,比如说实验目的、价格、操作方法等因素。比如检测蛋白，基本有下列步骤： 第一步、明白检测何种蛋白 第二步、明确编码该蛋白的基因与其他哪些物种同源性** 第三步、寻找检测这些物种蛋白的试剂盒 第四步、咨询商家ELISA试剂盒使用的抗体类型：单抗还是多抗？单抗是针对什么抗原决定簇的 第五步、做出自己的判断，该买哪个试剂盒 此外，选择试剂盒的时候，还应考虑样本类型、样本体积、灵敏度、检测范围、样本值等因素。 相关内容扩展： 目前市场上的ELISA试剂盒质量参差不齐，如何去挑选适合自己的试剂盒就显得特别重要，具体有以下几点可供参考。 特异性 ELISA 试剂盒的特异性与试剂盒的关键组分，抗体对有关。若抗体对中之一为多抗，另一个必须为单抗，建议使用双单抗。 灵敏度 灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的最低量的能力，用户可根据自己样本中待检指标的量选择合适的试剂盒，如果待检指标量很低，一般的试剂盒不能满足要求，可选择高敏的 ELISA 试剂盒。 重复性 科学实验讲求重复性，一般 ELISA 试剂盒，其板内和板间变异系数应该控制在 15% 以内。 简便性 试剂盒在保证高质量数据的情况下，实验时间越短，操作越便利，越容易受到用户欢迎。这也不妨作为选择试剂盒的一个指标。 经济性 进口分装试剂盒因为省去不少物流和报关费用，与国外原装进口试剂相比价格上有比较大的优惠，而且能提供比较灵活的包装规格，特别是 48T 等小包装，目前很多客户因为对品牌的信任度问题，主要还是选择国外原装进口，但是国内进口分装比较成熟的公司仍然是一个非常好的选择。 美誉度 一个品牌不光要有知名度，更重要的是美誉度。通过行业调查公司以及网络，相关宣传资料等可以找到美誉度高的 ELISA 试剂盒供应商，这个反映的不仅是产品质量的问题，对供应商的售前售后服务也是一个非常严格的检验。目前国际上主要的 ELISA 供应商有 R&D 细胞因子方面的试剂盒，Bender
-
ELISA法有哪几种常见类型？其原理及优缺点都是什么？
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA法有哪几种常见类型？ELISA实验通常以细胞培养上清液、血清、血浆以及组织裂解物等为样品。该实验必备三种试剂：固相的抗原或抗体；酶标记的抗原或抗体；酶作用的底物。根据样品的性质、检测的实验条件、试剂的来源，可设计出不同类型的ELISA检测方法。 一、直接ELISA 原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。 优点：操作流程简短，实验步骤少；无需使用二抗，避免了交叉反应；实验步骤少，操作不易出错。 缺点：实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。 二、间接法ELISA 原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。 优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直标一抗，可保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。 缺点：交叉反应几率升高。 三、双抗夹心法ELISA 原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。 双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 优点：高特异性，使用的捕获抗体与检测
-
ELISA直接法和间接法的原理与优缺点是什么？
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
一、直接ELISA 原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。 优点：操作流程简短，实验步骤少；无需使用二抗，避免了交叉反应；实验步骤少，操作不易出错。 缺点：实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。 二、间接法ELISA 原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。 优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直标一抗，可保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。 缺点：交叉反应几率升高。
-
ELISA直接法和双抗夹心法的原理与优缺点是什么？
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
一、直接ELISA 原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。 优点：操作流程简短，实验步骤少；无需使用二抗，避免了交叉反应；实验步骤少，操作不易出错。 缺点：实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。 二、双抗夹心法ELISA 原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。 双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 优点：高特异性，使用的捕获抗体与检测抗体都是检测特异性的；适用于复杂样品，抗原不需要进行纯化即可用于检测；灵活性更大，灵敏度更高，可采用直接法也可采用间接法。 缺点：检测物需要拥有两个以上不同的抗原表位或多个相同的重复表位；不适用于检测小分子物质。
-
ELISA直接法和竞争法的原理与优缺点是什么？
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
一、直接ELISA 原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。 优点：操作流程简短，实验步骤少；无需使用二抗，避免了交叉反应；实验步骤少，操作不易出错。 缺点：实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。 二、竞争法ELISA 原理：竞争法ELISA更为复杂，通常用于检测小分子如半抗原、激素、药物等。样品中待检游离抗原与固定于固相载体上的抗原一起竞争相同的有限量抗体，当样品中的游离抗原越多，就可结合越多的抗体，而固相抗原只能结合较少的抗体。反之亦然。经洗涤去除样品中的抗原与抗体的结合物，只留下固相抗原与抗体的结合物。显示经计算可得样品中抗原的含量。竞争法可根据实验设置直接法、间接法或夹心法形式。
-
ELISA间接法和双抗夹心法的原理与优缺点
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
一、间接法ELISA 原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。 优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直标一抗，可保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。 缺点：交叉反应几率升高。 二、双抗夹心法ELISA 原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。 双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 优点：高特异性，使用的捕获抗体与检测抗体都是检测特异性的；适用于复杂样品，抗原不需要进行纯化即可用于检测；灵活性更大，灵敏度更高，可采用直接法也可采用间接法。 缺点：检测物需要拥有两个以上不同的抗原表位或多个相同的重复表位；不适用于检测小分子物质。
-
ELISA间接法和竞争法的原理与优缺点
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
一、间接法ELISA 原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。 优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直标一抗，可保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。 缺点：交叉反应几率升高。 二、竞争法ELISA 原理：竞争法ELISA更为复杂，通常用于检测小分子如半抗原、激素、药物等。样品中待检游离抗原与固定于固相载体上的抗原一起竞争相同的有限量抗体，当样品中的游离抗原越多，就可结合越多的抗体，而固相抗原只能结合较少的抗体。反之亦然。经洗涤去除样品中的抗原与抗体的结合物，只留下固相抗原与抗体的结合物。显示经计算可得样品中抗原的含量。竞争法可根据实验设置直接法、间接法或夹心法形式。
-
ELISA双抗夹心法和竞争法的原理与优缺点
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
一、双抗夹心法ELISA 原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。 双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 优点：高特异性，使用的捕获抗体与检测抗体都是检测特异性的；适用于复杂样品，抗原不需要进行纯化即可用于检测；灵活性更大，灵敏度更高，可采用直接法也可采用间接法。 缺点：检测物需要拥有两个以上不同的抗原表位或多个相同的重复表位；不适用于检测小分子物质。 二、竞争法ELISA 原理：竞争法ELISA更为复杂，通常用于检测小分子如半抗原、激素、药物等。样品中待检游离抗原与固定于固相载体上的抗原一起竞争相同的有限量抗体，当样品中的游离抗原越多，就可结合越多的抗体，而固相抗原只能结合较少的抗体。反之亦然。经洗涤去除样品中的抗原与抗体的结合物，只留下固相抗原与抗体的结合物。显示经计算可得样品中抗原的含量。竞争法可根据实验设置直接法、间接法或夹心法形式。
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信