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ELISA实验技巧：ELISA实验数据要怎么处理？
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
(数据处理,类型,散点图,拷贝,标准曲线) 如果是新的数据，你只要双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。根据曲线方程式，计算出浓度。 ELISA实验数据要怎么处理？(数据处理,类型,散点图,拷贝,标准曲线) 方法： 1、拟和曲线： 输入行： 浓度值，如0 10 50 100 输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42 选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”；在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”；选择“系列产生在行”，按“下一步”；数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值；数据x轴，浓度；按下一步，点击完成。可得曲线图。 单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式；在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。 得到公式和R平方值。 也可以用上面说的方法：双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。 2、计算浓度： 第一次实验： 标准曲线为： y = -4E-05x2 + 0.026x R2 = 0.9745 为例，已知OD值，计算浓度。 由于y = -4E-05x2 + 0.026x，所以可以得到： 4E-05x2 －0.026x ＋y＝0 ax2 ＋bx ＋y＝0 a＝4E-05；b＝－0.026； x＝（－b－（b*b－4ay）（平方根））/(2*a) 代入a，b，和y值，得 x＝（0.026－（0.026*0.026-0.00016*y）(平方根）)/(2*0.00004） 在excel里可以用以下公式表示： x＝(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*y)/2))/(2*0.00004) 通用公式为： x＝（－b－EXP(LN（b*b－4ay）/2)）/(2*a) 应用excel的公式拷贝功能，计算所有浓度
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ELISA实验原理：ELISA结果判断
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
定性测定 定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。 在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。两类反应的结果判断方法不同，分述于下。 （1） 间接法和夹心法 这类反应的定性结果可以用肉眼判断。目视标本也无色或近于无色者判为阴性，显色清晰者为阳性。但在ELSIA中，正常人血清反应后常可出现呈色的本底，此本底的深浅因试剂的组成和实验的条件不同而异，因此实验中必须加测阴性对照。阴性对照的组成应为不含受检物的正常血清或类似物。在用肉眼判断结果时，更宜用显色深于阴性对照作为标本阳性的指标。 目视法简捷明了，但颇具主观性。在条件许可下，应该用比色计测定吸光值，这样可以得到客观的数据。先读出标本（sample，S）、阳性对照（P）、和阴性对照（N）的吸光值，然后进行计算。计算方法有多种，大致可分为阳性判定值法和标本与阴性对照比值法两类。 a． 阳性判定值 阳性判定值（cut-off value）一般为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为判断结果阳性或阴性的标准。 用此法判断结果要求实验条件十分恒定，试剂的制备必须标准化，阳性和阴性的对照品应符合一定的规格，须配用精密的仪器，并严格按规定操作。阳性判定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对大量标本的实验检测而得到的。现举某种检测HBsAg的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品HBsAg的含量标明为P=9±2ng/ml。每次试验设2个阳
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ELISA实验操作要点：ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础，ELISA试剂以及各种溶液如何配置？最近刚做了下ELISA实验，把各种ELISA配置方法汇总如下： 1、ELISA实验包被缓冲液 2、ELISA实验洗涤缓冲液 3、ELISA实验稀释液 4、ELISA实验终止液 5、ELISA底物缓冲液 6、ELISA实验TMB四甲基联苯胺、使用液 7、ELISA实验ABTS使用液 8、ELISC 试剂 1、ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液)： NaHCO3 1.59g NaHCO3 2.93g 加蒸馏水至 1000ml 2、ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M KH2PO4 0.2g Na2HPO4·12H2O 2.9g NaCl 8g KCl 0.2g Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸馏水至 1000ml 3、ELISA实验稀释液： 牛血清白蛋白(BSA) 0.1g 加洗涤缓冲液至 100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。 4、ELISA实验终止液(2M H2SO4)： 蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸98%、 21.7ml。 5、ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸)： 0.2M Na2HPO4(28.4g/L) 25.7ml 0.1M 柠檬酸(19.2g/L) 24.3ml 加蒸馏水50ml 6、ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液： TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml 底物缓冲液(PH5.5) 10ml 0.75%H2O2 32μl 7、ELISA实验ABTS使用液： ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5) 1ml 3%H2O2 2μl 8、ELISA实验封闭液： 牛血清白蛋白(BSA) 5g 加洗涤缓冲液至 100ml 值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉，不适合长期保存。 为了保证ELISA实验的准确性，实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要精确，将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔，严防交叉污染。
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ELISA试剂盒：选对品牌，用对品牌，让您的实验效率事半功倍！
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试剂盒深受广大科研工作者的喜爱。而且市面上的ELISA试剂盒数不胜数， 让大家选择的时候都比较纠结。到底怎么选择试剂盒呢？怎么才能不被纷扰世道的假的试剂盒迷惑双眼呢？选什么样的试剂盒才能性价比高呢？ 品牌试剂盒随便一个价钱都是要一千块以上，如果选错了试剂盒，轻则损失一笔科研经费，重则毁掉整个实验课题，再重则影响科研事业的发展，这个锅您能背么？不背…… 市面上的ELISA Kit质量良莠不齐，想要挑选到合适的试剂盒还真不是一件很容易的事情。不背锅，咱就坐下来，看看如何擦亮双眼，找对的，不找贵的（当然便宜的更不能找）；找好的，不找差的（怎么样才知道好差呢？） 下面小编“借您借您一双慧眼吧”跟大家一起把这纷扰看的清清楚楚、明明白白、真真切切！（小板凳搬过来，小编要分享经验咯……） 要从如下几个方面来甄别挑选合适的ELISA Kit。 如何选择ELISA试剂盒/挑选ELISA试剂盒 1 查找待测样本的蛋白浓度：可以通过美国国立生物技术信息中心（NCBI）的文献，Universal Protein（uniprot）上给出的蛋白表达量参考值来比较ELISA试剂盒中给出的样本值与报道值是否一致； 2 试剂盒的应用种属、检测样本的种类：除试剂盒特别说明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本种类有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用； 3 试剂盒的检测范围：也就是标曲范围，特别要注意待测样本浓度是否落在标曲范围内，对于浓度很高的样本，可以先进行预实验摸索到比较好的稀释倍数后再大量测定样本。 4 试剂盒中的稀释线性及回收率： a.稀释线性一般指样本稀释线性，是将样本梯度稀释下来，看各稀释梯度浓度是否成线性；参考样本稀释线性可以选择样本的最佳稀释倍数； b.稀释线性也有做加标稀释线性的情况，加标稀释线性是将标准品加入样本中测定加入的标准品浓度测定是否准确；同样也是确定待测样本稀释倍数的参考指标
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ELISA实验技巧：ELISA试剂盒ELISA空白孔的设置
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试剂盒ELISA空白对照有几种： 1. 空气空白\水空白：一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。 2. 底物空白：一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高，同样所有孔数值减掉该孔数值（只加底物和终止液） 3. 酶空白：一般在2步法实验中使用，主要是看酶是否和板有非特异性结合的，一般不做这个 。 ELISA空白孔一般设一个，这是为了减除显色液的OD值。而阴性和阳性标准品**是设2个复孔，虽然有点浪费，但为了确保实验的可靠性，我认为还是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般两个做法，看个人习惯或者说看你们实验室的习惯： 1，什么都不加，然后那个孔按照操作流程来做，这个说法的根据就是空白，也就是什么都没有。 2，加样本稀释液，然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的，加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔一致。 怎麽控制显色时间？ 显色时间要通过预实验找到所测所有sample的显色OD在0.1到2.0的有效range间，用过OPD solution，一般incubation for 15min at RT，测一次然后立即加入stop solution 在测一次。
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ELISA实验技巧：ELISA试剂盒酶标板在上面情况下失效？
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试剂盒的保质期一般都是在一年，如果保存得当的话，不会出现问题的。但不要反复冻融。当然如果是正常的DAS-ELISA检测试剂盒等，应该放在4℃左右冰箱保存。建议ELISA试剂盒解冻后一次用完。已开封或者使用后，剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，ELISA检测试剂盒开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。 但要注意的是，如果将ELISA试剂盒刚从冰箱里面拿出来就立即使用的话，可能会影响，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。 建 议：先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在ELISA检测试剂盒使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。 elisa的板子什么情况下会失效？ 1．通常商品化的酶标板要求密闭4℃保存，长时间暴露或未密闭保存，要么失效，要么结果为非可靠数据；如果是自己包的板，可能效期更短，保存条件要求更高，至于显色剂，正常条件下一天内不会失效的。 2．第三板是否完全按照前两板加所有试剂，如果缺失其中某一步骤，结果也会无色。
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ELISA试剂盒免费代测服务
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
“德尔塔生物”始终以"提供**的质量给客户，为客户的利益服务"为理念。拓展顶尖的产品研发与经验丰富的技术团队，致力于创新产品的研发。目前，实验室占地约800平米，内设国际先进实验仪器设备，能够完成ELISA检测、PCR扩增、免疫学检测等各类生物学实验。德尔塔生物经过10年ELISA试剂盒技术的积累与沉淀，不断创新突破，努力将中国生命科学研究提升到全新的高度！ 服务承诺： 凡购买本公司目录任何一种酶联免疫检测试剂盒，您只需将需要检测的动物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……）种类和检测指标（白介素类、激素类）及标本数量（48T/96T）通知公司业务员即可。 样本要求： 在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。 液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 血 清： 室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。 血 浆： 应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。 尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。 细胞培养上清： 检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
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ELISA试剂盒组成与常见ELISA试剂盒分类
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA快速检测技术越来越多的用于疾病诊断、食品安全检测中，那么ELISA试剂盒的主要组成成份是什么呢？根据ELISA试剂盒的应用范围，可将ELISA试剂盒分为拿几种呢？ ELISA试剂盒主要的组成成份如下： (1) 已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)； (2) C的抗原或抗体(结合物)； (3) 酶的底物； (4) 阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中)； (5) 结合物及标本的稀释液； (6) 洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水； (7) 酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。 常见的ELISA试剂盒 一、食品安全检验ELISA试剂盒 是指食品中的激素、药物、霉菌毒素、过敏原残留、转基因产品的检测试剂盒，以及微生物、维生素等的检测产品。 包括植物病毒、细菌、真菌、植物激素和转基因作物的农业诊断试剂盒，以及动植物疾病诊断类如猪、牛、羊、马等家畜和禽类以及宠物类检测试剂盒。 二、原装ELISA试剂盒以及各类国产ELISA试剂盒 1、细胞因子检测试剂盒： 如白介素、选择素、集落刺激因子，肿瘤坏死因子，干扰素，转化生长因子，趋化因子，细胞因子受体，粘附分子，生长因子，凋亡因子等等 2、心肌梗塞检测ELISA试剂盒 如肌钙蛋白，肌红蛋白，C-反应蛋白等等 3、内分泌检测ELISA试剂盒 如甲状腺，胰腺，性激素，孕酮，睾酮，生长激素，生长抑素，内皮素，皮质醇，骨钙素，催乳素，促肾上腺皮质激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羟色胺，17-羟孕酮等等 4、肝纤维化检测ELISA试剂盒 如纤维连接蛋白，透明质酸，胶原，基质金属蛋白酶抑制因子，基质金属蛋白酶，层粘蛋白等等 5、自身免疫检测ELISA试剂盒 如甲状腺，盐水可提取核抗原抗体(ENA)，抗核抗体，DNA，抗心磷脂抗体，类风湿因子，循环免疫复合物，抗胰岛细胞抗
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ELISA实验方法：ELISA中必要的三个试剂
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定，ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分： (1) 已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂); (2) 酶标记的抗原或抗体(结合物); (3) 酶的底物; (4) 阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中); (5) 酶联物(结合物)及标本的稀释液; (6) 洗涤液; (7) 酶反应终止液。 免疫吸附剂 已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月以上。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。 免疫吸附剂 固相载体 固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。可作ELISA中载体的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。 ELISA载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。 良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的EL
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ELISA实验操作要点：固体样本处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
固体样本处理方法： 固体样本处理原则：称取1g的固体样本，用9g的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。 1、组织标本： 2、切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀浆的话，就用液氮研磨，将植物组织放在研钵中，加入适量液氮，充分研磨。 2、细胞内蛋白样本： 许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。 （1）培养的细胞 A、动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 B、植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 （2）组织的细胞 切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。 3、土壤：称取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分
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ELISA实验操作要点：降低ELISA背景的四点Tips
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
在ELISA试剂盒操作中，我们都认为ELISA实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。在实验结束时，我们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。 一、洗涤很重要 洗涤步骤看似很无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。 二、封闭更关键 封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。 如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。 最常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。 蛋白封闭液则有所不同，是永久的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清
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ELISA实验技巧：酶标板分类与性能判断
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
酶标板作为ELISA检测实验中的辅材，起着举足轻重的作用并直接影响最终实验结果，酶标板的好坏主要取决于其对蛋白吸附的灵敏度、板孔间蛋白吸附能力差异以及所采购酶标板批次间的差异。因此，选择一款蛋白吸附灵敏度高、对蛋白吸附能力孔间差异小、批次间差异小的酶标板产品，是实验者获得可靠、稳定实验结果的保障。 酶标板分类： 根据不同的分类标准，酶标板有着不同的分类。 一、根据孔数，可分为96孔、48孔等，由于酶标板主要是配合酶标仪用，目前市面上的酶标仪最多为96孔，因此酶标板最为常用的也是96孔。 二、根据其底部的不同，又分为平底的，U型底、V型底等。平底的折射率低，适于在酶标仪检测；U型底的酶标板折射率较高，方便加样、吸样、混匀等操作，可以不用放在酶标仪上，直接通过目测观察颜色变化情况，从而判定有无相应的免疫反应。V底的酶标板可以精确的吸取样品。 三、根据酶标板与蛋白和其它分子结合能力的不同，又分为高结合力、中结合力和氨基化等。 （1) 高结合力 此种酶标板，表面经处理后，其蛋白结合能力大大增强，可达300~400ng IgG/cm2，主要结合的蛋白分子量＞10kD。使用该类酶标板可提高敏感性，并可相对减少包被蛋白的浓度和用量，不足之处为较易产生非特异性反应。抗原或抗体包被后，以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位，需使用蛋白作为封闭剂。 （2) 中结合力 此类酶标板经表面疏水键被动与蛋白结合，适合作为分子量＞20kD的大分子蛋白的固相载体，其蛋白结合能力为200~300ng IgG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性，适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体，可降低潜在的非特异性交叉反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。 （3) 氨基化 这种酶标板经表面改性处理后拥有带正电荷的氨基，其疏水键由亲水键取代。该类酶标板适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和pH值，其
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ELISA原理：酶联免疫吸附测定原理与应用方向
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
酶联免疫吸附测定简介 酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay），简称ELISA，是实验室最常用的检测方法。 酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质，其催化效力超过目前所有人造催化剂。ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反应的特异性，也不改变酶本身的活性。因此ELISA具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批标本的检测，广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。 酶联免疫吸附测定原理 ELISA必须遵守以下3个核心原理：1）抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性；2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。在ELISA中酶起到很关键的作用，常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。 酶联免疫吸附测定应用方向 ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用方面可用于疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。按照待测物性质的不同，ELISA反应可以分为抗原检测反应及抗体检测反应。 在医学领域上，能够进行检
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ELISA实验操作要点：酶联免疫吸附试验（ELISA）四大操作要点
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
1 标本的采取和保存 可用作elisa测定的标本十分广泛，体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。 在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。 2 试剂的准备 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 3 加样 在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更
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ELISA实验概念与原理：免疫酶测定法(ELISA)实验原理及类型
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA实验原理及类型 将已知抗体或抗原结合在某种固相载体上，并保持其免疫活性。测定时将待检标本和酶标抗体或酶标抗原按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应，用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离物成分，然后加入底物显色，进行定性或定量测定。 ELISA可用于检测抗体，也可用于检测抗原。根据检测目的和操作步骤的不同，通常有三种类型的检测方法。 1．间接法 此法是检测抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上，加入待测血清(抗体)与之结合，洗涤后，加酶标抗体和底物进行测定。其原理见图一。 图一 ELISA间接法示意图 2．双抗体夹心法 此法常用于检测抗原。将已知抗体吸附于固相载体，加入待测标本(含相应抗原)与之结合，温育后洗涤，加入酶标抗体及底物溶液进行测定。见图二。 图二 双抗体夹心法检测抗原 3．竞争法 此法可用于抗原及半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体上，加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原，使二者竞争地与固相抗体结合，经过洗涤分离，最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。见图三。 图三 竞争法测抗原示意图
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