ELISA直接法和双抗夹心法的原理与优缺点是什么?
发布时间:2022-03-01     作者:德尔塔   分享到:
【产品介绍】:
一、直接ELISA 原理:将抗原与固相载体连接,洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。 优点:操作流程简短,实验步骤少;无需使用二抗,避免了交叉反应;实验步骤少,操作不易出错。 缺点:实验中的一抗需要直接用酶标记,成本相对较高。 二、双抗夹心法ELISA 原理:双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子,但不适用于小分子抗原。将特异性抗体(捕获抗体)与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品,保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体(检测抗体)保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。 双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似,用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。 优点:高特异性,使用的捕获抗体与检测抗体都是检测特异性的;适用于复杂样品,抗原不需要进行纯化即可用于检测;灵活性更大,灵敏度更高,可采用直接法也可采用间接法。 缺点:检测物需要拥有两个以上不同的抗原表位或多个相同的重复表位;不适用于检测小分子物质。