-
冰冻干燥技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
冰冻干燥就是使蛋白样品液在预先冰冻的状态下，用抽真空的方法，不经液态，直接升华，除去其中所含水分，并使样品蛋白成为干燥制剂的过程。在免疫酶技术中，所用的血清、酶等在溶液中容易变性，制成干燥制剂后可长时间地在室温或冰箱（4℃）内保存而不失活，并且便于携带。 之所以要在冰冻是因为被干燥样品所含水分或溶剂由于周围空气压力的减少而增加蒸发速度，并且真空度愈高，溶液沸点越低，蒸发越快。 冰冻真空干燥与真空干燥和喷雾干燥相比，在实验中应用得更多更普遍。 1． 冰冻干燥血清的程序 （1） 先将适量血清倾倒在适当大小的培养皿中（样品液厚度在1cm以下），在低温—20℃以下）下冰冻成固态。 （2） 在冰冻干燥装置中，分别放置固体氢氧化钠和五氧化二磷，真空干燥器上端抽气管通过五氧化二磷干燥管与真空泵相连。 （3） 将冰冻血清块连同培养皿放进真空干燥器内，立即封闭干燥器（事先在盖沿涂上凡士林），开动油泵，一般经5－10h后，即可得冰冻干燥制剂。 （4） 冰冻干燥完毕。首先逐渐打开干燥器顶盖玻璃阀，慢慢放气，待整个系统中压力上升到大气压后，取下样品干燥容器，zui后关闭真空油泵。 2.讨论 （1）冰冻干燥的效果，取决于真空泵的真空度与口径合适的管道。真空油泵选用抽空容量大的，所有接管应力求粗短。 （2）样品如果是溶液，则是水溶液，以避免有机溶剂降低冰点，进入泵内。浓度要适中，不低于1.5%。 （3）样品如用缓冲液作为溶剂，用有挥发性的，例如碳酸盐或醋酸盐缓冲液;若是非挥发性的，则要考虑pH和盐浓度对样品的影响。例如用pH7.0磷酸盐缓冲液，由于冰冻干燥时Na2盐比Na盐先结晶，pH降至约3.5，对样品有害。在样品液中加入少量的明胶、乳糖或葡萄糖等，有利于保存活性。 （4）样品预冻时先放在普通冰箱冷至0℃后，迅速移入一20℃以下的冰箱骤冷冻结。 （5）在抽真空时，样品万一融化，必须重新预冻，并要检查原因。 （6）抽真空约30min，如盛有预冻样品的容器
-
昆明动物所等发现藏族人群血红蛋白浓度的海拔拐点
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
藏族人群的血红蛋白浓度与红细胞增多症检出率随海拔变化的非线性模型。A，血红蛋白浓度；B，红细胞增多症检出率。虚线指示的是血红蛋白浓度与红细胞增多症检出率在人群中出现快速上升的海拔拐点值。近日，*昆明动物研究所宿兵实验室与西藏大学、青海高原医学科学研究院等开展合作，研究发现了藏族人群血红蛋白浓度的海拔拐点。这是该团队在藏族高原适应机制研究中的又一阶段性成果，提出 4500 米可能是世居藏族人群对高原低氧环境适应的临界海拔，初步回答了藏族人群究竟能适应多高海拔的问题。该研究成果于 6 月 7 日在线发表在《美国血液学杂志》上（American Journal of Hematology, doi: 10.1002/ajh.24809）。世居青藏高原的藏族人群可以较好地适应高原低氧环境。与移居高原的平原汉族人群相比，世居高原的藏族人群在生理上表现为具有较高的通气量、较低的肺动脉压以及相对较低的血红蛋白浓度。其中，血红蛋白浓度可以间接地反映人群对高原的适应情况。宿兵实验室与西藏大学高原医学研究中心崔超英实验室、青海高原医学科学研究院吴天一实验室等通过 10 多年的紧密合作，深入当地村镇，实地采集了 20 多个地理区域的不同海拔藏族人群的各项血液、生理和生化指标数据，涵盖从zui低海拔（墨脱县，1,900 米）到极限高海拔（浪卡子县普玛江塘乡，5,018 米）的世居藏族人群。研究人员系统分析了这些藏族人群的血红蛋白浓度随海拔高度变化的模式，发现藏族人群的血红蛋白浓度和红细胞增多症检出率在 4500 米左右是一个拐点，4500 米以上呈现快速的增长。研究结果提示，藏族人群通过调控血红蛋白浓度来适应高原低氧环境的调控机制在 4500 米以上的极限高海拔低氧环境中可能不再有效。西藏大学首届博士生张慧、中科院昆明动物所博士生和耀喜、西藏大学教授崔超英为论文共同*作者，昆明动物所研究员宿兵与副研究员祁学斌为论文共同通讯作者。该研究得到中科院先导 B 项目、国家自然科学基金委“微进化”重大研究计划项目和地区
-
流式细胞技术实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
流式细胞技术实验方法 PI 染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。 2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。 3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。 4、离心，弃上清液。 5、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。 6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min，离心。 7、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。 8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室温避光孵育30min。 9、混匀，过300目筛网，置流式管中， 4℃冰箱保存，待测。 GFP PI染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。 2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。 3、加入2ml预冷PFA，PFA的浓度根据细胞的特点进行调节，4℃固定30min。 以下步骤同PI 染色操作步骤的（4-9） 细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。 2、以冷PBA 1ml，离心洗涤，弃上清液。 3、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul。用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。 4、离心弃上清液。 5、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。 6、向细胞中加入冷PBS 500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。 细胞表面间接免疫荧光染色操作步骤 1-2、同细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤 3、 用PBA稀释的*抗体200ul，对照管加入对应于一抗的正常实验动物IgG，轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育1、5-2h。离心，弃上清。 4、 PBS 1ml离心洗涤1次，以去除多余的未结合的特异性抗体。 5、 PBA适当稀释的荧光素标记的第二抗体200ul。吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min，避光。 6、 PBS 1ml离心洗涤2次。 7、将细胞重新悬浮于500ulPBS中，混匀，置流式管中，避光，4℃冰箱保存，待测。 胞内直接免疫荧光染色操作步骤 1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，15
-
ELISA试剂盒空白孔的设置
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1. 空气空白水空白：一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。2.底物空白：一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高，同样所有孔数值减掉该孔数值（只加底物和终止液）3. 酶空白：一般在2步法实验中使用，主要是看酶是否和板有非特异性结合的，一般不做这个 。 ELISA空白孔一般设一个，这是为了减除显色液的OD值。而阴性和阳性标准品是设2个复孔，虽然有点浪费，但为了确保实验的可靠性，我认为还是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般两个做法，看个人习惯或者说看你们实验室的习惯：1，什么都不加，然后那个孔按照操作流程来做，这个说法的根据就是空白，也就是什么都没有。2，加样本稀释液，然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的，加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔一致。
-
ELISA实验18条通用规则
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA实验18条通用规则 1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。 2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。 3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。 4、实验时，要使底物避光保存。 5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。 6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。 7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。 8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。 9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。 10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。 11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。 12、底物是光敏感的，要在临用前现配。 13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。 14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。 15、待检样品要澄清，否则会影响结果。 16、温浴时间应遵守试剂盒规定。 17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。 18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
-
科学家鉴别出引发罕见心律失常的遗传原因
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
研究人员通过研究鉴别出了一种罕见的致死形式的遗传性心律失常，同时研究者也开发出了一种方法来**这种疾病。心律失常是心脏系统功能失常的一种表现，其往往会引发不规律的心脏跳动，大多数患者会经历心脏乱跳，目前大约有400万人患有不同程度的心脏心率失常。 研究者说道，心律失常的特殊形式通常涉及心房和心室，发病原因极为复杂，目前我们已经开始研究去揭示个体遗传背景影响其心脏心率的差异，我们希望相关研究不仅可以帮助你锁定罕见心律失常的发病原因，同时也希望阐明影响数百万人不规则心律发生的常见形式。 首先研究者对一名37岁存在复发性心室颤动的男性个体进行研究，该患者对标准疗法并没有反应，比如各种药物的**等；在接下来跟踪研究的16个月里，研究者记录了该患者植入除颤器后机体发出的168次监测数据。基于家族史和临床表现，这名患者同时进行了遗传测试来检测引发其心律失常的原因，但研究者并没有鉴别出遗传突变。 随后研究者对患者基因组中的蛋白编码基因进行了测序鉴别出了多种突变体，在这些突变体中研究者发现以一种名为DPP6的基因突变，该突变可以改变心肌处理电脉冲的方法。本文研究对于设计特殊靶向疗法非常关键，目前研究者正在进行研究来揭示引发罕见心律失常的多种原因，而随之开发的相应疗法或许也会明显改善患者的不规则心律。 研究者非常庆幸当前可以获得这么多的初期研究成果，而他们还将重点研究遗传因子和环境因子如何引发心律失常，鉴别出多种形式的心律失常对于理解疾病的进展以及后期开发相应的干预措施或非常关键。
-
上海户实ELISA试剂盒检测几个样品？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
目前大家看到zui多的是：48T的试剂盒可以做42个样本加6个标准曲线；96T的盒子可以做90个样本加6个标准曲线上海户实ELISA试剂盒能检测几个样品呢？48T的可以做41个样本，预留6个标准孔，1个空白孔，作为对照；同样，96T的除掉6个标准孔，一个空白孔，可以做89个样本！另外，公司可以提供免费代测服务，仅收试剂盒的费用即可！
-
沉睡：细胞冻存的方法及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。 细胞冻存操作步骤： 1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液； 2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中； 3. 离心1000rpm，5min； 4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的zui终密度为5×106/ml～1×107/ml； 5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml； 6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者； 7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。 注意事项 1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但为对数生长期细胞。在冻存前一天换一次培养液； 2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤； 3．冻存和复苏用新配制的培养液。 上海德尔塔生物科技有限公司是一家生物高新技术企业，主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。公司专业代理美国BIM、R&D、Amresco、Sigma、 Spectrun、Abcam等各*高质量试剂盒和生物科研试剂，产品涵盖ELISA试剂盒、生物试剂、抗体、对照品、血清、细胞、培养基、实验耗材等，公司产品几乎涉及所有领域，咨询！
-
减少ELISA试剂盒SCI文章实验误差的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1.ELISA试剂盒SCI文章检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。2.使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。3.仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进。4.洗涤彻底，如若洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。5.严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。6.注意ELISA试剂盒SCI文章试剂盒保存期，过保存期的试剂不能使用。7.评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。8.严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。9.加样要准确、快速。如果加样不准确，酶生成物的量不能确定，直接影响显色结果。显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关，所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，ELISA试剂盒SCI文章保存期会缩短甚至失效。
-
青海发光杆菌实验时使用无菌室的要求
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
青海发光杆菌欲使用无菌室之研究人员，请于每学期初先至医学生物科技研究所办理。请填妥申请表格并签名盖章以示认同并愿意遵守使用规范，经核准后领用无菌室大门钥匙及卡片，新进人员请到任后依相同规定办理。申请长期使用者，将排入无菌室值日生之轮值工作。 临时使用者，请到医学生物科技研究所办理无菌室临时使用申请，经塡妥申请表格并签名盖章以示认同并愿意遵守使用规范后，核准使用无菌室，有效期限为14天。每次使用前请先至医学生物科技研究所办理登记预约，再领用无菌室大门钥匙及卡片，并请当天归还钥匙及卡片。 无菌室内禁止任何食物入内，并请换穿实验衣、拖鞋并戴上口罩后进入。 进出无菌室时，请务必关上*道门后再开启下一道门。 闲杂人等不得进入无菌室。因本无菌室有感染性微生物实验进行，为维护生物安全起见，请于下班后确实将无菌室大门上锁。 使用者请务必保持无菌室及操作台台面的清洁与整齐，操作完毕后laminar flow中请收拾干净，确实消毒并将UV灯打开及关闭瓦斯后再行离开，请勿留下私人器材。若有事暂时离开请标示注明。 青海发光杆菌无菌室每周值日生工作项目如下： 废液空瓶中请先加入漂白水150 ml（承载量为3 L废液，含漂白水有效浓度5%），若为含有病毒的废液，请先经高温高压灭菌后再倾倒。倾倒废液时，请先将水打开1分钟后再缓慢倾倒。倒完废液后须令水持续放水1分钟后再行关闭。 不须灭菌的塑料袋请集中后置于洗涤室。玻璃、Tips及Flask等亦请分类包扎后送往洗涤室处理。并于外包装上注名无菌室字样。 Water Bath 请使用一次水，并须添加抗霉菌剂（Sanitizer 1 稀释500倍）。 每周请以2 L清水加10 ml 10% 稀释的漂白水拖地。 每周请以70% 酒精清洁擦拭 CO2 培养箱内侧及铁架，并于水盘中加入含抗霉菌剂（Sanitizer 1 稀释500倍）之一次水。 CO2 或瓦斯桶若有更换，请于工作清单上注明日期。 工作完毕后请于工作清单上签上执行日期，并于周五交接给下一位值日生。 无菌室如长时间未使用，
-
抗原elisa试剂盒实用性主要体现的方面
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
（1）抗原elisa试剂盒质量可靠。在研发过程中选择测定方法，反复优化测定体系、测定条件和操作步骤，并且进行多种生物样品的实际测定验证，以确保测定的专一性、灵敏度、重复性和回收率；在生产过程中实行严格的质量控制，主要试剂选择国外生产商，并且从固定供应商处购买，生产人员经过系统长期培训，并且建立了严格的质量追溯体系。实行先用后付方法，即用户满意后才付款。万一出现质量问题，及时免费提供新试剂盒。 （2）抗原elisa试剂盒操作简便快捷。首先，测定方法以分光光度法为主，并且可以用酶标仪测定，保证绝大多数用户都有相应的仪器和操作经验。其次，保证测定结果可靠的基础上科学简化操作步骤，例如，根据反应步骤配制工作液，显著减少了用户加液次数，尽量统一加试剂的体积，显著减少用户调移液器的次数等等。zui后，操作说明简洁明确，用户一看就懂。 （3）规格合理。抗原elisa试剂盒试剂盒中通常由必须现用现配的试剂。如果保证过大，用户一天内不能用完，会造成试剂浪费。
-
细胞培养板的区别和选择
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
（1）平底和圆底（U型和V型）培养板的区别和选择 不同形状的培养板有不同用途。培养肿瘤细胞，通常是选用平底的，这样便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致。因此做MTT等实验时，无论是贴壁和悬浮细胞，一般选用平底板。测吸光值一定要使用平底的培养板。要特別注意材质，标示“TissueCulture（TC）Treated”是养细胞用的。 U型或V型板，一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫学方面，当做两种不同淋巴细胞混合培养時，需要二者相互接触刺激，这时一般会选用U型板，因为细胞会由于重力的作用而聚集在很小的范围内內。圆底培养板还会用于同位素掺入的实验，需要用细胞收集仪收集细胞的培养，如“混合淋巴细胞培养”等。V型板常用做细胞杀伤、免疫学血凝集实验。细胞杀伤这种实验也可用U型板替代（加入细胞后，低速离心）。 （2）Terasaki板和普通细胞培养板的区别 Terasakiplate主要是用于晶体学研究，产品设计便于对晶体的观察与结构分析。有两种sitting和handingdrop两种方法，两种方法应用产品的外形结构也不同。材料上选择crystalclasspolymer，特殊的材料有利观察晶体结构。 肿瘤细胞培养板主要是PS材料，材料是treatedsufface，便于细胞贴壁生长与伸展。当然还有浮游细胞的生长材料，同时还有lowbindingsurface （3）细胞培养板与酶标板的区别 酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，也可以用来测蛋白浓度；酶标板包括包被板和反应板，一般不用做细胞培养，它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测，需要更高的要求和特定的酶标工作液。 （4）常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量 不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加肿瘤细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
-
培养基的类别和作用分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1）即用型平板培养基杀死或抑制不想要的植物生长培养基的选择性培养基添加物质的介质，介质的选择。如链霉素，氯霉素抑制原核微生物的生长；制霉菌素，灰黄霉素能抑制真核微生物的生长；结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长。结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长。2）自然增殖培养基，不同种类的微生物往往生活在一起，为了将我们需要加一些特殊的微生物，在介质中的微生物对营养物质的爱，以增加该生物的繁殖率，并逐步消除其他微生物，这种介质称为介质的扩散介质，用于筛选和选择性富集。在某种程度上是一种选择性培养基，增殖培养基。3）一些试剂或化学介质的文化附加鉴别培养基，即用型平板培养基表现出明显的差异是很难区分的，从而帮助某些微生物的快速鉴定。这样的媒体称为分化培养基。例如，检查水和乳制品中的肠道致病菌，伊红美蓝琼脂的存在是一种歧视性的普通培养基。 一些媒体具有双重作用的筛选与鉴定。以食品检验中常用的makanke介质为例，它含有胆盐乳糖和中性红。胆盐抑制肠道细菌在细菌中的作用（选择性），乳糖和中性红（指标）能发酵乳糖的细菌（大肠杆菌）区分细菌和不能发酵乳糖的肠道（如沙门氏菌和志贺氏菌）。 此外，根据营养培养基是“完全”，可分为基本培养基，培养基和补充，这个词是用来在微生物遗传学。即用型平板培养基根据生产目的鉴别培养基，可分为种子培养基和发酵培养基.
-
肿瘤细胞冻存保护剂
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
肿瘤细胞很多化合物都可以作为冻存保护剂，它们既可以单独使用也可以联合使用，例如糖、血清和去污剂。虽然冻存没有的准则，但是大家普遍认为二甲基亚砜（DMSO）和甘油是保护活细胞和组织使用zui广泛且zui有效的冻存保护剂。其他冻存保护剂可根据情况使用，可单独使用也可联合使用，包括：聚乙烯乙二醇（polyethylene glycol），丙烯乙二醇（propylene glycol），甘油（glycerine），聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrolidone），山梨醇（sorbitol），右旋糖苷（dextran），海藻糖（trehalose）。冻存组织和整个器官的需求，促进了冻存方法的发展，新方法也提高了冻存肿瘤细胞和有机体的复苏。这些方法包括改变冻存保护剂的浓度和加入添加剂，避免冻存过程引发的细胞调亡或 程序性死亡。多年来人们一直认为，是冻存过程中产生的细胞内物理变化或损坏，造成冻存后细胞的死亡。而zui近有研究发现，一些更为精细的胞内活动可能导致了细胞死亡，而这些活动可在一定程度上受控于适当的冻存添加剂。冻存过程中，冻存保护剂有多种功能。例如，DMSO 可以降低冰点，促进细胞在胞内冰晶形成之前脱水更加完全。普遍认为，当冻存保护剂可有效穿透细胞，延迟胞内冰晶形成，降低溶液效应时，冻存保护的效果*。另外，需要根据冻存的细胞类型来选择冻存保护剂。对绝大多数细胞来说，甘油是更好的选择，因为它的毒性比DMSO 小。但是，DMSO 具有更好的渗透性， 通常作为较大型较复杂的细胞冻存，如原生生物。在添加到细胞悬液之前，冻存保护剂应该用新鲜培养基稀释到适宜浓度，这能zui小化潜在的化学反应损害，并确保肿瘤细胞能均一接触到保护剂，减少毒害效应。DMSO 和甘油通常使用的浓度范围为 5-10%（v/ v）。除了用于植物细胞，二者一般不联合使用。
-
血管内皮细胞特性
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1．血管内皮细胞重要标志（1）转化细胞第Ⅷ因子关连抗原，可以由全身所有血管内皮细胞产生，检测这一因子主要用相应抗体。VWF有其特异性，人的VWF抗体对牛的内皮细胞没有交叉反应。兔疫荧光间接法测定该因子，阳性细胞出现细长的荧光颗粒，在核周围的颗粒较密，细胞边缘颗粒较少。（2）Weibel-Palade小体，该小体是血管内皮细胞又一特异性的标志。电子显微镜下，呈现0.1～0.3μm,长0.5～5μm的椭圆形棒状结构。上述的VWF就是该小体产生的。2．培养的大动脉内皮细胞形态培养的内皮细胞从形态学上可分为两类。其一，占培养内皮细胞的大部分，直径在50～70μm，类圆形或多角形的小型转化细胞，这一类被称为典型内皮细胞，呈单层铺路石样排列，占婴幼儿、青少年血管内皮细胞的大部分。另一类是直径在100～200μm的大型内皮细胞，这类细胞通常带有两个以上的细胞核，被称为非典型内皮细胞。非典型内皮细胞是成人的大动脉内皮细胞，与动脉硬化和老化有关。一般来说，血管内皮细胞随着年龄的增加，使典型的内皮细胞慢慢地转变为非典型内皮细胞；年龄越大，非典型的内皮细胞含量越高。细胞生长方面，动脉内皮细胞比静脉内皮细胞增殖能力强，婴幼儿血管内皮细胞比成人或高龄者内皮细胞生长能力强，体外培养的这两种细胞与对照组转化细胞间存在显著差异。
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信