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小鼠疾病模型构建与药物临床前评价研究的思考
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
小鼠疾病模型在药物临床前评价研究中面临的挑战？ 小鼠疾病模型在转化医学研究中已发挥了极其重要的作用，无论是致病基因功能还是新药研发的临床前评价研究等方面。然而，关于小鼠疾病模型应用于药物临床前评价研究预测有效性的问题，也一直是科学家及生物医药企业十分关注与思考的问题。已有的经验教训表明，如何构建小鼠疾病模型，以及如何从已有的模型中选择合理的小鼠疾病模型等，都会直接影响到药物临床前评价研究结果的转化效率。比如，由于肌萎缩侧索硬化（ALS）小鼠疾病模型的错误选择，导致大多数临床前验证实验通过的药物，到了临床试验阶段，却以失败告终。 ALS也叫运动神经元病(MND), 影响中枢神经系统上下运动神经。ALS患者出现扩张性肌肉消耗和萎缩，导致瘫痪，疾病出现后3-5年死亡。ALS分为家族性(fALS,10%) 和散发性(sALS, 90%)。目前已经报道约50多个基因突变与ALS相关，但病理性突变相关致病基因多集中在SOD1, C9ORF72, FUS和TDP-43。 ALS小鼠疾病模型的构建为深入探索与揭示ALS病理学机制，以及开展药物临床前评价研究等，发挥了重要作用。比如，最早的SOD1基因突变转基因小鼠疾病模型，为ALS的早期研究铺平了道路。1993年，SOD1作为第一个ALS致病相关基因被发现，该基因突变占家族性ALS∼20% 、散发性ALS∼2%, 且该基因编码区域突变数超过150个，可以引起显性毒性作用。目前已成功构建了超过20多种啮齿类动物模型，多为人SOD1基因突变体的随机过表达小鼠模型，而SOD1基因敲除小鼠模型却未见任何表型。 人SOD1G93A点突变转基因小鼠，是最早、且应用最多的ALS小鼠疾病模型，用于约97%的ALS药物临床前评价实验研究。其次为SOD1G37R突变小鼠。应用人SOD1基因启动子及调控序列，表达人SOD1基因G93A突变体，构建不同人源化SOD1突变体转基因小鼠模型。研究表明，有SOD1G93A突变小鼠含有25个拷贝的人SOD1G93A突变体，比内源性小鼠SOD1基因的表达量高约13倍。初步的研究发现，不同的人SOD1基因突变转
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饮食热量限制对记忆性T细胞的调节作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
热量限制(Caloric restriction，CR)是指在没有营养不良或不缺乏维生素、矿物质或氨基酸的情况下，减少热量摄入。好处包括延长寿命、改善代谢状况，以及减少心血管疾病、神经退行性变、基本炎症水平和某些类型癌症的发病率。 CR对CD4和CD8记忆T细胞的迁移、内在细胞状态和功能有显著的影响。 在小鼠中，50%的CR可以诱导循环记忆T细胞从次级淋巴组织和血液重新分布到骨髓(BM)。CR期间，幼稚的B细胞和单核细胞也会在BM中积累，这个Niche可能作为免疫细胞的“避风港”或“代谢避难所”。 记忆T细胞的再分配是由类固醇激素、糖皮质激素协调，它们可以诱导BM同源受体CXCR4在T细胞上的表达。与此同时，在CR期间对BM进行了大量的重塑，以富集T细胞营养因子、红细胞和脂肪细胞，所有这些都能协同招募、保留和保护记忆T细胞。 在CR**过程中，BM脂肪细胞是一个重要的激素来源，可以弥补外周白脂肪组织(WAT)的损失。外周WAT是感染清除后记忆T细胞主要储存部位。在外周WAT中，记忆T细胞表现稳态增殖增加，增强的效应功能和脂肪酸的利用。 饮食限制诱导记忆T细胞回到骨髓（文献1） 虽然CR对宿主的生理学产生了一些有益的改变，在这种背景下，降低mTOR信号可能是增强记忆T细胞功能的核心。rapamycin降低mTOR信号，可诱导细胞进入CR状态，在病毒感染时足以增强记忆T细胞的发展、维持和保护功能。 总的来说，低食物摄入和充足的营养，可能是促进寿命和一般健康状况的理想状态。但是CR期间，记忆T细胞所使用的代谢途径和燃料来源仍然不清楚；此外CR的持续时间和程度，也没有系统评估；CR的干预方式；使用年龄(老年显示CR没有明显效果），因而合理使用依旧需要大量研究。 营养不良和食物代谢物减少 虽然减少热量摄入，会增加记忆T细胞的功能，但如果食物摄入严重减少，营养不足就会严重危害免疫系统。营养不良与慢性感染、低级别炎症状态、肠道渗透性增加和肠道微生物群的生物失调相关。 饮食蛋白质严重减少（0.6
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pH校准标准操作程序 （SOP）
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
pH校准标准操作程序（SOP）的目的是为常规校准步骤提供一个方法，以保证pH测试的精度。 推荐设备 pH计 pH电极和温度电极 磁力搅拌器和搅拌子 50毫升的烧杯和200毫升的废液杯 pH 4.01 缓冲液或同等缓冲液 pH 7.00缓冲液或同等缓冲液 pH 10.01 缓冲液或同等缓冲液 表面皿或封口膜 去离子水或者超纯水 校准频率 至少要在使用仪器进行测量前的当天进行校准。在一天测量结束时进行校准后检查，以确定仪器是否偏离校准。 pH校准和测试建议 1. 根据样品的pH值选择合适缓冲液标准液，样品的pH值应该在选择的缓冲液值之间。如果样品的pH值未知，则需要三种标准品进行校准：一种接近于7pH值，一种至少低于5 pH值的缓冲液，另一种至少高于9pH值的缓冲液，如果样品的pH值不在选择的校准溶液范围内，那么需要重新选择合适的校准溶液。 2. 如果电极是可填充的，请在校准和测量过程中打开填充孔，以确保填充液通大气。电极内部的填充液液位必须比缓冲液或样品液位至少高出两厘米。 3. 在校准/测试缓冲液或样品之间，用去离子水冲洗，并用滤纸吸去多余的水。然后再放入下一个缓冲液或样品。不要摩擦或擦拭电极玻璃球泡，减少极化引起的误差。 4. 请勿重复使用缓冲溶液，也不要将使用过的缓冲溶液倒回到原来的存储容器中。 5. 用磁力搅拌器适度匀速地搅拌缓冲液或者样品。 电极的准备 根据电极用户指南或说明书中的说明准备pH电极。校准之前，将电极存放在pH电极保存液中。 校准缓冲液准备 1.在校准之前，将约30 mL的pH 10.01缓冲液倒入50 mL的烧杯中，并用表面皿或封口膜覆盖烧杯。 2.在校准之前，将约30 mL的pH 7.00缓冲液倒入50 mL的烧杯中，并用表面皿或封口膜覆盖烧杯。 3.在校准之前，将约30 mL的pH 4.01缓冲液倒入50 mL的烧杯中，并用表面皿或封口膜覆盖烧杯。 4.再分别将约30 mL的pH 10.01、7.00和4.01缓冲液倒入单独的50 mL烧杯中。在校准过程中，将这三个烧杯中的缓冲液作为润洗
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三级淋巴组织构建炎症性疾病的免疫微环境
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
在经典淋巴器官之外出现的淋巴组织，也称之为异位淋巴组织/器官。因为存在于中枢淋巴器官（初级淋巴器官），外周淋巴器官（次级淋巴器官）之外，也称之为三级淋巴器官（tertiary lymphoid organs）。 异位淋巴器官被证实参与了慢性炎症性疾病（包括自身免疫性疾病）以及肿瘤免疫微环境。 解剖学上，第三淋巴器官多定位于胚胎发育不易发生淋巴组织的器官，如脑膜、唾液腺、肾脏、血管、心脏、滑膜等。 异位淋巴组织发生 与正常淋巴组织发育不同，在缺乏前体LTi细胞的情况下，第三级淋巴器官也开始出现。 起始阶段（Initiation） 异位淋巴组织生成的起始阶段是由一种局部炎症微环境驱动的，主要参与的免疫细胞包括：分泌IL-17的CD4+细胞，、NK细胞、中性粒细胞、γδT细胞和ILC3等。 这些免疫细胞与成纤维细胞、血管周围成纤维细胞、间充质细胞和间质细胞形成紧密连接，释放细胞因子如IFN-γ、IL-1β、TNF等。这些细胞因子促进粘附分子表达以及趋化因子（即CXCL12、CXCL13、CCL19和CCL21）释放，创建淋巴结构形成的基础空间环境。 归巢阶段（Homing） 释放的趋化因子，招募趋化T细胞，B细胞等更多的免疫细胞至炎症局部三级淋巴器官形成空间，基质细胞等持续释放淋巴细胞存活细胞因子等（BAFF，IL-7，CXCL12），支持迁移过来的淋巴细胞持续存活，活化，增殖形成异位淋巴器官。 维持异位淋巴组织（Maintenance） 激活的B细胞和T细胞释放LTα1β2，驻留的间质细胞、浸润巨噬细胞、树突状细胞和其他实质细胞产生的趋化因子（CCL19/21，CXCL12/13），FDCs促进生发中心形成，高亲和力抗体产生。B细胞也产生FDCs分化需要的 LTα1β2。 B细胞、T细胞和树突状细胞向三级巴组织的募集，激活内皮细胞的高内皮微静脉样表型。 在胚胎和新生儿时期，高内皮微静脉在所有次级淋巴器官中发育，对启动和维持免疫反应至关重要，因为它们从血液中提取幼稚和记忆淋巴细胞，并将它们输送到淋巴结内的抗原呈递细胞。 这些有助于淋巴细
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丝氨酸代谢抑制抗病毒先天免疫的机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
先天免疫是宿主抵御微生物感染的第一道重要防线，宿主代谢障碍如何影响抗病毒先天免疫是一个有待研究的有趣问题。越来越多的证据表明，胆固醇和葡萄糖代谢网络与先天免疫激活共同调控以控制病毒感染。但是，在很大程度上还未知其他宿主代谢活动（例如氨基酸代谢）是否以及如何参与抗病毒先天免疫。 丝氨酸代谢促进肿瘤的发生并调节免疫细胞的功能，但是它是否也有助于抗病毒的先天免疫尚不清楚。近期，天津医科大学基础医学院免疫学系余秋景教授课题组和药理学系王霆教授课题组合作在Cell Metabolism上发表了题为“Serine Metabolism Antagonizes Antiviral Innate Immunity by Preventing ATP6V0d2-mediated YAP Lysosomal Degradation”的文章，发现了PHGDH和关键的免疫代谢物丝氨酸在削弱抗病毒先天免疫中的关键作用及机制，并提出调控丝氨酸代谢可作为一种潜在的抗病毒疗法。 丝氨酸可以从头合成或从微环境吸收。在从头合成过程中，糖酵解的3-PG最终可以通过一系列酶促反应转化为丝氨酸，其第一步是由磷酸甘油酸脱氢酶（PHGDH）催化。为了研究PHGDH是否在抗病毒先天免疫中起作用，研究人员委托赛业生物构建了Phgdhfl/flLyz2-Cre+小鼠，这些小鼠通过髓样细胞特异性基因Lyz2（Lyz2-Cre）表达的Cre重组酶，在髓样细胞中特异性地缺失了loxP侧翼的Phgdh等位基因。此外，他们还利用小干扰RNA（siRNA）敲低RAW264.7细胞中的PHGDH、在HEK293T细胞中过表达PHGDH，感染病毒后IFNB1mRNA水平变化均说明，PHGDH在各种细胞类型中均负调控RNA或DNA病毒诱导的IFN-b信号传导。 为了探索PHGDH介导的抑制IFN-b产生的机制，研究人员采用萤光素酶报告基因，发现PHGDH的缺乏促进了DNA病毒、RNA病毒、TLR3和TLR4介导的IFN-b的产生，而且所有这些都涉及到聚集在TBK1节点上的信号通路，然后，他们检查了Ser172处TBK1的磷酸化以及Ser396处的关键转录因子IRF3的磷酸化，发现PHGDH通过抑制TBK1-IRF3轴来抑制IFN-b的产生。 丝氨酸衍
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Sirp基因敲除小鼠助力肿瘤研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
想调整研究方向，获得学术研究突破口？想获得论文选题思路，提高发文命中率？你需要了解学科发展态势和未来走向！赛业生物专栏《Gene of the Week》每周二会根据热点研究领域介绍一个基因，详细为您介绍基因基本信息、研究概况和应用背景等，助您保持学术研究敏锐度，提高科学研究效率，期待您的持续关注哦。今天我们要讲的主角是“不要吃我”信号CD47的好搭档Sirpα。 基因基本信息 备注：标有√的意为赛业红鼠资源库有该种保存状态的小鼠 Sirpα的表达与结构 信号调节蛋白α(signal regulatory protein α，Sirpα)，也称为Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase substrate-1 (SHPS-1)，在髓系造血细胞（e.g. 巨噬细胞、树突状细胞）和神经细胞表面均有表达；而其配体CD47，也称整合素相关蛋白(integrin-associated protein，IAP)，广泛表达于几乎所有正常细胞的表面。 Sirpα是一个跨膜蛋白（图1）。其胞外域中含有3个Ig样结构域（1个V样结构域和2个C1样结构域），胞内域的C端含有2个酪氨酸磷酸化位点。Sirpα的酪氨酸磷酸化位点能与蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2结合，从而激活这些磷酸酶。Sirpα的配体CD47属于Ig超家族，具有1个V型Ig样胞外域，5个跨膜段和1个短的胞质尾。Sirpα的IgV样结构域能与CD47的IgV样结构域反式结合，并促进Sirpα胞内域中的酪氨酸磷酸化，同时，这种结合也能激活CD47的下游信号蛋白Cdc42，一个属于Rho-家族的GTP-结合蛋白。此外，CD47还能通过胞外域与整合素顺式结合，调节其功能。 图1. CD47-Sirpα信号通路[1]。 Sirpα-CD47信号通路 Sirpα主要表达在巨噬细胞表面，与其他细胞上的CD47结合后，可向巨噬细胞传递抑制性信号，抑制巨噬细胞对靶细胞的吞噬作用。因此，这条通路可用来识别己细胞（self）与非己细胞（non-self）。一些肿瘤细胞利用这个机制，高表达CD47来向巨噬细胞发出“别吃我（Don’t eat me）”信号，来进行免疫逃逸（图2）。 图2. 通过Sir
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ELISA试剂盒(酶联免疫分析试剂盒)包被用抗体和抗原的选取
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
ELISA试剂盒(酶联免疫分析试剂盒)包被用抗体还是抗原的选取？ （一）包被用抗原： ELISA试剂盒(酶联免疫分析试剂盒)用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于ELISA，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCV ELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。 （二）包被用抗体： ELISA试
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瞿建国先生与何晓文博士做客节目《思创空间》 细胞银行精彩问答汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
近日，上海人民广播电台长三角之声《思创空间》节目，邀请原能细胞科技集团创始人瞿建国先生，上海原能医学技术有限公司联合创始人、执行副总裁兼CSO何晓文博士，与主持人虹见一起探讨细胞存储与细胞银行的意义与价值，分享细胞产业发展前景。 其中干货满满 一起跟随小编来分享吧！ ↓↓ 问：什么是细胞银行？ 瞿建国：把我们年轻的、有活力的、健康的细胞采集储存起来，到了我们年纪大或者需要的时候，把它取出来使用，这是细胞库的概念。真正发展成为细胞银行，需具备三点：1、细胞资源是非常有价值的；2、细胞冻存需做到永久保藏；3、未来细胞资源可以保值增值。 问：到底该存什么样的细胞，它具备什么特性？ 何晓文：很多细胞可以储存，主要是免疫细胞与干细胞。来自于人体的免疫细胞，它具备抵抗细菌、病毒，甚至是**肿瘤等作用；干细胞有一定的分化能力，具有营养、组织、支持等功能，常见来源于围产组织，如生孩子时的胎盘、脐带、羊膜等，这种围产组织里边含有各种成体干细胞。除了来源于医疗遗弃物的这个围产组织外，还有小朋友换牙的牙髓干细胞，成人智齿的牙髓里边也富含干细胞，还有脂肪组织里边也富含干细胞。 细胞储存尽可能的维持细胞的多样性，不要对它进行选择。因为未来随着科学、医学的发展，哪怕是现在看起来是占有很小组份的细胞， 未来它在机体里也是有用的，所以这也对储存的这个技术带来了很多挑战。 问：细胞存储、细胞银行的价值体现在哪些方面？ 瞿建国：现在科研、医疗、临床都涉及到生物细胞的存储问题。细胞银行的概念是惠及百姓的，不要等到生病、年老或研究制药时才考虑存储细胞，趁年轻身体机能好的时候存储健康细胞，譬如孩子出生时的围产组织等，将这些被视为医疗废弃物但实则是珍贵的细胞资源保存起来，是非常有意义的事情。 问：细胞存储后可以用于哪些方面？ 瞿建国：细胞的作用很大，细胞制品可以治病救人，可以保健抗衰美容等，还有用于免疫**，代谢性疾病，
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外泌体研究课题中常见问题集合与解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
常用外泌体研究样本来源有哪些？ Chris Gardiner等2016发表的调查报告有报道细胞培养上清液是最常用来提取外泌体的样本来源，除了细胞上清，其他最常见的体液是血浆(47%)、血清(22%)、尿液(14%)、脑脊液(8%)和乳汁(5%)。 (Gardiner C et al., 2016, J Extracell Vesicles) 逍鹏生物Dr.Cell实验室从外泌体NTA检测样本中统计分析了其中1620例，对其外泌体来源进行分析，结果如下图，统计结果表明外泌体来源趋势与以上文献报道基本一致。NTA检测样本的外泌体最常用来源依次是细胞培养液、血清、血浆、组织、尿液等。 我们预计当外泌体更多的应用于诊断与预后评估时，血清与血浆样本比例应会大幅 持续上升。 02 如何鉴定提取出来的外泌体？ 以目前外泌体的分离手段很难获得十分纯净而且单一的外泌体样品，也没有任何一个单一实验可以确定外泌体的存在。根据国际细胞外囊泡协会发表的指导手册《MISEV 2018》，外泌体特征鉴定通过NTA测粒径分布、TEM电镜分析形态、WB检测标志蛋白三项来验证。NTA分析样品中外泌体的粒径分布和颗粒浓度，TEM电子显微镜来观察样品中外泌体的形态特征，WB检测外泌体标志蛋白。 03 外泌体如何保存？ 不同时间、温度的保存对不同的外泌体样本影响不一；如果研究方向为外泌体形态特征、蛋白或其他功能性分析，在分离后新鲜使用为最佳。目前主流的建议是提取出外泌体后**是新鲜使用，或低温短期保存。 短时间几天内可以放4°C，长时间储存置于-80°C保存。 04 NTA检测可以进行外泌体定量吗？ NTA是物理方法，基于颗粒的布朗运动，因为不管是脂质体、蛋白，甚至是PBS中的颗粒（部分实验室自行配置的PBS中发现大量颗粒，推荐在外泌体研究中，用VC品牌的PBS（P/N:C3580-0500），避免干扰），都会被软件读取，并不能分辨是否为外泌体。但NTA提供的粒径分布可供判断所提取的内含物是否在外泌体的粒径范围内；另外，在做外泌体分泌的对比实验中，NTA提供的浓度值也可以作为重要的
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FluidFM 技术在活细胞单细胞组学领域的最新进展
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
本文转载自 北大生科院仪器中心 最新进展文章导读： 单细胞测序在疾病诊断和细胞异质性研究中发挥着重要作用。然而目前的单细胞测序手段需要将细胞消化并裂解才能够进行，而细胞状态在这一操作中不可避免的会发生改变，因此很难掌握细胞真实的基因表达情况， 尤其对于基因通路上表达变化的检测极为不利。近期苏黎世联邦理工学院使用FluidFM创建了一种原位活细胞基因测序方法，这种方法能够在不杀死细胞的情况下完成对细胞的测序工作。通过这种技术该团队成功完成单细胞RNA基因测序，并通过这种方法检测到了细胞的基因表达和细胞周期状态变化。下面本文就这项工作的具体内容进行阐述。 1. Live-Seq测序技术简述 由于单个细胞的RNA总量仅有10 pg。为了实现无损的单细胞测序，该团队首先使用FluidFM对现有的scRNA-Seq单细胞测序的方法进行了优化。为了尽可能的接近Smart-Seq的测试条件，该团队采用了首先将缓冲液吸入探针，然后再进行细胞提取的操作。这样可以确保所提取的RNA能够第一时间与缓冲液混合，从而避免RNA的降解。通过这一方法，该团队成功实现了IBA细胞的测序，证明了这种方法的可行性（图1）。 图1. Live-Seq技术a. Live-Seq技术的示意图和代表图片，黑色箭头指代液面；b. IBA细胞测序的质量控制图（n=10）。 2. Live-Seq技术分析细胞系和细胞状态 为了证实Live-Seq的有效性，该团队对多种细胞系进行了测序，这其中包括IBA细胞、小鼠脂肪干细胞和祖细胞（ASPCs）以及脂多糖处理的RAW264.7细胞和Mock处理的RAW264.7细胞。通过对这些细胞系进行测序发现，该方法能够区分上述细胞系，并且在特征基因检测中能够找到每种细胞所对应的特征基因，证明了Live-Seq方法的有效性（图2）。 图2. Live-Seq单细胞测序区分细胞型及细胞状态a. 实验方法示意图，使用LPS和PBS对RAW细胞进行处理；b. 前500个高度易变基因的tSNE图；c. 前十的细胞型、细胞状态差别基因的热图；d. 小鼠基因图谱预测，使用前100个
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藻类光合生理研究技术方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
藻类光合生理研究技术方案：FL双调制高灵敏度、高时间分辨率叶绿素荧光测量，光合放氧测量，光合热释光测量 AlgaTech®藻类在线监测技术方案：叶绿素荧光监测，溶解氧、pH与温度监测、多参数营养盐监测 手持式藻类光合生理测量技术：叶绿素荧光测量、光谱测量、溶解氧测量，藻类光合生理测量研究尽在掌握中！ 77K、叶绿素荧光光谱测量技术方案： 参考文献：R.Kana. Application of spectrally resolved fluorescence induction to study light-induced nonphotochemical quenching in algae. Photosynthetica, 2018; Spectral characteristic of fluorescence induction in a model cyanobacterium Synechococcus sp.(PCC 7942). Biochimica et Biophysica Acta, 2009.
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AlgaTech®藻类光谱成像分析全面技术方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
易科泰生态技术公司提供藻类光谱成像分析全面技术方案： 叶绿素荧光成像技术、多光谱荧光成像技术 高光谱成像与高光谱荧光成像技术 藻类高通量表型成像分析平台 配套藻类培养与在线监测 AlgaTech®高通量藻类表型分析平台在海洋大学安装运行：该平台由易科泰研发设计，集双轨式自动升降控制、高精度移动扫描平台、多光谱光源系统，高光谱成像、叶绿素荧光成像、多光谱荧光成像、RGB成像分析，可为藻类表型和生理生态研究提供全面、一站式解决方案。左图为平台安装测试，右图为海带光高光谱成像分析。 自左到右：.土壤小球藻环境毒理学研究（引自：Sun-Hwa Nam etc. Quantitative assessment of photosynthetic activity of Chlorella (Class Trebouxiophyceae) adsorbed onto soil by using fluorescence imaging, Environmental Pollution, 2019）；微拟球藻叶绿素荧光成像（Fo）（引自：Giorgio Perin etc. Generation of random mutants to improve light-use efficiency of Nannochloropsis gaditana cultures for biofuel production, Biotechnology Biofuels, 2015）；莱茵衣藻生长曲线与非光化荧光淬灭NPQ（引自：Silvia Berteotti etc. Increased biomass productivity in green algae by tuning non- photochemical quenching, Nature Scientific Report, 2016） 左图：高光谱成像技术分析藻类生长（Pauliina Salmi etc. Rapid Quantification of Microalgae Growth with Hyperspectral Camera and Vegetation Indices, Plants, 2021）；右图：栅藻脂质含量（Xiaoli Li etc. In situ and non-destructive detection of lipid concentration of Scenedesmus obliquus using hyperspectral imaging technique, Algal Research, 2020）
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猪等孢球虫通用PCR检测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
猪等孢球虫通用PCR检测试剂盒说明书 本产品是即用型PCR试剂盒的改良产品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等所有PCR 所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR 反应，具有广泛的用途。 . 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR 实验。 2. 快捷，操作步骤已经限度地简化，能减少污染，降低实验误差。 3. 本产品A 型含电泳染料，PCR 反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。 4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能扩增各种常见的DNA 样品。 5. 产物可直接用于T 载体克隆，不需要额外的加A 反应。 使用及效果：将本产品5 μL 与用户自备的模板，引物和水共5 μL 混合后，直接进行PCR反应（PCR 参数由用户自己确定），反应结束后直接取0 μL 电泳检查扩增结果。 技术特点： 、准确可靠，临床双盲对照试验＞000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。 2、高灵敏：可检测低至0ng的人基因组DNA。 3、快速：整个检测流程只需3小时。 4、简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。 5、防污染 6、高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。 组成及试剂配制: 、 酶标板：一块（96孔） 2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前5分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约0分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，00 U/L，50 U/L，25 U/L，2.5 U/L，6.25 U/L，3.2 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制00 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3、 样品稀释液：×20ml。 4、 检测稀释液A：×0
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SCID小鼠（重度联合免疫缺陷小鼠）
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
SCID小鼠，即重度联合免疫缺陷（server combined immune-deficiency，SCID）小鼠，最早在1980年由Dr. Bosma及其团队在C.B-17/Icr小鼠中发现（这个品系后被命名为C.B-17 SCID小鼠）。SCID小鼠具有16号染色体上的隐性基因突变（PrkdcSCID）。Prkdc基因编码了DNA依赖性蛋白激酶的催化亚基（DNA-PKcs）。该蛋白参与了T、B 细胞的 T 细胞抗原受体（TCR）、B 细胞抗原受体（BCR）基因的V（D）J重排（图1）。因此， SCID小鼠缺乏有功效的T、B淋巴细胞。大多数纯合子体内缺乏可检测水平的IgM，IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3或IgA，且其胸腺，淋巴结和脾滤泡几乎没有淋巴细胞。 但随着年龄的增长，部分SCID小鼠会出现免疫泄露（Leakiness）--小鼠体内产生少量有功能的T、B细胞和免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）。这种现象在non-SPF条件下饲养的SCID小鼠中发生率更高。目前，SCID小鼠产生免疫泄露的分子机制仍不明确，且没有一个明确的判定标准（Jax公司认为血清Ig含量>1 ug/ml 的SCID小鼠属于“leaky”）。并且，这种免疫泄露在不同遗传背景的SCID小鼠中的发生率不同：一般来说，SCID小鼠在C57BL/6J 和BALB/c 背景上的泄漏率高；在C3H背景上较低；而在NOD背景上极低。 图1. V（D）J重排[1] 此外，SCID小鼠对辐照敏感。已知辐照会造成DNA双链断裂，而DNA-PK参与了DNA双链断裂的修复（图2）。因此，含有PrkdcSCID突变的细胞由于无法有效修复其受损DNA，会导致细胞损伤和死亡。 图2. DNA PKcs参与了DNA双链断裂的修复[2] 相对于只有T细胞缺陷的裸鼠，SCID小鼠免疫缺陷程度更高，在成瘤所需肿瘤细胞接种量以及成瘤速度上都有一定优势，可以更有效地进行异种移植，包括人源肿瘤细胞系异种移植(cell derived xenograft, CDX)和人源肿瘤组织异种移植（Patient-derived tumor xenograft, PDX）等。此外，通过将PrkdcSCID突变引入不同遗传背景的小鼠品系中，可以得到各具特点的SCID小鼠（表1）。 表1. 不同SCID小鼠的特点比较[3-
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基于非靶向的体内微生物代谢谱识别食品基质中的病原菌
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
发表期刊：Food Research International 影响因子：5.339 平台：SPME/GC × GC- QTOF-MS 研究对象：微生物发酵液、空白发酵液、含菌食品（虾、牛肉、猪肉和牛奶）、空白食品。 1.研究背景 目前，食源性病原菌是影响食品安全的首要因素，建立一种操作方便，有效实用的食源性病原体检测方法显得尤为重要。微生物挥发性有机物（MVOCs）检测已经成为揭示食品中病原菌腐败和污染的一种新颖且有效的手段，但是，MVOCs种类繁多，受微生物种类、生长基质、环境条件等多种因素影响，导致了MVOCs浓度差异巨大。 本文采用的新型的全二维色谱技术和疏水-亲水平衡固相微萃取（SPME）探针技术具有物质分离效果好，捕获代谢物范围广的优点。旨在通过对不同菌种的MVOCs检测，寻找到不同微生物挥发性代谢标志物。从而建立一种食源性致病菌识别新方法。 2.研究思路 3.研究结果 1. 质谱方法优化 本文的适用性验证基于聚合物复合萃取探针，将该探针与三个商用萃取探针相比较，包括DVB /CAR/ PDMS(50/30μm), PDMS / DVB(65μm)和PDMS(75μm)。从提取的Shigella sonnei MVOCs的总峰面积来看1-1，新型SPME探针具有较大的峰面积，提取效果**。结合定性比较结果，PDMS或CAR/PDMS对双极性化合物(如醇和酮)的灵敏度较低。与DVB/CAR/ PDMS相比，新型SPME探针具有更高的保留能力，更适合于提取不同理化性质的MVOCs。因此，新型的SPME探针有助于提供更全面的MVOCs谱，为我们后续的实验提供了有力的工具。考察了气相炉升温速率和萃取时间对萃取效果的影响。优化结果如图1-2，1-3所示。在初始温度不变的条件下，以5℃ /min的加热速率从50 ℃~ 230℃，对MVOCs的检测灵敏度优于其他加热方案。同样，为了获得更好的提取效果，根据图1-3中总峰面积随提取时间的延长而增加的结果，选择60 min作为最佳条件。 图1 1-1SPME探针纤维（左）；1-2温度程序（中）；1-3提取时间（右） 2. MVOCs的鉴定与分析 优化后，将所建立的方法应用于5种食源性致病菌体
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