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中性粒细胞分离的方法
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
标准方法：Ficoll-泛影钠（Ficoll-Hypaque）密度梯度及红细胞裂解法。 1.取一50ml聚乙烯管，无菌采集人外周静脉血，加4.4ml3.8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min，离心，室温。 2.吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制备无血小板血浆（platelet-poor Plasma, PPP）。 3.余下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000，用无菌生理盐水配制)，并用生理盐水（0.9%）调节最终体积至50ml，轻轻、彻底混匀。室温沉降30min。 4.吸出富含白细胞的上层液，275gX6min。 5.沉淀的细胞用8mlPPP-生理盐水（1：4）重悬，并移到15ml离心管中。 6.悬液细胞上面加入3mlFicoll-Hypaque（密度1.077），750gX5min，室温。 7.吸取富含中性粒细胞和红细胞层，用0.155M NH4Cl重悬细胞，使红细胞裂解，然后中性粒细胞用含0.25%BSA Hanks平衡液（HBSA，无钙）洗2次，最终用HBSA（含钙）重悬。 8.用此法可得95%以上的中性粒细胞。
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Percoll细胞离心法
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
1.先制备Percoll储存液：Percoll原液（100%）:0.9%NaCl的体积比为9：1。 2.取一50ml聚乙烯管，无菌采集人外周静脉血，加4.4ml3.8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min，离心，室温。 3.吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制备无血小板血浆（platelet-poor Plasma, PPP）。 4.余下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000，用无菌生理盐水配制)，并用生理盐水（0.9%）调节最终体积至50ml，轻轻、彻底混匀。室温沉降30min。 5.吸出富含白细胞的上层液，275gX6min。 6.沉淀的细胞用2~3mlPPP重悬 7.在一15ml离心管中依次加入2ml42%、2ml51%Percoll(均为用PPP新鲜配制)、2~3ml细胞悬液，275gX10min. 8.单个核细胞及部分血小板位于血浆与42%Percoll液之间，中性粒细胞位于42%Percoll与51%Percoll之间。血小板可通过25%Percoll离心5min去除，也可在原密度梯度中加入第三个25%Percoll一起离心去除。 9.中性粒细胞层用PPP液冼1次，再用含糖的Krebs-Ringer磷酸缓冲液（KRPD，PH7.23）洗1次。 10.用这种方法可得80%中性粒细胞，纯度在95%以上。
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如何提取细菌蛋白质
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达，使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体，另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。 超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。 超声前菌体的准备： 菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100。切记冰浴超声！ 如何判断是否超声完全： 1，外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。 2，液体的粘滞性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。 3，高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。 4，染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检。 超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。
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重组基因的筛选的方法
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定出含有目的基因的转化子即阳性克隆的过程就是筛选。 成熟筛选方法如下： 插入失活法： 外源DNA片段插入到位于筛选标记基因（抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因）的多克隆位点后，会造成标记基因失活，表现出转化子相应的抗生素抗性消失或转化子颜色改变，通过这些可以初步鉴定出转化子是重组子或非重组子。常用的是β-半乳糖苷酶显色法即蓝白筛选法。 PCR筛选和限制酶酶切法： 提取转化子中的重组DNA分子作模板，根据目的基因已知的两端序列设计特异引物，通过PCR技术筛选阳性克隆。PCR法筛选出的阳性克隆，用限制性内切酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小。 核酸分子杂交法： 制备目的基因特异的核酸探针，通过核酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的克隆。目的基因特异的核酸探针可以是已获得的部分目的基因片段,或目的基因表达蛋白的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸,或其它物种的同源基因。 免疫学筛选法： 获得目的基因表达的蛋白抗体，就可以采用免疫学筛选法获得目的基因克隆。这些抗体即可是从生物本身纯化出目的基因表达蛋白抗体，也可从目的基因部分ORF片段克隆在表达载体中获得表达蛋白的抗体。
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PBS 与PBST的区别
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
PBS是磷酸盐缓冲液,PBST是磷酸盐吐温缓冲液PBST含有Tween-20成分，PBS 不含有。 磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline，简称PBS）的是常用的用于生物学研究的一个缓冲溶液。PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及 磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。 生物实验中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20，Tween-20为一种非离子表面活性剂,对细胞生长可产生影响. 主要用于一些化学实验中不影响实验反应的情况下调节pH值，以便让实验的化学反应在最佳条件下进行。部分用于食品或是饲料行业加工，如食品或者饲料真菌毒素检验中Elisa方法的洗板应用或者食品微生物检验中的稀释缓冲液。
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0.05%吐温缓冲液的配制介绍
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
含0.05%吐温－20的pH7.4的磷酸盐缓冲液bai(简称du为PBS－T)。 配制方法为： 称取磷酸二氢钾zhi(KH2PO4)0.2g，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)2.9g，氯化钠(NaCl)8.0g，氯化钾(KCl)0.2g，吐温－20 0.5mL，加水至1000mL。 PBS:Phosphate Buffered Saline PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.24g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.44g，氯化钠(NaCl)8.0g，氯化钾(KCl)0.2g，加水至1000mL。 PBS缓冲液的作用： PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。 原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应，所以使用PBS是**。 PBS也不是万能的，有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高，就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分，维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。
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核苷和核苷酸区别有哪些
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
核苷是含氮碱基与糖组分缩合成的糖苷。原指来自核酸的嘌呤和嘧啶糖苷（见苷），现已扩展至其他天然和合成的杂环碱基核糖苷，也包括糖上的C1连接到杂环碱的氧原子或碳原子上的化合物。 核苷酸，一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。 2、分类不同： 核苷：常见的核苷有：尿嘧啶核苷（尿嘧啶－1-β-D-呋喃核糖核苷）（见结构式a）、腺嘌呤核苷（腺嘌呤-9-β-D－呋喃核糖核苷）(b)、胞嘧啶核苷（胞嘧啶-1-β-D-呋喃核糖核苷）(c)、鸟嘌呤核苷（鸟嘌呤－9-β-D－呋喃核糖核苷）(d)等。 核苷酸：根据糖的不同，核苷酸有核糖核苷酸及脱氧核苷酸两类。根据碱基的不同，又有腺嘌呤核苷酸（腺苷酸，AMP）、鸟嘌呤核苷酸（鸟苷酸，GMP）、胞嘧啶核苷酸（胞苷酸， CMP）、胸腺嘧啶核苷酸（胸苷酸，TMP）及次黄嘌呤核苷酸（肌苷酸，IMP）等。 3、生理功能不同： 核苷：核苷是核酸的主要组分。有些核苷及其衍生物具有显著的生理功能，如次黄嘌呤核苷(肌苷)可**急性和慢性肝炎及风湿性心脏病，并有增加白血球等功效 核苷酸：其中三磷酸腺苷 (ATP）在细胞能量代谢上起着极其重要的作用。ATP还可将高能磷酸键转移给UDP、CDP及GDP生成UTP 、CTP及GTP。它们在有些合成代谢中也是能量的直接来源。
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核苷酸连接方式
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
核酸是由多个核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键聚合成的多聚核苷酸，相邻二个核苷酸之间以3’,5’-磷酸二酯键连接。 核苷酸是核糖核酸及脱氧核糖核酸的基本组成单位，是体内合成核酸的前身物。核苷酸随着核酸分布于生物体内各器官、组织、细胞的核及胞质中，并作为核酸的组成成分参与生物的遗传、发育、生长等基本生命活动。生物体内还有相当数量以游离形式存在的核苷酸。 三磷酸腺苷在细胞能量代谢中起着主要的作用。体内的能量释放及吸收主要是以产生及消耗三磷酸腺苷来体现的。此外，三磷酸尿苷、三磷酸胞苷及三磷酸鸟苷也是有些物质合成代谢中能量的来源。腺苷酸还是某些辅酶，如辅酶Ⅰ、Ⅱ及辅酶A等的组成成分。
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如何选择实验需要的抗体
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
一抗选择： （1）确定抗体的名字，注意中英文名字、别名、亚型等信息。 （2）确定您的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，或者是FACS。biorbyt的每种抗体说明书都会列出抗体经验证过适用的实验类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证。 （3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，Rat等。我们的抗体说明书都列出该抗体验证过的适用物种，可根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验需要的抗体。 （4）样本抗原蛋白的结构性质。了解样本抗原蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。 （5）单多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。 二抗选择： （1）种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。 （2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。免疫组化，WB二抗主要选择HRP，Biotin标记的二抗，而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗，如FITC、Cy3、PE等。
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常见的几种RNA介绍
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
mRNA： 生物的遗传信息主要贮存于DNA的碱基序列中，但DNA并不直接决定蛋白质的合成。而在真核细胞中，DNA主要贮存于细胞核中的染色体上，而蛋白质的合成场所存在于细胞质中的核糖体上，因此需要有一种中介物质，才能把DNA 上控制蛋白质合成的遗传信息传递给核糖体。现已证明，这种中介物质是一种特殊的RNA。这种RNA起着传递遗传信息的作用，因而称为信使。 mRNA的功能就是把DNA上的遗传信息精确无误地转录下来，然后再由mRNA的碱基顺序决定蛋白质的氨基酸顺序，完成基因表达过程中的遗传信息传递过程。在真核生物中，转录形成的前体RNA中含有大量非编码序列，大约只有25%序列经加工成为mRNA，最后翻译为蛋白质。因为这种未经加工的前体mRNA(pre-mRNA)在分子大小上差别很大，所以通常称为不均一核RNA。 tRNA： 如果说mRNA是合成蛋白质的蓝图，则核糖体是合成蛋白质的工厂。但是，合成蛋白质的原材料——20种氨基酸与mRNA的碱基之间缺乏特殊的亲和力。因此，必须用一种特殊的RNA——转移RNA（transfer RNA，tRNA）把氨基酸搬运到核糖体上，tRNA能根据mRNA的遗传密码依次准确地将它携带的氨基酸连结起来形成多肽链。每种氨基酸可与1-4种tRNA相结合，现在已知的tRNA的种类在40 种以上。 rRNA： 核糖体RNA(ribosomal RNA，rRNA)是组成核糖体的主要成分。核糖体是合成蛋白质的工厂。在大肠杆菌中，rRNA量占细胞总RNA量的75%-85%，而tRNA占15%，mRNA仅占3-5%。 rRNA一般与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体（ribosome），如果把rRNA从核糖体上除掉，核糖体的结构就会发生塌陷。原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。S为沉降系数（sedimentation coefficient），当用超速离心测定一个粒子的沉淀速度时，此速度与粒子的大小直径成比例。5S含有120个核苷酸，16S含有1540个核苷酸，而23S含有2900个核苷酸。而真核生物有4种rRNA，它们分子大小分别是5S、5.8S、18S和28S，分别具有大约120、160、1900和4700个核苷酸。 rRNA是单
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试剂盒的基本详情介绍
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
试剂盒是用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。一般在医院、制药企业使用。 试剂盒使用示例： 试剂盒的产生正是为了使实验人员能够摆脱繁重的试剂配制及优化过程，所以试剂盒中一般配备有相应的使用说明书，用户按照说明书只需少量的优化即可得到满意的结果。 说明书一般包括公司标志及名称、试剂盒名称、试剂盒组成、保质期、使用领域、使用方法等项目： ①一般在页眉页脚处为公司的名称及标志； ②接下来为试剂盒的名称； ③试剂盒组成中应为试剂盒中的所有内容，为了简洁明了，一般以表格的形式表现； ④操作步骤是试剂盒说明书中最重要的部分，内容应准确、简洁、易懂，不能包含带有歧义的句子，更不能含糊其辞，排版上操作步骤应将复杂的步骤拆解，使人一目了然。
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如何正确选择虾青素
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
选择虾青素看含量： 虾青素无论是国产的还是进口的都标注有天然虾青素含量，重点是看虾青素含量，含量越高，自然效果也就越好，当然价格也越贵。需要注意的是虾青素含量不是雨生红球藻含量，它只是提炼虾青素的主要原料，一般雨生红球藻提炼虾青素的比例是1%-2.5%，所以虽然标注雨生红球藻含量是几百毫克，但实际天然虾青素含量可能只有几毫克。 看产地、看附料、看包装; 辅助原料**也是抗氧化的，这样能相互激发，相互作用。而包装必须要足够抗氧化，因为虾青素放置空气中都会产生氧化，因此必须密封包装，而且每一粒都需要包装。而液体虾青素的活性更强，通常建议选择软胶囊类型。 看口碑，看服务：
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细胞冻存液不小心在水浴中加热了还能用吗
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
只要是温度不是很高，对冻存液的成分没有破坏作用，也就是说没有改变冻存液的理化性质，那就完全可用。 细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
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大蒜素和大蒜精有区别吗
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
其实大蒜素就是大蒜油， 大蒜油是大蒜中的特殊物质，呈现明亮透明琥珀色的液体，它是大蒜中抽取而得最重要的物质，此精油含很重要的活性硫化物，它对一般健康及心脏血管的健康很有帮助。而大蒜精是大蒜中一群含硫化合物的总称，所以说，大蒜素包含大蒜精。 大蒜，自古就被当作天然杀菌剂，有天然抗生素之称。大蒜既作为食物也作为传统药物应用。研究发现大蒜的主要成份油loin（蒜素）所具有的挥发性气味具有强烈的杀菌、抗菌作用，为绝佳的天然强力抗菌剂，长期服用能预防感冒及各种细菌感染。同时，可抑制肠胃病菌，帮助健胃整肠，刺激胃肠粘膜，促进食欲，加速消化。此外，还可促进血液循环，达到保暖、预防血栓、高血压之目的。大蒜没有任何副作用，它是人体循环及神经系统的天然强健剂。
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如何区别胎牛血清品质
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
一、外观 拿到血清，最先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要 1、颜色 根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。 国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。 进口胎牛血清或多或少总有点溶血，因为真正的胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂。 总的来说，国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量**的呈现出谈黄、微红色，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭活血清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖啡色。 2、沉淀 很多血清客户，会发现进口血清有沉淀，从而怀疑血清的质量问题，这是没有根据的。 血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有任何影响，沉淀的产生原因很多，和厂家的加工生产方式密切相关。 国产的血清，大多来自北方，由于价格低廉，保存环境都不好，从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融，每次冻融过程，就会析出部分纤维蛋白沉淀，这样，血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”，很少有沉淀产生。 进口的胎牛血清，过滤分装前很少会反复冻融，生产后的成品也是清澈的，但随着时间的推移，血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然，进口的新生牛血清，一般牛龄都在2周左右，血清中的各种蛋白含量明显偏高，生产后血清可能会浑浊，甚至有大量沉淀。 当然，购买回来的血清都是冰冻状态，使用时需要融化，融化过程**在温度较低的状态下慢慢进行，否则沉淀相对较多，虽然沉淀并不直接影响血清的质量，但对细胞的显微观察有一定的阻碍。 3、澄清度 进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡，而国产血清，因
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