-
如何校准干式恒温器温度
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
干式恒温器是采用微电脑控制的恒温金属浴装置,以代替传统的水浴装置,可广泛应用于样品的保存和反应、DNA扩增和电泳的预变性、血清凝固等领域。 干式恒温器在实际使用中，客户常常为温度的准确性而烦恼，特别为已经使用了多年的干式恒温器的客户。 通常，客户没有完备的检测器具和完善的检测方法对仪器的温度准确性进行评估。因此，我们一般建议客户把干式恒温器送回厂家进行重新检测，由厂家进行评价仪器温度的准确性。 干式恒温器温度校准的必备条件： 1．环境要求。我们要求在环境温度15C~25C下进行温度校准。 2．湿度要求。湿度条件要低于85%下进行 3．温度校准最重要的器具之一:国家二等标准温度计(0.1C刻度)，而且必须经过权威部门校验过的国家二等标准温度计。(针对模块孔比较大的模块)，普通的温度计或没有校准计量过的高精度温度计都不允许。 4．温度校准最重要的器具之二:高精度热敏电阻等传感器，而且必须经过权威部门校验过的高精度热敏电阻等传感器。(针对模块孔比较小的模块) 5．检测要求:国家二等标准温度计和高精度传感器放入模块孔时，必须要求非常好的接触模块，一般都会在孔内加入导热油(耐高温油，通常燃点必须高于200度)和导热硅脂 6．检测方法:拥有厂家提供的完整的温度校准方法和说明 如果用户拥有上面的必备条件，可以自行进行温度校准。
-
干式氮吹仪和水浴氮吹仪的加热方法及加热特点比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
干式氮吹仪加热方法： 干式氮吹仪通过将氮气吹入加热样品的表面，使样品中的溶剂快速蒸发、分离，从而达到样品无氧浓缩的目的，保持样品更纯净。使用氮吹仪代替常用的旋转蒸发仪进行浓缩，能同时浓缩几十个样品，省时高效。 干式氮吹仪加热特点： 1.加热器使样品被快速加热至蒸发温度,同时气体经气针吹至溶液表面，促使溶液快速蒸发和样品浓缩。 2.气针在气腔的位置可被改变，使之适用不同的试管。 3.在浓缩有毒溶剂时,整个系统可置于通风柜中。 水浴氮吹仪加热方法： 水浴氮吹仪通过将氮气吹入加热样品的表面进行样品浓缩。该方法具有省时操作方便、容易控制等特点，可很快得到预期的结果。 水浴氮吹仪加油特点： 1.水浴加热通常是把需要加热的试管放置于盛水的烧杯中，热源对水加热，水再把热量传至试管，可以看做是一个间接加热过程，不同于干式的直接接触热源加热；另外由于水浴加热过程中，可以在烧杯的水中插入一根温度计，用以实时观察水温从而可以很好的控制水的温度，干式加热法则很难实现温度的实时控制。 2.水浴加热过程中试管浸入烧杯水中，各部位受热比较均匀;而干式加热法过通常是试管底部比中上部受热多。 3.水浴加热升温慢降温也慢，而且加热温度不超过100℃，是一种“温和"的加热方式;干式加热法升温快降温快，加热温度可以高达180℃左右，可以认为是一种“急火"加热，两种加热方式适用于不同的物质样品。
-
单细胞蛋白质定量技术解析干细胞异质性
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的未分化细胞。体内或体外研究表明, 干细胞具有表型及功能的异质性, 这一特性也决定了其不同的分化和再生能力。越来越多的证据表明, 干细胞自我更新及分化的分子机制以及与干细胞功能失调的相关疾病的产生都是在单细胞水平发生的, 基于异质性的干细胞群体的研究结果显然具有较大局限性。近年来, 单细胞相关技术的发展为异质性细胞群体在单细胞水平的研究奠定了重要基础。 单细胞水平的基因检测在过去几年已经有了较快的发展，2011年开始有文献利用单细胞定量PCR进行基因表达水平检测。之后众多的科学家在优化了多种基因扩增技术后，在高保真基因扩增的基础上，开发了单细胞全基因组测序，转录组测序，和外显子测序，进一步推进了单细胞基因水平表达谱的研究。 但是，生命医学的各种生理病理效应，包括干细胞的分化发育，最终都需要在蛋白质水平进行研究和分析，才能真正的解析这些生命科学的奥秘。2014年美国加州大学伯克利分校，生物工程系Amy E. Herr教授，在Nature Methods撰文，Single-cell western blotting，第一次在蛋白质水平实现单细胞精度的检测，并利用此技术对神经干细胞分化过程中蛋白质表达变化做了细致分析。 2016年7月美国ProteinSimple公司基于此技术，在全球推出了Milo单细胞蛋白质表达定量分析系统，该系统，采用单细胞微孔技术，捕获单细胞，原位裂解细胞后，进行蛋白质电泳分离，然后利用专利技术进行蛋白质原位捕获，特异性western blot一抗及荧光标记二抗杂交，芯片扫描仪扫描后，利用Scout软件对每个单细胞中的蛋白质表达进行深度分析。从细胞悬液准备到实验结束4-6小时，单个细胞可进行数十个靶蛋白分析。 基于在干细胞异质性分析的独到优势，ProteinSimple公司将携此技术参加2016年9月7日至9日在吉林省长春市华天大酒店展开的中国干细胞第六届年会，展台32号。如果对此技术有兴趣的科学家可以和ProteinSimple的技术专家进行面对面交流。
-
实验室气路安装要求
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
（一）、需求 1、供气参数：1、气体品种：共有八种气体。1、气体品种：共有八种气体, Ar(氩气) , N2 (氮气), L N2 (液氮) , He (氦气), 空压机一楼(Air) ,氢气(H2),乙炔(C2H2), O2(氧气) 分别在四、五楼都有独立气瓶室； 液质室: N2、Air 共2个；气相室: H2、N2 、He 、Air 各四 共16个； 气质室: N2、He 、Air、H2各两个共8个；ICP-MS室: Ar 、H2 、He 各一组共3个； 光镨室：Air、Ar、C2H2 各四 共12个；气相、液相、理室：N2 共4个 ； 荧光室: He 、Air 各一 共2个 ； 红外碳硫.氧氮分析室: O2 、N2、Air 两组各一 共6个； 光镨室: C2H2、Air 各一 共2个；原子荧光室: Ar 共1个； ICP室： Ar 共1个；气相色镨室: H2 、N2、Air 两组各一 共6个； 气质室：He 共1个；色镨处理室: N2 共2个； 油品二室: O2 共1个 2、压力要求：气源—— 高压瓶装气体，按国家标准充装；及杜瓦瓶(液氮) 2.1使用压力—— 常规，按一次减压（≤0.8MPa），终端减压到仪器需要的使用压力两级调压考虑(需要使用的管道配终端的减压阀及开关阀门) 3、管道敷设方式：埋地线槽敷设。 4、特殊要求： 4.1因氮气用量较大,要采用液体杜瓦瓶做主供气+两瓶高压钢瓶做备用供气,以保证不间断供气,防止由于供气的间断影响仪器的使用. 4.2部分用气点较多的气源采用自动切换连续不间断供气的集中供气方式，终端配置开关阀和压力指示 4.3小流量的气源采用单回路汇流排供气,终端配置开关阀和压力指示 (二)、编制依据 1、GB50235—2010《工业金属管道工程施工及验收规范》； 2、GB50236—2011《现场设备、工业管道焊接工程施工及验收规范》； 3、使用单位提出的工作条件（压力、流量及工作连续性等）。 (三)、供气流程 根据设计参数，共有八气体, Ar(氩气) , N2 (氮气), LN2 (液氮) He (氦气),空压机一楼(Air) ,氢气(H2),乙炔(C2H2), O2(氧气) 分别在四.五.六楼都有独立气瓶室， 供气流程如下：气体从气瓶经高压软管进入高压汇流管，经第一次减压
-
实验室装修三要素介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
一、实验设计的“三要素” 1、实验对象： 实验所用的材料即为实验对象。如用小鼠做实验，小鼠就是本次实验的实验对象，或称为受试对象。实验对象选择的合适与否直接关系到实验实施的难度，以及别人对实验新颖性和创新性的评价。一个完整的实验设计中所需实验材料的总数称为样本含量。**根据特定的设计类型估计出较合适的样本含量。样本过大或过小都有弊端。 2、实验因素： 所有影响实验结果的条件都称为影响因素，实验研究的目的不同，对实验的要求也不同。影响因素有客观与主观，主要与次要因素之分。研究者希望通过研究设计进行有计划的安排，从而能够科学地考察其作用大小的因素称为实验因素（如药物的种类、剂量、浓度、作用时间等）；对评价实验因素作用大小有一定干扰性且研究者并不想考察的因素称为区组因素或称重要的非实验因素（如动物的窝别、体重等）；其他未加控制的许多因素的综合作用统称为实验误差。**通过一些预实验，初步筛选实验因素并确定取哪些水平较合适，以免实验设计过于复杂，实验难以完成。 3、实验效应： 实验因素取不同水平时在实验单位上所产生的反应称为实验效应。实验效应是反映实验因素作用强弱的标志，它必须通过具体的指标来体现。要结合专业知识，尽可能多地选用客观性强的指标，在仪器和试剂允许的条件下，应尽可能多选用特异性强、灵敏度高、准确可靠的客观指标。对一些半客观（比如读pH试纸上的数值）或主观指标（对一些定性指标的判断上），一定要事先规定读取数值的严格标准，只有这样才能准确地分析自己的实验结果，从而也大大提高了自己实验结果的可信度。
-
葵花宝典：蛋白质组学发文章的四重境界
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
某宝典卷首曰：“欲练神功，必先自宫。”卷尾曰：“即使自宫，未必成功。”这个惨痛案例告诉我们，欲成大事必付出常人难及的巨大代价，然而最终是否成功，仍有很多因素影响，练错一招，走火入魔。临床医生做科研亦如此，白天忙临床已经是一把辛酸泪，还要晚上写文章、申课题，简直是满纸荒唐言。 倘若砸下百万经费就能发CNS，世界和平就不再是梦想，可惜隔行如隔山，纵使柳叶刀旋转跳跃不停歇，一样会落入基因测序的恶性循环；宝贵的临床样本堆积成山，如何修炼科研神功，将之化为文章的金矿？少年郎，陈博见你骨骼惊奇，请收下这部《蛋白质组研究宝典》。 宝典总纲：“天之道，损有余而补不足，是故虚胜实，不足胜有余。”陈博给大家强行翻译成大白话：蛋白质是一切生命活动的直接参与者，蛋白质表达的差异将影响到相关的生理功能变化，蛋白质组学研究是揭示疾病相关分子机制的最直接研究手段，iTRAQ技术是最常用的蛋白质组学研究方案。 译文：样本+iTRAQ+WB。这是最简单粗暴但有效的蛋白质组学研究套路，在临床样本中用iTRAQ找到差异蛋白，经过最基本的数据分析后，进行WB或IHC的验证，发在诸如：Proteomics、Proteome Sci、Plos One等杂志上，屡试不爽。如下例： Fang P, Ying H, et al. Dissecting characteristics and dynamics of differentially expressed proteins during multistage carcinogenesis of human colorectal cancer. World J Gastroenterol. 2016. (IF=2.8) 这篇文章用一台5600质谱仪做iTRAQ（目前蛋白质组研究中，主流的高分辨率质谱是QE或5600），在样本中找到3000多种差异蛋白，并做了GO分析、聚类分析、数据统计等最基本的数据分析，最后做了IHC验证，影响因子2.8分。 此类研究周期短、花钱少、文章好发、有深挖潜力，实乃抢时间毕业、赶时间结题的神器！作为接下来一系列课题申请的前期研究，这足以打下坚实的基金申请基础。 译文：细胞+基因芯片+iTRAQ+WB+功能验证。遥想当初，很多老
-
钯扩散氢气发生器提纯方法原理及优缺点介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
简介 随着气体消耗需求的增加，氢气发生器现已成为许多实验室必不可少的设备。发生器可在极短的时间内按需提供高纯度气体，其便利性优于气瓶，特别是在健康和安全方面更具优势，因为在实验室工作环境中保存高压氢气会使人们产生顾虑。 生成器所含氢气量通常少于半升，这与 50 升高压气瓶中 9,000 升气体相比几乎可以忽略不计。有多家氢气发生器制造商生产高品质仪器，可为各种应用提供超高纯度气体，包括纳米管研究、气相色谱分析以及半导体行业。许多人都知道氢气来自于水的电解，但实际操作真的如此简单？为何发生器如此昂贵？ 尽管使用气体发生器生成高纯度氢气涉及许多高度保密的机密，但从水中产生氢气的只能利用几个基本机理。氢气发生器系统通常使用两相系统生产经过提纯的氢气。先从水中分离出氢气，然后对氢气进行提纯。许多氢气发生器使用质子交换膜 (PEM) 与钯扩散或变压吸附 (PSA) 干燥机等氢气提纯系统。 用于氢气发生的质子交换膜像反向操作燃料电池一样高效工作。水在 PEM 处电解，PEM 为促进 H+ 离子运动的固体聚合物电解质，而 O2- 离子会被固定并形成 O2 分子（参见图 1.）。氢离子由 PEM 晶格借助表面扩散、格罗图斯 （Grotthuss） 扩散和运载扩散1三种机理沿离子通道传递。质子传递通过跨膜质子传递完成，该薄膜能够渗透阳离子，但不能渗透阴离子或电子并且只能传递水合氢离子。2电解槽阴极收集的氢气需要进行提纯。提纯可通过多种方法完成。 图 1. 质子交换膜功能原理图 钯电解器/提纯综合系统 在钯电解器、氢气分离/提纯系统中，由管束组成的钯阳极和钯阴极（参见图 2.）用于电解包含可溶电解质（通常为 NaOH 或 KOH）的水。电解电流通过溶液时，氢离子扩散穿过钯管阴极，产生超高纯度氢气。 图 2. 使用电解和提纯综合系统的氢气发生器原理图 该系统提供超高纯度氢气和极少的水分与 O2 携带。但是电池中的电解质必须定期更换，这一过程意味着发生器至少需要 12 小时的停机时间（包括冷却
-
抑郁模型大鼠不同部位 miR－16表达及其与 5－羟色胺转运体的关联性研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
摘 要 目的 研究 miＲ － 16 在慢性不可预知温和应激抑郁症模型大鼠神经系统不同部位的表达及其与 5 － 羟色胺( 5 －HT) 转运体的关联性。方法 对照组和慢性不可预知温和应激抑郁模型组大鼠各 10 只，模型组大鼠接受 21 天的不可预知温和应激刺激，对照组大鼠正常饲养。两组大鼠麻醉后收集脑脊液，测定 miＲ － 16。然后断头处死，分离前额叶皮质、中缝核、海马，测定 miＲ － 16 和 5 － HT 转运体蛋白。结果 模型组大鼠脑脊液和中缝核的 miＲ － 16 相对表达量低于对照组，中缝核 miＲ － 16与 5 － HT 胺转运体呈负相关; 而前额叶皮质和海马中的 miＲ － 16、5 － HT 转运体分别与对照组比较，差异均无统计学意义( P ＞0. 05) 。结论 中缝核 miＲ － 16 可能通过调节 5 － HT 转运体的表达，参与抑郁症的病理过程，脑脊液 miＲ － 16 亦可能与抑郁症相关。 关键词 慢性不可预知温和应激抑郁模型;miＲ － 16;5 － HT;转运体 世界卫生组织公布，抑郁症已成为世界第 4 大疾患，预计到 2020 年，可能成为仅次于冠心病的第 2 大疾病。抑郁症具有患病率高( 终生患病率女性为10% ～ 25% 、男性为 5% ～ 12% ) 、复发率高 ( 1 年30% ，5 年 70% ) 、自杀率高( 10% ～ 25% ) 等特点，是全球性公共卫生问题之一，给个人、家庭和社会带来极大的精神损失和巨大的经济负担。然而，其病因和发病机制尚未清楚，给该病的诊断和**带来极大困难。microＲNAs( miＲNAs) 是近年来表观遗传学研究的热点，是一类进化保守的、18 ～ 25 个核苷酸的非编码 ＲNA 分子，通过与靶基因的 mＲNA 3'非翻译区( 3' － untranslated region，UTＲ) 结合，引起 mＲNA的降解或者翻译的抑制，从而调节蛋白表达，在生物发育和疾病发生、发展中起重要作用。现有的研究揭示，miＲ － 16 可能与抑郁症相关，其参与抑郁症的机制，可能是其在脑组织中以 5 － 羟色胺( 5 － HT)转运体( serotonin transporter，SEＲT) 基因作为靶基因，参与 SEＲT 翻译水平的调控
-
旋转蒸发仪:您的问题,IKA来解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
Q1：IKA旋转蒸发仪 (配置镀防爆膜玻璃组件) 可以达到的最低真空度是多少? A1：最低可达 1 mBar，在真空系统足够强劲且所有的真空连接都非常密实的情况下。 Q2：竖直型冷凝器和倾斜型冷凝器，哪种比较好? A2：对于应用要求来说两者的冷凝效果相当。这两种冷凝器的冷凝面积和冷却效率是一样的。 Q3：如何设置溶剂减压蒸馏所需的最佳参数，如真空度和水浴锅温度，有效避免爆沸？ A3：1）RV10自动控制型中，内置了自动沸点识别功能，仪器可自动调至最佳蒸馏参数进行全自动蒸馏。 2）IKA有40种常规溶剂的对应蒸馏参数，包括水浴锅温度，转速和真空度。直接选择对应的溶剂，启用自动蒸馏即可。 3）参照说明书中溶剂数据库参数，设置加热锅温度，转速和真空度。 Q4：待机状态下，加热锅浴液温度较高的时候，IKA旋转蒸发仪是否有警示? A4：有的，只要加热锅内的温度超过 60 °C，热警提示“HOT“ 将会一直闪烁。 Q5：当连接转接头时，加热锅可否外移？ A5：可以，加热锅HB 10可以水平移动 50 mm, 也可以单独使用。 Q6：IKA旋转蒸发仪可实现连续蒸馏吗? A6：可以，即便是使用 3 升容量的接收瓶您也可以进行连续蒸馏操作，您只需使用标配的 PTFE 连续进样管即可实现。真空状态下，转到放空阀吸液,液体通过 PTFE 进样管连续输送到蒸发瓶中。该进样过程中真空度的变化很小且可通过真空泵进行调节，连续进样也可保持真空的稳定。 Q7：蒸馏过程中有必要对蒸发瓶内的蒸汽温度进行测量吗? A7：不需要，IKA旋转蒸发仪采取最佳的方式来控制蒸馏过程，即监控进出水的温差，实现无损和完整的数据监测。 Q8：所需蒸馏的样品很容易产生泡沫，怎样才能防止泡沫进入到冷凝管中呢? A8：1）选择使用RV 10.500 泡沫截止瓶就能解决这个问题。它可以防止泡沫进入到冷凝管或接收瓶中。2）设置好合适的真空度，可有效防止起泡。 Q9: RV10旋转蒸发仪可适用于乙醚等易爆溶剂的蒸馏吗？ A9: 可以。乙醚在空气中
-
最新生物标志物biomarker检测技术进展（一）
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
生物标志物的概念早在1983年被首次提出，它是指可以标记系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构或功能的改变的生化指标，具有非常广泛的用途。由于生物标志物可用于疾病诊断、判断疾病分期或用于评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性，展示出在药物研发领域的重要作用。 2010年10月，美国FDA出台文件讨论生物标志物指导原则草案，预示着生物标志物已成为新药临床研究的评价工具之一（图1）。美国NIH给生物标志物以更实用的诠释：用以评价和衡量被试个体生物学过程，病理学过程以及对**干预药理学反应的特征指标，包括核酸，蛋白，代谢衍生物在内的诸多分子都可以成为潜在的生物标志物。蛋白是生物学功能的执行者，位于中心法则的功能一端，能够为基础医学、转化医学和精准医学提供最直接的判定依据，因而是研究和应用最为广泛的标志物。因而对蛋白标志物的检测技术也最为重要。迄今为止，抗体仍然是蛋白生物标志物检测最根本的基础，众多方法以抗体为核心建立，并且不断更新和发展，本综述拟从应用视角出发，较为系统地分析和比较现有蛋白生物标志物的检测技术，并结合全新技术的发展，对生物标志物的前景进行展望。 图1. 生物标志物应用的转化医学研究领域 图2. 生物标志物在药物研发领域的应用 蛋白生物标志物可以帮助人们了解生物学过程，能运用于疾病的高危评估，早期诊断，检测定位，预后判断，**反应，复发监测全过程。在早期诊断方面，以肿瘤研究为例，生物标志物可以提供预测，诊断和预后信息。特别是近年来兴起的个性化**和差异化诊断技术方面，生物标志物发挥的作用也日渐重要。因此不论对于科学研究还是制药企业，生物标志物都是关注的焦点。生物标志物既可以为药物的作用机制，如何影响靶点，以及下游的效应提供关键的洞见（图2），也可在药物早期研究中鉴定药物或**手段的毒性和副作用（例如肝毒性，肾毒性，心脏毒性，肌肉毒性等等。）这对于药物研发有非常重要的意义，据统计，药物研
-
最新生物标志物biomarker检测技术进展（二）
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
生物标志物检测的创始：免疫组织化学 人类最早是在组织样本中实现了生物标志物的检测。组织特异性的标志物在现代医疗中被经常用来研究肿瘤等疾病中的病理变化。最经典的被转化医学成功应用于组织中标志物检测的方法是免疫组织化学（Immunohistochemistry），特别是在肺炎中的早期应用。免疫组化技术在1940年代发明时[1]，初衷是证实病原体的存在部位，例如肺炎球菌II型和III型多糖在鼠中的定位。过氧化物酶标记技术在1979年成熟，免疫组化的灵敏度被显著提高。带来的直接益处是福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片的免疫组化检测。多数情况下免疫组化使用酶联抗体来进行显色反应，并通过显微镜镜检。尽管在医学检验中使用广泛，但这项技术仍然存在瓶颈：需要非常专业的操作人员和极为严格的标准，还仅能得到半定量的结果。近些年来专家致力于免疫组化的标准化和自动化。但要在全世界各地的实验室实现非常一致的免疫组化，并且在假阳性或假阴性等区分度方面达到一致的判别标准，还面临众多的困难，争论和挑战。人们对免疫组化应用于标志物检测的展望包括提高灵敏度以检测低丰度蛋白，较好的动态检测范围，更高的空间分辨率以判别标志物表达的细胞类型甚至是细胞器类型。另外，免疫组化在多重性，绝对定量以及特异性方面的需求还没有得到有效满足。 生物标志物的应用关键：体液样本检测 生物标志物近年来引起了极大的关注，因为有大量在血浆或血清中的蛋白标志物被鉴定。尽管这些蛋白有较高的转化医学价值，但现有技术的检测灵敏度或检测能力仍然是主要的制约因素。事实上在过去长达15年时间里，平均每年进入临床应用的新的生物标志物仅为1-2个。在平台的选择方面，灵敏度并不是唯一的考量，准确性，可重复性，动态检测范围大小以及样本通量决定标志物检测能力。由此也不难理解为什么质谱技术在体液样本检测中的应用不广：质谱最主要的缺陷是不适合复杂样品的分析，特别是体液样品，体液的样本除了成分复杂，更有巨大
-
最新生物标志物biomarker检测技术进展（三）
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
ELISA酶联免疫分析 ELISA（酶联免疫分析）是很早被应用于体液样本临床蛋白标志物检测的技术，因而也被当成“金标准”来使用，但事实上受制于较简单的实验范式和有限的优化措施，ELISA技术的灵敏度非常有限。而ELISA由于其使用抗体的不同，结果也会体现不同的检测效力。粗制多克隆抗体，亲和纯化的多克隆抗体，和单克隆抗体都在ELISA中有广泛的应用。在构建试剂盒时经常会需要对抗体的特异性，灵敏度等进行测试。应用不同的样本进行同一个抗体的Western Blot测试可以帮助我们判断抗体的特异性。对各种来源的抗体进行比较和优化，对于开发ELISA试剂盒，起到最为基础的作用。 Multiplex多重标志物检测技术 ELISA技术已经非常成熟且容易掌握，但其灵敏度和检测通量较低的问题吸引研究者的关注，并尝试开发更好的技术来替代这种传统方法。由于大量获取较廉价数据的需要，亦或是在样本量有限而需要获得较多数据时，多因子或多重分析物同时鉴定的技术对研究者意义重大。 代表性的多重生物标志物检测技术包括平面矩阵式检测和液相悬浮芯片。平面矩阵式检测以R&D等公司的固相蛋白芯片为代表，通过在固相芯片的不同位置免疫捕获不同的标准品或者样品，来利用空间位置实现不同样本的识别，而酶标二抗所产生的显色反应强弱报告了每个样本点的特定分析物含量，仪器通过简便的读卡就能判断不同分析物的含量。固相蛋白芯片分析重数较低以及动力学范围较窄的特性使得这项技术的应用受到一定限制，更适合于定性检测或者相对含量的判断。 液相悬浮芯片以Luminex平台为代表，BD等公司的CBA技术也可以归为此类。Luminex液相悬浮芯片采用的红色-红外双色/三色染料混合荧光编码，可以实现约100种/500种不同身份微球的识别。当把特定颜色的微球与检测特定指标的抗体偶联起来以后，不同微球就可以在同一份样本中独立工作，去分别捕获不同的标志物。该技术所使用的二抗仍然是标志物特异性的，上面带有生物素标记，可以同链霉亲和素-藻红蛋白显色
-
最新生物标志物biomarker检测技术进展（四）
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
全新的SMC单分子检测技术 虽然现有多项生物标志物检测技术已经丰富了人们对生物标志物的认识，获取了大量数据和经验，解决了很多生物学或医学问题，但如前文所述的诸多瓶颈仍限制了生物标志物的应用。尤其是对于疾病，特别是肿瘤的早期诊断或预防而言，在疾病的潜伏期或是发生早期，就能在血清/血浆这样容易获得且远离病灶的样本中发现生物标志物的存在十分必要。研究表明这些标志物的含量很可能低至每毫升亚皮克级。上述几乎所有的技术对于这一检测区间都显得无能为力。第二，据文献报道，在已知的约400,000种人类蛋白中，有大约75%，也就是300,000种被现有技术很难检测到。大量生物标志物处在现有技术的检测极限之下。第三，现有技术很多情况下受制于较低的灵敏度，仅能在疾病个体中测得某种生物标志物，而此时疾病可能已经进入实际发生阶段。在健康个体或是疾病风险的个体中尽管这些标志物含量极低，但很可能具备预测性作用，而现有技术无法有效利用这一点。第四，医学研究者在临床上获取了各种类型的体液样本，例如脑脊液、宫颈液、肺泡灌洗液、泪液、尿液等，这些体液样本中经常生物标志物含量极低，但却具备特定领域的独特研究价值，而其中蕴含的宝贵生物学信息常被现有技术忽略。因此，人们亟需开发更为灵敏且特异的生物标志物检测技术来更好地满足基础医学或转化医学的研究需要。 图5. 单分子检测技术原理 新技术的诞生为这些研究需求的实现提供了重要的机会。单分子检测技术（Single Molecule Counting, SMC），在抗体依赖的蛋白生物标志物检测方面产生了质的变化。单分子检测主流的检测技术以Erenna等单分子检测平台为代表（也被称为Singulex），基本原理在于利用毛细管进行荧光素标记分子的上样，并以激光聚焦的方式进行单个分子的激发检测。当荧光素标记分子通过高能量的激光焦点时，单个蛋白分子偶联的荧光素所发射的光闪烁信号被检测器测得。光闪烁信号的次数和强度与分子浓度呈正相关性，从而能建立标
-
九大测序平台对比
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
1.sanger 企业：Life Technology 推出时间：1977年发明，1986年第一台商业化测序仪 主流型号：3730XL 样品要求：PCR产物：浓度≥50ng/ul 体积≥10ul；质粒：含量≥5ug；菌液：体积≥1ml。 测序原理: 双脱氧链终止法：Sanger法测序的原理就是，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)使之扩增，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)使之终止。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止，终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几个至千以上个，相差一个碱基一系列片断。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。 文库制备:无需建库，提供质粒、菌液、PCR产物等均可以 模板制备:PCR扩增 读长:500-1000bp 测序通量: 四种测序方式的每天通量： 短片段测序36cm36min500bp 1,728,000bp/day； 快速测序36cm60min700bp 1,440,000bp/day； 标准测序36cm90min800bp 1,113,000bp/day； 长片段测序50cm120min1100bp 1,002,000bp/day。 (36cm指毛细管长度，36min指一次反应时间，500bp指一个反应的读长；) 时间/run:36 min-2 hours 碱基精确度:99.999% 变异检测能力(DNA重测序方面): heterozygous insertions and deletions,microsatellite, SNP, AFLP, T-RFLP,and LOH analyses AFLP：扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism),； T-RFLP：限制性片段长度多态性（terminal restriction fragment length polymorphism）； LOH analyses：杂合性缺失（Loss of Heterozygosity）； 成本:$95,000 per machine, about $4 per reaction, 800bp per reaction, 数据格式:*.bcf ； *.abl 分析软件: 数据收集软件Data Collection v2.0 (随机提供) Manages your inst
-
ESCO生物安全柜与超净工作台的本质差别
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
Jul 27, 2016 ESCO生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的产品。根据操作样品类型以及可能影响的空域范围的不同，ESCO生物安全柜的结构设计、排风比例也不同。据此，ESCO生物安全柜分为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级，其中Ⅱ级又分为A1、A2、B1、B2型。 ESCO生物安全柜可分为一级、二级和三级三大类以满足不同的生物研究和防疫要求。一级ESCO生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。气流原理和实验室通风橱一样，不同之处在于排气口安装有HEPA过滤器。类型的ESCO生物安全柜都在排气和进气口使用HEPA过滤器。一级ESCO生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，由于不能保护柜内样品，目前已较少使用。 ESCO生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中，应避免使用明火。溢出实验室中要张贴如何处理溢出物的实验室操作规则，每一位使用实验室的成员都要阅读并理解这些规程。认证在安装时以及每隔一定时间以后，应由有资质的专业人员按照生产商的说明对每一台ESCO生物安全柜的运行性能以及完整性进行认证，以检查其是否符合国家及国际的性能标准。清洁和消毒由于剩余的培养基可能会使微生物生长繁殖，因此在实验结束时，包括仪器设备在内的ESCO生物安全柜里的物品都应清除表面污染，并移出安全柜。 ESCO生物安全柜和超净工作台具有本质的差别：超净工作台是只保护样品的设备，其通过高效过滤器的净化空气向下吹过工作区来保护样品。由于工作区是正压区，气流通过操作窗口外溢，因此，其不保护操作人员和环境。如操作样本中含有已知、未知或潜在致病菌，很可能给操作人员和环境带来危害。与之不同的是，ESCO生物安全柜是一种负压过滤排风柜，其排放的气体都经高效过滤器严格过滤，这样可以保护操作者和环境免于暴露在实验过程中产生的有害气溶胶中。正确操作
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信