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生物化学技术专题：粉防己生物碱的提取分离与鉴定
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
汉防己为防己科千金藤属物Stephania tetrandra S. Mcore的根，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱。主要是汉防己甲素和汉防已乙素。临床上除用作**高血压、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。 目的要求 通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。 1． 生物碱的一般提取方法。 2． 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定 已知生物碱的结构和性质 汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。 1．汉防已甲素（Tetrandrine，汉防已碱，粉防已碱） 无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者，150℃左右熔后加热又固化，至213℃复熔。 2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱） 溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。籍此可以相互分离，用不同溶剂重结昌时，其晶形和溶点不同： 3．轮环藤酚碱（Cylanoline） 为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。 生物碱的提取分离 1．总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离 注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。 注二：净砂必须事前洗净烘干，拌和量**不要超过120g，以免索氏提取器一次装不下或装得过多。提不尽生物碱。 注三
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生物化学技术专题：巴马汀提取及延胡索素制备的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
巴马汀为季铵生物碱，溶于水和极性大的有机溶剂（如甲醇、乙醇等）所以可用甲醇、乙醇或水进行提取。然后通过盐析，降低其在水中的溶解度而沉淀，与其它杂质分离。巴马汀是有机碱，尽管它带正电荷，但和水的亲和力仍小于NaCl，NaCl和水的强亲和力，降低了巴马汀在水中的溶解度，使它被“挤”出。 1． 流程 2．工艺 （1）提取：黄藤粗粉20g，用95%EtOH回流提取2次，每次1小时，乙醇用量为100ml，合并二次醇提取液，浓缩至3~4ml，用吸管转移到5ml小锥形瓶中，放置，析晶，抽滤得巴马汀粗晶。 （2）分离：将巴马汀粗晶用10ml水溶解后，抽滤。不溶物主要为黄藤内酯。滤液滴加 HCl至PH2，再加10%NaCl进行盐析放置，析出黄色不溶物，抽滤得氯化巴马汀粗晶。 （3）精制：用70%EtOH热溶氯化巴马汀粗晶，过滤，滤液析晶，抽滤，得精制氯化巴马汀。干燥称重——克，测溶点——℃。 （4）氢化：精制氯化巴马汀用50%甲醇溶液，加入因体KBH2约0.2g，直到甲醇液迅速由黄变白或微黄色。滴加HCl至PH2并加热使多余的KBH4分解，再趁热滴加NH4OH使反应液呈碱性，立即析出鳞片状四氢巴马汀粗晶，抽滤得结晶，红外线灯下干燥，再用EtOH-H2O重结晶，得精制四氢巴马汀。干燥称重 —— 克，薄层层析检查纯度。熔点—— ℃。 3．巴马汀原位还原反应 在硅胶CMC- Na薄层板的起始线上点自制的巴马汀乙醇液，及对照品巴马汀乙醇液及四氢巴马汀乙醇液。然后再在自制的巴马汀的原点加点2%KBH4甲醇液2~3次，吹干，氨缸中饱和后，以CHCl2OH(3:1)展开，改良碘化铋钾试液显色。巴马汀Rf值0.4左右，四氢巴马汀Rf值约0.9，进行原位反应的巴马汀如氢化彻底，应和对照品氢巴马汀的Rf值一致，如反应不彻底则出现二个斑点，其Rf值分别与对照品巴马汀及四氢巴马汀一致。 四、黄藤中生成碱的检识： 1．生物碱沉淀反应 取黄藤的15醋酸浸出液每份1ml，置小试管中，分别滴加下列各试剂2~3滴，观察并记录有无沉淀产生及颜色变化。 （1）碘化铋钾试剂 （2）硅钨酸试剂 （3）
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生物化学技术专题：薯蓣皂苷元的提取和鉴别
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
目的要求： 1．掌握甾体皂苷元（亲脂性和中性成分）的提取方法。 2．熟悉薯蓣皂苷元的性质及鉴定法。 简介： 薯蓣皂苷元（Diosgenin）是一种甾体皂苷元，分子式（C27H42O31）,分子量414.61，为白色结晶，mp204～207℃，[ ]25D-129.3（CHCl3），溶于一般有机溶剂和醋酸，不溶于水。目前，是制造多种甾体药物如口服避孕药（I号，II号避孕药片）和甾体激素（如可的松）等的重要原料。在植物界主要分布在薯蓣科薯蓣属（Dioscorea）植物中，我国的薯蓣属植物有80余种，其中只有薯蓣根茎组（Stenophora）的17种、I亚种及一变种才含有甾体皂苷元，其它则含有多量淀粉，无皂苷元。已用于生产的主要有盾叶薯蓣（D.Zingiberensis C. H. Wright），穿龙薯蓣（D.nipponica Makino），黄山药（D.panthaica prain et Burkil）,紫黄姜(D.nipponica Makinovar rosthani prain et Burk)等。在植物体内薯蓣皂苷元是与葡萄糖、鼠李糖结合成薯蓣皂苷（Dioscin）而存在。提取分离时，一般是先用稀酸将薯蓣皂苷水解成薯蓣皂苷元与单糖（葡萄糖、鼠李糖）。因薯蓣皂苷元不溶于水，混存于植物残渣中，故可用有机溶剂（如石油醚）直接从植物残渣中提取出薯蓣皂苷元。 提取方法 1．皂苷预试： 2．薯蓣皂苷元的提取： 注一：检查薯蓣皂苷元是否提尽，可用李伯曼反应，参考实验二“注三”项下。 注二：回收石油醚的方法见实验一“注四”项下。 注三：所得薯蓣皂苷元（粗品）用石油醚抽洗后，即可测定熔点，若熔点不合格时，才进行重结晶。 薯蓣皂苷元的鉴定 1．熔点测定：204～209℃ 2．薄层层析鉴定： 应只呈现一个与标准Rf值一致的色斑。 样品：白色结晶的无水醇液 标准品：薯蓣皂苷元无水醇液 1）吸附剂：AI2O3软板（中性100～200目，活性Ⅲ级） 展开剂：苯一甲醇（9：1） 2）吸附剂：硅胶H-CMC硬板 展开剂：石油醚-乙酸乙酯（7：3） 显色剂：10%磷钼酸乙醇溶液。喷雾后加热10～20分钟 3）化学反应： ①Liebermann-Burchard反应 ②CHCI3-浓H2SO
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生物化学技术专题：秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
秦皮为本樨科白蜡树属植物白蜡树（Fraxinus Chinensis Poxb）或苦沥白蜡树（F.rhynchophylla Hance）或小叶白蜡树（F.bungeana DC）的树皮,味苦，性微寒。具有清热、燥湿、收涩作用。主治温热痢疾、目赤肿瘤等症。 秦皮中含有多种内酯类成分及皂苷、鞣质等，其中主要有七叶苷、七叶内酯、秦皮苷及秦皮素等。多有抗菌消炎的生理活性，七叶内酯对细菌性痢疾、急性肠炎有较好**效果，兼有退热作用，毒付作用小，几无苦味。适于小儿服用。 秦皮中主要成分的结构及性质 1．七叶苷（esculin），又叫马粟树皮苷：白色粉末状结晶，mp205～206℃。易溶于热水（1：15），可溶于乙醇（1：24），微溶于冷水（1：610），难溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚、氯仿。在稀酸中可水解。水溶液中有蓝色荧光。 2．七叶内酯（esculetin）：黄色针状结晶，mp276℃。易溶于沸乙醇及氢氧化钠溶液，可溶于乙酸乙酯，稍溶于沸水，几不溶于乙醚、氯仿。 3．秦皮苷（fraxin）：mp205℃。 4．秦皮素（fraxetin）：mp227～228℃。 实验原理 七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离之。 实验方法 （一）提取：取秦皮粗粉150g于索氏提取器中，加400ml乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。 （二）分离：在上述浸膏中加40ml水加热溶之。移于分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿萃取过的水层蒸去残留氯仿后加等积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂至干，残留物溶于温热甲醇中，浓缩至适量，放置析晶，即有黄色针状结晶析出。滤出结晶。甲醇、水反复重结晶，即得七叶内酯。 将乙酸乙酯萃取过的水层浓缩至适量，放置析晶，即有微黄色晶体析出。滤出结晶。以甲醇，水反复重结晶，即得七叶苷。 （三）鉴定： 1．化学检识：取七叶苷、七叶内酯各少许分别置试管中，加乙醇1ml溶解。加1%FeCl3溶液2-3滴，显暗绿
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奶及奶制品中黄曲霉素M1检测的解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
一、背景介绍 黄曲霉毒素M1 （Aflatoxin M1）属于黄曲霉毒素一类结构相似的化合物中的一种，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒法破坏。哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1。黄曲霉毒素M1危害主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡。 目前来讲，Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。 Pribolab(普瑞邦)作为专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商之一，整合了原北京泰乐祺检测应用实验室，更加专注于霉菌毒素检测产品和技术解决方案的服务,以期快速提出解决方案。针对几年来牛奶及其制品中不断出现的黄曲霉毒素M1超标问题，建立了一套完整的解决方案。 二、参考标准：根据国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定。 （一）免疫亲和柱-高效液相色谱法：符合GB 5413.37-2010国标方法 1. 所需设备和耗材 高效液相色谱仪 色谱柱：真菌毒素专用色谱柱（PRC-18，Pribolab）。 免疫亲和柱：PriboFast®黄曲霉毒素M1免疫亲和柱(IAC-012-3, Pribolab，25支/盒，快速过柱型，适用于粘稠样本：如生鲜乳、酸奶等,有效解决过柱易堵问题)。 高速均质器：不锈钢耐腐蚀,转速达到22000rpm 以上(EQ-WR-1L，Pribolab)。 玻璃纤维滤纸：PriboFast®玻璃纤维滤纸（GMF/A-110，Pribolab） PriboFast®八位泵流操作架（Pribolab，用于控制免疫亲和柱过柱流速） 标准品：Aflatoxin M1（固体标准品MSS1007 100ug或0.5µg/ml Aflatoxin M1 液体标准品，Pribolab) 2. 样品前处理:普瑞邦针对生鲜乳、干酪、奶油等提供不同的处理方案(详细方案请联系Pribolab中国:400-688-5349
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恒温恒湿箱温度的控制因素解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
恒温恒湿试验箱，顾名思义，如其名：可调节温度和湿度从而达到试验效果的试验箱。简单的耐高、低温、湿试验都可以选择恒温恒湿箱；如果需要多次循环试验的，为试验方便，可选择可程式恒温恒湿试验箱。恒温恒湿箱的高温和低温分别由加热管和制冷设备控制。 控制恒温恒湿试验箱温度的，主要是加热管。它是控制器得到升温命令时将输出电压给继电器，约3-32V直流电加在固态继电器上；其交流端相对于接通导线。接触器也一起吸合，两端有电压使其发热，由循环风机把热量带到箱内，使得恒温恒湿试验箱升温，当温度即将达到设定值时；通过加在固态继电器PID调节输出控制器；我们可以直观地在试验箱的控制面板看到加热器的输出率。 恒温恒湿试验箱加热区的加热管也是容易出现故障的地方，容易出现加热线烧断，加热部分SSR会损坏。处理方法也很简单，更换加热丝及接线端子，更换SSR即可。 制冷是决定一个恒温恒湿箱的性能和配置好坏的重要参考指标，由压缩机，冷凝器内螺旋式高效冷媒铜管、波纹翅片蒸发器，干燥过滤器，油分离器，电磁阀等组成，加湿系统选用外置式锅炉蒸汽式加湿器具备节能降耗功能，可以节省70%的能源消耗；它是加湿器加热水变成蒸汽的过程，以达到恒温恒湿箱加湿的目的。压缩机除了制冷还具有除湿功能，通过控制制冷系统达到降湿目的。 R404A压缩机偶尔会发生串气现象，串气原因：可能因为第一段的冷冻系统膨胀阀太大，板式换热器的安装方向有问题，这个需要工程师去具体确认维修的。
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恒温恒湿试验箱内外部保养的异同点介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
恒温恒湿试验箱内外部因所处位置不同，面对的试验环境不同，需要承受的压力也不同，所以保养也有所差别。那么，恒温恒湿试验箱内外部保养有什么不同呢？ 恒温恒湿箱外部保养： 1、箱体外部每年亦须清洗一次以上，清洗时先用肥皂水擦拭即可。 2、配电室内每年至少清洁一次以上，清洁时可利用吸尘器将室内灰尘吸除即可。 3、恒温恒湿试验箱在操作前应先将内部杂质清除。 恒温恒湿机内部保养： 1、恒温恒湿试验箱加湿器之检查与保养加湿器内之储水应每月更换一次，确保水质清洁，加湿水盘应每一个月清洗一次，确保水流顺畅。 2、恒温恒湿试验箱冷凝器灰尘之清除冷凝器应定期每月保养，利用真空吸尘器将冷凝器散热网片上附着之灰尘吸除或利用高压空气喷除灰尘。 3、恒温恒湿试验箱检查超温保护器恒温恒湿试验箱运转时，超温保护之设定最高值加20℃~30℃。试验箱内之温度升至超温保护之设定点时，加热器之供电即止，"OVERHEAT"超温警示灯亮但风扇仍运转，若长时间运转及无人看管，运转前请务必确实检查超温保护器，是否设定妥当[湿球超温保护器之设定为120℃]。 4、恒温恒湿试验机湿球测试布之更换当测试布表面不干净或变硬，或于做完温度控制后，继续做温湿球度控制前都必须更换测试布。测试布约三个月更换一次，更换时应用清洁布擦拭测温体[Sen-sor]，更换新测试布时应先清洗干净。 5、恒温恒湿试验箱湿球水位之检查与调整积水筒水位不可过高，使水溢出积水筒或过低使湿球测试布吸水不正常，影响湿球的准确性水位大约保持六分满即可。积水筒水位之调整，可调整积水盒的高低。
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呼吸道合胞病毒感染对豚鼠咳嗽相关气道功能及其神经递质的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
叶新民 钟南山 刘春丽 陈如冲 赵谨 【摘要】 目的 观察呼吸道合胞病毒RsV(感染)对豚鼠咳嗽相关的气道功能及神经递质的影响，探讨病毒感染后咳嗽的发病机制。方法雄性SPF级豚鼠60只。按数字随机法随机分成正常对照组、病毒感染组和哮喘组，病毒感染组按病毒感染后天数分为6、12、28和42 d四个组，每组10只。通过滴鼻方法接种RSV。Buxco肺功能仪测定咳嗽反射敏感性(CRs)及气道反应性(AR)。荧光定量PcR(Real—time PcR)方法检测辣椒素受体亚型l(VRl)的mRNA表达，免疫组织化学方法检测肺组织VRl及蛋白基因产物9．5(PGP一9．5)的蛋白表达。结果病毒感染6、12、28、42 d组豚鼠CRs[(8．oo士3．86)、(8．70士6．20)、(7．60±4．40)和(6．70±3．71)CCnt]均较正常对照组[(2．50±1．43)ccnt]升高(P值均
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生物化学技术专题：生物碱的鉴别
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
生物碱的鉴别 1．检品溶液的制备： 取粉碎的植物样品约2g，加蒸馏水20~30ml，并滴加数滴盐酸，使呈酸性。在60℃水浴上加热15分钟，过滤，滤液供作以下试验。 2．生物碱类成分的鉴别： 生物碱类成分（除有少数例外）均与多种生物碱沉淀试剂在酸性溶液（水液或稀醇液）中产生沉淀反应。操作如下： （1）取上备酸水浸液四份（每份1 ml左右即可）,分别滴加碘-碘化钾﹑碘化汞钾试剂﹑碘化铋钾试剂﹑硅钨酸试剂。若四者均有或大多有沉淀反应，表明该样品可能含有生物碱，再进行下项试验，进一步识别。 （2）取上备其余酸水浸液，加Na2CO3溶液呈碱性，置分液漏斗中，加入乙醚约10ml振摇，静置后分出醚层，再用乙醚3ml，如前萃取，合并醚液。将乙醚液置分液漏斗中，加酸水液10ml振摇，静置分层，分出酸水液，再以酸水液5ml如前提取，合并酸水液，如此酸提液四份，分别作以下沉淀反应。 a．碘化汞钾试剂（Mayer试剂）：酸水提液滴加碘化汞钾试剂，产生白色沉淀。 b．碘化铋钾试剂（Dragendorff试剂）：酸水提液滴加碘化铋钾试剂，产生桔红色或红棕色沉淀。 c．碘-碘化钾试剂（Wagner试剂）：酸水提液滴加碘-碘化钾试剂，产生棕色沉淀。 d．硅钨酸试剂：酸水提取液滴加硅钨酸试剂产生淡黄色或灰白色沉淀。 此酸水提液与以上四种试剂均（或大多）产生沉淀反应，即预示本样品含有生物碱。 （3）备注：以上（1）、（2）沉淀反应结果：沉淀的多少以“+++”，“++”，“+”表示，无沉淀产生则以“-”表示。若（1）项试验全呈负反应，可另选几种生物碱沉淀试剂（可参考有关资料）进行试验，若仍为负反应，则可否定样品中有生物碱的存在，不必再进行（2）项试验。
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生物化学技术专题：蒽苷的鉴别
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
1．检品溶液的制备： 取大黄粉末2克，加乙醇20ml，在沸水浴上回流浸提10分钟，过滤供鉴别用。 2．鉴别试验： （1）与碱成盐显色反应（Borntrager反应）：取1ml乙醇提取液，加入1ml 10% NaOH溶液，如产生红色反应，加入少量30%过氧化氢液，加热后红色不褪，加酸使呈酸性时，则红色消褪再碱化又出现红色。 注：或取大黄粉末少许，置小试管中，加水1~2ml，加浓H2SO4 2-3滴，置水浴中加热10分钟，冷却，加乙醚1-2ml振摇。用吸管吸取醚液（黄色）于另一洁净试管中，加入NaOH试液1ml振摇，则醚层应褪为无色，碱层（下层）为红色，示有蒽醌类成分存在，如供试的中草药在以上试验中碱水层仅现黄色，可分出碱水溶液，置试管中，加30%H2O2溶液1~2滴，在沸水浴中加热数分钟，混液如能转为橙红色，说明中草药中可能有蒽酚类成分存在。 （2）升华试验：取大黄粉末少许，置载玻片上，玻片两端各放短木棍一小段，然后另取一洁净载玻片，放置于小棍上，注意勿触及下面粉末。然后移置在三足架的铁纱网上小心加热（勿使粉末炭化）至玻片上有升华物凝结为止，取下盖片，使升华物面向上，放于显微镜下观察，可见多数黄色针晶或羽毛状晶体（蒽醌衍生物）。此晶体遇碱液呈红色。 （3）园形滤纸层析： 样品：大黄醇浸液 显色：1）于自然光下观察色带 2）于紫外光下观察荧光环 3）氨熏，观察是否出现红色环，再置uv下观察荧光环 4）喷0.5%MgAC2甲醇液，于90℃烘5分钟，是否出现橙红或紫红色环。
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生物化学技术专题：强心苷的鉴别
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
1．检品溶液的制备： 取夹竹桃叶碎块粉末3g，于100ml锥形瓶中加70%乙醇40ml，水浴上浸煮5分钟，放冷，过滤，滤液（或经处理后--方法参照注二）供鉴别用。 [注1]：强心苷的试验都是在较强的碱性条件下进行，如果样品中含有蒽醌，也具有红色反应，防碍检查，因此在检查前需先检查有无蒽醌类成分，若有则应先将其除去，即将乙醇浸液在水浴上蒸发，残渣加CHCl3热溶后过滤，CHCl3液用1%NaOH液振摇，去除蒽醌后，CHCl3液供鉴别用。 [注2]：夹竹桃叶或毛地黄叶绿素，常使醇提液带较深的绿色，影响反应的进行。故需将叶绿素除去，具体方法如下： 乙醇浸提液在水浴上挥去大部分乙醇（不让乙醇挥尽），再加水适量，使含醇量约20%左右，稍热后即放冷，过滤，滤液即可供试验用，或将滤液在水浴上浓缩至糖浆状，加入95%乙醇10ml溶解再供试验用。 2．鉴别试验： （1）三氯化铁冰醋酸反应（Keller-Kiliani反应）：取醇提液或经处理后的CHCl3或醇液1ml，水浴上蒸干，残渣溶于冰醋酸2ml中，加入1%FeCl3乙醇液1滴，混合均匀，倾入干燥小试管中，再沿管壁缓慢加入等体积浓硫酸，静置，二液交界处显棕色（苷元），渐变为浅绿，兰色，最后上面醋酸层全呈兰色或兰绿色（ -去氧糖）。 （2）碱性3.5-二硝基苯甲酸反应（Kedde反应）：取1ml醇浸提液，加入碱性3.5-二硝苯甲酸试剂3~4滴，产和红色或红紫色反应。 （3）亚硝酰铁氰化钠反应（Legal反应）：取1ml醇浸提液或经处理后的CHCl3或醇液在水浴上蒸干，用1ml吡淀溶解残渣，加入0.3%亚硝酰铁氰化钠溶液4~5滴，混匀，再加入NaOH饱和乙醇液1-2滴，是否呈现红色（若结果不明显可另一取一份供试液如上操作，最后加NaOH饱和乙醇液0-5ml，观察二液交界面有无红色）。 （4）碱性苦味酸（Baljet反应） 取样品醇液1ml，加入碱性苦味酸试剂（苦味酸饱和水液与5%NaOH水液等量混合）数滴，呈现橙或橙红色。
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生物化学技术专题：皂苷的鉴别
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
1．检品溶液的制备： 1）取皂角碎块1g于大试管（或小烧杯）中，加蒸馏水15ml，于30~90°水浴上浸渍15分钟后过滤，滤液供鉴别用。 2）取薯蓣碎块0.5g加上法同样制备得薯蓣水浸液。 3）取薯蓣碎块0.5g于大试管或小锥形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上温浸15分钟，滤液供鉴别。 2．鉴别试验： （1）溶血试验：取滤纸片一小块，于小心处滴加皂角浸液一滴，待干后于同处再滴加一滴，如是反复操作至滴加数滴，干燥后无喷雾血球试液（取牛血、羊血或兔血一份，用玻棒或棉签搅和，除去凝集的血蛋白，加pH7.4磷酸盐缓冲液一份稀释即得），数分钟后观察在红色的背底中是否出现无红色的黄色（或透明）斑点（中心处皂解浸液原点）。（本反应亦可在试管中进行，血球试液中草药浸液中的皂苷溶解后，血球液由浑浊变为澄明。此外还可在载玻片上进行，并在显微镜下观察血球破裂溶解前后的状况）。 （2）泡沫试验：薯蓣浸液，皂角浸液各2ml，分别置于试管中。用力振摇一分钟后放置，在10分钟内观察二管是否都有持久性泡沫产生？ （3）醋酐浓硫酸试验（Liebermann-Burchard反应），皂角浸液5ml，于蒸发皿中在水浴上蒸干，加入1ml醋酐使其溶解，滴于干燥比色盘中，从边沿缓缓滴加浓硫酸1滴，观察颜色变化。 另取薯蓣浸液5ml，置于蒸发皿中，在水浴上蒸干，加入1ml醋酐溶液，并倾入比色盘中，（试管）沿管壁加入几滴浓硫酸，观察界面间是否有紫红色环产生？ （4）氯仿-浓硫酸试验（Salkowski反应）：取薯蓣醇浸液2ml，在水浴上蒸干，有氯仿1ml溶解，转入干燥小试管中，沿壁小心加浓硫酸1ml，氯仿层显红或兰色，硫酸层有绿色荧光，示含甾体皂苷。
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生物化学技术专题：挥发油的定性鉴别
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
1．外观性状： （1）取各种挥发油（松节油、薄荷油、丁香油、陈皮油及桂皮油）观察其色泽，是否有特殊香气，及辛辣烧灼味感。 （2）挥发性：取滤纸屑一小块，滴加薄荷油一滴，放置2小时或微热后观察滤纸上有无清晰的油迹（与菜油作对照实验）。 （3）pH检查：（检游离酸或酚类）。 取样品一滴加乙醇5滴，以预先用蒸馏水湿润的广泛pH试纸进行检查，如显酸性，示有游离的酸或酚类化合物，剩下的样品乙醇液供下面（7）（8）试验用。 （4）FeCl3反应（检酚类）： 取样品一滴，溶于1ml乙醇中，加入1%得FeCL3醇液1~2滴，如显蓝紫或绿色，示有酚类。 （5）苯肼试验（检酮、醛类） 取2，4-二硝苯肼试液0.5~1ml，加1滴样品的无醛醇溶液，用力振摇，如有酮醛化合物，应析出黄一橙红色沉淀，如无反应，可放置15min后再观察之。 （6）荧光素试验法： 将样品乙醇液滴在滤纸上，喷酒0.05%荧光素水溶液，然后趁湿将纸片暴露在5%Br2/Col4蒸汽中，含有双键的萜类（如挥发油）呈黄色；背景很快转变为浅红色。 （7）香荚醛--浓硫酸试验： 取挥发油乙醇液一滴于滤纸上，滴以新配制的0.5%香荚醛的浓硫酸乙酸液，呈黄色、棕色、红色或兰色反应。
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华南农大：miRNA调控植物对镉的应激反应
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
土壤中的重金属污染是一个世 界范围内严重的环境问题，主要是由于一些人为活动，如采矿，工业活动和有机磷的使用等造成。土壤中镉（Cd）可以很容易地被植物吸收，从而导致各种中毒症状，如降低生物量，叶片失绿，抑制根系生长，发生形态学改变，甚至植株死亡。大量研究表明，在植物中，microRNA（miRNA）参与了众多至关重要的生理过程，包括发育调控、信号传导、和胁迫应激。miRNA对于植物的重金属胁迫应激反应非常重要。大豆(Glycine max)是全球最重要的农业作物之一，土壤中的镉污染影响大豆种子的产量和质量。为此，来自华南农业大学的年海教授和杨存义教授领衔的课题组对大豆中参与镉应激反应的miRNA进行了研究，并比较了它们在不同基因型大豆中的表达模式差异，研究成果发表在12月刊的PLoS One上。 研究人员采用一个包含953个特异探针的定制的μParaflo®微流体芯片（定制miRNA芯片检测由联川生物承担完成），鉴定了经镉处理和未处理的HX3（镉耐受型）和ZH24（镉敏感型）大豆株系中miRNA表达模式的差异。总共鉴定出26个与镉应激相关的miRNA，其中有9个miRNA在两个品种中均有发现，有5个和12个miRNA分别在HX3和ZH24中特异表达。通过qRT-PCR对其中16个miRNA进行验证，发现大多数miRNA具有与芯片检测结果相似的表达模式。 为了筛查miRNA调控的靶基因，研究人员利用降解组测序（）并结合生物信息学分析，从上述4个样本混合的降解组文库中鉴定到204个miRNA的376个靶基因。发现其中有55个靶基因被14个镉应激相关的miRNA剪切。GO注释表明，这些靶基因参与了广泛的生物学过程。研究人员通过qRT-PCR对其中10个靶基因的表达谱进行了验证。 本研究详细描述了镉胁迫下大豆miRNA与其靶基因的应答机制，提供了一个更好地理解植物重金属耐受性分子机制的框架。 * Fang X, Zhao Y, Ma Q, Huang Y, Wang P, et al. (2013) Identification and Comparative Analysis of Cadmium Tolerance-Associated miRNAs and Thei
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浅谈色谱进样瓶的高效清洗
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
进样瓶是待分析物质进行仪器分析的盛装容器，其洁净度直接影响到分析结果。随着各界对食品质量安全关注度的上升，色谱分析技术越来越多地运用到食品质量安全检测中来，尤其在农产品检测领域，色谱分析技术已经被广泛运用。在我国，每年都有大量的农产品样品（农药残留、 有机酸等等）需要经由液相色谱、气相色谱进行检测。由于样品数量大，检测过程中有大批进样瓶需要清洗，不仅浪费时间，降低工作效率，而且有时会出现因清洗后的样品瓶洁净度达不到要求而导致实验结果发生偏差的情况。 色谱进样瓶以玻璃材质为主， 极少是塑料材质。一次性使用的进样瓶成本高、浪费大、对环境污染严重，大多实验室都是将进样瓶清洗后重复利用。 实验室常用的清洗进样瓶方法主要分为人工清洗、超声波清洗以及采用色谱进样瓶清洗机清洗三种清洗方式。 人工清洗是先用强酸浸泡24小时，再用清水冲洗，然后加入洗衣粉、洗涤剂、有机溶剂及酸碱洗液，人为的用定制的小试管刷洗。这种常规的刷洗法缺点很多，洗涤剂和水的使用量大，洗涤用时长，容易留有死角，如果是塑料进样瓶，易在内部瓶壁留下刷痕，占用大量人力资源。 超声波清洗的普遍洗涤顺序是先用清水冲洗，再用工业乙醇浸泡，再用超声波清洗2次，再用清水浸泡，再用超声波清洗2次，部分情况下还需先用强酸浸泡。超声波清洗相对人工清洗确实提高了清洗效率及洁净度，但由于超声波清洗需要多次换水，并未实现全自动化，整个清洗过程需要清洗人员的全程跟进，加上清洗时间的不定性，仍存在很大的缺陷。 Q1色谱进样瓶清洗机清洗是通过电脑控制高压多方向动态喷淋水流的温度、压力及冲洗时间、次数等，在相应的清洗剂作用下，将色谱进样瓶表面及内部残留冲洗干净，清水冲洗、清洗剂清洗、清水漂洗等清洗过程在色谱进样瓶洗瓶机内一气呵成，实现了真正意义上的全自动清洗。一方面提高了清洗的时间效率，另一方面以标准化的程序清洗色谱进样瓶，保证了清洗效果。 三种清洗方式的对比
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