-
月末特别篇：配置培养基中的问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
昨日，我司钱接到了来自山东农业大学张同学的，说自己是刚刚接触实验，对培养基有些问题不太明白，特地来咨询胰腺癌。我司钱了解情况后，将问题整理出来发给了技术部。技术部人员对张同学的问题作出了详细的解答。 一、划线获得单个菌落的方法，若是划不出单个菌落，可能是因为： 1. 平板上有过多的水分 2. 划线时接种环未经反复灼烧 3. 多区划线，三区或四区划线二、涂布和倾注的区别： 1. 涂布利于观察，但由于涂布棒上会带有少量的菌液，影响计数的准确性。 2. 涂布更为准确，但不利于观察菌落的状态。三、上海恒远提醒您，配制培养基时应注意： 1. 灭菌温度要严格控制，按照要求灭菌，尤其含糖量较高的温度不应太高，过高会导致糖分焦化，影响质量。 2. 不能反复灭菌，反复灭菌也会导致营养成分的破坏。 3. 含琼脂的灭菌后要摇匀。、 以上就是今天的内容了，上海德尔塔生物的培养基质量给您的保证，质量问题我们是可以无条件包退换的（合同上有注明），安全可靠，等您来购！ 上海恒远主营：elisa试剂盒,人elisa试剂盒,大鼠elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,生物试剂,血清,抗体,培养基,标准品,国产血清、GIBCO胎牛血清等，更多产品及技术详情欢迎我司业务人员！
-
ELISA试剂盒SCI文章血清标本的收集处理和保存方面
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
(1)ELISA试剂盒SCI文章要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。 (2)样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。 (3)血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。ELISA试剂盒SCI文章样本的长时间保存，应在-70℃以下。(4)冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。 (5)ELISA试剂盒SCI文章标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。
-
一种检测细胞存活和生长的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
操作步骤： 1、正常细胞用含血清的培养液培养至对数生长期，常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需 消化)。 2、 低速离心，收集细胞沉淀。 3、 用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。 4、 细胞接种于 96 孔培养板，一般接种密度为 3000～10000 个细胞/孔。通常细胞增殖实验每孔加 3000 个细胞，细胞毒性实验每孔加入 6000 个细胞。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。 5、 37℃ 5%CO2 继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养 6～24h。 6、 按照实验具体要求，给予 0～20μl 干预药物处理，37℃ 5%CO2 继续培养至合适时间。 7、 弃培养液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鲜培养液，在正常细胞培养箱内继续孵育 4h。 8、 弃培养液，每孔加入 110μl Formazan solvent，置摇床上低速振荡 10 min，使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。 9、 在酶联免疫检测仪 570nm 测定各孔吸光度。 注意事项： 1、 MTT solution 尽量减少反复冻融的次数，当颜色变为灰绿色时，请勿使用。 2、 由于使用 96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。 3、 MTT solution 在低温情况下会凝固，置于室温或 20～25℃水浴至全部融解后使用。 4、 Formazan solvent 可以-20℃储存，当产生沉淀或凝固时可以 37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。 5、 观察 formazan 是否完全溶解，亦可以借助光学显微镜观察。 6、 培养正常细胞时尽量细菌避免污染。 7、 应注意设立 OD 调零孔和对照。 8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
-
鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒实验前的准备和注意的基本事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
◆ 仔细阅读鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒说明书◆ 检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期，请勿使用。◆ 按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）◆ 标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存◆ 准备好所有实验额外所需物品，（比如移液器，试管，清洗器，酶标仪）◆ 按鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒说明书将所用试剂平衡至室温，根据检测标本数量确定所需试剂的量◆ 检查试剂盒内每种试剂的贮存条件，保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推荐的条件存储。◆ 检查不稳定或者变质的试剂溶液（比如沉淀或变色）。有些试剂，比如标准品稀释液或者检测稀释液，可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之前，必需充分混匀。而由于沉淀物的特性，在加入酶标板之前，必需不停搅拌。◆ 保证充分的孵育时间和温度。◆ 切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。◆ 在混合或溶解蛋白溶液时，避免泡沫产生。◆ 在实验开始之前，安排好实验流程。◆ 在实验开始之前，清洁工作台。◆ 鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒若有问题，应与我公司的
-
重铬酸钾标准滴定溶液的标定方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
重铬酸钾标准溶液标定方法：1.配制 称取5g重络酸钾于1000ml的水中,摇匀.C（1/6K2Cr2O7）=0.1mol/l2.标定 量取（30.00~35.00）ml配制好的重络酸钾溶液,置于250ml碘量瓶中,加入碘化钾2g,使之溶解,加入20%硫酸20ml,摇匀,密塞,在暗处放置10分钟后加水150ml稀释,用0.1mol/l 硫代硫酸钠标液滴定至终点时,加入淀粉指示剂3ml(5g/l),继续滴定到蓝色消失而显亮绿色,同时做空白样.3.计算 C（1/6K2Cr2O7）=【C1*（V1-V2）】/V 其中C1指的是硫代硫酸钠标液的物质的量的浓度（mol/l） V指的是重络酸钾的用量ML；V1指的是硫代硫酸钠的用量ML ；V2指的是空白实验硫代硫酸 钠溶液的用量ml
-
菌种培养凝集反应技术分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
菌种培养颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutination reaction）。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应稀释抗体。１）直接凝集反应颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应(Direct agglution reaction)。a.玻片凝集法。是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定。b.试管凝集法。是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。菌种培养因为要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小时观察，血清zui高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价。２）间接凝集反应将可溶性抗原（抗体）先吸附在一种与免疫无关的，颗粒状微球表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在有电解质存在的条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应(Indirect agglutination)。由于载体增大了可溶性抗原的反应面积。当载体上有少量抗原与抗体结合。就出现肉眼可见的反应，菌种培养敏感性很高。
-
人正常组织来源细胞培养中污染特点分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
人正常组织来源细胞细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。黑胶虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象人正常组织来源细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，zui终形成恶性循环。病毒：组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。 尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。非同种细胞污染 ：即是细胞交叉污染，由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开
-
原代细胞培养实验器具清洗步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
原代细胞实验器具清洗 l 玻璃类 1、主要有：培养瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，离心管，试管，培养皿等。 2、清洗步骤： 泡在含有洗洁净的自来水中→捞出来用毛刷将实验器具各个面刷洗至少25遍→自来水冲洗25遍→过一遍一蒸水→泡入铬酸,过夜(24h左右)→从铬酸中捞出器具，自来水冲洗25遍→过三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子备用→用前高温灭菌(121℃，25min)→烘干→使用。 注意：新的玻璃器具先要泡盐酸1天，然后清洗步骤与上面相同。 l 塑料类 1 塑料类器具主要包括：孔板，大枪头，瓶盖，滤器，采血管等。 2 清洗步骤： (1)孔板，采血管 原代细胞泡在有洗洁净的自来水中→用超声清洗仪超声3遍(每遍1小时，200C)→在含有洗洁净的自来水中用毛刷或者纱布将各个面刷洗至少25遍→过一遍一蒸水→泡入盐酸过一个礼拜→从盐酸中捞出后自来水冲洗25遍→过三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子→用前包装好照钴→使用 (2)大枪头，盖子，滤器 在含有洗洁净的自来水中用毛刷或者纱布将各个面刷洗至少25遍→用超声清洗仪超声1遍(每遍45分钟，200C)→自来水冲洗→过三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子→用前包装好灭菌→使用 注意：(1)烘孔板时温度不应太高，烘干后用报纸包裹，装入箱子内，照钴，便可使用。 (2) 新的培养瓶盖子泡旧5%稀盐酸1天→再用2%NaOH煮20min →自来水冲洗→洗洁精清洗→用超声清洗仪超声1遍(每遍45分钟，200C)→冲洗15遍→过三遍一蒸(每遍3次)→过三遍三蒸水→烘干使用原代细胞
-
ATCC细胞培养中各种器皿灭菌注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1.ATCC细胞清洗玻璃制品时，浸酸之后一定要用自来水冲洗10—15次。因为残存的洗液对细胞粘附有很大影响。清洗塑料制品时要用棉花或柔软纱布擦洗。千万不要用硬毛刷，否则损害塑料表面后细胞不易贴壁。Tip和Tube一定要用超声清洗处理后逐个清洗。如没有洗净会影响下一次使用的效果。2.干热灭菌时，应在白天使用烤箱，并不断观察，以免发生意外。当温度超过100℃时，不能再打开烤箱门。器皿烤完后，待温度降至100℃之下才能开烤箱门。金属器械和橡胶、塑料制品不能使用干热灭菌方法。.3.高压灭菌后器皿务必晾干或烘干，ATCC细胞以防包装纸潮湿发霉。4.牛血清、大部分培养基、胰酶和一些生物制剂是有机溶液，均不能高压(如TdR，秋水仙素，谷氨酰胺，异硫氰酸胍，MOPS等)。5.滤过除菌时，滤器在使用前先装好滤膜(有时可在上面加一层定性滤纸)，包好，经高压灭菌后才能使用。滤过酶类制剂时应待滤器温度降至室温下再进行。过滤时压力不宜过大，压力数字以2为宜。压力太大时微孔滤膜可能破裂，或使某些微生物变形而通过滤膜。装滤膜时位置要准确。另外滤器包装时，螺钉不要拧得太紧，以防高压蒸汽不能进入，待高压灭菌之后，再拧紧使用。6.ATCC细胞使用化学消毒法时，配制75%酒精应用卫生级，不要用化学纯、分析纯和纯酒精。来苏儿水不能用于皮肤消毒，它对皮肤有刺激性。空气消毒时，所有的物品要事先准备齐全并使消毒者有较方便的退出途径。因为甲醛或乳酸加热后放出的蒸气对人的角膜和呼吸道上皮有严重的刺激和伤害作用。
-
ELISA试剂盒如何做好优化
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒质量保证是一个复杂的过程，许多重要的环节都会影响检测质量。每一行业产品都有好有坏，由于生产厂家繁多，让消费者在选择这一块有了很大的困扰。ELISA试剂盒加样的优化：在这一过程中，一般情况下有三次加样，它们分别是加标本，加酶结合物，加底物。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振荡。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、血液收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液，再在其加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。ELISA试剂盒包被条件的优化：1.包被液的选择：一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。2.包被浓度的选择：包被的zui适浓度随固相载体和包被物的性质变化，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要明确针对特定包被抗原的zui适包被浓度需要通过实验来确定。3.包被温度的选择：通常是4-8度条件下放置一个晚上或者37度保温2小时，我们强烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的保持。4.包被抗原的选择：可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质，比如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。
-
ELISA试剂盒测定中试剂的准备Z为关键,啦啦啦！
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
在实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，ELISA试剂盒其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，上海恒远生化试剂有限公司还指出以下几点： ELISA试剂盒的操作步骤 1、取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。 2、分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。 3、标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。 注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。 4、加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 5、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 6、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒弃去，如此重复5 次，拍干。 7、加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。 8、温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。 9、洗板：用稀释
-
试剂盒的参考标准您知吗？且听上海晶抗为您分解
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
我公司的技术专员表示出对ELISA试剂盒的参考标准熟知以下7项就够了： 一、标准曲线 1.定量方法：标准曲线至少由5个浓度组成，测定次数不少于5次，以确定工作浓度范围和IC50范围。 2.定性方法：工作浓度范围通过阴性、临界值浓度和阳性的样品测定来确定，每个浓度重复不少于5次，浓度与响应值之间应有一定的关系。 二、检测限和定量限 1.检测限：20份空白样品测定均值加3倍标准差。 2.定量限：应大于标准曲线中zui低浓度点。对于定量方法，应对该浓度样品至少测定6次进行验证，而不能通过外延法推断。 三、临界值（cut-off值）的确定 对于有zui高残留限量的药物，检测方法的临界值为20份添加MRL浓度的样品重复3次测定的均值减去1.64倍标准差，即95%置信限处。对于禁用药物，检测方法的临界值为定量限，该值应达到公认的指标。 四、精密度和准确度 对于有zui高残留限量的药物，添加浓度为MRL及MRL上下各一个浓度；对于禁用药物，添加浓度为定量限和2倍定量限，每个添加浓度至少测定5个平行样，并至少进行3批实验（不同检测日期，不同标准曲线，不同批次试剂盒）。 1.准确度：回收率范围大于40%或符合相应检测标准的要求。 2.精密度：以变异系数表示。 批内变异系数：每批平行样之间的变异系数小于或等于25%，对于禁用药物小于或等于30%. 批间变异系数：所有样品之间的变异系数值小于或等于30%，对于禁用药物小于或等于40%. 定性方法：阴性和阳性样品各测定不少于50份，确定假阳性率和假阴性率。 五、交叉反应 试剂盒与待检药物类似物、代谢物或共同存在的药物测定交叉反应率。 六、保存期 保存期通过保存条件的稳定性试验结果确定。 七、复核试验 1.定量方法：检测限、IC50以及至少两个添加浓度的准确度和精密度，并与理化方法（或与具代表性进口试剂盒）比较。 2.定性方法：检测限、假阳性率和假阴性率。
-
ELISA试剂盒实验记录的书写步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒实验记录字迹整齐，选用标准的专业术语、计量单位及外文符号，英文缩写出现时须注明全称及中文释名，运用蓝色或黑色钢笔、碳素笔记载，不得运用铅笔或易褪色的笔（如油笔等）记载。试验原始记载须记载于正式试验记载本上，试验记载本应按页码装订，须有接连页码编号，不得缺页或挖补。每次试验须按年、月、日次序在试验记载本相关页码右上角或左上角记载试验日期和时刻，也可记载试验条件如天气、温度、湿度等。ELISA试剂盒试验记载本主页一般作为目录页，可在试验开端后连续填写，或在试验结束时统一填写。 试验记载本应作为宣布论文和试验室科技档案管理的*文件，研究生结业应在离校前将悉数试验记载和其他科研材料上缴试验室保管和存档，不得随意处置或丢掉。试验记载需修正时，选用划线方法去掉原书写内容，但须确保仍可辨认，然后在修正处签字，防止随意涂改或彻底涂黑，空白处可符号“废”字或 打叉。ELISA试剂盒试验记载中应照实记载实践所作的试验，试验成果、表格、图表和照片均应直接记载或订在试验记载本中，变成*记载。
-
今日讲述：ELISA试剂盒实验的操作要点
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒应严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。首先应选取的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。所以ELISA试剂盒的购买，试剂质量的保证以及实验前实验仪器的检察都是很重要的。一、标本的采集及保存 1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3、细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 4、样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。 注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 二、试剂的准备按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂. ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的.自配的缓冲液应用pH计测量较正.从冰箱中取出的试 验用试剂应待温度与室温平衡后使用.试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。三、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 四、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 五、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 六、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 七、测定：以空白空调零，450nm波长
-
上海恒远为您解答：胎牛血清需要灭活吗？
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
相信很多人都有一个疑问，那就是胎牛血清需不需要灭活处理。针对这个问题，上海恒远觉得有必要给大家讲解讲解！ 一般的血清都不要去灭活处理，为什么呢？GIBCO公司在其血清说明书上解析道：经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清，沉淀物的形成会显著增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。除非是在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，才推荐做热灭活。所以在不是做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞培养时，血清尽量不经热灭活。
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信