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GM-CSF细胞因子与免疫疾病的关系
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）细胞因子是一种活跃的免疫效应因子,在体内有着广泛的免疫活性。作为一种免疫佐剂,它不仅可以促进APC(如DC和巨噬细胞)的成熟,提高其抗原提呈能力,而且在T细胞介导的炎症性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤中扮演着关键性作用。细胞因子检测可以研究细胞因子在生理系统中的作用和了解细胞因子产品用于临床**的效果。正常生理条件下,GM-CSF在体内的表达水平较低。在肺黏膜中,GM-CSF主要由上皮细胞产生，GM-CSF在调节肺泡巨噬细胞的微生物防御和清除表面活性剂方面发挥着重要作用。在人类中,90%的肺泡蛋白沉积症PAP是由高水平的GM-CSF中和自身抗体引起的自身免疫性疾病。GM-CSF是促炎细胞因子，在感染或炎症过程中可迅速升高。在炎症部位,GM-CSF通过募集髓样细胞并增强其存活和活化而具有促炎作用。GM-CSF可通过对巨噬细胞，树突状细胞和嗜中性粒细胞的活化，分化和存活的作用在类风湿关节炎发病机制中起关键作用，有研究发现靶向粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的某单克隆抗体在**类风湿关节炎（RA）方面有效且耐受性良好。由于GM-CSF细胞因子广泛参与过敏性和炎症性疾病的发病过程,因此,通过细胞因子检测等手段了解这些细胞因子及其受体的功能与机制，对于了解相关临床疾病的病理生理过程具有重要的指导意义。进行细胞因子检测可以判断机体免疫功能，对于疾病的诊断、病程观察、疗效判断及**监测等均具有重要意义。细胞因子检测的结果还可以作为疫苗免疫学检测的指标。美迪西生物医药可以为广大医药研发人员提供细胞因子检测服务，其生物分析部基础设施齐全、仪器设备先进，拥有的流式CBA、MSD、Luminex系统等技术平台可以进行各种singleplex或multiplex多形式的细胞因子检测。GM-CSF可使巨噬细胞极化为促炎性M1表型，并可诱导包括其他促炎性因子如TNF、IL-1、IL-6、IL-12和IL-23在内的炎性连锁反应。有证据显示GM-CSF在多种自身免疫性疾病的发病和进展中起到至关重要的作用。目前已
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胎牛血清大放价，更有0元试用惊喜来袭！
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
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作者：德尔塔 日期：2022-04-01
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SIGMA试剂，大量现货,SIGMA期货短
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
SIGMA试剂，大量现货,SIGMA期货短 苏州千舍生物，SIGMA试剂，我司常备现货千余种，*。更多SIGMA试剂直接国外订货，周期短、安全、可靠、方便、快捷！为广大科研院校及医院药厂提供极大的方便。部分现货试剂如下： 常卖货号清单 常卖货号清单 常卖货号清单 185310-5G I4381 467871-250G C4642-25G G4410 SML0223-10MG 229520-10G C6780 V900471-25G 482315-1G C8356 V900922-100G 429732-1G V1255 L9283-10MG 236489-100G 335681 524980-1L F2877-500G A9251 F8263-500g F2877-100G D9515 79255-100MG 31232-250G C1184 76524-100MG 334065-50G R2625 650471-1L 203521-100G 75688 V900830-5G 262072-25G T7505 V900852-25G 379816-1G 193992 43820-10G C4151-5G T1503 D0550-100G 71643-250G B8026 52976-1MG-F 30435-500G C3389 P3803-100ml I1406-250MG C3667 A7906 R3875-10MG B5887 82524-1KG 398853-5G C8356 T46108-100G 61197-250G H4272 P1609000 M7634-100G D8418 158534-10G V900271-500G D2629 383112-100G 63138-250G S5631 T2036-100MG M1880-500G C7698 14400-100MG 223506-25G A2058 A7085-100G 223506-500G P3932 K1512-500G C7902-500G 219703 15972-5ML-F C5080-500G R7632 72609-100MG 21097-250G 12072 S3132-100MG 12022-1KG G3632 C2932-5MG C3306-100G 246171 L2378-10MG 71649-500G G8270 I3377-5G 71650-1KG C6762 C7397-1G B6768-500G *09713
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研域生物技术试验: 亮的细胞转染怎么做？
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
做转染试验时小编就抱着一个信仰，就是要给细胞点“色彩”看（荧光），但你知道吗？就这个简单的试验进程，小小的细胞却有着大大的能量，试验进程中带阳离子的脂质体充当着“搬运工”的角色将质粒从胞外“抓”到胞内，而细胞为质粒的仿制、转录、翻译提供“场所和原材料”，自己也跟着“增光填色”,但“上色”进程中会遇到一些问题，总结下来主要有以下二个方面： 细胞状况差 转染功率低 1：转染后细胞状况较差 A：剖析：主要是铺板和反响液配制的原因 细胞状况是整个试验的要害，假如细胞状况欠好，则转染后细胞状况当然就好不了 铺板：过多或不均匀，细胞长的太满就会状况较差 脂质体本身有毒性，假如脂质体加入量太多，会导致细胞状况较差，或者细胞死亡，主张在做正式试验前，先做一下预试验，探索一下质粒和脂质体的配比。 2：转染后荧光功率低 A：剖析：主要是细胞原因和“搬运”进程中的问题 1、细胞状况仍然是重中之重，假如有一段时间转染效果很不理想，必需求换一批次细胞； 2、加入意图质粒后悄悄混匀，太用力会损坏混合液的结构， 3、质粒与转染试剂的比值： 过高一部分质粒不能进入细胞，过低“搬运工”太多，有毒性且浪费； 4、吸、打液体时注意枪头内液面高度，是否彻底打出； 5、反响液配好后等待20min，质粒才会被彻底包裹； 6、反响液滴加加入细胞，使“脂质体+质粒”均匀分布； 7、质粒重复冻融影响浓度，尽量削减冻融次数；脂质体 -20℃保存，用完应立刻放回； 8、必要时需求检测一下质粒的浓度是否精确；
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人多能性干细胞ESCs/iPSCs在诱导脑类器官的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
过去，中枢神经系统（CNS）药物研究主要依赖于啮齿动物模型或细胞体外模型等传统方法。由于人类和啮齿类动物间的物种差异，所获得的数据难以真实地模拟神经发育和疾病机制等。随着干细胞技术的发展，培养人大脑类器官成为目前神经科学研究领域炙手可热的研究项目。大脑类器官是模拟人脑的生理特性的独特的工具，可用于研究正常脑与疾病脑的建模，用于阐明中枢神经系统疾病的发病机制，亦可用于神经发育疾病的探索，或用作中枢神经系统药物筛选的工具。 01 |脑类器官培养方法概述 脑类器官通常从人多能性干细胞(ESCs/iPSCs)开始培养，自发形成脑发育早期所具备的结构和层次。但脑细胞团簇达到一定尺寸后，可发育的阶段会受到营养缺乏和氧供应的限制，继而神经元开始死亡，结构停止发育。 目前，大脑类器官的培养主要分为两种方法，引导分化法 (Guided)和非引导 (Un-guided)分化法。 ①非引导分化法依赖于细胞自身的形态发生和内在的分化能力，将外在干扰小化，得到的类器官有前脑、中脑、后脑、视网膜和脉络丛等多种细胞谱系，该种方法的缺陷在于高可变性和异质性。 ②而引导分化法是加入一些外源性的模式因子，诱导hPSCs分化为想要的细胞谱系。 在类器官结构中，多能性干细胞(ESCs/iPSCs)诱导为拟胚体 (Embryoid Body, EB)，在外胚层形成后，引导分化为神经或非神经方向。引导分化法获得的类器官依赖分化过程中添加的生长因子，大多数是脑区特异性的，如皮层、海马、中脑、大脑等。引导分化法得到的类器官含有神经祖细胞、神经元、星形胶质细胞及其他的大脑细胞。由于是引导性分化，批次间的可变因素少，可以产生对应比例的特异性细胞类型。很多团队都在尝试用不同的方法来培养类器官，分别培养脑区特异的类器官后再将其共培养，类器官会自我融合形成含有不同脑区的类器官，该模型可以用于研究脑区间的相互作用。 02 |3D大脑类器官的制作方法 2013年，Lacaster和Knoblich等发表在Nature及Nature protocol上
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原代细胞培养在药物测试的使用与注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
长期以来，科学家多依赖永生化的细胞系来进行各种研究，但在过去十年，随着细胞生物学的发展，细胞培养领域发生了巨大变化，新型的技术和培养试剂让使用原代细胞作为研究对象成为可能。相比于细胞系，原代细胞更多保留了体内原始组织的生物学特征，如生长和衰老，因此通过原代细胞可建立更好的细胞疾病模型。 原代细胞（Primary cells）是指来源活体组织，经过特定分离方法制备而成的初始细胞。 原代细胞离体时间短且不经过永生化过程，其生物学特性未发生很大变化，仍保持原有的遗传特征，可更好地反映细胞在体内的生长状态，从而获得与体内生理功能更接近的数据，很适合用于药物测试、细胞分化和转化等实验研究。 01 原代细胞与细胞系该如何选？ 原代细胞生长缓慢，一般认为，原代细胞培养的第1代和传代到第10代以内统称为原代培养。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40-50代，这种传代细胞叫做细胞株。当细胞传至50代以后又会出现“危机”，这时有部分细胞的遗传物质发生了改变且带有癌变的特点，从而可能无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 细胞系因其容易培养、种类多、产量可观的优点一直是细胞水平研究，且价格相对低廉，但细胞系“价廉却不一定物美”。研究发现，细胞系在连续培养的过程会不断发生突变，长时间的多次传代可能会导致细胞系的基因型和表型都发生变化，从而影响实验结果。例如有研究报道，HEK293经腺病毒转染后得到的细胞更接近未成熟神经元细胞；MDA-435作为乳腺癌细胞被广泛用于各种研究，但近年来越来越多证据表明其可能为一种黑色素瘤细胞。 原代细胞则不存在这些问题，虽然原代细胞分离和培养的成本可能相对更高，但原代细胞作为更接近体内环境的研究模型，可让你的研究结论更加接近“事实”，且原代细胞的使用可减少动物实验所
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大鼠尿肌酐（UCR）试剂盒（ELISA） 使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
大鼠尿肌酐（UCR）试剂盒（ELISA） 使用说明书 l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠尿肌酐（UCR）的含量。 l 有效期：6个月 l 保存条件：2-8℃ 实验原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠尿肌酐（UCR）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠尿肌酐（UCR）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样本处理及要求 1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 需要而未提供的试剂和器材 酶标仪（450nm） 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 37℃恒温箱 蒸馏水或去离子水
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补充维生素D对婴儿肠道微生物的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
CHILD Cohort研究项目指出，补充维生素D对婴儿肠道微生物群有影响。这项发表在《Gut Microbes》杂志上的研究发现，补充维生素D与婴儿三个月大时微生物群的组成变化有关，特别是导致Megamonas菌的低丰度。“维生素D在早期生命中起着重要作用，支持骨骼代谢和婴儿免疫系统的健康发展，”资深作者、阿尔伯塔大学儿科学系教授Anita Kozyrskyj说。“北美的大多数婴儿接受维生素D，无论是作为母乳喂养的补充，还是作为商业婴儿配方奶粉的一种成分，因此我们想了解维生素D与婴儿肠道内主要细菌的存在或数量之间的关系。”研究人员检查了1157名婴儿的粪便样本，他们发现，无论婴儿是如何喂养（母乳喂养还是配方奶喂养），直接补充维生素D滴剂的婴儿都会导致Megamonas菌减少。先前的研究表明，这种细菌与哮喘或呼吸道病毒感染之间可能有联系，因此维生素D可能对儿童健康有额外的益处，值得进一步研究。研究人员还评估了婴儿和母亲补充维生素D与婴儿肠道中艰难梭菌（C.difficile）的存在之间的关系。“有些婴儿肠道内携带引起腹泻的艰难梭菌，但没有任何症状。然而，当肠道细菌的水平变得不平衡时，这种特殊的细菌会繁殖，导致疾病，并增加儿童后期对慢性病的易感性，”作者Kelsea Drall评论道。研究发现，近30%的婴儿携带艰难梭菌，但在纯母乳喂养的婴儿中，这种细菌的发病率较低。然而，无论是婴儿补充维生素D滴剂还是母亲在怀孕期间或分娩后补充维生素D，都与艰难梭菌定植无关。“有趣的是，母亲食用维生素D强化牛奶是降低艰难梭菌在婴儿体内定植可能性的因素。”根据Kozyrskyj的说法，婴儿的肠道微生物群在早期经历了迅速的变化。因此，了解在这一关键发育时期婴儿肠道中微生物群落的相关因素是至关重要的。
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干旱、低温/低氧胁迫，植物怎么了？
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
干旱（Drought stress）是重要的环境压力之一，原因很多包括低降雨量，盐度，高温和低温以及高强度的光等。干旱胁迫是一种多维胁迫，会引起植物的生理，形态，生化和分子性状的变化。许多植物已经改进了耐旱机制，但这些机制各不相同，取决于植物种类。随着近年来干旱的频率和严重程度的增加，对作物的破坏变得更加严重，降低了总产量，研究植物的抗旱性变得尤为重要。 当环境温度持续低于植物正常所需温度（生物学零度）时，温度对植物形成低温胁迫（Cold stress），对植物的生长、发育和生存造成严重影响。植物遭受低温逆境胁迫时，从感受低温信号到发生一系列生理生化反应和调节基因表达，进而产生抗寒能力。研究低温胁迫对植物生长发育、生理生化指标、低温反应基因的表达与调控，对于我们生产生活有着重要意义。低温胁迫对植物的影响主要体现在酶活性、膜系统、细胞失水等，导致细胞代谢紊乱，甚至是细胞死亡。而某些植物在长期适应过程中逐渐形成各种抗寒本领，如形成胁迫蛋白、增加渗透调节物质，提高保护酶活性等方式来提高植物（细胞）对低温胁迫抗性。 植物生长需要氧气，低氧逆境是植物生长中遇到的普遍的问题。氧气是植物正常生长发育的*的条件，植物吸收氧气而进行呼吸作用，驱动ATP和NADP的合成，维持细胞生长所需的还原力，构成整个植物生命代谢的核心。然而洪涝灾害、灌水过多、土壤板结以及无土栽培等都J易使得植物根系供氧不足，导致低氧胁迫。低氧胁迫（Hypoxia）已经成为影响植物正常生长的重要逆境因子之一，分子氧缺乏导致细胞代谢改变，并可显着降低作物生产力。植物低氧胁迫对植物造成的影响有很多，如：呼吸代谢途径的改变，还原性有害物质积累，矿物质元素吸收失衡、水分吸收减少，激素代谢紊乱。 土壤（盐渍土）中的过量可溶性盐对大多数植物具有毒害作用。盐分是影响植物生长和产量的一个重要环境因子, 高盐会造成植物减产或死亡。盐胁迫（Salt stress）可对植物渗透压、离子交换和
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ELISA实验总做不好？原来如此简单！
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
ELISA实验仪器系统概况 酶标仪特点： 1. 适用多种规格的酶标板：支持6-384孔板的检测，操作轻松灵活； 2. 可选波长范围较宽：400-750nm；340-750nm (UV)； 3. 高确度的分析软件：当今微孔板仪器先进的Gen5软件，分析结果确保准确； 4. 简单易懂的操作系统：数据和图像结果非常直观（以ELISA为例）。 5. 应用广泛：可应用于标准ELISA、酶动力学检测（乙酰胆碱酯酶、乳酸脱氢酶等）、酶活性相关分析（激酶、蛋白酶等）、细胞活性分析（MTT、XTT、IC50）、内毒素分析、凝集分析、细菌细胞生长密度检测、氮氧化物的测定、食品和环境检测、临床检测，血清分析。 全自动洗板机特点： 保证实验结果可重复性，减少人工操作实验误差； 洗板速度快，缩短实验时间； 整板或1-12条可任意组合，节省板子载量； 每孔残留量
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SK-OV-3细胞| SK-OV-3人卵巢癌细胞 处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
SK-OV-3细胞| SK-OV-3人卵巢癌细胞 处理方法 素冉生物依托同济大学，上海市东方医院，上海市di一妇婴保健院供应人脐带间充质干细胞，人脂肪干细胞，无血清细胞冻存液，IPS功能性细胞，HUVEC细胞，各类细胞株细胞系，所有人源细胞均STR鉴定后入库。并供应各类血清，培养基，胰酶，双抗，完全培养基等。 产品名称: SK-OV-3细胞 中文名称: SK-OV-3人卵巢癌细胞 规格：T25瓶 复苏周期：10个工作日左右 培养步骤： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。 3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法： 方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去
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smmc-7721细胞| smmc-7721人肝癌细胞 处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
smmc-7721细胞| smmc-7721人肝癌细胞 处理方法 素冉生物依托同济大学，上海市东方医院，上海市di一妇婴保健院供应人脐带间充质干细胞，人脂肪干细胞，无血清细胞冻存液，IPS功能性细胞，HUVEC细胞，各类细胞株细胞系，所有人源细胞均STR鉴定后入库。并供应各类血清，培养基，胰酶，双抗，完全培养基等。 产品名称: smmc-7721细胞 中文名称: smmc-7721人肝癌细胞 规格：T25瓶 复苏周期：10个工作日左右 培养步骤： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。 3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法： 方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，
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如何消除AV3人宫颈癌细胞培养的污染？
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
当重要的培养细胞污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。 高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。 1）在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。 2）分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。 3）每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。 4）确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2－3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2－3代。 5）在无抗生素的培养基中培养细胞一代。 6）重复步骤4。 7）在无抗生素的培养基中培养4－6代，确定污染是否以已被消除。
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有高特异性和高精度的胞嘧啶碱基编辑器
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
在一项新的研究中，高彩霞教授课题组基于截短的人APOBEC3胞嘧啶脱氨酶（A3Bctd）构建出两种新的CBE，并开发出一种高通量检测方法，用于评估植物CBE中不依赖于单向导RNA（sgRNA）的脱氨变化。 他们首先开发了一种快速、高通量且廉价的方法---nSaCas9介导的正交R环测定法---来评估植物中的CBE。在这种测定法中，正交CRISPR系统nSaCas9被用于在植物细胞中产生单链DNA（ssDNA）区域，作为不依赖于sgRNA的脱氨变化的靶标。为了评估nSaCas9介导的正交R环测定，他们将它与全基因组测序（WGS）测定进行了比较。一致性的结果表明，nSaCas9介导的正交R-loop测定法为评估CBE的不依赖于sgRNA的脱靶活性提供了一种合理、快速和高通量的方法。他们随后通过合理设计构建出16个A3Bctd脱氨酶变体，并评估了它们的在靶效率（on-target efficiency）和不依赖于sgRNA的脱靶活性。他们利用nSaCas9介导的正交R环测定法对这些A3Bctd-BE3变体进行了测试，并选择了7个与高效的在靶编辑活性和下降的脱靶活性相关的突变。之后，他们将这些突变进行组合，产生了9个新的具有双氨基酸或三氨基酸替换的A3Bctd-BE3变体。通过这种方式，他们得到了两个新的CBE变体：A3Bctd-VHM-BE3和A3Bctd-KKR-BE3，这两个变体表现出高效的在靶活性和明显下降的不依赖于sgRNA的脱靶活性。此外，这两种新的CBE变体在它们的靶位点上的编辑表现得更，主要产生单个和两个胞嘧啶（C）编辑。他们还通过全基因组测序验证了A3Bctd-VHM-BE3和A3Bctd-KKR-BE3的高特异性
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