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影响ELISA双抗夹心法实验结果的七大因素分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
前言：双抗夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）是zui典型的免疫分析法，被广泛用于检验医学工作中疾病诊断、食品安全、环境分析等领域。 抗原抗体结合的特异性，酶催化反应的专一性，生物素和亲和素级联放大效应都极大地提高了双抗夹心法ELISA检测的灵敏度，对检测物的快速诊断提供了重要保证。然而，ELISA从标本制备到结果检测的任何一个步骤都影响了zui终结果的判读。今天上海恒远分享一篇影响双抗夹心法ELISA实验结果的七大因素分析，希望能帮助到您！ 1、样本和检抗的加样方式： 双抗夹心法ELISA常规检测方法是样品、抗体试剂单独加入。但有些试剂盒推荐样品和检测抗体一起加来缩减步骤从而加快检测的时间。然而由于游离的样品和检测抗体先结合后形成空间位阻效应，可能会影响样品和包被抗体的结合。所以，一般不建议将ELISA步骤中样品和检测抗体一同孵育。 2、孵育温度： 孵育温度可以选择25℃，这样可以降低检测的背景而又可以保持其在37℃下的检测灵敏度。然而在OD值整体偏低的情况，就不建议这么做了。 3、封闭与否： 牛血清白蛋白在ELISA反应中可以防止酶的分解和非特异性吸附。但是封闭并不是对所有的ELISA体系都必须。有实验表明，牛血清白蛋白封闭并不能提高ELISA体系的检测灵敏度，反而影响了低浓度样品的检测。原因可能是高浓度下的牛血清白蛋白可能会影响低浓度的标准品/样本与抗体结合，导致检测的灵敏度降低。因此，只要抗体的活性高，也可以不用封闭这一常用的步骤。 4、洗液中吐温浓度： 吐温20是阴离子表面活性剂，防止了抗原抗体的非特异性结合同时也防止后面的抗体或样品吸附到微孔板上，因此ELISA包被抗体时一定不能含有吐温20，但是包被以后的步骤中的缓冲液都可以含有吐温20，其浓度在0.05%为*。 5、样本严重溶血： 样本严重溶血红细胞破坏溶解时，释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定试验中，容易在温育过程中吸附于微孔板
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如何调整进口elisa酶联免疫试剂盒实验的对策
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
进口elisa酶联免疫试剂盒试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在科研上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。 下面将操作中各个环节常出现问题解决办法总结于下： 选择试剂： 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。 标本收集与保存： 避免使用肉眼可见的溶血标本、高脂标本和混浊标本；2-8℃下，标本可放置24-48小时，长期保存需放置-20℃下。 请避免反复冻融。 人ELISA试剂盒具体请参照： 试剂使用中的准备工作及注意事项： 试剂盒中会有提示，一般需要准备的有： 洗涤液；用前配制；有的试剂盒会标明，配好的4度下一般可以放一个月；如果没有标明，尽量用新鲜的，不要多配制。 显色液（有A液和B液的），用前15分钟配制； 标准品：有的试剂盒中标准品是已经配制好的，4度保存；有的是要现配制的；按照说明书操作； 浓缩生物素结合的二抗和HRP：如果需要配制，试剂盒没注明配好可以保存多久的话，尽量现配现用（用前15分钟配制）； 原则是：试剂盒上没有指出配制物的储藏方式的话，应该现配现用；不要怕麻烦；还有小瓶的管子开盖前要离心，以免盖子上粘连以后总量不够。 加 样：室温温育的试剂，特别是温育时间比较短的实验操作的试剂，加样对数据的影响比较大，特别要注意加样问题。 不好的操作原因： 不会正确使用加样器； 血清或血浆标本分离不好即进行加样； 进口elisa酶联免疫试剂盒手工操作中，加样板过多造成加样後放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）； 加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。 100004 3-hydroxy-N-2-naphthyl-2-naphthamide 304-59-6 845885-90-7 100005 色酚AS-SW meso-2,3-Dimercaptosuccinic acid 846589-98-8 100006 135-64-8 二巯基丁二酸 847063-13-2 100007 Naphthol AS-KB 304-55-2 847227-37-6 100
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即用型平板培养基制备过程之灭菌
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
不同的即用型平板培养基其制备方法也不同，一般包括以下步骤： （一）准确称量试剂根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。 （二）校正pH值将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。 （三）过滤将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。 （四）分装将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。 （五）灭菌 培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。 即用型平板培养基高压蒸汽灭菌，一般采用15磅／平方（即1.05kg／cm2）压力，此时的温度是121.3℃。灭菌20～30分钟后，可达到完全灭菌的目的。在进行灭菌的时候，首先要把灭菌锅内的冷空气排出，否则，冷空气存在会降低锅内的实际温度，影响灭菌效果。 100029 锌试剂 gossypol 848574-60-7 100030 135-52-4 棉酚 848777-30-0 100031 3-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid, disodium salt 303-45-7 848821-58-9 100032 2-萘酚-3,6-二磺酸二钠 Methenolone Enanthate 848821-61-4 100033 135-51-3 美替诺龙庚酸酯 848821-76-1 100034 disodium 3-aminonaphthalene-2,7-disulphonate 303-42-4 848841-54-3 100037 2-萘胺-3,6-二磺酸钠盐 2,3-Dihydroxybenzoic acid
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转化细胞周期概述
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
转化细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。可分为四个阶段：①G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；②S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期，只有在这一时期H3-TDR才能掺入新合成的DNA中；③G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；④M期又称D期(mitosis or division)，细胞分裂开始到结束。细胞周期（cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，分为间期与分裂期两个阶段 间期 间期又分为三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。 1. G1期 此期长短因细胞而异。体内大部分细胞在完成上一次分裂后，分化并执行各自功能，此G1期的早期阶段特称G0期。在G1期的晚期阶段，细胞开始为下一次分裂合成DNA所需的前体物质、能量和酶类等。 2. S 期 是细胞周期的关键时刻，DNA经过复制而含量增加一倍，使体细胞成为4倍体，每条染色质丝都转变为由着丝点相连接的两条染色质丝。与此同时，还合成组蛋白，进行中心粒复制。S期一般需几个小时。 3. G2期 为分裂期做zui后准备。中心粒已复制完毕，形成两个中心体，还合成RNA和微管蛋白等。G2期比较恒定，需用1～1.5小时。 [有丝分裂] 分裂期 M 期：细胞分裂期。 细胞分裂期：前期，中期，后期，末期。 细胞的有丝分裂（mitosis）需经前、中、后，末期，是一个连续变化过程，由一个母细胞分裂成为两个子细胞。一般需1～2小时。 1. 前期（prophase）染色质丝高度螺旋化，逐渐形成染色体（chromosome）。染色体短而粗，强嗜碱性。两个中心体向相反方向移动，在细胞中形成两极；而后以中心粒随体为起始点开始合成微管，形成纺锤体。随着核仁相随染色质的螺旋化，核仁逐渐消失。核被膜开始瓦解为离散的囊泡状内质网。 2. 中期（metaphase）细胞变为球形，核仁与核被膜已完全消失。染色体均移到细胞的赤道平面，从纺锤体两极发出的微管附着
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大鼠P-HSLELISA试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒森贝伽。 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中P-HSL的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠P-HSL水平。用纯化的大鼠P-HSL抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P-HSL，再与HRP标记的P-HSL抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的P-HSL呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠P-HSL浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：18μmol/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集
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大鼠P-HSLELISA试剂盒操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒森贝伽。 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中P-HSL的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠P-HSL水平。用纯化的大鼠P-HSL抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P-HSL，再与HRP标记的P-HSL抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的P-HSL呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠P-HSL浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：18μmol/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集
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辣根过氧化物酶标记链霉亲和素
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
英文名称Streptavidin/HRP中文名称辣根过氧化物酶标记链霉亲和素克隆类型Polyclonal交叉反应 Biotin产品应用WB=1:5000-50W ELISA=1:5000-50W IHC-P=1:500-5W IHC-F=1:500-5W not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.浓 度1mg/ml产品介绍background:Streptavidin is a tetrameric protein composed of identic subunits. Each subunit binds one biotin molecule with a KD of ~1x10-15M. The preparation contains an N- and C-terminal shortened variant (core streptavidin) with improved properties concerning homogeneity, solubility, resistance towards proteolytic degradation and accessibility of the biotin binding pocket as compared to native streptavidin. The high affinity recognition of biotin and biotinylated molecules has made streptavidin one of the most important components in diagnostics and laboratory kits.This enzyme conjugate solution can be used to stain biotinylated antibodies. Important Note:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
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链霉亲和素产品简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
链霉亲和素产品简介！ 货号：XF9170 规格：1mg/10mg/100mg 保存：-20℃干燥保存，有效期至少保存2年。 纯度：≥99%（SDS-PAGE） 活性：15.7Units/mg，1unit定义为结合1ug生物素所需的链霉亲和素的量（单位mg）。 产品来源：重组蛋白，大肠杆菌表达。 产品简介： 链霉亲和素（Streptavidin）是一种源自于阿维丁链霉菌（streptomyces avidinii）的生物素结合蛋白质，由四个相同的亚基组成，每个亚基可结合一个生物素分子。链霉亲和素与生物素的结合力*，其解离常数约为10-14 M，这一特质是得链霉亲和素-生物素系统广泛应用于荧光显微镜术、免疫电镜，、流式细胞分析、Western杂交、ELISA 检测等传统生物学技术，以及生物芯片和纳米生物学等现代前沿研究领域。与来源于鸡蛋清的亲和素相比，链霉亲和素不含糖及修饰，等电点接近胜利pH值，因而非特异性吸附显著低于前者，可提供更高的检测信噪比。 本公司生产的链霉亲和素是经基因工程改造的重组核心链霉亲和素，不含天然链霉亲和素N-末端C-末端多肽片段，有效避免了这些末端多肽对生物素结合的空间位阻。此外，本产品在每个亚基C-末端引入了组氨酸标签（6xHis），用户可方便的设计基于Ni-NTA的实验方案。 链霉亲和素四聚体表观分子量为57.8kD,单亚基表观分子量为14.4kD 使用方法： 本产品为冻干粉，含微量磷酸钠盐，链霉亲和素在高浓度时、冻干过程中或反复冻溶条件下易 形成不溶的聚集体。推荐以纯水溶解冻干粉至 5-10 mg/ml 浓度，如见溶液略呈浑浊，可经 16000 g 离心 5 分钟去除不溶物。不溶物含量很少，不影响产品有效成分的含量及使用。配置好的溶液可分 装为适宜体积，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融，其活性至少可保持半年。如欲在 4℃下保存溶 液，可添加适量防腐剂（如 0.05%叠氮钠）以避免微生物生长，并于 2 周内用完。 注意事项： 链霉亲和素是一种高度稳定的蛋白质，可抵抗蛋白酶消化、 pH 和温度、以及较高浓度的变 性剂和去污剂。常用的
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硫乙醇酸盐培养基的用法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
硫乙醇酸盐培养基是检验相关产品灭菌后是否灭菌完全的细菌培养基，由于它是分层的培养基故又可成为需厌氧菌培养基，该培养基需要菌可生长在上层，厌氧菌可以生长在底部，兼性则全管生长。硫乙醇酸盐培养基用法介绍如下：1 、称取本品 29.25g,加热搅拌溶解于 1000ml 纯化水中，2 、分装适宜容器 ,其装量与容器高度的比例应符合，3 、培养结束后培养基氧化层 （ 粉红色 ） 不超过培养基深度的 1/2 。4 、121℃高压灭菌 15 分钟迅速冷却。在供试品接种前，培养基氧化层高度不得超过培养基深度的1/5 。5 、否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（ 不得超过 20 分钟 ），迅速冷却 ,只限加热一次，并应防止被污染。
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小鼠 HGF ELISA检测试剂盒检测范围
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒英文名称：Mouse HGF ELISA Kit实验类型：夹心法检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mLzui低检测限：1.0 pg/mL应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体（本产品仅供实验室科研及非临床用途）试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠肝细胞生长因子（HGF）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠肝细胞生长因子（HGF）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
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五个要点教您挑选进口elisa试剂盒
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
对于elisa方法的实验，科研朋友们都知道它的敏感性高并且重复性好，也因此让其在科研中受到了广大科研工作者们的青睐。而现在的供应商之众多而且种属非常齐全，这让不少科研朋友们因而产生了选择性综合症，挑不出自已的哪个试剂盒。现在由上海恒远来为您说说挑选进口elisa试剂盒的五个要点，也希望能够为科研朋友们选购的时候提供帮助。挑选五要素：1、明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性。2、寻找检测这些物种蛋白的试剂盒。3、明确检测何种蛋白。4、做出自己的判断该买哪个。5、咨询供应商elisa是试剂盒使用的抗体类型：多抗还是单抗，单抗是针对什么抗原决定的。上海德尔塔生物科技有限公司将以切实专注的态度面向广大新老客户，代理进口标准品、elisa试剂盒、抗体、血清、生物试剂……详情信息欢迎本公司工作人员，咨询订购。
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细胞培养的诀窍
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1. 确保所有实验室材料都无菌 交叉污染是细胞培养的大敌。即使是zui轻微的污染，也可能毁了几个星期的成果。因培养箱内温暖潮湿，真菌极易生长，因此必须注意定期清洁。此外，在将培养瓶、移液管及其他的相关物品放入超净台之前，应用酒精擦拭干净，以避免污染。 2. 小心处理您的培养物 细胞培养的脆弱性怎么强调也不为过。剧烈摇晃，或连续的温度波动可能会对生长产生不利的影响。确保培养箱是水平的，温度均一，且远离电动仪器。此外，尽量避免一次处理多个细胞系，因为它可能会影响细胞的基因型和表型。您还应定期完成STR图谱分析，以确认细胞系的身份。 3. 在使用前正确解冻细胞 尽管解冻看起来是个简单的步骤，但必须操作得当，以免伤害细胞。长时间暴露在高温条件下会使细胞无法铺板。因此，冻存管应当在37°C水浴中放置2分钟，然后用条件培养基稀释，以避免DMSO造成直接伤害。 4. 使用对数生长期的细胞 细胞培养过程共有3个阶段：停滞期、对数期和平台期，分别代表了低细胞生长、高细胞生长和无细胞生长。zui有活力的细胞是健康的，快速分裂的，在对数期以70-80%的汇合度存在。 5. 在传代之前不要让细胞完全汇合 汇合度是指贴壁细胞占据培养瓶表面积的比例。完全汇合意味着100%的表面都被贴壁细胞覆盖。一定要避免这种状态，因为它意味着细胞不能继续生长。不过，当务之急是使用活跃生长的细胞。 6. 选择*的培养基开发策略 在细胞培养过程中，培养基是控制产品质量、产量和成本的zui重要因素。必须针对每种培养物来定制培养基，以优化实验结果。在决定以哪种方式来开发您的培养基时，您有几个选择。您可以购买现成的，自己开发，也可以与另一家公司合作开发特定的培养基。在这个过程中，您需要考虑时间和成本等因素。 7. 配制干粉培养基时评估水的质量 液体培养基往往会带来比干粉培养基更高质量的结果。这可能与水的质量有关。由于细菌在水中迅速生长，故需要监控内毒素
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碳水化合物的基本介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
碳水化合物是由碳、氢和氧三种元素组成，由于它所含的氢氧的比例为二比一，和水一样，故称为碳水化合物。它是为人体提供热能的三种主要的营养素中zui廉价的营养素。食物中的碳水化合物分成两类：人可以吸收利用的有效碳水化合物如单糖、双糖、多糖和人不能消化的无效碳水化合物如纤维素，是人体必须的物质。 糖类化合物是一切生物体维持生命活动所需能量的主要来源。它不仅是营养物质，而且有些还具有特殊的生理活性。例如：肝脏中的肝素有抗凝血作用；血型中的糖与免疫活性有关。此外，核酸的组成成分中也含有糖类化合物——核糖和脱氧核糖。因此，糖类化合物对医学来说，具有更重要的意义。 自然界存在zui多、具有广谱化学结构和生物功能的有机化合物。可用通式Cx（H2O）y来表示。有单糖、寡糖、淀粉、半纤维素、纤维素、复合多糖，以及糖的衍生物。主要由绿色植物经光合作用而形成，是光合作用的初期产物。从化学结构特征来说，它是含有多羟基的醛类或酮类的化合物或经水解转化成为多羟基醛类或酮类的化合物。例如葡萄糖，含有一个醛基、六个碳原子，叫己醛糖。果糖则含有一个酮基、六个碳原子，叫己酮糖。它与蛋白质、脂肪同为生物界三大基础物质，为生物的生长、运动、繁殖提供主要能源。是人类生存发展*的重要物质之一。
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大鼠TNF2αELISA试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒森贝伽。 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中大鼠TNF2α的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠TNF2α水平。用纯化的大鼠TNF2α抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入TNF2α再与HRP标记的TNF2α抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的TNF2α呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠TNF2α浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：90ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过
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微生物菌种率的现象及原理分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
微生物菌种是工厂常见现象，由于空气质量、设备、操作及各种环境的影响，杂菌易产生，发酵染菌后，需要尽快找出染菌的原因，积极采取措施，抑制杂菌生成，并总结归纳发酵染菌的经验教训，提升整体工作水平。 发酵染菌率和发酵染菌原因分析 一、发酵染菌率 (1)总染菌率：指一年内发酵染菌的批次与总投料批次数之比乘以100得到的百分率。 (2)设备染菌率：统计发酵罐或其他设备的染菌率，有利于查找因设备缺陷而造成的染菌原因。 (3)不同品种发酵的染菌率：统计不同品种发酵的染菌率，有助于查找不同品种发酵染菌的原因。 (4)不同发酵阶段的染菌率：将整个发酵周期分成前期、中期和后期三个阶段，分别统计其染菌率。有助于查找染菌的原因。 (5)季节染菌率：统计不同季节的染菌率，可以采取相应的措施制服染菌。 (6)操作染菌率：统计操作工的染菌率，一方面可以分析染菌原因，另一方面可以考核操作工的灭菌操作技术水平。 二、染菌原因分析 (一)染菌的杂菌种类分析 对于每一个发酵过程而言，污染的杂菌种类的影响是不同的。如在抗生素的发酵过程中，青霉素的发酵污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害更大;链霉素的发酵污染细短杆菌、假单胞杆菌和产气杆菌比污染粗大杆菌更有危害;四环素的发酵过程zui怕污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌;柠檬酸的发酵zui怕青霉菌的污染;谷氨酸发酵zui怕噬菌体污染。因噬菌体蔓延迅速，难以防治，容易造成连续污染。若污染的杂菌是耐热的芽孢杆菌，可能是由于培养基或设备灭菌不彻底、设备存在死角等引起;若污染的是球菌、无芽孢杆菌等不耐热菌，可能是由于种子带菌、空气过滤效率低、除菌不彻底、设备渗漏和操作问题等引起涸 污染的是真菌，就可能是由于设备或冷却盘管的渗漏、无菌室灭菌不彻底或无菌操作不理当、糖液灭菌不彻底(特别糖液放置时间较长)而引起。 (二)发酵染菌的规模分析 从染菌的规模来看，主要有三种。 ①大批量发酵罐染菌。如发生在发酵前期，可是种子带菌或连消设
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