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耳鸣动物模型的建立方法及声音惊跳反射检测法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
耳鸣动物模型的建立方法及声音惊跳反射检测法 一.耳鸣动物模型的建立方法 虽然有多种方式可诱发耳鸣，但目前采用的多是噪声和耳毒性药物这两种方法。在此基础上建立的动物模型不仅可以检测耳鸣诱导是否成功，还可以研究药物**耳鸣的疗效、耳鸣相关的神经生理学机制等。 1.水杨酸诱导的耳鸣 经研究发现几乎所有大量使用水杨酸的风湿病患者都发生了耳鸣伴暂时性听力下降。理论上，可以导致人类耳鸣的药物也可以诱导动物产生耳鸣，因此目前建立的耳鸣动物模型很多是由水杨酸诱导的。水杨酸对耳鸣的诱导作用呈剂量依赖性，诱导耳鸣的最小有效剂量可因动物的种属、注射时间的长短而产生变化，从而产生急性、可逆性的耳鸣，其耳鸣感觉与宽带噪声相似。水杨酸的药代动力学显示水杨酸在脑脊液中的浓度水平较血清中晚２～４小时出现，因而在听觉系统中的作用也在水杨酸注射后2小 时左右发生，这个过程是可逆的，大部分在１-２天后消除。 2.噪声诱导的耳鸣 有资料显示，噪声虽然可使毛细胞保持完整性，但会损害相应的传入神经末端，并进一步损害蜗神经，使神经同步放电活动增加，传入兴奋抑制失衡，导致中枢神经的重塑。在听觉敏感的频率范围内，中间频率较阈值频率的噪声更易诱发动物耳鸣。由噪声诱导的急性耳鸣频谱较宽，频率高于噪声频率，急性耳鸣消失后，即使噪声刺激消失，若干年后依然可能产生慢性耳鸣，它的频谱限制在一个较窄的范围内。即使噪声是纯音，它诱发的耳鸣频谱依然是宽带的。 二. 以惊跳反射为基础的耳鸣动物模型的检测 听觉惊跳反射 惊跳反射是动物被突发的强感觉刺激诱发的一种全身防御反应，一般表现为面部及躯体肌肉的快速收缩，常伴随着当下行为的中止以及心率的增加，可由多种感觉模式诱发。听觉惊跳反射可被瞬间增强的声刺激诱发，一般采用１００ｄＢ及以上的宽带白噪声刺激。人类多用眨眼反 射 作为ＡＳＲ的反应指标，通过测量眼轮匝肌肌电图的波幅和潜伏期来表示，而啮齿类动物则通过底板传
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肠道病毒通用型（EV-U）扩增检测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
肠道病毒通用型（EV-U）扩增检测试剂盒说明书 技术原理： DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。 在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性） 发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。 特点优势： 1.特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。 2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。 3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。 4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。 5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。 需要自备
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二血管阻塞慢性脑缺血模型的制作
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
二血管阻塞慢性脑缺血模型 本文介绍模拟慢性脑血流低灌注所致病理生理改变及认知障碍的啮齿类动物模型，包括大鼠双侧颈总动脉结扎和小鼠双侧颈总动脉狭窄模型。其中，大鼠双侧颈总动脉结扎模型通过结扎大鼠双侧颈总动脉实现，小鼠双侧颈总动脉狭窄通过在小鼠的双侧颈总动脉植入钢制线圈实现。结扎大鼠双侧颈总动脉造成脑血流的下降并能较好模拟慢性缺血所致的病理改变，操作简单、重复性好、死亡率低，被广泛用于慢性脑缺血的研究。该模型可造成脱髓鞘改变、轴突丢失、胶质细胞增生等白质损伤的病理改变。 此外，将结扎大鼠双侧颈总动脉与降低平均动脉压(降至50mmHg)结合，并在缺血10~30min后重新恢复血供，可用于模拟前脑缺血。该模型可引起脑内易感脑区神经元的选择性、延迟性死亡，包括新皮质、海马CA1区的锥体神经元以及尾侧壳核。其中，海马神经元损伤与记忆受损及认知障碍密切相关。该模型所致的神经元选择性损伤可通过组织学和行为学检测方法进行评估。二血管结扎模型手术步骤简单、再灌注操作容易，故较四血管结扎模型更具优势。 一、动物选择 大鼠 在建立大鼠二血管结扎的动物模型时，必须考虑动物的品系、性别以及年龄。由于雌激素对缺血结果有影响，通常选用雄性大鼠。在二血管结扎的动物模型中，最常用的动物是250~300g的雄性 Wistar大鼠。Sprague-Dawley(SD)大鼠和其他品系的大鼠亦可用于本模型的制作。 小鼠 常采用雄性C57BI/6小鼠，体重为24-30g。此外，沙鼠是较为常用的品系。由于转基因和基因敲除小鼠大多来源于C57BI/6品系，为了研究基因在慢性脑缺血病理生理机制中发挥的作用，故目前多用C57BI/6小鼠制作该动物模型。 二、制作步骤 1.大鼠手术操作步骤 所有操作均在无菌条件下进行。手术人员应戴口罩和无菌手套，穿无菌隔离衣。术前所有手术器械均应灭菌且在手术过程中存放在无菌溶液中，如恶霉灵溶液。 大鼠二血管结扎模型操作步骤 (a)大鼠头颈部血管及结扎部位示意图； (b)动物呈仰卧位
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合适的手术器械如何维护保养？
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
手术器械生锈是厂家和使用者关注的重点及痛点。生锈的本质是手术器械表面致密的一层氧化膜（保护膜）的破坏。手术器械材质中含铬，器械表面的保护膜实际是一层致密的氧化铬，氧化铬被破坏，器械表面直接空气接触，生锈概率大大增加。那针对器械防锈这一块，瑞沃德手术器械是怎么做的呢？ 1、材质 瑞沃德的手术器械材质采用的是优质进口不锈钢和人体生物相容性极好的钛合金，其中不锈钢材质的手术器械铬、碳含量均超行业标准，表面生成致密氧化铬保护膜的同时，也增加了器械的硬度，剪、切类器械硬度可达50HRC以上，能提高器械防锈能力，保证器械使用寿命。钛合金材质的手术器械，抗氧化性能好，保护里面金属不受腐蚀。 2、工艺 器械的磨损，也是破坏器械表面保护膜的常见的因素，磨损的因素有很多：手术量大，使用频率高，使用操作不规范；反复处理（清洗，消毒等操作）；器械处理过程中人为的一些因素（撞击等）。瑞沃德的手术器械采用PVD镀膜技术，该工艺大大增加了手术器械的表面硬度，从而耐磨损。同时瑞沃德钛合金手术器械采用了表面等离子加硬工艺，钛合金手术器械质软，该工艺更增加器械刃口硬度，从而提高器械的耐腐蚀和耐磨损能力。 3、维护保养 专业的器械维护保养能让手术器械的使用寿命得到有效保障，瑞沃德拥有自己一套专业完整的手术器械维护保养流程。 常规维护方法 1）【清洗前预处理】 手术结束后，先用多酶清洗剂浸泡5-10min后，使存留在器械表面和机械连接部位缝中的污物分解和软化，切忌直接浸泡在热水、酒精、消毒剂或防腐剂中，这样会使黏液、血液或其他体液发生凝固，影响下一步的清洗；复杂难处理的部位，可先拆开器械，拆开后保管好每一个部件，以便处理后进行组装。 2)【清洗】 用流动的蒸馏水（切忌用生理盐水）冲去肉眼可见的血污，冲洗过程中，需打开器械的各个关节，便于清洗彻底；清洗过程中避免器械之间碰撞，不能使用钢刷或颗粒清洗剂，防止损坏器械防腐蚀性膜层；铰接器械(
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浸渍镀膜法：快速制备纳米颗粒薄膜的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
纳米颗粒薄膜在防反射、防雾、自清洁等多功能涂料领域中应用广泛。它也被频繁用于生产，例如材料保护层，防止金属腐蚀等方面。如何制备这些纳米颗粒薄膜是值得考虑的问题。我们通常很难从目前的几种制备方法中选出最适合自己应用的方法。但如果薄膜的堆积密度不是首先需要考虑的问题时，浸渍镀膜则是目前最简单的纳米粒子涂覆基材的方法。更多百欧林纳米薄膜沉积解决方案，请查看产品页。 浸渍镀膜工艺流程 理论上，浸渍镀膜非常简单。将基材垂直浸入含有纳米颗粒的溶液中。首先让基材保持浸没在溶液中，并留出一些时间进行纳米颗粒沉积；之后，将基材从溶液中提拉出并使其干燥。但是，当需要精确控制沉积材料在基材上的性质时（厚度、沉积密度等），浸渍镀膜的过程也有几个因素需要考虑。 浸渍镀膜过程一般分为三个步骤： 基材浸入 纳米颗粒吸附和基材表面溶剂排出 溶剂挥发 基材浸入 基材的浸入通常是采用垂直浸入的方法。但为了得到不对称的沉积厚度，还可以采用不同角度的倾斜浸入方法。浸入通常由计算机程序控制，以实现自动浸入和恒定的浸入速率。浸入后，将基材保留在溶液中，留出足够的时间完全润湿基材。基材和纳米颗粒表面的物理化学性质都会影响需要浸渍的时间长短。 纳米颗粒沉积 在浸没完成之后，将基材从溶液中提拉出。基材提拉的速度会影响镀层的均匀性，较高的提拉速度会导致镀层较厚。因此，在基材提出的整个过程中应该保持速度恒定，并且避免任何振动。 溶液的浓度也是重要的影响因素。浓度太低会导致基材的镀层不均匀，高浓度溶液会引起溶液相中的纳米颗粒团聚，从而导致纳米颗粒的多层自组装。因此，合适的溶液浓度对保持镀膜的均匀性也十分重要。 在某些时候，可能还会通过将基材浸入多次，从而制备多层薄膜。也可能需要通过加入不同浸渍溶液来生产具有类复合材料的多层薄膜，这些功能都可以使用我们的多杯浸渍镀膜机实现。基材表面溶剂此时会被排出。 挥发 挥发阶段是使溶剂从制备的基
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BRGSF重度免疫缺陷小鼠：聚焦新药研发
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
疾病动物模型是研究人类疾病发生发展机制、药物筛选及疗效评价必不可少的工具，好的疾病动物模型可以加快新药的研发速度。你还在为不知道选择什么小鼠模型发愁吗？你还在为造模发愁吗？赛业生物新栏目《每周一鼠》上线啦，每周更新，为大家讲解一个疾病小鼠模型的故事，希望对大家了解不同的疾病小鼠模型有所帮助。 听完上周的赛业生物云课堂，想必你对BRGSF重度免疫缺陷小鼠及经过人CD34+造血干细胞移植重建后得到的BRGSF-HIS人免疫系统重建小鼠的特点和应用都有了一定的了解，今天就让我们复习总结一下吧。 BRGSF重度免疫缺陷小鼠 BRGSF小鼠是目前市面上免疫缺陷程度最高的小鼠之一，对各种来源的CDX和PDX高度兼容，可用于实体瘤和血液瘤研究。与N*G小鼠不同，BRGSF小鼠为BALB/c背景，其体内拥有完整的补体级联反应，也可用于研究补体依赖的细胞毒性（CDC）机制。BRGSF-HIS小鼠由BRGSF小鼠经人CD34+造血干细胞移植重建而得到，具有所有主要的人造血干细胞分化亚群，人源髓系细胞分化完全，人源细胞长效存在，实验窗口期长，且无贫血现象。 品系名称：BALB/c Rag2tm1Fwa Il2rgtm1Cgn SirpaNOD Flk2tm1lrl 一、BRGSF重度免疫缺陷小鼠的特点 1. 体内CDC机制完整，可用于CDC机制的相关研究。 与N*G小鼠不同，BRGSF小鼠为BALB/c背景，其体内拥有完整的补体级联反应，可用于研究补体依赖的细胞毒性（CDC）机制。例如：可用于对利用CDC机制清除CAR-T的药物进行药效和安全性评估。 2. 对各类CDX和PDX高度兼容。 BRGSF小鼠无T、B、NK细胞，NOD背景来源的Sirpa基因（SirpaNOD）取代了BALB/c背景来源的Sirpa基因，小鼠巨噬细胞对人源细胞的吞噬作用弱，对各种来源的CDX和PDX高度兼容。可用于实体瘤和血液瘤研究。 3. 具有较强的辐照耐受力，可用于研究需要放疗的疾病及HIS小鼠的构建。 二、BRGSF小鼠的应用 ☑ CDX/PDX（e.g. 实体瘤、血液肿瘤） ☑ 细胞免疫疗法（e.g. 对CDC介导的CAR-T疗法进行
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超敏一步巢式Taqman qPCR荧光核酸检测技术的机理及应用优势
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
巢式PCR具有很高的灵敏度和特异性，但传统的巢式PCR采用两对引物，通过两轮PCR，进行目标产物的扩增。这种操作的不便性，使得其高灵敏度的特性难以应用到快速检测和临床诊断中。在单管巢式PCR的扩增中，由于内侧引物会阻碍外侧引物的扩增，因此标准的Taq DNA聚合酶不能在单管巢式PCR的扩增中，发挥其高灵敏度的特性。采用耐高温、且具有链置换活性的聚合酶，可保证在单管反应中，内外两侧引物同时扩增，巢式PCR才能达到真正意义上的高灵敏度。一步法巢式PCR（One-Step Nested PCR）技术最早报道于2013年，虽然其拥有高灵敏度的检测特性，但始终未能在核酸检测领域获得广泛应用。其主要原因是SD聚合酶的链置换活性过于强烈，而导致外切酶活性作用的机会太弱，导致高信噪比的TaqMan探针无法应用于One-Step Nested PCR。因此，One-Step Nested PCR的荧光探针检测只能依靠特异性和信噪比欠佳的发卡FRET探针。凭借在分子工具酶改造工作中积累的的丰富经验，开发出具有探针切割活性的SD 2.0 DNA Polymerase和SD 3.0 DNA/RNA Polymerase，结合独有的P-Bond锚定探针技术，将高信噪比的TaqMan探针应用到One-Step Nested PCR上，建立起了TaqMan One-Step Nested qPCR方法。运用TaqMan One-Step Nested PCR方法检测DNA或RNA分子，在检测灵敏度和扩增速度方面，都是传统TaqMan PCR法难以企及的。因此，TaqMan One-Step Nested PCR技术将是未来基因检测市场争夺战中的最有利武器之一。一、One-Step Nested PCR 高灵敏度机理在标准PCR过程中，使用上游和下游两条引物对靶基因进行热循环扩增，每经过一个循环的扩增，产物最多变为2倍。而在One-Step Nested PCR(或称为PCDR法，Polymerase Chain Displacement Reaction)的扩增中由于使用两条上游引物和两条下游引物，因此在每次热循环过程中，产物增加近4倍，在经过30-40次循环后，核酸产物将会高于PCR法成千上万倍，并且所需的循环数更少。在核酸检测的实验中，One-Step Nested PCR法比标
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LAMP核酸扩增技术的发展、优势、体系及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
一、恒温扩增技术的发展现状 自1980年PCR技术发明后，基于PCR技术的核酸检测迅速应用到临床、食品、环境的检测中，并成为核酸检测的金标准。但PCR的检测技术存在设备体积大、粗样品耐受性差、反应时间长、灵敏度难以达到单copy等诸多缺点，已经难以满足现代核酸检测的要求：速度快（
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Hanson超高精度溶出杯在提高USP2法实验结果的一致性中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
众所周知USP2法实验中溶出杯的质量是影响实验结果精度和重复性的一个显著的因素，针对精度我们对溶出杯质量的要求是什么？我们能做什么？Hanson公司发表一篇报告专注了这个细节，基于6年的现场PVT测试数据和溶出杯不同生产厂家的精度经验，对于超高精度溶出杯（Hanson SPV）性能定义的目标就是明显地减少溶出杯变化系数和极高地通过USP PVT第一阶段的测试。并且，最近的生产方法改进和产量的放大使得在经济性上和普通的溶出杯成本非常接近。基于长期的SR8溶出仪SPV成功经验，Hanson现在也能将此产品成功应用于Vison G2系列溶出仪上。 ●6年标准溶出杯和超高精度溶出杯PVT现场测试结果对比 ●通过X射线扫描球体内临界表面的细节 ●色彩映射出溶出杯的一致性，与理想几何的形状的偏差 ●最初的和改进后的标准药片，几何型溶出杯的引入以及USP PVT测试CV考核增加了超高精度溶出杯的需求 ●可以事先发现，调研溶出杯几何形状、流体力学和溶出速率的密切相关性 ●玻璃溶出杯生产方法和最近技术提升了质量和控制了成本 在这个20页的题目为“Improving the Consistency of USP Apparatus 2 with Hanson Research Super Precision Vessels”报告中，Hanson 发布在不规则几何与球形和杯与杯间的溶出速率热点、以及以下相关话题的讨论： ●仪器相关影响因素以及溶出杯如何装配的概论 ●避免同时出现药物超出参数范围（out-of-specification）和仪器超出标定范围 （out-of-calibration）棘手问题的结果出现 ●当升级或者当没有升级成Hanson 超高精度溶出杯已知的问题示现 ●超高精度溶出杯的应用于化学标准药片的优势 USP定义了一个理想的几何形状，与这个理想的形状最小的偏差，临近药片的液体流动速率变化的影响和溶出结果的影响也最小，要提高重复性，设备的制造距这个理想的形状越接近越好 -----Cox et al., from “Systematic Error Associated with Apparatus 2 of USP Dissol
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小鼠巨噬细胞蛋白1βelisa检测试剂盒样本处理及要求方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
小鼠巨噬细胞蛋白1βelisa检测试剂盒样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。 仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 小鼠巨噬细胞蛋白1βelisa检测试剂盒注意事项： 1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标
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肿瘤研究热门基因PTEN
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
想调整研究方向，获得学术研究突破口？想获得论文选题思路，提高发文命中率？你需要了解学科发展态势和未来走向！赛业生物专栏《Gene of the Week》每周会根据热点研究领域介绍一个基因，详细为您介绍基因基本信息、研究概况和应用背景等，助您保持学术研究敏锐度，提高科学研究效率，期待您的持续关注哦。今天我们要讲的主角是抑癌基因PTEN。 1 PTEN基因研究概况 PTEN是迄今发现的第一个具有双重特性磷酸酶活性的肿瘤抑制基因，有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶双重特异性，在细胞内多条信号传导途径调控中起着重要作用，自发现以来受到众多学者的关注。PTEN脂质磷酸酶的活性可使磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3）去磷酸化转变为磷脂酰肌醇二磷酸而失活，继而抑制Pl3K/AKT通路，抑制细胞的生长、调控细胞周期。癌细胞中PTEN功能的丧失几乎总是导致PIP3的积累和相关的AKT信号的激活。癌症中PI3K途径效应子的下游激活是PTEN缺失最重要的标志。然而，PTEN缺失也被证明可以通过依赖PIP3的信号激活多种途径，包括Ras–MAPK、Wnt /β-catenin、Notch、Hippo途径。 图1. PTEN抑制PI3K途径和AKT的下游致癌信号。通过使PIP3磷酸化，PTEN阻止了PDK1激活AKT，从而防止了肿瘤的发生。 尽管PTEN-PI3K轴已经很好地建立了，但是有大量的调节机制可以进入PTEN，并且有许多下游机制可以使PTEN发挥作用，从而导致PTEN信号在癌症中的复杂性不断增加。在这些机制中，已证明翻译后修饰（PTM）和蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）可精确控制PTEN的稳定性，活性和定位。越来越多的数据表明，蛋白磷酸酶活性和磷酸酶非依赖性功能均在PTEN介导的肿瘤抑制中发挥作用。总而言之，阐明涉及PTEN信号传导的新途径将使我们进一步理解和认识PTEN在预防肿瘤发生中的作用。 图2. 细胞核中PTEN信号传导的复杂性。 2 PTEN基因编辑小鼠概述 由于PTEN在肿瘤发生中的重要性，因此已设计了许多复杂的基因工程小鼠模型（GEMM），以阐明“PTEN途径”促进肿瘤发生的潜在机制
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大小鼠Morris水迷宫实验方法浅析
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
Morris水迷宫实验是一种强迫实验动物(大鼠、小鼠)游泳，学习寻找隐藏在水中的平台的一种实验，主要用于测试实验动物对空间位置觉和方向觉(空间定位)的学习记忆能力。它广泛应用于学习记忆、阿尔茨海默病、海马和外海马、智力与衰老、新药开发/筛选/评价、药理学、毒理学、预防医学、神经生物学、动物心理学、行为生物学及时辰生物学等多个学科的科学研究和计算机辅助教学(CAI)。 一、实验目的 检测动物的空间记忆和探索能力。 二、实验原理 大(小)鼠虽然天生会游泳，但是它们性喜干燥，厌恶潮湿，同时游泳对于其而言是十分消耗体力的活动，因此它们会本能地寻找水中的休息场所。寻找休息场所的行为涉及一个复杂的记忆过程，包括收集与空间定位有关的视觉信息，再对这些信息进行处理、整理、记忆、加固，然后再取出，目的是能成功地“航行”并且找到隐藏在水中的站台，最终从水中逃脱。 三、实验材料与方法 (一)实验材料 1.实验设备 Morris水迷宫。 2.实验动物及分组 (1)大鼠或小鼠(本实验以大鼠为例)。 (2)根据实验目的将大鼠分组，并将每只大鼠编号。 (3)分笼饲养，自由饮食，动物房温度21～25℃，相对湿度40％～60％，自然光照昼夜节律变化。 (二)实验具体方法 将各组大鼠在正式训练前一天分别放入水中自由游泳2min，使其熟悉水迷宫环境。然后对各组大鼠正式进行Morris水迷宫测试。实验采用航行定位实验和空间探索实验分别测试大鼠的学习能力和记忆能力。 1.定位航行实验共5d 将大鼠从标记的4个入水点依次朝向池壁轻轻放入水中，采集大鼠在2min内寻找到并爬上平台所用的时间(平台在第3象限，平台低于水位2cm左右)，即逃避潜伏期(在站台上稳定10s算找到站台，否则继续记录)。如果大鼠2min内未找到平台，需将其牵引到平台，并停留60s，这时潜伏期记为2min。 2.空间探索实验1d 撤除平台，将大鼠放入水池中，记录大鼠在2min内在平台所放置的目标象限停留时间和穿越平台所在区域的次数。 (三)实验操作中的注意事项 (1)
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肿瘤干细胞研究套路：Wnt信号通路的激活
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
研究背景 人的子宫内膜是一种高度再生的组织，在类固醇诱导下，每个月都有增殖、分化和脱落的周期。有证据表明，子宫内膜干细胞存在于子宫内膜中，并负责子宫内膜每月的周期性再生。子宫内膜在循环卵巢类固醇激素、雌激素和孕激素的影响下发生再生性改变。子宫内膜癌也被证实含有能自我更新的肿瘤干细胞亚群。这些具有干细胞特性的细胞负责肿瘤生长和化疗耐药性。多种细胞表面蛋白已被成功鉴定为各种类型癌症的肿瘤干细胞标志物，而在子宫内膜癌中CD133和CD44蛋白被用于富集肿瘤干细胞，目前缺乏子宫内膜肿瘤干细胞的特异性标志物。 SMOC-2是SPARC家族成员之一，在胚胎发生和伤口愈合过程中高度表达。该基因产物是一种基质细胞蛋白，可刺激内皮细胞增殖和迁移，以及血管生成活性。已有研究表明，SMOC-2可能在性腺和生殖道发育过程中介导细胞间信号转导和细胞类型特异性分化。此外，SMOC-2已被证明是肠道干细胞的特征基因且对于L1介导的肠癌发展是必需的。因此作者想探索SMOC-2是否与子宫内膜癌肿瘤干细胞之间存在关联。 研究结果 为了确定SMOC-2与肿瘤干细胞之间的关联，作者通过流式分别分选出的人子宫内膜癌细胞系AN3CA和Ishikawa的CD133+/CD44+细胞以及CD133-/CD44-细胞（CD133和CD44已经被广泛地认为是多种类型癌症中的肿瘤干细胞的表面标志物），经Western blot及qPCR验证，SMOC-2在CD133+/CD44+中的表达显著高于CD133-/CD44-细胞，提示了SMOC-2与肿瘤干细胞相关。 图1.SMOC2在CD133+/CD44+细胞中的表达。 作者进一步通过siRNA敲低SMOC-2以及慢病毒构建过表达SMOC-2的细胞株，发现敲低SMOC-2后，已鉴定的干细胞相关基因SOX2、OCT4和NANOG表达发生了下调，而过表达SMOC-2则使得这些干细胞相关基因上调。这些结果证明了SMOC-2促进子宫内膜肿瘤细胞的干细胞特性。 图2. SMOC2促进干性相关基因的上调。 体外的细胞实验证明了SMOC-2促进细胞的成球以及增殖之后，作者通过构建CDX模型（cell-derived x
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徕卡超薄切片技术的原理与应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
对样本开展研究时，为了以纳米级分辨率显示其精细结构，通常会使用到电子显微镜。 电子显微镜有两种类型：扫描电子显微镜（SEM）用于对样本表面成像，以及需要使用极薄电子透明样本的透射电子显微镜（TEM）。因此，使用电子显微镜对样本内部的精细结构进行成像时，此类技术解决方案需要制作出非常薄的样本切片。被称为超显微技术的样本制备方法可以产生具有最小伪影的超薄切片（厚度20-150nm）。 在切片过程中，样本的块面（切割切片处）始终保持在一个平直的表面上，可供SEM进行研究。当截面在阵列中成像时，就可以重建样本的三维图像。这种方法称为阵列断层扫描（AT）。超薄切片技术及其在AT中的应用概述如下。 超薄切片技术 超薄切片技术主要用作透射电子显微镜（TEM）的样本制备方法。它允许样本的内部结构以纳米级分辨率进行可视化和分析。它以快速、干净的方式制作超薄的样本切片。超薄切片技术的一个主要优点是切片内电子透明区域的大小和均匀性以及切片产生的速度。 超薄切片技术可用于多种类型的样本，包括生物学试样和工业材料如聚合物（橡胶和塑料）以及韧性、硬质或脆性材料（金属或陶瓷）等。制备这些样本薄片还有其他技术，如聚焦离子束（FIB）铣削、离子刻蚀、三脚架抛光和电化学处理，但超薄切片技术在速度和清洁度方面具有优势。 阵列断层扫描 (AT) 是一种用于细胞和蛋白质结构分析的高分辨率三维图像重建方法。该技术利用扫描电子显微镜（SEM）或光学显微镜（LM）中超薄、树脂包埋连续切片的有序阵列成像。AT技术能够对细胞及蛋白质结构开展定量立体结构分析和可视化观察。其横向和空间分辨率比传统的共焦显微镜更理想。此外，通过生物试样的部分自动化检测来实现更高的处理量。 超薄切片原理 利用阵列断层扫描进行TEM观察以及实现最优化3D重建时，超薄有序的切片是一大前提。超薄切片机（如徕卡显微系统的EM UC7）则可以制作出此类超薄的样本切片（厚度20 ~ 150 nm）。 要在透射电子显微镜中
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Cell Metabolism文献解析 | 丁酸盐激活5-HIAA-Bregs-AhR轴抑制关节炎
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
类风湿性关节炎(RA)是一种由白细胞功能失调引起的疾病，研究数据显示肠道细菌或微生物群的变化可影响RA的正常免疫系统功能。调节性B细胞(Bregs)是一种免疫抑制细胞，它通过产生白细胞介素(IL)-10, IL-35和转化生长因子-1 (TGFβ1)介导免疫耐受，从而抑制多种免疫病如自身免疫性疾病。英国伦敦大学学院Claudia Mauri和Elizabeth C. Rosser研究团队发现补充丁酸盐可改变微生物群的组成，增加血清素衍生代谢物5-羟基吲哚-3-乙酸（5-HIAA）的产生，激活芳烃受体(AhR)抑制生发中心(GC) B细胞和浆细胞的分化以维持Bregs功能从而改善关节炎，相关成果发表于《Cell Metabolism》。 RA患者粪便丁酸盐降低与CD19+CD24hiCD38hiB细胞和IL-10+Breg频率降低相关 肠道微生物群的生态失调可能是RA发病的一个促进因素，本研究团队已报道CD19+CD24hiCD38hiB细胞中高比例的IL-10+Bregs的频率与RA严重程度呈负相关。微生物来源的SCFAs对维持免疫稳态至关重要，因此，作者推测RA的生态失调可能影响SCFAs，导致B细胞稳态异常和Breg频率降低。本研究招募非活动性RA患者收集粪便和血清样本进行代谢组学分析，发现与年龄和性别匹配的健康对照(HCs)相比，RA患者粪便中丁酸盐和丙酸盐显著减少，而乙酸盐没有差异(图1A)。在RA患者中丁酸盐水平与总CD19+CD24hiCD38hiB细胞和IL-10+B细胞的频率呈显著正相关(图1D,1G)。丙酸盐或乙酸盐与CD19+CD24hiCD38hiB细胞或IL-10+Breg频率无明显相关性(图1B-1F)，表明丁酸盐在维持关节炎疾病中Breg稳态方面起作用。 丁酸盐依赖于Bregs抑制实验性关节炎 对抗原诱导的关节炎模型(AIA)小鼠粪便SCFA水平进行分析，发现与关节炎前小鼠相比，急性期和缓解期关节炎小鼠丁酸盐和乙酸盐含量下降(图2A, S2A)。为评估个体SCFA在控制关节炎严重程度方面的作用，并确定B细胞在介导抑制中的可能作用，疾病诱导前在野生型(WT)小鼠和B细胞缺陷(μMT)小鼠的饮用水中添加乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐，发现与对照组(两种基因型的对照
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