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粒度测试的基本概念和基本知识问答
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
一、粒度测试的基本概念和基本知识问答 1. 什么是颗粒？ 颗粒是具有一定尺寸和形状的微小的物体，是组成粉体的基本单元。它宏观很小，但微观却包含大量的分子、原子。 2. 什么叫粒度？ 颗粒的大小称为颗粒的粒度。 3. 什么叫粒度分布？ 用一定方法反映出一系列不同粒径颗粒分别占粉体总量的百分比叫做粒度分布。 4. 粒度分布的表示方法？ 1) 表格法：用列表的方式给出某些粒径所对应的百分比的表示方法。通常有区间分布和累计分布。 2) 图形法：用直方图和曲线等图形方式表示粒度分布的方法。 3) 函数法：用函数表示粒度分布的方法。常见有R-R分布，正态分布等。 5. 什么是粒径？ 粒径就是颗粒的直径，一般以微米为单位。 6. 什么是等效粒径？ 等效粒径是指当一个颗粒的某一物理特性与同质球形颗粒相同或相近时，我们就用该球形颗粒的直径来代表这个实际颗粒的直径。根据不同的测量方法，等效粒径可具体分为下列几种： 1) 等效体积径：即与所测颗粒具有相同体积的同质球形颗粒的直径。激光法所测粒径一般认为是等效体积径。 2) 等效沉速粒径：即与所测颗粒具有相同沉降速度的同质球形颗粒的直径。重力沉降法、离心沉降法所测的粒径为等效沉速粒径，也叫Stokes径。 3) 等效电阻径：即在一定条件下与所测颗粒具有相同电阻的同质球形颗粒的直径。库尔特法所测的粒径就是等效电阻粒径。 4) 等效投影面积径：即与所测颗粒具有相同的投影面积的球形颗粒的直径。图像法所测的粒径即为等效投影面积直径。 7. 为什么要用等效粒径概念？ 由于实际颗粒的形状通常为非球形的，因此难以直接用粒径这个值来表示其大小，而直径又是描述一个几何体大小的最简单的一个量，于是采用等效粒径的概念。 8. 什么叫D50？ D50是指累计分布百分数达到50％时所对应的粒径值。它是反映粉体粒度特性的一个重要指标之一。D50又称中
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土壤水势，含水量及其生理意义
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
土壤中的水分可以用两种方式描述：含水量和水势。含水量是指单位体积土壤中水分的体积或单位重量土壤中水分的重量，单位分别是cm3/ cm3%，kg/ kg%；土壤水势（water potential）是在等温条件下从土壤中提取单位水分所需要的能量，单位是巴（bar, 1 bar=100 kPa）土壤水分饱和，水势为零；含水量低于饱和状态，水势为负值，土壤越干旱，负值越大（测量土壤水分的仪器有TRS-II土壤水势测定仪，详细介绍可见http://www.top17.net/product/1708.html）。一般植物的生存范围是0到-15巴（-1500 kPa）。含水量,水势，这两个指标分别相当于电学中的电子密度和电势。和水势不同，含水量不能反映土壤水分对植物得有效性。譬如15%的含水量，在沙土中已经相当湿润，几乎所有植物都可以生长。如果黏土含水15%，几乎所有植物都无法生存。相反，如果用水势作为测量单位，测量结果则与土壤性质无关，不管土壤性质，不管地理位置，-10巴的土壤都很干旱，-0.5巴的土壤都很湿润。可以看出，单凭含水量，你无法判断土壤的干旱程度。某植物在土壤A中生长的最佳含水量为20% ，换一种土壤B，情况就不见得如此。因此，用含水量进行植物和环境的关系的研究，其结果一般无法推广。成千上万的人用含水量进行植物和水分的研究，但他们的研究结果无法应用于实际。这不仅是人力资源的浪费，更是水资源的浪费。可见测量土壤水势及土壤含水量的意义重大，本文向大家推荐两款测量土壤水分与土壤水势的仪器，测量土壤水分的仪器是TZS-II土壤水分速测仪，此款仪器可快速测定土壤的含水量，详细介绍请见；测量土壤水势的仪器是TRS-II土壤水势测定仪，其仪器携带方便，操作简单，在测量土壤水势方面得到广泛应用，其详细介绍请见。以上是本人对土壤水势及含水量的认识及见解，希望能帮助各位。
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YSI 6600主导型 多参数水质监测仪 常见问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
YSI 6600主导型 多参数水质监测仪 常见问题解答 YSI 6600与YSI 6920相比有哪些不同的功能？ YSI 6600的许多特征具有其独特性。YSI 6600有一个深度传感器，可在水下200米测量。电池寿命约为90天（25℃，每15分钟采样间隔）。YSI 6600的软件适用于英语或法语操作系统，同时还在开放其它语言的版本。除此之外，两个光学传感器接口可用于测量浊度、叶绿素或罗丹明。 YSI 6600 的哪些探头可在野外更换？ 除深度/水位传感器不需要更换外，所有探头均可在野外更换。pH和ORP探头被组合在一个传感器中。 哪些离子选择电极传感器可同时使用？ 所有离子选择电极传感器均可同时使用：酸碱度、氧化还原电位、铵氮/氨氮、硝酸盐和氯化物。 YSI 6600 最大可测深度是多少？ YSI 6600最大可测深度为200米。 YSI 6600有透气式水位和明渠流量测量功能吗？ 有。在浅水中，YSI 6600可以用作高精度的透气式水位测量；YSI 6600还可测明渠流量。 YSI 6600 有内存吗？ 有内存。YSI 6600的内存可用于无人值守监测，每15分钟采样间隔，可投放使用75天，记录150,000个读数。 YSI 6600 适用于10厘米直径的测井吗？ 是的，YSI 6600的直径仅为8.89厘米。 YSI 6600可测量多少参数？ 功能完备的YSI 6600可支持11个不同的直接测量参数和7个计算参数。 YSI6600适合剖面分析吗？ 是的，实际上大多数用户正在使用YSI 6600作剖面分析。探头上的深度传感器提供了数据的空间位置信息，探头自身的时间信息也同时被复合在一条条由其它传感器测量的参数信息上，构成了用户需要的在剖面上水体变化的完整信息。
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PC-ADP 常见问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PC-ADP（脉冲相干声学多普勒剖面仪）代表了多普勒剖面技术的技术发展水平。因为它在固件和硬件上与传统ADP都有所不同，因此，对于这种产品，用户常有很多疑问。 脉冲相干模式到底是什么？ 在脉冲相干模式下，ADP发送一对脉冲，两脉冲间通过一个时间的延迟将之分开。然后测量每个脉冲返回信号的相位。被时间分开的两脉冲之间的相位变化直接与水中颗粒的速度成比例。这与SonTek ADV所采用的技术相同。ADV能以极低的不确定度进行高精度测量而著称。ADP系统的PC模式所能做的是能允许极小单元大小（小至1.6厘米），并且是极低的测量不确定度。有关完整解释，请参阅PC-ADP的操作原理。 PC-ADP与具有“脉冲相干模式”的ADP有何不同？ 作为一种可选的功能，SonTek的许多ADP系统支持脉冲相干模式操作。我们常说的“PC-ADP”是脉冲相干的一个固件选项、特殊硬件和软件的组合（包括一个经优化的用于高分辨率剖面测量、半径为10厘米的换能器头）。 人们通常如何配置PC-ADP？ 最为常见的应用是用于输沙率的研究或其它底部边界层的研究工作。在这些应用中，通常将PC-ADP头朝下安装在三脚架上或其它结构上，距底部约1～2米。当然，也可将其朝上安装以用于其它研究。 PC-ADP可否用于低流速的测量？ 脉冲相干技术是一项优秀的技术，可测量低至毫米级/秒的低流速。最小分辨率为0.1毫米/秒。 PC-ADP可否用于高流速或动态环境？ 高于2米/秒的水流建议使用标准ADP模式测量。 哪种压力传感器可用于PC-ADP？ PC-ADP可以选用连续型、模拟型或频率型各种不同的压力传感器。模拟传感器是一种应变式的压力传感器，位于PC-ADP换能器的头部，其精确度为0.1%；还可以选择更为先进的、精确度为0.01%的RPT共振式压力传感器，但其最大深度限于20米；作为第三个选择，我们也可以外置Paroscientific公司生产的石英压力传感器。 其它有哪些传感器可连接于PC-ADP？ ADP电子设计允许与外部的一个串行口设备和两个模拟口设备（0-5V）集成。通常，串行口设备是
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LGR激光分析仪参考文献
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
LGR是世界上激光痕量气体和稳定性同位素分析技术的领导者。随着OA-ICOS技术日臻完善，为研究者带来了更大的方便，在以往很难测量的领域提供了测量的可能。 因为仪器性能优良，数据稳定，越来越得到用户的认可，目前全世界已有400多台分析仪在为人类更好的服务。仪器广泛应用在碳水通量测定，大气痕量气体变化的测量，水文同位素研究，CO2/H2O稳定性同位素廓线测量和土壤CH4通量等方向的研究。在近几年在国际权威刊物如Nature、Science上发表了大量的文献；同时，很多研究者对LGR激光分析仪做了性能等方面的测试，结果表明分析仪精度高、稳定性好，是目前世界上最先进的激光分析仪。现将部分文献目录列出，共各位用户参考。 Los Gatos 参考文献： [1] Natalia Shakhova, Igor Semiletov, Anatoly Salyuk, Vladimir Yusupov, Denis Kosmach, Örjan Gustafsson. Extensive Methane Venting to the Atmosphere from Sediments of the East Siberian Arctic Shelf. Science, 2010, 327: 1246-1250. [2] D. R. Bowling, J. B. Miller, M. E. Rhodes, S. P. Burns, R. K. Monson, D. Baer. Soil, plant, and transport influences on methane in a subalpine forest under high ultraviolet irradiance. Biogeosciences, 2009, 6: 1311-1324. [3] P. Sturm, A. Knohl. Water vapor δ2H and δ18O measurements using off-axis integrated cavity output spectroscopy. Atmospheric Measurement Techniques Discussions, 2009, 2: 2055–2085. [4] Christopher T. et al., The influence of environmental water on the hydrogen stable isotope ratio in aquatic consumers. Oecologia, 2009, 161: 313-324. [5] D. Penna, B. Stenni, M. S. Wrede. et al.. On the reproducibility and repeatability of laser absorption spectroscopy measurements for δ2H and δ18O isotopic analysis. Hydrology and Earth System Sc
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鸡β内酰胺酶（β-lactamase）ELISA试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
鸡β内酰胺酶（β-lactamase）ELISA试剂盒使用说明书 document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') 6. 标本采集后尽早进行提取，提取
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原代细胞传代技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
原代细胞传代技术 一、贴壁细胞的消化法传代 1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。 2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或与EDTA混合液）轻轻摇动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。 4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 二、悬浮细胞的传代 1、直接传代 ① 让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。 ② 用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。 2、离心法传代 ① 将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1000rpm，5分钟。 ② 去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。 ③ 将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。
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原代细胞分离技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
原代细胞分离技术 取人或动物体内（或胚胎）的组织，将其剪碎至1mm3的组织块，再采用的如下方法进行分离培养： 一、悬浮细胞的分离方法 1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。 2、去掉上清，离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。 3、用培养基重悬，调整适当细胞浓度后分瓶培养。 4、如选用悬液中某种细胞，可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 （一）机械分散法 1、纤维成分很少的脑组织，部分胚胎组织，用剪刀剪碎至1mm3的组织块。 2、用PBS清洗两次后 ①用吸管吹打，分散组织细胞。 ②或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头压出。 ③或在不锈钢纱网内用钝物（注射器钝端）压挤使细胞从网孔中压挤出。 3、收集细胞转入离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。 4、去上清，加入含血清的培养基，重悬后移至培养瓶中培养。 （二）消化分离法 1、酶消化分离法（过夜冷消化法） ①细胞间质较少的软组织，如肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等，用Hanks液清洗组织三次，剪成碎块大小为4毫米左右。 ②再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪组织。 ③加入0.25%的胰蛋白酶，摇匀后放4℃过夜。 ④次日再用Hanks液洗涤，弃去上清，共洗2-3次。 ⑤加入少量含血清的培养基吹打分散，细胞计数，按适当的浓度分瓶培养。 2、非酶消化法（EDTA消化法） ①把组织块剪碎，呈1mm3大小的组织块。 ②将碎组织块在平皿中用无钙镁PBS洗2-3次。 ③加入消化液（胰蛋白酶或胶原酶或EDTA）于37℃水浴中作用适当时间（中间可轻摇1~2次），若组织块膨松呈絮状可终止，若变化不大可更换一次消化液，继续消化直至膨松絮状为止。 ④弃去上清，加入含有钙、镁离子的培养基中止消化反应，并洗涤2-3次后，加入完全培养基。 ⑤用吸管吹打，使细胞充分散开后用纱网过滤后分瓶培养。
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正常人脐静脉原代内皮细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells - 正常人脐静脉原代内皮细胞培养 一、实验试剂 1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement 2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO 3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S 4、染色液： 0.4% Trypan Blue 5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit 6、检测试剂：抗人Ⅷ因子抗体，荧光标记二抗，乙醇丙酮混合液（1：1） 二、实验器械 1、培养皿 2、培养瓶 3、直剪和眼科剪 4、眼科镊和止血钳 5、10ml注射器 6、玻璃滴管 7、烧杯 8、15ml离心管 三、实验流程 取材 ↓ 洗涤脐带外血渍,将胶带剪为15cm左右长 ↓ PBS灌洗，去掉淤血 ↓ 推注空气，排出残存1 × PBS （pH 7.4 ） ↓ 注射器灌注消化液（PriCells），至另一端有消化液流出时用止血钳截断，继续灌注消化液至血管充盈用另一止血钳截断此端，放置到含抗生素1 × PBS （pH 7.4 ）烧杯中 ↓ 烧杯放置到37℃，15-20min水浴 恒温消化，间隔2-3min摇动 ↓ 收集消化液，用培养基洗涤静脉3-4次，3ml/次，之后加入消化终止液（PriCells）反应 ↓ 离心，1000rmp,10min，弃去上清 ↓ 重悬，计数细胞 ↓ 接种密度以5 × 105个/ml ↓ 培养37℃，5%CO2 四、实验操作 1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。 2、取材：正常分娩胎儿脐带，长15-20cm。 3、材料预处理：将获取的血管放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除脐带外部的血渍，之后用注射器吸取洗涤液反复灌住冲洗脐带静脉血管，至血管内无血渍，洗涤液澄清为止。 4、消化液：用注射器关注空气推注入血管中，排出残余洗涤液，在从血管一端开口处注入消化液，当另一开口端有消化液流出即可用止血钳结扎血管，继续灌注消化液，到血管充盈为止，同样用止血钳截流血管，放入含无菌PBS的烧杯中37℃水浴消化30min。 5、终止消化：去掉止血钳，让酶
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正常小鼠原代骨骼肌细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells –正常小鼠原代骨骼肌细胞培养 一、实验试剂 1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement 2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO 3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S 4、染色液： 0.4% Trypan Blue 5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit 6、检测试剂：鼠抗人及大鼠desmin一抗，肌球蛋白（myosin）单克隆抗体 二、实验器械 1、培养皿 2、培养瓶 3、直剪和眼科剪 4、眼科镊和止血钳 5、烧杯 6、15ml离心管 三、实验流程 取肌肉于平皿，Hank’s洗3次 ↓ 剔除脂肪、结缔组织 ↓ 肌肉标本剪约0.1cm3小块 ↓ 移至离心管，Hank’s洗3次 ↓ 静置1min，弃去上层液及漂浮组织 ↓ 0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次 ↓ 生长培养基终止消化，反复吹打，依次100，200，400目过筛 ↓ 离心，1000rmp,10min，弃去上清 ↓ 重悬，计数细胞，接种密度以5 × 105个/ml ↓ 悬液加入未经PPL包被培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度，1h ↓ 转移包被瓶中，生长培养基培养，培养37℃，5%CO2 ↓ 4d换液，以后每天换 四、实验操作 1、 新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块； 2、 将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织 3、 向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化； 4、 反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min； 5、 弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d换液，以后每天换液1次。 五、细胞鉴定 1、显微鉴定：刚分离出的原代细胞比较小，呈球形，折光性强。12h后，细胞开始贴壁，72h后贴壁完全，细胞逐渐延展成梭
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正常小鼠原代脑星形胶质细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells –正常小鼠原代脑星形胶质细胞培养 一、实验试剂 1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement 2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO 3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S 4、染色液： 0.4% Trypan Blue 5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit 6、检测试剂：抗小鼠CD 11b/c抗体，荧光标记二抗，乙醇丙酮混合液（1：1） 二、实验器械 1、培养皿 2、培养瓶 3、直剪和眼科剪 4、眼科镊和止血钳 5、10ml注射器 6、玻璃滴管 7、烧杯 8、15ml离心管 三、实验流程 取材 ↓ 去除大脑脑膜及血管,剔除海马部分 ↓ 1 × PBS （pH 7.4 ）漂洗3次，去掉表层血丝 ↓ 先用眼科镊将组织撕碎成糜状，用眼科剪反复剪10min，再用移液器轻轻吹打20~30次。 ↓ 将组织转移至15ml离心管中，加入消化液（PriCells） ↓ 将离心管放置到37℃，15-20min水浴恒温消化 ↓ 加入消化终止液（PriCells）终止反应 ↓ 离心，1000rmp,10min，弃去上清 ↓ 重悬，计数细胞 ↓ 接种密度以1 × 106个/ml ↓ 培养37℃，5%CO2 四、实验操作 1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。 2、取材：正常昆明小鼠（生后24h内）。 3、材料预处理：将小鼠处死后浸泡入体积分数75% 乙醇中消毒，以血管钳从后夹住颈部，用眼科剪从枕部向前依次分开头皮及颅骨，再用眼科镊依次剥离，剔除脑膜及血管。取大脑（剔除海马部分）置于1 × PBS （pH 7.4 ）中，漂洗去表层血丝，至脑组织呈乳白色。 4、消化液：用眼科镊将组织撕碎成糜状，再用眼科剪反复剪10min，最后再用移液枪轻轻吹打20~30次，将剪碎的组织用枪转移至15ml离心管中，37℃水浴消化15min。 5、终止消化：按1：1加入消化终止液，中止酶反应。 6、收集重悬细胞：1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。 7、培养细胞密度：调整细胞密度以1 × 10
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正常大鼠原代主动脉平滑肌细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells –正常大鼠原代主动脉平滑肌细胞培养 一、实验试剂 1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement 2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO 3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S 4、染色液： 0.4% Trypan Blue 5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit 6、检测试剂：肌动蛋白、a-SMA或Desmin抗体，荧光标记二抗，4%多聚甲醛 二、实验器械 1、培养皿 2、培养瓶 3、直剪和眼科剪 4、眼科镊和止血钳 5、玻璃滴管 6、烧杯 7、15ml离心管 三、实验流程 成年大鼠，麻醉，无菌获取主动脉血管 ↓ 1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤血管，剥去血管外膜外附着的组织 ↓ 纵向剪开血管，内膜向上，用钝镊子横向刮动血管内膜，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）反复洗涤。 ↓ 用镊子横向刮动血管，刮下来中膜层，收集中膜用PBS洗涤，加入少量培养基（PriCells），将血管剪切为1×1mm3的小块，1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次 ↓ 组织块中加入消化液（PriCells），转至15ml离心管中于37℃水浴恒温消化15min，间隔2-3min摇动，静置1min，收集消化液，重复消化3-4次。 ↓ 收集消化液，加入消化终止液（PriCells）终止反应 ↓ 离心，1000rmp,10min，弃去上清 ↓ 重悬，计数细胞 ↓ 接种密度以5 × 105个/ml ↓ 培养37℃，5%CO2 四、实验操作 1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。 2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥麻醉，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。 3、材料预处理：将获取的血管放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除血管外部的血渍，洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。 4、除去内皮细胞：将血管纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，
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正常人肺微血管内皮细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells-正常人肺微血管内皮细胞培养 实验材料： 1. 手术切除的正常肺组织 2. 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶，0.5mmol/L EDTA 3. 6孔培养板：用多聚赖氨酸包被 4. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS（pH=7.4），添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4 5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊 6. 离心管（15ml、50ml） 实验方法： 1． 将肺组织至于无菌的培养皿中用含双抗的1×PBS（pH=7.4）清洗若干次至无明显血细胞； 2． 剪取肺组织边缘微血管丰富的组织，用含双抗的1×PBS（pH=7.4）清洗两次； 3． 将剪取的肺边缘组织剪成2-3mm3大小，加入含双抗的1×PBS（pH=7.4）清洗； 4． 用进行过灭菌处理的玻璃滴管将剪碎的组织块和清洗用的1×PBS（pH=7.4）一起转入15ml离心管中； 5． 250rpm/min离心2 min，小心倾去液体，再加入适量的含双抗的1×PBS（pH=7.4），用玻璃滴管吹吸液体以清洗组织块； 6． 继续250rpm/min离心2 min，小心倾去液体，重复上述步骤若干次，直至离心后的液体中观察不到明显的红色； 7． 将清洗好的组织块重新转至无菌的培养皿中，用无菌的200 ml的吸头将组织块贴于25cm2培养瓶中； 8． 加入2ml培养基，将培养瓶倒置放于37℃、5%CO2的培养箱中2-3h之后正置培养瓶继续培养； 9． 培养若干天后，可观察到组织块周围陆续有细胞爬出，继续培养几天，直至组织块周围的细胞达到较高密度（培养其间两天换液一次，换液操作时动作一定要轻柔，以防组织块被摇下）； 10. 当组织块附近的细胞生长到较高密度后，将贴壁的组织块吹下，换新的培养基继续培养24； 11. 24h后，用0.25%的Trypsin-EDTA消化细胞，FBS中止消化，将消化后的细胞悬液转入15ml离心管，1000rpm/min离心5min，之后倾去废液，用培养基重悬细胞，转入原来的培养瓶中，继续在37℃、5%CO2的培养箱中培养。
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正常大兔主动脉平滑肌细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells: 正常大兔主动脉平滑肌细胞培养 实验材料： 1. 正常大兔主动脉 2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2 3. 消化液：0.125%胰蛋白酶，0.1%胶原酶Ⅰ 4. 细胞培养瓶（T25） 5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊 6. 网筛（100目） 7. 离心管（15ml、50ml） 实验方法： 1. 处死大兔，分离出主动脉，放入预冷的含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复清洗3次。以洗去表面血丝和粘膜； 2. 将清洗过的大动脉剪成2.5~3cm的血管段，剥离外膜; 3. 将去外膜的血管段放入培养皿中，纵向剪开管壁，然后使内膜朝上，用小刀片轻轻刮去内膜细胞。加1×PBS洗涤中膜3次，将中膜剪成1mm3的组织块； 4. 将组织块移入50ml离心管中，加入适量0.1%胶原酶Ⅰ溶液，在37℃恒温箱中消化1~3h，至组织块成絮状为止； 5. 1000r/min，离心5min，去上清。再加入0.125%胰蛋白酶溶液，37℃水浴中搅拌消化5~10min。用含血清的培养基终止消化，吸管轻轻吹打2-3min，以得到分散的平滑肌细胞; 6. 过100目网筛，收集滤液，1000r/min离心5min，弃上清; 7. 加培养液重悬细胞、调整细胞浓度至1×105个/ml，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养； 8. 两天后第一次换液，之后每天换液一次; 9.PriCells-原代平滑肌细胞细胞特制基础培养基 10.PriCells-原代平滑肌细胞细胞培养特制添加剂 11.PriCells-原代细胞分离试剂盒 12.PriCells-原代细胞鉴定试剂盒
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原代细胞复苏的基本操作方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells: 原代细胞复苏的基本操作方法 一、实验准备 （1）仪器：净化工作台、离心机、恒温水浴箱、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱 （2）玻璃器皿：吸管（弯头、直头）、培养瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、废液缸 （3）塑料器皿：吸头、枪头、胶塞、移液管（10ml）、15ml离心管、冻存管（1～2ml） （4）其他物品：微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪 （5）试剂：PBS、小牛血清、培养液、双抗（青霉素、链霉素）、胰蛋白酶（0.08%） 二、操作步骤 （1）从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。 （2）从37℃水浴中取出冻存管，75％酒精消毒后，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管中。PriCells推荐接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。 （3）离心，1000rpm，5min。PriCells推荐不离心。 （4）弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。PriCells推荐小牛血清浓度依据原代细胞种类。 （5）次日更换一次1／2培养液，继续培养。 三、注意事项 （1）将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。 （2）取出冻存管后立即放入水浴中，使其尽快融化（在1－2分钟内）。 （3）复苏**用新配制的培养液。
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