-
立式低速大容量冷冻离心机的常见故障与处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
离心机是利用离心力分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械，应用于医学中的离心机就叫做医用离心机。医用离心机根据最大转速可分为低速离心机（30 000 r/min），按有无制冷设备可分为冷冻离心机和普通离心机。现把多年来在设备维修中遇到的冷冻离心机的故障现象和维修方法以低速冷冻离心机为例进行总结。例:低速冷冻离心机是最高转速为4000 r/min带有制冷设备的离心实验仪器，故障现象主要有离心机不转或转速不准确、温度控制失灵等。 1．故障一 1.1故障现象 离心机不转，转速达不到设定值。 1.2分析与检修 离心机不转和转速达不到设定值的原因有以下3种情况：（1）电源电路部分故障。首先，对电源线、插座、插头、变阻器（WH118，3.3 kΩ，2 W）、继电器（HH52P，HH53P）等易坏部件进行检修。然后，检查开关电源以后电路、空气开关、整流器、滤波器、变压器（OUT18V，3 A），直至电动机部分。（2）电动机自身故障。电动机是离心机的主要部件之一，电动机分为带碳刷电动机和无碳刷电动机。该离心机是带碳刷电动机，现在大多数电动机都是无碳刷电动机。电动机转速达不到设定转速，首先检查轴承，需更换时就更换，需要维护时（比如加注润滑油和清洗时）就维护。然后，检查电动机整流子和电刷是否匹配、电刷磨损是否厉害、是否需要更换等。（3）转速控制部分故障。转速控制系统有一个集成芯片（CW7815C III9501）能确保离心机安全准确的运行，如果转速故障排除以上原因，可更换芯片或者控制面板。 2．故障二 2.1故障现象 离心机温度控制失灵，虽能制冷但是不能设定温度。 2.2分析与检修 离心机温度失灵的原因主要有2个：（1）温度控制面板故障；（2）传感器故障。温度是冷冻离心机一个重要的参数，因为有些样品（比如细胞、蛋白质等）在高温环境下会被破坏，离心机在高速运转下就会产生能量，所以必须利用制冷系统对离心样品进行降温，使其离心环境保持在一定的范围之内（比如1～10℃）。打开机箱盖，检测温
-
层析柜原理、应用和主要硬件指标性能
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
一、层析柜 层析柜是专为生化层析实验而研制的特殊用途低温柜，也可用于其他需要低温环境的实验，或用于物品冷藏。经过科学设计，冷柜总高度一般不超过2米，便于进出房间和电梯。 二、层析柜用途 主要用在生命科学研究的高校学科和科研院所，主要用来进行各种酶类，肽类，大分子，核酸等物质的生化层析分析试验。也可用于其他需要低温环境的实验，或用于物品冷藏。专门为对温度要求很高的各种应用设计，可以在箱内操作层析设备和其它简易安装的仪器和设备。 三、层析柜硬件构成 1、制冷系统 标准的制冷系统由压缩机、冷凝器、蒸发器、膨胀阀、电磁阀等组成。 用管道依次将这些设备连接，形成一个封闭式系统。系统工作时，压缩机将蒸发器所产生的低温低压制冷剂蒸气吸入汽缸内，经压缩机压缩，压力升高（温度也升高）到稍大于冷凝器内的压力时， 将其汽缸内的高压制冷制蒸气排到冷凝器中。（所以压缩机起着压缩与输送制冷剂作用）在冷凝内高温高压的制冷剂蒸气与温度较低的空气（或常温水）进行热交换而冷凝为液态制冷剂，这时液态制冷剂经过膨胀阀降温（降压）后入蒸发器，在蒸发器内吸收被冷却物体的热量后在汽化。这样被冷却物体便得到冷却而制冷剂蒸气又被压缩机吸走，因此在制冷系统中经过压缩、冷凝、膨胀、蒸发四个过程完成一个循环。 制冷系统原理如下图所示： 2、温控系统 温控系统的核心部件是温度传感器，温度传感器对环境温度自动进行采样、即时监控，当环境温度高于控制设定值时控制电路启动，可以设置控制回差。如温度还在升，当升到设定的超限报警温度点时，启动超限报警功能。当被控制的温度不能得到有效的控制时，为了防止设备的毁坏还可以通过跳闸的功能来停止设备继续运行。 温控系统在层析柜里面是重要的硬件，主要要看传感器的灵敏度、数量和分布，温控性能也要关注，一般来说，温控范围、温控精度等参数是有温控器来决定的，和层析柜的关系不大，有的温控系统能控制的温度范围很宽，但实
-
微生物学技术：高压蒸汽灭菌实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
标签： 高压蒸汽 灭菌 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 实验方法 高压蒸汽灭菌实验 实验方法原理 在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 试剂、试剂盒 牛肉膏蛋白胨培养基 仪器、耗材 培养皿 手提式高压蒸汽菌锅 实验步骤 1. 首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 2. 放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 3. 加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 4. 用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用1.05 kg/cm2，121.3℃，20分钟灭菌。 5. 灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 6. 将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。
-
微生物学技术:PCR法检测支原体
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。 1、仪器设备 超净工作台、PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析系统、台式离心机、旋涡混悬器等。 2、实验试剂 选用美国Stratagene公司生产的支原体检测试剂盒（内有引物、阳性对照、内对照、StrataClean resin、缓冲液），dNTP，TapDNA聚合酶，缓冲液，琼脂糖，矿物油。 3、实验操作 PCR反应的前期操作应在无菌环境中进行。 （1）样品的收集：待测细胞用无双抗培养基培养7d，用无菌容器取上清液500ul，4℃保存待测。 （2）模板的制作：在无菌的条件下，取细胞培养上清100ul于一无菌的0.5ml塑料离心管内，盖好盖子，95℃水浴加热5min。 （3）打开盖子，向管内加StrataClean resin10ul，盖好盖子，旋涡混悬器混合，离心5—10s，吸取上清至一新的塑料离心管中，模板制作完毕，4℃保存。 （4）PCR反应：反应体系最适条件为：10mmol/lTris-HCL（pH8.38）；50mmol/lHCL；1.5-2.5mmol/lMgCL2；200umol/ldNTP；2UDapDNA聚合酶。总反应体系为50ul，反应用去离子水均需用12000uw/cm2紫外灯照射。反应如下表： 表 反应程序 程 序 循 环 温度/℃ 时间/min 94 2 1 1 50 2 72 2 94 1 2 40 50 1 72 2 ①在0.5ml塑料离心管中加入35.2ul去离子水及5ul*10Taq反应缓冲液。 ②依次加入下列成分：0.4uldNTPs（25mmol/l），0.4ulTaqDNA聚合酶（5U/ul），2ul引物。 ③加2ul去离子水，总体积45ul。 ④加2ul已制成的模板到反应体系中。 ⑤阳性对照，内对照各5ul加入到各自的反应体系中。 ⑥取一支含有以上反应体系的离心管，加入5ul去离子水作为阴性对照管。 ⑦在反应体系中加入100ul矿物油。 （5）琼脂糖凝胶电泳
-
微生物学技术：用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
(一)实验目的 了解细菌生长曲线的持点及测定原理，学会用比浊法测定细菌的生长曲线。 (二)实验原理 将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。该曲线表明细菌在一定的环境条件下群体生长与繁殖的规律。一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。 比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比关系，利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值)，用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。 实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理，以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。 （三）实验器材 (1)活材料：大肠杆菌(E.coli)。 (2)培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10mL)，浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。无菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。 (3)器材：1mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。 （四）实验方法 方法(1) 1)接种：取13支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明菌名、培养处理、培养时间、组号)。按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2mL的大肠杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡，使菌体混匀。另一支不接种的培养管注明CK(对照)。 2)培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14h后取山，放冰箱中贮存，待测定。加酸处理。取出经4h培养的另二支培养管，按无菌操作法加入lmL无菌酸溶液，摇匀后放回摇床上，继续振荡培养，于培养8h和14h后取出放冰箱中贮存，待测定。加富营养物处理。余下的二支培养管于培养6h后取出，按无菌操作法加入浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养液1mL，摇匀后，继续进行振荡培养，于培养8h和14h后取出，放入冰箱中贮存，待测定。 3)比浊：将培养不同时间、形成不同细胞浓度的细菌培养液
-
微生物学技术：紫外线灭菌实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
标签： 紫外线 灭菌 紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200~300 nm 的紫外线都有杀菌能力，其中以260 nm 的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制。 实验方法 紫外线灭菌 实验方法原理 由于辐射能使空气中的氧电离成［O］，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成过氧化氢（H2O2），O3和H2O2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2 m 为宜。 试剂、试剂盒 石炭酸 来苏尔溶液 牛肉膏蛋白胨平皿 仪器、耗材 紫外线灯 实验步骤 1. 单用紫外线照射 （1）在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关，照射30分钟，将开关关闭。 （2）将牛肉膏蛋白胨平皿盖打开15分钟，然后盖上皿盖，置37℃培养24小时。共做三套。 （3）检查每个平皿上生长的菌落数。如果不超过4个，说明灭菌效果良好，否则，需延长照射时间或同时加强其他措施。 2. 化学消毒剂与紫外线照射结合使用（1）在无菌室内，先喷洒3~5%的石炭酸溶液，再用紫外线灯照射15分钟。 （2）无菌室内的桌面、凳子用2~3%来苏尔擦洗，再打开紫外线灯照射15分钟。 （3）检查灭菌效果。 由于紫外线对眼结膜及视神经有损伤作用，对皮肤有刺激作用，所以，不能直视紫外线灯光，更不能在紫外线灯光下工作。
-
微生物学技术：噬菌体的检查及效价测定
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
一、目的： 1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2. 学会检查噬菌体的方法。 3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 二、原理： 噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑──噬菌斑。了解噬菌体的特性，快速检查、分离，并进行效价测定，对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。 检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等（至于无法采样而需检查的对象，可以用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品）。为了易于分离可先经增殖培养，使样品中的噬菌体数量增加。 采用生物测定法进行噬菌体检查，约需12h左右，因而不能及时判断是否有噬菌体污染。通过快速检查可大致确定是否有噬菌体污染，以采取必要的防治措施。根 据正常发酵（培养）液离心后菌体沉淀，上清液蛋白含量很少，加热后仍然清亮；而侵染有噬菌体的发酵（培养）液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活 性蛋白，加热后发生蛋白质变性，因而在光线照射下出现丁达尔效应而不清亮。此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判断亦较准确。但不适于溶源性细菌及温合 噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培养液也往往不适用。 噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个 噬菌斑，故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。 三、材料： 1. 菌种： 敏感指示菌（大肠杆菌）、大肠杆菌噬菌体(从阴沟或粪池污水中分离)。 2. 培养基：
-
浅析低速离心机和高速离心机技术区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
离心机，根据工作量的大小，主要从转速和容量两个方面选择。下面详细介绍离心机的几个常识： (1)转速：离心机根据最大转速的不同分为低速离心机(30000 rpm／min)，每个离心机都有额定的最大转速，最大转速指的是在空载情况下的转速，但最大转速根据转子种类的不同、样品质量的大小而有差别。例如：一个离心机的额定转速是16000 rpm／min，说明在空载的时候转子每分钟旋转16000次，加上样品以后，转速肯定会小于16000 rpm／min。转子的不同，最大转速也不同(一台进口离心机可选配多个转子)，水平转子可达到1 5000 rpm／min，但角转子大约能达到14000 rpm／min，具体的差别要详细咨询产品销售人员和生产厂的有关技术人员，所以在转速的选择上要慎重，所选择离心机的最大转速要高于目标转速。如：目标转速是16000 rpm/mIn，所选择离心机的最大转速必须高于16000 rpm／min。 (2)温度：有些样品(如蛋白质，细胞等)在高温环境下会破坏，这就要选择冷冻离心机，冷冻离心机都有额定的温度范围。离心机在高速运转的时候所产生热量和离心机的制冷系统平衡在一定温度(一般冷冻离心的样品需要保持在3℃～8℃)，具体能达到多少也和转子有关，如一个离心机的额定温度范围为-10℃～60℃，装上水平转子在旋转的时候可以达到3℃左右，如果是角转子可能只到7℃左右．这一点也要详细咨询产品销售人员和生产厂的有关技术人员。 (3)容量：每次需要离心多少个样品管7每个样品管需要多少容量7这些因素决定一个离心机的总容量，简单的来说离心机的总容量=每个离心管的容量×离心管个数，总容量和工作量的大小是相匹配的。 (4)转子：离心机的转子主要分为两种，水平转子：运转时吊蓝处于水平状态，与转轴成直角，样品将沉淀集中于离心管的底部：角转子：离心容器与转轴成一固定角度，样品将沉淀集中于离心管底部及靠近底部的侧壁。如果希望分离的样品集中于离心管的底部就选择水平转子，如果希望样品集中于离心管的底部和靠近底部的侧壁上就要选择角转
-
高温电炉的炉衬寿命如何来提高？
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
首先说打炉衬，就是用石英砂等材料，沿炉体内壁做一保护层隔离熔炼料与炉体内的感应线圈，保护感应线圈。 通常情况下，我们都了解高温电炉在使用的过程中，需要在炉体中打炉衬和对其进行烧结。 重要的是炉衬打结的好坏，是保证中频电炉的使用寿命和安全的重要前提。打高温电炉炉衬时应注意，用力均匀打结实，一次打完，一次成型。炉衬打好后需经长时间低温烘烤，使之凝结成-个坚固的整体，且具有相当强度，能经受熔液搅拌和加料冲击。烧结时，应遵循空炉低功率慢升温的方法，连续烘烤36小时以上，使之充分凝结固化。 炉衬打结好后，如何正确、合理操作是延长高温电炉使用寿命和保证人生安全的关键： 1.一般情况下，操作使用高温电炉及实验电炉前要先检查，水冷却系统水流是否通畅，冷却水水压、水温是否正常，是否有漏水现象，液压系统是否能正常工作。 2.操作中要做到，小心谨慎不乱摸乱碰，一人操作，一人监护，并且严禁闲杂人员进入机房，防止触电。熔炼过程中要使用干燥的熔料，并做到轻放料，勤加料，当炉内熔料熔化达到需要时应及时倒出，避免高温增加炉衬损耗； 3.勤观察，当发现高温电炉的炉体外侧有发红现象，这就是要漏炉的先兆，应及时采取关停中频电源，倒出炉内熔料等措施，避免漏炉事故的发生。 4.使用中还应注意，当发现炉衬变得很薄，不能继续使用时，应砸掉旧炉衬重做新炉衬，防止漏炉事故发生。 最后再说明一点——定期、正确和精心的维护是延长高温电炉使用寿命和保证安全的重要保障，同时也是避免危害事项的必备步骤
-
恒温水浴锅不加热怎么办
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
恒温水浴锅不加热怎么办 在各实验室的使用率非常之高，样瓶的恒温、干燥、蒸馏等都需要用到恒温水浴锅，既然是恒温水浴锅，那么它的恒温就显得尤为重要，如果一个连温度都不准的水浴锅，就谈不上是恒温水浴锅，既然温控对于水浴锅这么重要那么一旦温控出现故障怎么办呢，下面笔者就简单说几点。 首先如果温控仪显示正常，但不加热，一般为加热元件损坏，在确认加热元件无问题的情况下，多为继电器损坏，若继电器好的情况，则继电器驱动元件（9013）坏。对于固态继电器则较容易损坏。那么我们只能更换固态继电器。 如果电源指示正常，但温控仪无数字显示。此故障大多为温控仪上的稳压元件（7805或7812）在长时间使用过程中发热导致焊点出现断点，或者可能是温控仪出厂时存在虚焊现象导致，可重新焊接即可。 温控仪如果出现999或000跳动且有报警输出，此现象为传感器断路，如出现LLL或半HHH，此现象为传感器短路，此时可更换温度传感器，若更换后不久又出现此种状况，可检查放传感器的不锈钢管接头是否漏水，如果漏水则一起更换。 温控仪出现显示温度远高于或远低于实际温度的情况，此现象一般也可判断为温度传感器损坏，可更换后再试。 温控在水浴锅中的作用非常之大，一个好的温控仪表，就能很大程度的决定恒温水浴锅的好坏。但是如果遇到以上此类问题，我们也要学会一一排除解决，提高我们的工作效率。 了解更多信息您还可以访问：
-
植物组织培养中常用灭菌方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热（烘烧和灼烧）、湿热（常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波）、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。 1、培养基用湿热灭菌 培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1mpa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05mpa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。 关阀再通电后，压力表上升达到0.1mpa时，开始计时，维持压力0.1-0.15mpa，20分钟。 按容器大小不同，保压时间有所不同。见表1。该表所列数字是彻底灭菌很保险的数字，如果容器体积较大，但是放置的数量很少，也可以减少时间。 表1. 培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间 容器的体积/ml 在121℃灭菌所需最少时间/min 20-50 15 75-150 20 250-500 25 1000 30 到达保压时间后，即可切断电源，在压力到0.5mpa，可缓慢放出蒸汽，应注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。当压力降到零后，才能开盖，取出培养基，摆在平台上，以待冷凝。不可久不放气，引起培养基成分变化，以至培养基无法摆斜面。一旦放置过久，由于锅炉内有负压，盖子打不开，只要将放气阀打开，大气压入，内外压力平衡，盖子便易打开了。 对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种工具，可以延
-
PRP（ACR）美容离心机是如何运用到美容行业的
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
PRP是利用自身血液制作的富含血小板的高浓度血浆，每立方毫米（mm3）PRP里含有约一百万单位的血小板（全血浓度的5-6倍)，PRP的pH值为6.5-6.7(全血的pH值=7.0-7.2)。人体的血小板在高浓度的状态下，pH值从7.0-7.2降到6.5-6.7，此时血小板大量分泌具有促进伤口及组织愈合和细胞再生的9种生长因子，所以PRP同时也被叫做富含生长因子血浆[plasma-rich growth factors(PRGFs)]。 PRP 技术是医疗级的皮肤修复专家：上世纪90年代初，瑞士医学家在对富含血小板的血浆进行系统的临床研究中发现，富含血小板的血浆具有很强的止血能力。在之后进行的临床研究中，瑞士医学家们发现这些富含血小板的血浆在固定的浓度和一定的pH值的影响下，能够产生大量健康皮肤所需的生长因子。随后，瑞士医学家们尝试将病人自体血液的pH值从7.0-7.2降低到6.5-6.7，但让其他血液成份活性不变，从而使固定浓度的血小板快速产生大量的生长因子，进一步修复皮肤的各种创伤，这就是PRP技术。 上世纪90年代中期，瑞士国家实验室成功地将PRP技术运用到各种外科、烧伤科和皮肤科的**上。利用PRP技术产生的生长因子能够促进伤口癒合，治癒从前无法**的大面积烧伤、慢性溃疡和糖尿病引起的肢体溃烂等疾病。研究同时发现，将PRP技术与植皮技术综合应用**烧伤非常有效，能够大幅提高植皮的成功率。 但在当时，PRP技术需要在大型实验室製作，需要较为複杂的设备，同时也存在生长因子浓度不够、制作周期长、容易被污染、存在感染风险等问题。 PRP 技术走出实验室： 2003年，瑞士国家实验室经过一系列的研究努力，成功地研製出了改良的PRP技术套装产品PRP-Kit（PRP速生套装），将从前所需要的繁琐配置技术浓缩在一个套装中，PRP-Kit包含制作富含血小板血浆所需要的所有原料，从此，只需在医生的办公室中花一个小时就可以制作出含有高浓度血小板及高浓度生长因子的PRP。新的PRP技术将全血中99% 的白细胞浓缩到PRP中，保证**部位不发生任何感染。能够在很短的时
-
转基因植物的分子检测与鉴定方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
随着分子生物学和植物基因工程的不断发展，越来越多的育种工作者开始利用转基因技术获得常规育种技术难以得到的新种质和新品种。植物转基因技术最大的好处在于可以打破自然界物种间原有的生殖隔离，促进基因在不同物种间的交流，极大地丰富变异类型，增大遗传多样性，为植物新品种的培育提供丰富的育种资源。通过对基因功能的研究，筛选目的基因，还可实现植物性状的定向改良。因此该技术自1983年首次获得转基因植物以来，便深受育种工作者青睐，得到了蓬勃地发展。至今已有30多科约200多种植物转基因成功；国际上相继有30多个国家批准3 000多例转基因植物进入田间试验，并且在美国、加拿大、中国等20多个国家成功进行了商品化生产。转基因作物品种在农业生产中日益显现出巨大潜力。 植物转基因操作中，除利用抗生素抗性和除草剂抗性等选择基因排除非转化细胞而留存转化细胞，以及利用Gus和GFP等报告基因显示转基因成功外，更重要的是从分子水平鉴别出阳性转化体，明确目的基因在转基因植株中的拷贝数和转录与表达情况。本文就常用的转基因植株检测与鉴定方法做一概述，并对近期发展起来的新方法做简要介绍。 1 外源基因整合与否及其整合拷贝数的鉴定 1.1 PCR(polymerase chain reaction)检测 1.1.1 常规PCR PCR技术对目的片段的快速扩增实际上是一种在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下利用DNA聚合酶的酶促反应，通过3个温度依赖性步骤(即变性、退火和延伸)完成的反复循环。经PCR扩增所得目的片段的特异性取决于引物与模板DNA间结合的特异性。根据外源基因序列设计出一对引物，通过PCR反应便可特异性地扩增出转化植株基因组内外源基因的片段，而非转化植株不被扩增，从而筛选出可能被转化的植株。 由于PCR检测所需的DNA用量少，纯度要求也不高，无需用同位素，实验安全，操作简单，检测灵敏，效率高，成本低，使之成为当今转基因检测不可或缺的方法，被广泛应用。然而，PCR检测易出现假阳性结果。引
-
如何选择荧光定量检测法之SYBR Green I
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
总的说来，荧光检测技术可大致分为两大类：通用型的荧光染料检测法和高特异性的荧光探针法。前者主要是利用荧光染料(如SYBR Green I)与双链DNA分子结合发光的特性来指示扩增产物的增加，优点是：无需另外设计荧光探针，无需特别优化条件，简便易行，成本较低，能适用于任何一款定量PCR仪，缺点是专一性不如探针法；而后者则利用荧光标记的特异性探针或者引物来识别模版，优点是特异性更高，适用于扩增序列专一检测(见下表)，不过增加了荧光探针的成本。 性质 特异性 通用性 探针 非特异性检测 荧光染料 SYBR 可逆荧光 引物(非特异性扩增或引物二聚体有影响) 通用 不需要 扩增序列专一检测 荧光探针法 Taqman（包括MGB技术） 积累荧光 引物+ 探针 专用 需要 FRET 一般 实时荧光 引物+双探针 专用 需要 Amplisensor 分子信标（molecular beacon) 积累荧光 引物+ 探针 专用 需要 荧光标记引物 蝎型引物（scorpion primer) 积累荧光 引物 专用 不需要 Amplifluor 积累荧光 引物 通用 不需要 除了以上这些，还有双探针系统(bi-probe system)、BODIPY FL标记探针、Light- up探针、iFRET(induced fluorescence resonance energy transfer) 技术、Qzyme 探针和Magiprobe等等。 这么多种荧光标记方法，在选择的时候当然要根据各人实验设备、实验目的以及实验要求，还有经费来判断了。 荧光染料 对于专一性要求不高的实验，或者是大规模高通量的实验，使用方便、花费较小的荧光染料可以作为你初步的选择对象。老实说，荧光染料法实质上无非就是常规的PCR反应中添加了荧光染料，借助染料和双链DNA的结合所发出的荧光实时监控反应的进程。由于不需要设计序列特异性探针和优化反应条件，价格低廉，通用性强，而且荧光染料法可用于任何一种型号的定量PCR仪，因而同样得到广泛采用。荧光染料法的专一性和PCR没有本质的区别---但是作为“失之毫
-
抗原多肽设计的基本原则
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
为了使产生的抗体获得最佳效果，仔细地设计抗原多肽是很有必要的，设计应满足一个基本条件：在免疫过程中，该抗原既不会产生过强的免疫反应，同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的抗体。抗原设计是一个很复杂的课题，有诸多需要注意的细节。根据我们所积累的经验，有几点关键的基本设计原则可供大家参考： 确定抗体的用途 新开展一个研究项目，弄清楚所感兴趣的蛋白的一些基本特性是很有必要的，特别是如果知道蛋白的结构会对选择抗体易于接触和识别的区域有很大的帮助。然而，在没有这样精确的结构信息的情况下，了解研究的用途会影响多肽设计的策略。例如：如果研究重点是集中在蛋白的不同区域，如C端或N端，或在一种特定状态下的蛋白，如磷酸化等，那么按照所需序列设计的多肽和产生的相应的抗体在应用上应该没有太大的困难，然而，蛋白的构象将影响抗体与其识别区域之间的相互作用。这种情况下可能存在的问题是如果在折叠的蛋白中，该识别区域被藏在蛋白的内部，抗体将无法接触到该区域，则无法产生相互作用。 识别区域的选择原则 一般说来最理想的抗原识别区域应具备亲水、位于蛋白表面和结构上易变形性等特点。因为在大多数的天然环境中，亲水区域倾向于集中在蛋白表面，而疏水区域常常被包裹在蛋白内部，同样道理，抗体只能与在蛋白表面发现的识别区域相互作用，而当这些识别区域有足够的结构易变形性而转移到抗体可接触的位置时，将会与抗体间有很高的亲和性。 连续的与不连续的识别区域 连续的区域是指由连续的氨基酸序列构成的识别区域。大多数抗体是针对连续识别区域的，抗体能与这类区域以很高的亲和力相结合表明这段序列不在蛋白内部。不连续的识别区域是代表有一定折叠的一段多肽序列，或是将两段分离开的多肽连在一起的抗体的识别区域。在某些情况下，针对这样不连续识别区域的抗体也能产生，只是用来免疫的抗原多肽必须具备与该不连续识别区域相似的二级结构，而序列的长度需要符合相关的
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信