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法测效靶细胞杀伤——用流式细胞术
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，国外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确。 具体参照如下： 1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM,37度30分钟。 2、拿出后，1000rpm,5min,可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次 3、与效应细胞混培，作用4-6小时。 4、将细胞混合液消化取出，洗二次，PI工作液5ul，避光30分钟后上流式 5、CFSE，PI双阳性的细胞为被杀伤的靶细胞，除以靶细胞总数，即为杀伤率。 注意事项： 1、CFSE及PI的浓度必须注意，宁低勿高，个人感觉，如果标高的话，在4度放一晚好像会好一些 2、必须设全阴，CFSE单标，PI单标，CFSE＋PI双标并同步化的靶细胞的参照. 3、作用时间不能太长，不要超过8个小时。 你可能感兴趣的生物试剂： 肿瘤/凋亡研究相关抗体 人、大小鼠等Elisa检测试剂盒 生长因子 趋化因子 蛋白酶 神经营养素
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Fluorescent Staining of Cells
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
1. Fluorescent phalloidin in methanol. Phallacidin does not work as well. Dilute 10 ul 330 nM stock into 500 ul PBS for each large coverslip. 2. PBS, solution A. Procedure: 1. Fix and permeabilize cells (see other protocols). Mount coverslip onto a plastic frame reserved for fixed samples. Apply some vacuum grease to the frame before use, if necessary. 2. Turn off light. Dilute fluorescent phalloidin 50x into PBS. 3. Gently pipet phalloidin solution onto coverslip. Stain for 30 min at room temperature. 4. Rinse coverslip 3x with PBS. 5. Fill the chamber with PBS or an antibleaching solution and observe. Dishes may be stored at 4o in a sealed, light-tight container. Immunofluorescence Staining Materials: 1. PBS/BSA: PBS solution A with 1% BSA (Boehringer Mannheim 100 350) and 0.1% NaN3, stored at 4oC. Bring to room temperature before use. 2. Primary antibody, diluted appropriately with PBS/BSA. Need 200 ul per 45x50 coverslip. Clarify in a Eppendorf for 15 min (minimal requirement) or in an ultracentrifuge with the Type 42.2Ti rotor (or Airfuge) if necessary. 3. Secondary antibody, prepared as for the primary antibody. 4. Coverslip boxes. Procedure (do not allow coverslips to dry out anytime): 1. Fix and permeabilize cells (see other protocols). Wash with PBS/BSA for 10 min in a fixation box. 2. Cut a small piece of parafilm to match the area of staining and put 200 ul antibody solution on the piece. Shake off most of the liquid from the coverslip but do not let it dry out. Invert the coverslip onto the parafilm. Prepare a 100 mm plastic petri dish containing a
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Fusion and Cloning
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
本文章来源于SciMall科学在线 Reagents Medium A - Pre-fusion Medium and Hybridoma Expansion Medium Medium B - Fusion Medium Medium C - Hybridoma Recovery Medium Medium D - Hybridoma Selection Medium Medium E - Hybridoma Growth Medium PEG Solution Materials 50 ml Sterile conical tubes 15 ml Sterile conical tubes 10 ml sterile pipets 1 ml sterile pipets Pasteur Pipets, sterile 100 mm sterile Petri Dishes 96-well culture dishes 24-well culture dishes Forceps Scissors Multi-channel pipettor, 50-200μl Pipet tips, sterile Reagent Reservoir, sterile Tupperware container Myeloma Cells 1. One week prior to the fusion, split myeloma cells into Medium A to ensure that they are well adapted. 2. Grow up approximately 2 x 107 healthy cells, in mid-log phase, for each fusion Fusion 1. Count the myeloma cells and resuspend to 2 x 107 cells in 30 ml Medium A in a 50 ml tube. 2. Sacrificed the mouse, saturate in ethanol, and remove the spleen. 3. Place the spleen in a Petri dish containing 10 ml of Medium A. 4. Prepare a single cell suspension of the spleen. 5. Using a Pasteur Pipet, transfer the spleen cells to a 50 ml tube. 6. Rinse the Petri dish with another 10 ml of Medium A and add to the tube. 7. Allow the tube to sit for approximately 1 minute to settle the larger pieces of tissue. Transfer the cell suspension to a clean tube, leaving behind the larger pieces of tissue. 8. Add 10 ml of Medium A to the tube to wash the tissue pieces. Allow to settle. Transfer the medium to the clean tube, co
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3H-Thymidine Uptake by Cultured Cells
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
Materials Fibroblast cells in log phase growth Ca , Mg free-phosphate buffered saline (PBSA) 5% (w/v) Glutaraldehyde (GTA) 2% (w/v) Perchloric Acid (PCA)Subbed slides (coated with chrom alum gelatin) and Permount Nuclear Track Emulsion (Kodak or Ilford) Darkroom and chemicals for photographic processing Dektol developer Kodak Fixer Giemsa stain, graded series of alcohols, xylol Procedure Grow either L cells (Mouse fibroblasts) or chick embryo fibroblasts on coverglasses and then give them H-thymidine for a short period of time. At the end of the labeling period, wash the coverslips in PBSA by gently grasping a coverslip with forceps and passing it through a beaker of saline. Fix cultures in glutaraldehyde for 15 minutes. Wash in several changes of water. Wash in cold 2% PCA for 5 minutes to remove unincorporated labeled precursors to DNA. Repeat twice. Wash in water 5 minutes. Repeat. Dry the backs of the coverslips with filter paper, and mount CELL SIDE UP on slides with Permount.The slides should be very clean. Coat the slides beforehand with chrom alum gelatin (CAG) by dipping the slides into CAG solution and draining until dry. This coating, and the gelatin coating on the coverslips, help to prevent the emulsion layer (below) from pulling away from the slide during later development. Allow Permount to dry overnight. In a darkroom, spoon out a small amount of gel into a suitable vessel, and slowly melt it at 45° C in a water bath.Kodak NTB-3 emulsion is stored refrigerated as a gel in a screw cap bottle inside a double light-tight box. Dip the slide in the
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肌动蛋白（Actin）动力学调节机制
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
细胞骨架的定义分为狭义和广义两种，前者是微丝，微管和中间纤维的总称，它们存在于细胞质内，又被称为“胞质骨架”。后者还包括细胞外基质（extracellular matrix）、核骨架（nucleoskeleton）和核纤层（nuclear lamina）。细胞骨架是细胞内运动，细胞器固定，细胞外型维持，信号传导和细胞分裂的物质基础之一。 信号分子结合到膜上受体，或者是激活与受体偶联的蛋白质—大G蛋白，或者先是激活受体酪氨酸激酶，再激活下游的小G蛋白Ras。G蛋白是一个很大的家族，包括Rho，Rac，Ras等小家族，它们在细胞中扮演着信号传导开关的角色。当它们与GDP结合时，呈现失活状态。在鸟嘌呤交换因子（英文：Guaninexchangefactor，简称GEF）的帮助下，G蛋白脱离GDP并与GTP结合，进入激活状态。G蛋白的GTP会被GTP酶激活蛋白（英文GTPase-activatingproteins，简称GAP）水解，并释放出其中的能量，让G蛋白行使其功能。就是说，G蛋白通过这一GTP/GDP循环在激活/失活状态中回旋，传递信号。当G蛋白被激活后，它下游的多种分子会被激活。这些下游分子本身会形成网络，相互制约，或者是相辅相成。它们调控着细胞迁移中各个方面。它们作用的详细情况请见文章中的相应章节。 本信号转导涉及的信号分子主要包括： Sema1a，PlexinA，Mical，Integrin Recaptor，Src，Paxillin，FAK，PI3K，PI3Kα，GRB2，GEF，Ras，P130，GIT1，GIT2，PIP2，PIP3，Cofilin，Crk，PIX，TIAM1，Vav，MEKK，Cartactin，WAVE，PI5K，ROCK，RTK，PLCβ，PLCγ，Nck，WASP，CaM，GPCR，PKA，PKCα，Fascin，Ena，VASP，PIX，cdc42，Filamin，MEK，MLCK，RhoGEF，Rho，ROCK，mDIA，MBS，Profilin，MLC，Arp2，Arp3，IP3，CaM，LIMK，PKD1，Calcineurin，SSH，14-3-3ζ，CIN，Cofilin，Hsp90，Gelsolin，ADF，CapZ，Tmod，Tropomyosins等。 点击图中信号分子，自动寻找相关产品
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血管生成（Angiogenesis）信号通路图
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
血管生成是通过人体中存在的诸多互补和复杂的信号途径调节的.血管内皮生长因子(VEGF)-血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管生成素(Ang)-Tie2轴和Dll4-Notch这3个复杂的、相辅相成的信号传导通路可在调节血管生成中发挥重要作用. VEGF与内皮细胞上的两种受体KDR和Flt-1高亲和力结合后，直接刺激血管内皮细胞增殖，并诱导其迁移和形成官腔样结构；同时还可增加微血管通透性，引起血浆蛋白（主要是纤维蛋白原）外渗，并通过诱导间质产生而促进体内新生血管生成。VEGF在血管发生和形成过程中起着中枢性的调控作用，是关键的血管形成刺激因子。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）。TNF-α是一类具有血管活性的细胞因子，可诱导异位子宫内膜炎性细胞因子MCP-1，IL-6和IL-8等的释放，促进异位内膜及基质细胞增殖及炎性细胞浸润，新生血管形成，组织粘连，从而形成异位病灶。 本信号转导涉及的信号分子主要包括： HIF1α，PHDs，HIF1β，PI3K，Akt，mTOR，S6K，4E-BP1，eIF4E1，elF4E1，Ras，MEK1，MEK2，Erk1，Erk2，MNK，CBP，P300，TCEB1，TCEB2，Rbx1，Cul2，VHL，MMP，Cox2，PAI-1，VEGF，PDGFR-β，VEGFR2，Tie2，FGFR，IGFR，TGFα-R，SLIT，ROBO，Src，FAK，p38，MAPK，Smad2，Smad3，PLCγ，NOS等。 点击图中信号分子，自动寻找相关试剂
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RNA探针的合成方法和合成效率检测
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
RNA探针的合成方法和合成效率检测 在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度mRNA，以及原位杂交的核酸定位检测等应用，RNA探针是一种理想选择。RNA探针同样也适用于Southern blots，文库筛选，斑点杂交等应用。但是，在RNA探针制备过程和整个杂交实验过程中，必须注意RNAse的防污染操作。 制备RNA探针的常用方法是构建含探针标记模板的重组质粒，将克隆子的转录区下游进行限制性酶切线性化后，进行体外转录的探针合成反应。当然，采用的质粒上必须含有SP6，T3或T7 RNA聚合酶的启动子序列。体外转录法合成的探针量很大，通常情况下，1μg的DNA模板进行反应，将得到20μg的标记RNA探针。 另一种更加直接的体外转录标记法，是先通过PCR方法制备DNA探针模板。扩增引物需要特殊设计，包含SP6，T3或T7 RNA聚合酶的启动子序列。 对于原位杂交的应用，为了更好地进行杂交反应的质控，建议在制备反义链探针的同时，也制备正义链的探针，用作杂交实验的阴性对照。在原位杂交实验前，首先通过Northern blots实验验证探针的有效性和目标转录子在不同样本中的表达模式，有助于简化后续原位杂交实验的优化流程和结果解释。 模板制备和探针标记 以地高辛（DIG）的探针标记方法为例，罗氏DIG Northern Starter Kit的操作指南中建议，如果直接通过PCR方法制备DNA探针模板，反义链端的反向扩增引物应包括T7 RNA聚合酶的启动子序列5'-AATACGACTCACTATAGG-3'（后续通过T7 RNA转录），或T3启动子序列5'-ATTAACCCTCACTAAAGG-3'（通过T3 RNA转录）。 通过此方法获得的特定PCR产物，无需经过纯化，即可用于下游探针合成。对于地高辛标记系统，在体外转录合成的探针片段中，大约每隔3个UTP位点会插入一个DIG标记的UTP分子（DIG-11-UTP
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显微镜测微尺使用方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
相信大多数使用者对显微测微尺的使用并不是十分了解和熟悉，所以我将显微测微尺的使用说明整理一下，现在放出来供广大显微镜使用者学习，希望对他们有所帮助。 显微测微尺是用来测量显微镜视场内被测物体大小、长短的工具, 包括目镜测微尺(分划目镜)和测微台尺。用时需两者配合使用。目镜测微尺系在目镜的焦面上装有一刻度的镜片而成, 其每一刻度值为0.1mm, 测微台尺为一特制的载玻片, 其中央有刻尺度, 每一小格的值为0.01mm, 使用时, 先将目镜测微尺插入目镜管, 旋转前透镜将目镜内的刻度调清楚, 在把测微台尺放在载物台上, 调焦点到看清楚台尺的刻度。观察时先将两者的刻度从“0”点完全重叠, 在向右找出两尺又在何处重叠, 然后记下两尺重叠的格数, 以便计算出测微尺每小格在该放大率下的实际大小。测量时不再用测微台尺, 如改变显微镜的放大赔率, 则需对目镜测微尺重新进行标定. 通过以上的显微测微尺的简单介绍，不知显微镜使用者学会了没有？如果还有不懂的地方，也可以继续关注我以后的文章。
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Elis实验结果管理
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
1．固相载体的选择 载体的种类很多，其中包括纤维素、交联右旋糖酐、葡萄球菌聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等。从使用形式上可有凹孔平板、试管、珠粒等。 聚苯乙烯凹孔板是应用最广泛的一种载体。聚苯乙烯塑料微量滴定板吸附蛋白的性能好，操作简便、用量小，适于大批检查。 由于聚苯乙烯的工艺过程不够稳定,造成各批次差异较大。所以进行ELISA之前，必须进行筛选。检查方法： ⑴ 吸附性能的检查：先加抗体包被，然后加入同一稀释度的酶标抗体，最后加底物、显色、测OD值,求出总平均OD值,再求出每相邻两孔的OD平均值,此均值在总均值的±10%以内为合格,若中间孔与四周孔OD值相差太大，或一侧与另一侧孔OD值相差较大均属不合格。 ⑵ 对比测定阳性血清与阴性血清，观察是否存在明显差异，若二者OD值相差于10倍以上者为合格。 板的处理。新板一般不用处理,用蒸馏水冲洗即可应用。板用一次即废。但不少实验工作者认为用超声波处理，清洁液Tritonx100、20%乙二醇处理仍可应用。但发现空白对照显色较深和阳性样品显色结果不理想时，应弃去不用。 2．载体的吸附条件 载体的吸附均为物理吸附。吸附的多少取决于PH值、温度、蛋白浓度、离子强度以及吸附时间等。 较好的吸附条件是：离子强度为0.05Mol/L～0.10Mol/L，pH9.0～pH9.6碳酸盐缓冲液，蛋白浓度为1µg/ml~100µg/ml，4℃过夜或37℃3h。 3．酶标抗体使用浓度的确定 于聚苯乙烯板孔中加足够量的抗体包被,温育一定时间，冲洗、把酶标结合物倍比稀释，每个稀释度加2孔,温育、冲洗、再加底物显色、比色。以OD值为纵坐标,酶标结合物的稀释度为横坐标，制作曲线。找出OD值为1时，相对应的酶标抗体稀释度为最适酶标抗体稀释度。 这个稀释度是指在这种条件下的最适稀释度，换个条件就不是最适的了。如1﹕400的酶标抗体稀释度温育6h可与1︰6 400稀释度温育24h结果相同。所以一旦条件确定之后，就不要变更，以保证结果的重复性和相对的准确性。 此最适酶标抗体稀释度可做为工作浓度，也可提高半个
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志贺氏菌检测新国标厌氧条件增菌的解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
2012年5月17日，中华人民共和国卫生部颁布GB 4789.5-2012《食品安全国家标准食品微生物学检验 志贺氏菌检验方法》，新国标将于2012年7月17日起实施。 该标准实施之日起，原GB/T4789.5-2003标准作废。 解读新国标GB4789.5-2012 为了提高食品中志贺氏菌检出率，降低操作者的操作要求，增菌过程的调整是本次新标准最大的变动之处。 两份国标方法之间增菌部分的主要区别如下表所示： GB4789.5-2003 GB4789.5-2012 增菌培养基 GN增菌肉汤 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素 取样操作 无菌均质器或研钵 无菌均质器或拍击式均质器 增菌培养条件 37℃，有氧培养6~8小时 41.5℃，厌氧培养16~20小时 …… …… …… 更改增菌培养方式的最终目的是最大程度消除食物样品中的杂菌背景对于检测培养的影响。 1、厌氧环境41.5℃培养，可排除需氧菌和大部分不耐热的厌氧菌与兼性厌氧菌干扰； 2、使用志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素进行增菌，可排除革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性肠杆菌（如变形杆菌等）的干扰； 减少杂菌背景的同时，也降低了杂菌在增菌过程中对于数量很少的志贺氏菌的竞争抑制作用，可有效地提高志贺氏菌的扩增量，有助于进一步的分离与鉴定。 厌氧增菌的解决方案 不同于常规厌氧培养，新国标中的增菌培养是在无菌三角烧瓶或无菌匀质袋中进行，故厌氧袋因容积限制而无法使用，故我们推荐如下解决方案： 解决方案一： 每日样品检测量80-120份的实验室，建议配备AW500SG/TG全能型厌氧工作站。 型号 AW500SG/TG 最大培养容量： 120只（250ml标准三角烧瓶） 80 只（500ml标准三角烧瓶） 传输舱容量： 6只（250/500ml标准三角烧瓶） 解决方案二： 每日样品检测量70~90份的实验室，建议配备AW400SG/TG全能型厌氧工作站。 型号 AW400SG/TG 最大培养容量： 90只（250ml标准三角烧瓶） 70只（500ml标准三角烧瓶） 传输舱容量： 6只（250/5
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2012北京生物医学新技术与应用系列讲座PDF资料下载
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
2012年6月29-30日，由中国生物器材网、北京亦庄生物医药园主办，北京旷博生物技术有限公司承办的“2012北京生物医学新技术与应用系列讲座暨细胞分析与免疫检测新技术专场”于北京亦庄生物医药园成功召开。 本次讲座历时2天，由15家业内知名企业及11位特邀专家做了精彩的报告。报告内容主要围绕流式新技术、细胞成像技术新进展、microRNA在免疫检测的中的研究和应用、特异性T细胞免疫检测技术和多因子高通量免疫检测等主题展开。精彩的演讲引起在场专家学者的热烈反响，应广大师生的强烈要求，现将讲座PDF内容公布供下载学习使用，请勿转载用于其他用途。 友情提示： 1、请在注册“个人用户”后再下载讲座PDF资料。点击此处立即注册 2、由于部分文件较大，请耐心等待下载完成。 3、部分讲座资料由于不便公开将暂不提供下载。 相关链接：
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血小板功能检测在临床中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
血小板在参与血栓形成和动脉粥样硬化中起重要作用。TXA2、5HT引起血管收缩：PDGF、β-TG、PF4刺激平滑肌细胞引起动脉硬化，GPIIb/IIla纤维蛋白原受体活化引起血小板聚集，与凝血系统活化形成的纤维蛋白构成血小板栓子。 血小板粘附、聚集、释放产物、花生烯酸代谢、促凝作用及受体表达参与上述过程。 在体内，狭窄血管产生的高切应力，各种细胞释放的产物以及内皮损伤等因素均可构成激活血小板的刺激因素。除上述环境因素外，血小板自身的某些特性改变，譬如：基因多态性，在发生血栓形成中的意义也是近年来渐为人们重视的新课题。 一、血小板功能检测项目 出血时间、粘附性、聚集性、释放产物、花生四烯酸代谢产物、胞浆游离钙水平测定、凝血活性、膜糖蛋白检测、基因多态性和突变。 常用的检测功能的方法为：血小板聚集性测定(比浊法、阻抗法、循环血小板聚集体、自发性血小板聚集)，近年来，流式细胞仪、PFA-100分析及激光衍射法检测微小聚集体也逐渐地进入临床或临床前阶段。 比浊法测定血小板聚集是应用较广泛的指标，可以用于遗传性血小板疾病诊断指标，也可以作为血栓性疾病中评估其病理反应，指导抗栓药物的应用以及作为抗血小板药物监测之用。在比浊法的应用中，有几项关键问题应予以注意：(1)血液采集与分离。(2)诱导剂应用:种类、浓度。(3)正常值的选定。 流式细胞仪可以检测血小板功能、代谢、尘化及受体表达，而微小聚集体的形成作为血栓形成的早期敏感指标采用激光衍射法的测定也正在评估中，反映体内全血状态下的血小板阻抗法以及血小板内钙离子水平的检测在临床研究中显示其意义。 二、血小板功能检测的临床应用 1、出血性疾病 分遗传性和获得性二类，采用常规的血小板聚集试验对遗传性血小板疾病即可作出初步诊断。 2、血栓性疾病 大多数血栓性疾病均可以检测到血小板反应性增高，(这对疾病的病理过程，指导疾病**均有一定；意义，许多指标在疾病中的意义也作比较研究，一些分子标志
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B Cell Receptor 信号通路图
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
B cells produce immunoglobulins (Ig, antibodies) that specifically bind antigen molecules. B cells first produce a membrane-bound form of immunoglobulin, the B cell receptor, as part of B cell differentiation. Each B cell expresses one immunoglobulin but the population of B cells in each individual display a wide variety of antigen specificity, with each cell expressing Ig on its surface as part of the B cell receptor complex. When the B cell receptor binds to antigen, it initiates a signal through other proteins non-covalently associated with it in the B cell receptor complex, the Ig-alpha (CD79a) and Ig-beta (CD79b) chains. The signal initiated by binding of antigen to the B cell receptor complex causes growth and proliferation of the B cell and the creation of an amplified clone of effector cells that secrete the antigen-specific immunoglobulin. Activation of the B cell receptor by antigen also results in the production of memory cells that persist in circulation to produce a more rapid immune response after future challenges by the same antigen. 本信号转导涉及的信号分子主要包括：BCR，mlg，CD19，Ag，CRALChannel，Orai1，Lyn，Ezrin，Syk，SHP-1，SHP-2，SHIP，PTEN，Gab，BACP，Shc，Dok-3，PI3K，PIR-B，Csk，clathrin，Cbp/PAG，Cbl，p38，p70，p85，p110，CD19，CD22，CD40，CD45，Btk，Bam32，PLCγ2，LAB，BLNK，GRB2，SOS，RhoA，Akt，cdc42，Vav，HS1，Pyk2，Rsc，RapL，Riam，Rap，SOS，Rss，c-Raf，MEK1，MEK2，Erk1，Erk2，GRP，Dok-1，IP3R，STIM1，PKC，TAK1，CARMA1，Bcl10，MALT1，IKK，p38，IκB，NF-κB，CaM，GSK-3，mTOR，S6K，Calclneurln，NFAT，MEKK8，MKK3，MKK4，MKK6，MKK7，JNK1，JNK2，Ca
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eIF2的调控信号通路图
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
mTOR可对细胞外包括生长因子、胰岛素、营养素、氨基酸、葡萄糖等多种刺激产生应答。它主要通过PI3K/Akt/mTOR途径来实现对细胞生长、细胞周期等多种生理功能的调控作用。 正常情况下，结节性脑硬化复合物-1(TSC-1)和TSC-2形成二聚体复合物，是小GTP酶Rheb(Ras-homolog enriched in brain)的抑制剂，而Rheb是mTOR活化所必需的刺激蛋白，因此TSC-1/TSC-2在正常情况下抑制mTOR的功能。当Akt活化后，它可磷酸化TSC-2的Ser939和Thr1462，抑制了TSC-1/TSC-2复合物的形成，从而解除了对Rheb的抑制作用，使得mTOR被激活。活化的mTOR通过磷酸化蛋白翻译过程中的某些因子来参与多项细胞功能，其中最主要的是4EBP1和P70S6K。 在整个PI3K/Akt/mTOR信号通路中，有一条十分重要的负反馈调节剂就是10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10, PTEN)。PTEN是一个肿瘤抑制基因，位于人染色体10q23。它有一个蛋白酪氨酸磷酸酶结构域，在这条通路中可以将PI-3，4-P2与PI-3，4，5-P3去磷酸化，从而负调节PI3K下游AKt/mTOR信号通路的活性。 本信号转导涉及的信号分子主要包括PKR，PERK，GCN2，HR1，PP1，GADD34，eIF2-GDP，eIF2-GTP，eIF2B，GSK-3β，NCK，eIF1，eIF5，43S等。 点击图中信号分子，查看详细通路图及产品（抑制剂，抗体，磷酸化抗体，检测试剂盒，重组蛋白等）:
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eIF4和p70 S6K的调控信号通路图
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
mTOR可对细胞外包括生长因子、胰岛素、营养素、氨基酸、葡萄糖等多种刺激产生应答。它主要通过PI3K/Akt/mTOR途径来实现对细胞生长、细胞周期等多种生理功能的调控作用。 正常情况下，结节性脑硬化复合物-1(TSC-1)和TSC-2形成二聚体复合物，是小GTP酶Rheb(Ras-homolog enriched in brain)的抑制剂，而Rheb是mTOR活化所必需的刺激蛋白，因此TSC-1/TSC-2在正常情况下抑制mTOR的功能。当Akt活化后，它可磷酸化TSC-2的Ser939和Thr1462，抑制了TSC-1/TSC-2复合物的形成，从而解除了对Rheb的抑制作用，使得mTOR被激活。活化的mTOR通过磷酸化蛋白翻译过程中的某些因子来参与多项细胞功能，其中最主要的是4EBP1和P70S6K。 在整个PI3K/Akt/mTOR信号通路中，有一条十分重要的负反馈调节剂就是10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10, PTEN)。PTEN是一个肿瘤抑制基因，位于人染色体10q23。它有一个蛋白酪氨酸磷酸酶结构域，在这条通路中可以将PI-3，4-P2与PI-3，4，5-P3去磷酸化，从而负调节PI3K下游AKt/mTOR信号通路的活性。 本信号转导涉及的信号分子主要包括IRS-1，PI3K，PIP3，PDK1，PTEN，Akt，TSC1，TSC2，Rheb，mTOR1，p70 S6K，4E-BP1，S6，PDCD4，eIF4B，eIF4E，eIF4A，eIF4G，eIF4F，MNK，PABP，PAIP1，PAIP2，43S，48S，LKB1，AMPK，RagA/B，RagC/D，GSK-3，Wnt，LRP，Frizzled，Gαq/o，Dvl，Erk，p38 MAPK，p90 RSK，GβL，Raptor，DEPTOR，Sin1，PRR5，Rictor等。 点击图中信号分子，查看详细通路图及产品（抑制剂，抗体，磷酸化抗体，检测试剂盒，重组蛋白等）：
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