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植物膜转运的模型预测、实验验证及生理学影响
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
细胞膜是控制细胞振荡的中心，细胞的振荡在植物界中十分普遍。例如质膜电位的周期性变化、液泡电位及电流的波动、质外体的浓度变化、胞内pH及Ca2+的波动、不同细胞类型质膜跨膜离子流振荡等。然而，目前除了大致了解膜和离子流直接或间接参与振荡过程，研究人员对这种振荡的生理学功能仍然知之甚少。 Shabala等研究人员应用反馈受控振荡模型提出了许多设想：（1）振荡周期强烈依赖于质子泵活性；（2）质子泵活性受抑制时，振荡停止；（3）H+和K+流之间存在方向性的转变；（4）细胞膜上有对外界温度和离子浓度变化感受的“窗口”，对外界不同的变化细胞表现为不同的振荡模式；（5）振荡特性与细胞大小紧密相关等。他们使用“非损伤微测技术”直接测定了不同环境条件下植物根、叶片及真菌细胞跨膜的H+、K+、Ca2+和O2的振荡规律。通过对模型预测及实验测定数据的比较，用实验成功地证实了之前设想的正确性。 此项研究结合模型预测及实验数据，根据植物对盐、温度、渗透、低氧及pH胁迫的适应性反应，对振荡的生理学功能作了较为清晰的阐述。这个模型可以指导筛选抗盐、抗涝等方面的育种工作。 图注： 上图：玉米根部O2流的振荡变化作为O2利用情况的指标。A:不同氧气浓度下O2流的振荡规律；B:O2流振荡对外界氧气的依赖性。 .tmp_b1{ margin:6px 6px;} 关键词：适应(Adaptation)；离子流(Ion flux)；膜(Membrane) 参考文献：Shabala S et al. . J. Exp. Bot. .2006, 57: 171-184. 全文下载：【转载请注明出处】 ----------------------------------------------------------- Oscillations in plant membrane transport model predictions, experimental validation, and physiological implications Abstract ： Although oscillations in membrane-transport activity are ubiquitous in plants, the ionic mechanisms of ultradian oscillations in plant cells remain largely unknown, despite
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环介导等温扩增反应(LAMP) 基因诊断技术及产品简介
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。 2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术，即 LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳，LAMP反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。 可以预见，在未来的基因诊断领域，LAMP方法将占据大壁江山。目前，在万方数据库搜索LAMP文章424篇之多。 重点说明： 1. 产品研发概述，优缺点简介 荣研公司在其网站上提供免费的LAMP引物设计软件，一次LAMP反应只需要30～60min就能完成，因此针对特定病原的LAMP诊断试剂盒研发周期较其他的基因诊断方法如PCR、荧光定量PCR等短。配套使用荣研公司提供的LAMP 反应液和实时浑浊仪将大大提高研发效率。 LAMP方法优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）；反应时间短（30～60min就能完成反应）；临床使用不需要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浑浊仪）；操作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于PCR管中，置于水
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双层玻璃反应釜标配清单-各个配件作用
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
★关于50L双层玻璃反应釜配置如下： 序号 配件名称 数量 说明 1 双层釜体 一台 有效容积50L；另有1L,2L,3L,5L,20L,30L规格。 2 搅拌电机 一台 转速启动-1350转（可调） 另外为了安全我们可提供气动防爆搅拌电机。 3 调速器 一台 带有数字显示功能（无级调速） 4 五口釜盖 一个 与釜体配套使用，我们可以根据您的要求烧结不同要求的玻璃接口。 5 反应釜架子 一套 支撑釜体等用，公司承诺全部使用304#不锈钢，耐腐蚀性能更好！ 6 冷凝器 一个 蒸馏冷凝，双圈蛇形蒸馏盘管，蒸馏冷凝效果**。 7 四氟放料器 一个 放料（可以拆卸），全部采用上等材料，有很好的，耐酸碱，耐高温的效果。 8 温度计套管 一个 放温度计，我们可以改进为铂金数显温度测试仪表，达到温度一目了然。 9 恒压漏斗 一个 真空状态下加料，恒压滴定，加入浓物料，配比不同的溶液。 10 四氟搅拌杆 一套 内径不锈钢，外包TEFLON防腐材料。 11 真空塞头 二个 用于密封，40#塞头，34#塞头。 12 真空抽气头 一个 用于抽取反应釜内空气以获取真空。 13 循环加热系统 一台 微电脑数字显示控温系统，带有内置循环泵。只需一机即可满足恒温功能。
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技术指导：对盐雾试验的思考及与实际的密切联系
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
盐雾试验是一种主要利用盐雾试验设备所创造的人工模拟盐雾环境条件来考核产品或金属材料耐腐蚀性能的环境试验。它分为二大类，一类为天然环境暴露试验，另一类为人工加速模拟盐雾环境试验。人工模拟盐雾环境试验是利用一种具有一定容积空间的试验设备——盐雾试验箱，在其容积空间内用人工的方法，造成盐雾环境来对产品的耐盐雾腐蚀性能质量进行考核。它与天然环境相比，其盐雾环境的氯化物的盐浓度，可以是一般天然环境盐雾含量的几倍或几十倍，使腐蚀速度大大提高，对产品进行盐雾试验，得出结果的时间也大大缩短。如在天然暴露环境下对某产品样品进行试验，待其腐蚀可能要1年，而在人工模拟盐雾环境条件下试验，只要24小时，即可得到相似的结果。 人工模拟盐雾试验又包括中性盐雾试验、醋酸盐雾试验、铜盐加速醋酸盐雾试验、交变盐雾试验。 中性盐雾试验（NSS试验）是出现最早目前应用领域最广的一种加速腐蚀试验方法。它采用5%的氯化钠盐水溶液，溶液PH值调在中性范围（6～7）作为喷雾用的溶液。试验温度均取35℃，要求盐雾的沉降率在1～2ml/80cm².h之间。 醋酸盐雾试验（ASS试验）是在中性盐雾试验的基础上发展起来的。它是在5%氯化钠溶液中加入一些冰醋酸，使溶液的PH值降为3左右，溶液变成酸性，最后形成的盐雾也由中性盐雾变成酸性。它的腐蚀速度要比NSS试验快3倍左右。 铜盐加速醋酸盐雾试验（CASS试验）是国外新近发展起来的一种快速盐雾腐蚀试验，试验温度为50℃，盐溶液中加入少量铜盐—氯化铜，强烈诱发腐蚀。它的腐蚀速度大约是NSS试验的8倍。 交变盐雾试验是一种综合盐雾试验，它实际上是中性盐雾试验加恒定湿热试验。它主要用于空腔型的整机产品，通过潮态环境的渗透，使盐雾腐蚀不但在产品表面产生，也在产品内部产生。它是将产品在盐雾和湿热两种环境条件下交替转换，最后考核整机产品的电性能和机械性能有无变化。
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Morris水迷宫实验准则（1）
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
实验原理（水迷宫的发展史，以及简单的实验原理和应用领域，以及在我国的发展情况和国内外的主要厂家） Morris水迷宫的组成（主要分为硬件和图像采集，软件） 硬件准则（国内外文献提及到的硬件准则，我们主要针对国内文献提及到的） 实验流程准则（实验细节） 统计方法学准则（遵循统计学原理） 评价指标的准则（实验数据的解释） 实验适用范围准则（实验适用四个领域，与水迷宫的10个优点） 一、实验原理 20世纪80年代初,英国的心理学家Morris和他的同事利用大鼠在盛有水和牛奶混合物的不透明水池中搜索目标物的方法,研究大鼠的海马等脑区受到损害后的学习、记忆和空间定向以及认知能力时取得了令人瞩目的结果。这种装置不但构思新颖、实验设计合理以及方法简便和实用,而且便于观察和记录动物入水后搜索藏在水下平台所需的时间、采用的策略和它们的游泳轨迹,从而可分析和推断动物的学习、记忆和空间认知等方面的能力。虽然起初的实验对象为大鼠，但此后该迷宫系统成为评估啮齿类动物空间学习和记忆能力的经典程序，广泛运用于神经生物学、药理学等领域的基础和应用研究中。它能较客观地衡量动物空间记忆、工作记忆以及空间辨别能力的改变。因此,这种研究方法很快就引起各国神经科学家的关注,并将此法称为Morris水迷宫法。国外有许多生产Morris水迷宫的公司，比如说德国的TSE公司，美国的Sandiegoinstruments公司等等；20世纪80年代末,中国科学院心理研究所建立了我国第一个Morris水迷宫实验室,并于90年代初建立了Morris水迷宫图像自动采集和处理系统。国内随后出现了许多Morris水迷宫生产厂家，比如说有上海欣软、北京药研所等等，但是从国际到国内，Morris水迷宫的硬件设备，软件系统，实验方法，以及实验数据的处理方法都不尽相同，因此，从Morris水迷宫法的发明到现在已有20余年的历史了，应该制定一套比较标准的实验准则了。 二、Morris水迷宫的组成 Morris实验系统由水迷宫装置、水迷宫图像自动采集和软件
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免疫学实验比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。 IHC（免疫组化Immunohistochemistry） 是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。 ELISA（酶联免疫吸附试验Enzyme linked immunosorbent assay） 用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。 WB （蛋白质印迹Western Blot） 先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。 对于IHC来说，定位是免疫组化最大的优势。该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高，是定位检测分析**方法对病理学领域开展深入研究是十分有意义，尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 WB与IHC技术相比，定量可能更加准确；当然WB也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于IHC。 ELISA与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测**方法之一。尤其对于微定量分析多个样本非常有用，所用试剂和样品量很少，结果精确。IHC针对性比较强，而且一般是以组织或者细胞为样本，而ELI
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引物设计重点因素及设计技巧
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
引物设计重点因素及设计技巧 想把引物合成的比较好，除了前引物和后引物的Tm不能相差太大，我们还要重点考虑以下因素： 一、GC含量 引物的GC含量一般为40-60%，以45-55%为宜，过高或过低都不利于引发反应。有一些模板本身的GC含量偏低或偏高，导致引物的GC含量不能在上述范围内，这时应尽量使上下游引物的GC 含量以及Tm 值保持接近（上下游引物的GC含量不能相差太大），以有利于退火温度的选择。如果G-C比例超出，则在引物的5’端增加As或Ts；而如果A-T比例过高，则同样在5’端增加Gs或Cs。但也有认为：原来普遍认为PCR引物应当有50%的GC/AT比率的观点其实是不对的，以人基因组DNA为模板，用81%AT的引物可以产生单一的、专一的、长250 bp，含有70% AT的产物。完全没有必要复杂地去计算产物和引物的解链温度，PCR引物的GC/AT比率应当等于或高于所要放大的模板的GC/AT比。产物中GC含量**大于引物中的GC含量。 二、Degeneracy 多义性 当设计多义引物时应尽量减少引物多义性，这样会带来更好的特异性，应尽量避免3末端的多义性，因为这里即使一个碱基的错配都能阻止引物延伸。 三、3’ End Stability 3 末端稳定性 引物稳定性影响它的错配效率，一条理想的引物应该有一个稳定性较强的5 末端和相对稳定性较弱的3 末端。如果引物3 稳定性强，有可能在即使5 末端不配对的情况下造成错配，形成非特异性扩增条带（secondary bands） 。而3 末端稳定性低的引物较好的原因是在引物发生错配时，由于3 末端不太稳定引物结合不稳定而难以延伸。 四、GC Clamp GC钳 引物与目的位点的有效结合需要有稳定的5 末端。这一段有较强稳定性的5 末端称为GC钳。它保证引物与模板的稳定结合。选择有合适稳定性的引物能在确保不产生非特异性条带的前提下尽量降低退火温度。 五、Secondary Structures二级结构 二级结构是引物设计中必须考虑的一个重要因素。二级结构能显著影响反应中能与模板正确结合的引物数量，发卡结构的存在能限制引物与
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Isolation and cultivation of endothelial progenitor cells (EPCs)
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
Isolation and cultivation of endothelial progenitor cells (EPCs) Circulating bone marrow (BM)–derived endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited to the site of tissue regeneration and substantially contribute to neovascularization and re-endothelialization after acute vascular injury. Intravenous infusion of EPCs after ischemia was shown to improve neovascularization and cardiac function in both animal models and pilot clinical studies. Conversely, BM-derived EPCs participate in the pathogenesis of various diseases, such as cancer, retinopathy, and atherosclerosis. Impaired recruitment of BM-derived endothelial and hematopoietic precursor cells is known to block both tumor angiogenesis and growth. Injection of BM cells promotes injury-associated retinal angiogenesis. BM-derived progenitors also contribute to the formation of the microvasculature in allograft arteriosclerotic lesions. Therefore, EPCs have both physiologic and pathologic roles; thus, they have been widely considered for establishing new therapeutic strategies for the treatment of angiogenesis-related diseases. The number of circulating EPCs may limit the ultimate magnitude of angiogenesis therapies and, therefore, strategies that are based on the administration of ex vivo–expanded populations of EPCs harvested from the patient's circulating blood appear promising. 1. Human umbilical cord blood (HUCB) samples (∼50 mL each) were collected from fresh placentas with attached umbilical cords by gravity flow. 2. EPCs were isolated by density gradient centrifugation over Biocoll (Biochrom, Berlin,
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Isolation of stromal vascular cells from human adipose tissue
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
Isolation of stromal vascular cells from human adipose tissue Stromal stem cells proliferate in vitro and may be differentiated along several lineages. The scarcity of stromal stem cells in tissues and the lack of reagents required obtaining freshly isolated cells of high purity and in quantities required for extensive analysis. In human bone marrow, for example, only 0.001–0.01% of nucleated cells form CFU-Fs. Adipose tissue is easy to obtain in large quantities and harbors a large number of cells with CFU-F ability; therefore, it should provide a readily available source of stromal stem cells in numbers sufficient to study their biology without having to resort to cell culture. 1. Adipose tissue was obtained by liposuction from abdominal, hip, and thigh regions of healthy female donors aged 18–39. 2. The stromal vascular fraction (SVF) was separated from adipose tissue using a procedure modified. 3. Lipoaspirate (300–400 ml) was washed with primary cell culture system containing antibiotics (100 IU/ml penicillin and 100 IU/ml streptomycin) and 2.5 μg/ml amphotericin B. 4. Washed adipose tissue was digested for 2 h on a shaker at 37°C in primary cell isolation system. 5. Floating adipocytes were aspirated from pelleted SVF cells after centrifugation at 400 × g for 10 min. 6. Pellets were resuspended in red blood cell lysis buffer (2.06 g/l Tris base, 7.49 g/l NH4Cl, pH 7.2) for 10 min at room temperature. 7. After resuspending SVF cells in primary cell culture system containing 2% fetal bovine serum (FBS), tissue clumps were allowed to settle for 1 min. 8. Suspe
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如何做简单的气相色谱配置
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
用户购买一台气相色谱，如果要求可以正常使用的话，除了常规实验室所必须有的那些装备：比如：实验台、玻璃器皿、气源、标准物质等等，还需要以下这些部分： 一 气源 二 主机 三 柱子 四 标准物质 五 其它（电脑、打印机、工作站等等） 那么，如何为用户选购这些部分呢？我们在这次和下次的 news letter 中将为大家介绍如何为客户做简单的气相色谱配置。 这次为大家介绍前边的两项（气源和主机的选择） 一 气源 气相色谱的气源按照用途可以分为四类：载气、燃气、助燃气、驱动气。 载气：通过整个分析系统，要求纯度高、质量好。一般来说，我们要求客户用大厂家和好品牌的气体，而且一般是要求用钢瓶气，**不要用气体发生器。好的载气是保证分析可以正常进行的基础。一般来说常用的载气有：氮气、氢气、氩气、氦气等。 燃气：一般用氢气，只要保证可以正常点火，并且不干扰分析就可以了。用户可以使用高纯度的钢瓶气或氢气发生器。如果预算足够的话，**使用氢气发生器，因为比较安全。 助燃气：一般用空气，只要可以起到助燃的作用，而且不干扰分析就可以了。用户可以使用高纯度的钢瓶气或空气发生器。 驱动气：一般是空气。 那么什么时候应该配哪些气体呢？ 我们在给用户配气源的时候，一般按照检测器来考虑： FID：需要配载气、燃气、助燃气。一般来说都是配氮气（高纯钢瓶气，40L，含减压阀），氢气（钢瓶气或氢气发生器），空气（钢瓶气或空气源）。 TCD：需要配载气。一般来说，为了提高灵敏度，我们建议客户配氢气（高纯钢瓶气）或氦气（高纯钢瓶气）。但是如果客户要分析氢气的时候，我们需要配氩气或者氮气或者氦气。 ECD：需要配载气。一般来说，氮气（高纯钢瓶气）。 FPD：与FID一样。 TSD：与FID一样。 当客户购买了自动阀的时候需要配驱动气，一般来说：空气钢瓶或者空气源都可以。 二 主机 主机主要为用户配
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大鼠脑钠素（BNP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 48T 3μg/L -80μg/L 使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中脑钠素（BNP）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠脑钠素（BNP）水平。用纯化的大鼠脑钠素（BNP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脑钠素（BNP），再与HRP标记的脑钠素（BNP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脑钠素（BNP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠脑钠素（BNP）浓度。 试剂盒组成 1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶 2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 标准品（160μg/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×4条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 3ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 80μg/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 40μg/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 20μg/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 10μg/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 5μg/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2. 加样：分别设空白
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抑制素B(INH—B)ELISA Kit酶免试验说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
抑制素B酶免试验说明书 美国进口原装RayBiotech（Cat:EIA-INB-1） 简介 抑制素B属于TGF-β超家族，家族成员包括抑制素A，TGF-B，活化素，骨成型蛋白，其中抑制素与活化素相关性最为密切。 活化素和抑制素都是二聚体蛋白复合结构，每个复合物都是由两个单元结构经二硫键连接组成的。此外，两个复合物都来自同一家族的相关基因和蛋白质，但不同在他们的亚基组成，抑制素是由两个不同的亚单位（a单元与b单元）经二硫键连接形成 抑制素B是由一个alpha单元和一个betaB单元组成 抑制素A是由一个alpha单元和一个betaA单元组成 活化素有同构二聚体和异构二聚体，活化素A（2个betaA单元），活化素B（2个betaB单元），或者是活化素AB（1个betaA和一个betaB单元） 抑制素在生殖调节方面有着重要的作用。抑制素和活化素在作为生殖轴的调节器时通常发挥相反的作用，而在生殖生理学调节方面可发挥多种作用。最近报道称抑制素在肿瘤方面已有新发现。抑制素在多个细胞组织内被报道为潜在的肿瘤基因，包括前列腺，卵巢，子宫内膜和乳房，抑制素的低表达或低灵敏度都与肿瘤的起始和恶化相关联 实验原理 抑制素B酶免试剂盒用于抑制素B肽的定量检测，依据的是竞争酶免法 包被板内预包被了抗兔二抗， 抗抑制素B抗体经封闭、孵育后，生物素标记的抑制素B肽和标准品或样品中的目的肽会竞争结合抑制素B抗体，结合的生物素B肽与辣根过氧化物酶连接，会发生颜色改变。颜色强度与复合物的量成正比，而与标准品或样品中的抑制素B的量成反比。这是由于生物素标记的抑制素B肽和标准品或样品竞争结合抑制素B抗体。样品浓度可从标准曲线上读取 试剂盒组成 1. 包被板 96T，包被有二抗 2. 洗涤缓冲浓缩液（20X） 25mL 3. 标准品 2支，10µl/支 4. 抗抑制素B单抗 2支，5µl/支 5. 试验稀释液A 30mL，含0.09%的叠氮化物作为防腐剂，用于标准品和血清或血浆样品的稀释 6. 试验稀释液B 15mL，5X的
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如何监测高压蒸汽灭菌器效果
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
如何监测高压蒸汽灭菌器效果 高压蒸汽灭菌的效果是怎么样被监测出来的，需要有一定的监测指标，高压蒸汽灭菌效果的监测主要有以下三 种方法： 第一种是工艺监测，又称程序监测。根据安装在灭菌器上的量器(压力表、温度表、计时表)、图表、指示针、报警器等，指示灭菌设备工作正常与否。此法能迅速指出灭菌器的故障，但不能确定待灭菌物品是否达到灭菌要求。此法作为常规监测方法，每次灭菌均应进行。 第二种是化学指示监测。利用化学指示剂在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点，以判断是否达到灭菌所需参数。 常用的有： 1)自制测温管：将某些化学药物的晶体密封于小玻璃管内(长2cm,内径1～2mm)制成。常用试剂有苯甲酸(熔点121-123℃)等。灭菌时，当湿度上升至药物的熔点，管内的晶体即熔化，事后，虽冷却再凝固，其外形仍可与未熔化的晶体相区别，此法只能指示温度，不能指示热持续时间是否已达标，因此是最低标准。主要用于各物品包装的中心情况的监测。 2)3M压力灭菌指示胶带：此胶带上印有斜形白色指示线条图案，是一种贴在待灭菌的无菌包外的特制变色胶纸。其粘贴面可牢固地封闭敷料包、金属盒或玻璃物品，在121℃经20分钟，130℃经4分钟后，胶带100%变色(条纹图案即显现黑色斜条)。3M胶带既可用于物品包装表面情况的监测，又可用于对包装中心情况的监测，还可以代替别针，夹子或带子使用。 第三种是生物指示剂监测。利用耐热的非致病性细菌芽胞作指示菌，以测定热力灭菌的效果。菌种用嗜热脂肪杆菌，本菌芽胞对热的抗力较强，其热死亡时间与病原微生物中抗力最强的肉毒杆菌芽胞相似。生物指示剂有芽胞悬液、芽胞菌片以及菌片与培养基混装的指示管。检测时应使用标准试验包，每个包中心部位置生物指示剂2个，放在灭菌柜室的5个点，即上、中层的中央各一个点，下层的前、中、后各一个点。灭菌后，取出生物指示剂，接种于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，置55-60℃温箱中培养48小时至7天，观察最终
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大鼠血管紧张素Ⅱ受体1抗体（ATⅡR1）酶联免疫分析试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 15pg/ml-400pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中血管紧张素Ⅱ受体1抗体（ATⅡR1）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中大鼠血管紧张素Ⅱ受体1抗体（ATⅡR1）水平。用纯化的大鼠血管紧张素Ⅱ受体1（ATⅡR1）抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入大鼠血管紧张素Ⅱ受体1抗体（ATⅡR1），再与HRP标记的血管紧张素Ⅱ受体1（ATⅡR1）抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管紧张素Ⅱ受体1抗体（ATⅡR1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠血管紧张素Ⅱ受体1抗体（ATⅡR1）浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（800pg/ml） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 400pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 200pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 100pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 50pg/ml 2号标准品 150μl的3号
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蛋白质的沉淀方法及常见沉淀剂
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
蛋白质沉淀的概念： 蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation)，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。 定性分析： 蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。若无外加条件，不致互相凝集。然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂)蛋白质便容易凝集析出。如将蛋白质溶液pH调节到等电点，蛋白质分子呈等电状态，虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了。但是还有水化膜起保护作用，一般不致于发生凝聚作用，如果这时再加入某种脱水剂，除去蛋白质分子的水化膜，则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白质脱水，然后再调节pH到等电点，也同样可使蛋白质沉淀析出。 沉淀方法： 1.盐析法——多用于各种蛋白质和酶的分离纯化 在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同，故可用于对混和蛋白质组分的分离。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白质的活性。调节蛋白质溶液的pH至等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好。盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫b分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。影响盐析的因素包括：蛋白质浓度、离子强度和类型、PH值、温度等。针对温度这一条，需要强调：在低离子强度或纯水中，蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加。但在高浓度下，蛋白质、酶和多肽类物质的溶解度随温度上升而下降。在一般情况下，蛋白质对盐析温度无特殊要求，可在室温下进行，只有某些对温度比较敏感
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