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PCR扩增效率的评估-扩增曲线的解读
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
做过PCR的小伙伴都知道，PCR前期的验证引物探针性能和确定最适反应条件是确保正式实验顺利进行的前提。PCR实验中有个相当重要的工作——即是PCR扩增效率的评估。扩增效率是PCR检测性能最重要的指标之一，也是定量分析计算结果时所需要的参数。接下来，让小编给大家细细说来吧。 什么是扩增效率 PCR是一种DNA体外扩增技术，通常包括了30 - 50个循环周期。每个循环中，目标DNA分子的拷贝数最多会增加1倍。但在实际反应中，1个DNA分子在1个扩增循环后被成功复制的概率，也就是扩增效率E
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USP20点突变小鼠助力代谢疾病研究，荣登Nature
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
胆固醇是必不可少的脂质，但是高水平的胆固醇和其他脂质是心血管疾病、非酒精性脂肪肝、肥胖和糖尿病的主要危险因素。在哺乳动物中，进食后胆固醇的生物合成增加，并且在禁食条件下受到抑制。但是，在空腹-进食过渡期胆固醇生物合成的调控机制仍然知之甚少。 近日，武汉大学生命科学学院宋保亮团队在国际顶级期刊Nature上发表了题为“Feeding induces cholesterol biosynthesis via the mTORC1-USP20-HMGCR axis”的文章，揭示了进食后胆固醇合成的调控机制，USP20抑制剂可用于降低胆固醇水平，以**包括高脂血症、肝脂肪变性、肥胖和糖尿病在内的代谢疾病。 肝脏是胆固醇的主要生物合成器官，胆固醇通过约30个步骤由乙酰辅酶A合成。HMG-CoA还原酶（HMGCR）将HMG-CoA转化为甲羟戊酸，是胆固醇生物合成中的限速酶。严格控制胆固醇的生物合成，以防止胆固醇过多引起的毒性。宋保亮课题组发现进食后胰岛素和葡萄糖浓度增加可以作为信号，激活mTORC1，mTORC1在S132和S134位点磷酸化修饰USP20蛋白，USP20被招募到HMGCR复合物中并拮抗其降解，上调胆固醇合成。 图1.进食后胰岛素和葡萄糖通过mTORC1-USP20-HMGCR通路上调胆固醇合成。 研究人员发现，在肝脏特异性Usp20敲除小鼠和USP20（S132A/S134A）点突变小鼠（赛业生物构建）中，进食几乎不再诱导HMGCR蛋白增加。进一步的研究表明USP20的基因缺失或药理抑制作用可以显著降低饮食引起的体重增加，降低血清和肝脏中的脂质水平，提高胰岛素敏感性并增加能量消耗。总而言之，这项研究揭示了mTORC1通过磷酸化USP20与HMGCR之间的联系。抑制USP20可能是**包括心血管疾病、高脂血症、非酒精性脂肪肝、肥胖症和糖尿病在内的代谢疾病的有效疗法。 原文检索： Lu,XY.,Shi,XJ.,Hu,A.et al.Feeding induces cholesterol biosynthesis via the mTORC1–USP20–HMGCR axis.Nature(2020).https://doi.org/10.1038/s41586-020-2928-y
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其它动物细胞株操作步骤与注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
其它动物细胞株注意事项： （1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好（logphase）且存活率高之状态，约为80–90％致密度。 （2）冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 （3）注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色（以0.22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650），以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。 其它动物细胞株操作步骤为： （1）选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天蕞好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心（1000r/min，10分钟）。 （2）去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间。 （3）将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记（日期、细胞种类及代次、冻存支数）。 （4）将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时（此步可省略），再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，蕞后沉入液氮中。
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药界新宠——LYTAC 与靶向蛋白降解技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
近日，溶酶体靶向嵌合体 (LYTAC) 的发现在“江湖”上掀起了风浪，PROTAC 技术也安上了“开关”，到底是怎么回事儿呢？作为 5G 青年的小编又忍不住下手了，借此和大家聊一聊那些靶向蛋白技术~ 靶向蛋白降解 (TPD) 是一种有效性的，高度选择性的诱发蛋白降解方式。近年来，以 PROTAC 为代表的 TPD 技术的研究如火如荼。PROTAC 主要降解的是胞内蛋白，实际上，有 40% 的基因产物为胞外和膜相关蛋白，如生长因子、细胞因子和趋化因子，它们在多种疾病 (如癌症和炎症) 中引发异常信号传导。那么，有没有一种诱导胞外蛋白降解的技术来弥补 PROTAC 的这一局限呢？ PROTAC 是通过「清洁工」——泛素-蛋白酶体系统 (UPS) 来降解目标蛋白 (POI)，而此途径是胞内蛋白降解的主要途径，因此 PROTAC 主要降解胞内蛋白。泛素-蛋白酶体系统和自噬-溶酶体途径：是目前最主要的两条降解途径。这两条降解途径之间相互联系，具有协同和补偿作用。 溶酶体靶向嵌合体 (LYTAC) 近日，来自斯坦福大学 Bertozzi 教授的研究团队在 Nature 上报道了一项靶向胞外蛋白的降解技术——溶酶体靶向嵌合体 (LYTAC)。并且证明 LYTAC 成功降解了表皮生长因子受体 (EGFR)、程序性死亡配体 1 (PD-L1) 和载脂蛋白 E4。斯坦福大学的研究人员还表明，在细胞中，LYTAC 可以靶向并降解阿尔茨海默症和癌症中的重要蛋白。继 PROTAC 之后，LYTAC 可能会成为另一个“爆款”。 图 1. LYTAC 作用机制[3] LYTAC 含有两个结合域，一个寡糖肽基团 (Oligoglycopeptide group) 和一个能与目标蛋白质结合的抗体或小分子，两者用 Linker 连接。寡糖肽基团在细胞表面与跨膜受体 CI-M6PR 结合，所得复合物被细胞膜吞没，形成运输囊泡，并在 CI-M6PR 作用下将复合物转移至溶酶体降解，而受体 CI-M6PR 可循环利用并回到细胞膜 (如图 1)。例如通过使用抗 EGFR 单克隆抗体 Cetuximab 与 CI-M6PR 配体 M6Pn 糖多肽缀合构建 LYTAC Ab-2 来降解 EGFR。 另外，在去年六月份，PROTAC 先驱
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拉曼光谱技术及其在药物分析中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
摘要 拉曼光谱是研究化合物分子受光照射后所产生的散射光与入射光能量差与化合物振动频率、转动频率间关系的分析方法。该方法可用于化学物质结构分析、晶型分析、中药材真伪鉴别和成分分析及药物剂型的快速鉴别等。本文简单介绍了拉曼光谱的发展和基本原理，着重描述了拉曼光谱技术在药物分析领域的应用，并对其应用前景做了展望。 拉曼光谱( Ｒaman spectroscopy) 是研究化合物分子受光照射后所产生的散射光与入射光能量差与化合物振动、转动频率间关系的分析方法。其优点在于快速、准确、灵敏，测量时通常不需要破坏样品( 样品形态可以是固体、半固体、液体或气体) ; 其谱带信号通常处于可见光谱或近红外光谱范围内，可以有效地和光纤联用。 1 拉曼光谱技术的发展及基本原理 拉曼光谱是一种基于拉曼散射原理的振动光谱。其仪器组成主要包括光源、样品装置、滤光系统、光波处理系统( 单色器或干涉仪) 和检测器等。拉曼光谱通常采用激光作为单色光源，将样品分子激发到某一虚态，而后受激分子跃迁到一个与基态不同的振动能级，此时，散射辐射的频率不同于入射频率，这种频率的变化与基态和终态的振动能级差相当，这种“非弹性散射”光即称为拉曼散射。 除常规的拉曼光谱外，还有一些较为特殊的拉曼技术，如表面增强拉曼、共振拉曼、拉曼旋光、相关－反斯托克拉曼、拉曼增益或减失光谱以及超拉曼光谱等。其中，表面增强拉曼和共振拉曼在药物分析中应用广泛。 2 拉曼光谱技术在药物分析中的应用 2. 1 化学物质结构分析 拉曼光谱属于振动光谱，可以与红外光谱相互补充，提供更为准确的分子振动状态和分子结构等方面的信息。 用共焦拉曼光谱仪测定了盐酸曲马多的拉曼光谱图，并对其谱带进行了解析，所测图谱峰形良好，峰强明显，指纹性强，能够反映出盐酸曲马多的结构信息。 分析研究了地塞米松磷酸钠和倍他米松磷酸钠两种差向异构体的固体及饱和溶液的常规拉曼光谱及以银胶为基底的表面增强拉曼光谱，建立了两种差向
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超连续谱光源在激光层照显微镜Lightsheet使用中的优势及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
在路易斯安那州新奥尔良的神经科学年度会议上，卡尔蔡司的显微镜事业部提出了一项新的显微技术，即激光层照显微镜(Lightsheet )。这给生物学家带来了在活体生物动态成像研究上的新方法。 ▲Lightsheet观察的小鼠大脑 生命观察 生物学家可以使用新的显微系统观察整个生物体在几天甚至更长时间内的发育。极低的光毒性和整合的培养系统可以在不损伤样本的情况下观察细胞群的分化。在大型生物活体上，特别是像果蝇或斑马鱼胚胎，相比已有的荧光显微镜观察方式来说，激光层照显微镜(Lightsheet)可以提供更多的信息。 同时，激光层照显微镜也可被用于海洋，细胞生物学和植物生理学。它的光照光束(层照光束)只会照亮样本很薄的一层，因而起到保护样本其他部分的作用。并且它的成像光束与光照层成90度角。 因此，激光层照显微镜能在最小的照明强度下获得**的图像质量，尤其适合于活体样本的长期试验。成像从不同的观察角度获得数据，再通过数学运算进行三维重建和时间序列视频录制。 Lightsheet 激光层照系统使用了可实现柱面透镜光学与激光扫描相结合的新型光学概念。用户能从复杂的实验样本上得到均匀的光学切片信息。 ▲Lightsheet观察的小鼠海马区 开创荧光显微技术新纪元 Lightsheet 是观察活体样品发育的一种对样品损伤低的方法，它开启了研究新纪元。以下为激光片层扫描显微技术（Light Sheet Fluorescence Microscopy）的应用： 一、形态发育和胚胎形成 在斑马鱼和黑腹果蝇等模式生物胚胎形成阶段，对细胞进行时间、空间模式的荧光成像。 二、器官发育与细胞动力学 胚胎与小型生物中细胞动态过程的快速成像，例如：细胞迁移、心脏发育、血流、血管发育、神经发育及钙成像。 三、三维细胞培养 三维细胞培养、球体和囊肿、组织培养、器官培养的实时成像。如细胞迁移、表达模式及细胞增殖的分析。 四、对光透样品成像 对荧光标记的固定样品（组织切片、小鼠大脑、胚胎、器官、球状体和活
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肿瘤研究领域热门基因之MYC
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
想调整研究方向，获得学术研究突破口？想获得国自然选题思路，提高国自然基金申报成功率？你需要了解学科发展态势和未来走向！赛业生物专栏《Gene of the Week》每周会根据热点研究领域介绍一个基因，详细为您介绍基因基本信息、研究概况和应用背景等，助您保持学术研究敏锐度，提高科学研究效率，期待您的持续关注哦。今天我们要讲的主角是明星致癌基因MYC。 基因基本信息 备注：标有√的意为赛业红鼠库有该种保存状态的小鼠 MYC基因研究概况 近年来的研究发现，肿瘤产生的根本原因是基因的变异。基因是遗传信息的基本单位，总的来说，细胞中有两类基因与肿瘤的发生发展密不可分，它们分别是原癌基因与抑癌基因。MYC基因是目前研究最多的一类核蛋白类癌基因，包括C—MYC、N—MYC、L—MYC、R—MYC 4种。C-MYC原癌基因是最常见的活化原癌基因之一，C-MYC参与调控的癌症占人类所患癌症的20%左右，受C-MYC原癌基因影响致死的癌症患者每年可达几十万。 MYC是一种作用广泛的转录因子，它通过多种机制调节细胞的分化和增殖，包括靶基因的转录扩增。 图1.MYC调控细胞生长和增殖。 DOI:10.1016/j.cell.2012.03.003。 C-MYC基因主要通过扩增和染色体易位重排的方式激活，与某些组织肿瘤的发生、发展和演变转归有重要关系。在许多人类癌症中经常观察到该基因的扩增。涉及该基因的易位与人的伯基特淋巴瘤和多发性骨髓瘤有关。它能调控多种与细胞增殖和代谢过程相关基因的表达，并且其对应的基因也是人类癌症中最常见的高丰度癌基因。长非编码核糖核酸在癌症发展和进展中的作用越来越受到重视。特别是，在癌细胞中参与C-MYC和p53通路的lncRNAs的名单正在迅速扩大。MYC能够与MAX形成异二聚体并结合在E-box序列上来激活对应的转录靶标。正是由于MYC在癌症发病机制中的重要作用，发展针对MYC或其通路的抑制剂来调控MYC的表达和活性成为重要研究方向之一。 表1.描述人类癌症中MYC与抗肿瘤免疫之间关系的代表性文献。
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简化微生物实验室的MALDI工作流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）作为微生物鉴定技术，应用已有十多年了，传统生化方法需要数天时间才能得出结果，而且往往缺乏特异性，而MALDI-TOF 质谱仪则克服了上述局限性。MALDI作为一种用于质谱（MS）的软电离方法，可实现对生物分子（如DNA、核糖体蛋白质、肽和糖）以及有机大分子（如聚合物和其它大分子）的分析。MALDI-TOF质谱仪也因此成为当今最先进的利用蛋白质组指纹技术鉴定细菌、酵母和真菌的技术。 快速准确的分析、便捷的样品制备以及简便的结果生成，使得MALDI-TOF质谱仪非常适合于常规的和高通量的微生物鉴定。为此，微生物样品点在MALDI-TOF质谱仪靶板上的点位，并在分析前以特定的MALDI基质覆盖，随后将所获得的质谱图谱与参考谱库进行匹配。MALDI-TOF 质谱仪靶板通常采用金属、塑料或陶瓷，可将MALDI-TOF 质谱样品点在单个点位上用于分析。MALDI-TOF 质谱仪靶板主要有两种类型，即一次性靶板和可重复使用靶板。其关键的区别在于，可重复使用靶板需要在每次试验之间进行彻底的清洁和检查，而一次性靶板则即时可用。本文将讨论一次性靶板在经济、方便的微生物鉴定工作流程中的优势。 快速、稳定的工作流程 在中、高通量实验室（例如在制药或食品工业）中，快速微生物鉴定是质量控制（QC）和及时交付所必需的，因此，高效、方便、快捷的工作流程至关重要。此外，在受到高度管制的行业（如制药行业），QC方法必须通过实验室验证。可重复使用的MALDI钢质靶板由微生物实验室负责，因为它们需要一个必须经常被记录的额外清洁步骤，作为遵循清洁程序的审查证据。然而，使用一次性靶板可直接支持规定环境下的工作流程，如ISO 15189。 一次性靶板可减轻清洁程序验证的负担，降低先前样本的污染和记忆效应的风险。因此，当使用一次性MALDI靶板时，基于MALDI的工作流中有关质量管理（Quality Management, QM）的部分变得更加简便，并能为管理和实验室团队节省时间，更能专注于其核心任务
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利用弹性网正则化或卷积神经网络构建评估扁豆丝囊菌根腐病模型
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
Plant Phenomics | 利用弹性网正则化或卷积神经网络构建评估扁豆丝囊菌根腐病的广义线性模型 丝囊菌根腐病是限制扁豆和豌豆产量的主要疾病，能够导致严重的经济损失。目前商业化推广种植的品种大都缺乏根腐病抗性，因此，研究者致力于通过遗传育种方法开发出抗病性更好的扁豆品种。 作物表型由于与植物表达性状（受基因和环境因素间的相互作用影响）的评估息息相关，所以成为了作物改良工作中的一个关键过程。传统表型方法通量较低且易受主观因素影响，往往费时费力，因此有必要开发新的表型组学技术，在细胞、器官、植株或群体层面辅助获取多维表型数据。可以预见的是，与传统方法相比，表型组学的进步将能够实现对大规模育种试验进行无损、自动化以及高时空分辨率的评估。 数据驱动的方法解释特定的生物学模式（如抗病性和农艺表现等）能够帮助植物育种专家、病理学家和生理学家等做出决策。传感器技术的发展推动了许多性状的大规模筛选，这种大规模筛选的方法会生成大量的数据，需要进行数据分析来提取出有意义的数据性状，因此新的数据分析方法也亟待开发。已有研究表明，统计学方法和机器学习方法都可以从收集到的表型数据中有效地提取性状。与统计学方法相比，机器学习方法的优点之一是其能够评估多个性状的组合，而不是针对某些性状一个一个地进行评估。 近日，Plant Phenomics在线发表了华盛顿州立大学Afef Marzougui等人的题为Generalized Linear Model with Elastic Net Regularization and Convolutional Neural Network for Evaluating Aphanomyces Root Rot Severity in Lentil的研究论文。 论文作者使用可见光图像评估了扁豆的丝囊菌根腐病抗性。为了辅助表型过程，在论文作者先前的研究工作中，已评估了从可见光或高光谱图像中提取扁豆根芽的可能性，并结合使用了用于疾病分类预测的弹性网回归模型。考虑到深度学习方法的潜在优点，该文章建立了一个扁豆根图像数据集(Fig. 1 (a))
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多肽合成与修饰技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
实验技术：多肽 合成是一个固相合成顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进 和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点，从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总的来说分成两种：固相合成和液相多肽合成。 实验技术原理： 多肽合成仪以固相合成为反应原理，在密闭的防爆玻璃反应器中使氨基酸按照已知顺序（序列，一般从C端-羧基端 向 N端-氨基端）不断添加、反应、合成，操作最终得到多肽载体。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。 实验操作流程： 1、去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去除氨基的保护基团。 2、激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环：这两步反应反复循环直到合成完成。 3、洗脱和脱保护：多肽从柱上洗脱下来，其保护基团被一种脱保护剂（TFA）洗脱和脱保护。 多肽修饰类型： 1、C端标记技术 ： C端酰胺化（Amidation,C-termainal）、醛基化（Aldehydes）、醇基化（Alcohols）、pNA (p-Nitroanilide) AMC、AFC、巯基乙胺化（Cysteamide）、酯基化（Ester）、N-烷基化（N-Alkyl Amides）等 2、N端标记技术 ： 乙酰化Acetylated （Acetylated）、Palmytolyl、HYNIC、生物素标记（Biotinylated）、Br乙酰化（Bromoacetylated） 螯合反应（DOTA，DTPA conjugated）、甲醛化（Formylated）、十四烷基、十八烷基化（Myristoylated） 琥珀酰化、棕榈酸化、苹果酸化、脂肪酸化等（Succinylated） 3、荧光标记修饰： C端修饰:AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye
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槐凝集素（SJA）ELISA免费代测试剂盒说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
槐凝集素（SJA）ELISA免费代测试剂盒说明书 【中文名称】：槐凝集素（SJA）ELISA免费代测试剂盒 【产品规格】：96T/48T。 【保存条件】：2-8℃低温保存 【保质期】：6个月，所有试剂盒均提供批次。 【试剂盒成分】：酶标板，试剂，标准品等。ELISA试剂盒检测范围：人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。 主要用于科研方面，不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。 槐凝集素（SJA）ELISA免费代测试剂盒实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中维生素C(VC)水平。用纯化的维生素C(VC)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入维生素C(VC)，再与HRP标记的维生素C(VC)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的维生素C(VC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中维生素C(VC)浓度。 植物维生素C(VC)ELISA免费代测试剂盒索取说明书或有技术问题请的在线销售人员！凡在公司购买ELISA试剂盒的客户，可享受我司提供的免费代测服务、全程技术指导及完整的售前售中售后服务，如有问题请，我们会以zui快的速度为您解答！ 样本处理及要求 1.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 3. 不能检测含NaN3 的样品，因NaN3
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Klhl22敲除小鼠揭示调控PD-1蛋白水平稳态的新机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
目前在肿瘤免疫疗法中，阻断免疫检查点是最有前景的疗法之一。其中，PD-1/PD-L1检查点是最广为研究的领域之一。程序性死亡受体1(Programmed cell death protein 1,PD-1)表达于活化T细胞表面，并能传导免疫信号抑制T细胞的增殖、生存和效应功能，影响T细胞的抗肿瘤效果。PD-1表达上调是T细胞活化的正常结果，也是终止免疫反应所必须的，但其异常高表达会过度抑制T细胞活性，因此维持PD-1蛋白水平在合适范围内是非常重要的。PD-1的表达是被多层级调控的，目前在翻译后水平调控方面，已知FBXO38能介导细胞表面的PD-1泛素化并通过泛素蛋白酶体途径使其降解[1]，但不知道在被转运至细胞表面前，是否还有调控机制参与胞内PD-1蛋白水平上的调控。此外，PD-1疗法还面临着耐药性和低响应率的问题。虽然5-FU与PD-1单抗联合疗法已被临床前研究数据证明有效，但它的具体机制尚不清楚。 今年10月，北京大学基础医学院王嘉东教授、王巍教授团队和北京大学人民医院申占龙教授团队联合在著名SCI期刊PNAS上发表了题为“KLHL22 maintains PD-1 homeostasis and prevents excessive T cell suppression”的文章[2]，揭示了一种可在翻译后水平上调控PD-1蛋白稳态的相关蛋白：KLHL22。它能在PD-1被转运至T细胞表面前介导其降解；而KLHL22的缺乏可导致PD-1异常高表达，T细胞活性被过度抑制，抗肿瘤反应降低。此外，该文章揭示化疗药物5-FU可通过抑制Klhl22转录来提高PD-1的表达量，从而增强5-FU和PD-1单抗联合疗法的效果。 KLHL22是一种主要的PD-1相关蛋白 为了探究蛋白质水平上PD-1的调控因子有哪些，研究人员首先在稳定表达PD-1的Jurkat细胞和HEK293T细胞上进行串联亲和纯化/质谱(Tandem affinity purification,TAP/MS)分析。在这两种细胞的TAP/MS结果中，他们发现KLHL22蛋白都得到了较高的特异性富集(>10%)。接下来，他们又做了免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)和免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,CO-IP)实验来验证KLHL22与PD-1
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亨廷顿病致病基因HTT
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
HTT基因研究概况 该基因与亨廷顿病（Huntington disease,HD）直接相关，致病区域在其1号外显子上。在正常人中，HTT基因的1号外显子数量只有不超过35个连续的CAG重复，编码一段Huntingtin蛋白上的多聚谷氨酸。当这种CAG重复超过35个时，HD发病概率随着重复的增加而上升。目前HD在欧美高加索白人中的发病率在0.005%~0.01%之间，属于罕见病范畴，但由于该病致病基因单一，发现时间早，而且症状涉及运动，认知，精神等多重障碍，因而在神经退行性疾病领域有比较深入的研究，不过目前仍然没有HD的相关**性药物面市。 人类HTT蛋白位于4号染色体的短臂上，长达180bp，并具有多达67个外显子。亨廷顿病的致病位点在第一个外显子上。该基因上的突变则多为haplotype A1、A2和A3三种类型。HTT蛋白的重要区域包括N端的多聚谷氨酰胺区域和聚脯氨酸区域；含有氨基酸最多的三个HEAT区域（这个区域最先在四个蛋白中发现）。HTT上有蛋白酶体、Caspase和Calpain的识别位点，正常情况下，HTT能被Caspase水解成两段，而且两段可以自行结合行使功能；而在HD病理情况下，HTT的表达不但增加了，而且其游离的N端产物更易聚集，同时C端也会产生一定的毒性。 图1. Huntingtin基因及其蛋白。 ISBN: 978-0-12-805120-7。 正常的HTT能促进BDNF的转录并促进皮层-纹状体轴突中的BDNF进行转运。当BDNF释放进入皮层-纹状体之间的突触时，就会激活纹状体上的TrkB受体，造成TrkB的内吞，内吞的TrkB与Dynein、Dynactin以及Kinesin-1共同构成复合体激活Erk1/2，促进神经元的存活。 图2. HTT调节皮层-纹状体功能。 DOI: 10.1016/j.neuron.2016.02.003。 HTT基因在人体组织的表达 图3. 人和小鼠HTT基因mRNA相对表达量。人和小鼠脑组织中该基因无疑都是绝对的高水平表达。接下来就是睾丸、皮肤、脾脏和肺中该基因表达也较高。小鼠在胸腺中的表达也很高不（表达信息为归一化的相对值，而非直接RPKM数据；同物种内部比较，小鼠和人之间无可比性）。
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植物维生素D（VD）ELISA免费代测试剂盒实验说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
植物维生素D（VD）ELISA免费代测试剂盒说明书 【中文名称】：植物维生素D（VD）ELISA免费代测试剂盒 【产品规格】：96T/48T。 【保存条件】：2-8℃低温保存 【保质期】：6个月，所有试剂盒均提供批次。 【试剂盒成分】：酶标板，试剂，标准品等。ELISA试剂盒检测范围：人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。 主要用于科研方面，不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。 植物维生素D（VD）ELISA免费代测试剂盒实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中维生素C(VC)水平。用纯化的维生素C(VC)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入维生素C(VC)，再与HRP标记的维生素C(VC)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的维生素C(VC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中维生素C(VC)浓度。 植物维生素C(VC)ELISA免费代测试剂盒索取说明书或有技术问题请的在线销售人员！凡在公司购买ELISA试剂盒的客户，可享受我司提供的免费代测服务、全程技术指导及完整的售前售中售后服务，如有问题请，我们会以zui快的速度为您解答！ 样本处理及要求 1.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 3. 不能检测含NaN3 的样品，
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细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒说明书 技术原理： DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。 在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性） 发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。 特点优势： 1.用特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。 2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。 3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。 4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。 5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。 反应
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