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德尔塔告诉你染色质是解锁癌症表观遗传学的钥匙！
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
表观遗传学指基因序列不变化的前提下，基因表达发生了可遗传的变化，包括DNA甲基化、染色质改型、基因沉默、组蛋白修饰等。其中，染色质改型调控基因表达的过程，涉及多种导致DNA和组蛋白组成变化、染色质构象变化的蛋白质。 观遗传学指基因序列不变化的前提下，基因表达发生了可遗传的变化，包括DNA甲基化、染色质改型、基因沉默、RNA编辑、组蛋白修饰（甲基化、乙酰化、磷酸化等）等。其中，染色质改型调控基因表达的过程，涉及多种导致DNA和组蛋白组成变化、染色质构象变化的蛋白质。 众多研究已经证明，染色体畸变和染色质异常修饰，常常导致正常细胞癌变。这些修饰缺陷将可能影响数百个下游基因的表达模式，导致多个信号通路的紊乱。关于染色质改型的进一步研究证明，这一表观遗传学表现与众多目标蛋白相关联。癌症试验胚胎学建立在表观遗传学基础上，正在迅速发展为一个新的研究学科。 针对染色质异常修饰，为**制剂的研发提供了新思路。怀着这一美好前景展望，小编总结了以下5个具有抗癌潜能、与染色质异常相关的关键性因子： 组蛋白修饰改变染色质 组蛋白修饰能够以两种方式改变染色质：直接改变蛋白质与染色质的联系，间接改变染色质构象。组蛋白-组蛋白或者组蛋白-DNA的互作都有可能影响染色质构象。 其中，一个常见的修饰是组蛋白赖氨酸残基的乙酰化，这个修饰过程会中和正电荷，直接破坏染色质与其他蛋白的静电相互作用。间接影响包括染色质重塑，影响其与特定的修饰组蛋白互作，招募他们至染色质的功能。 爱荷华大学生物化学、卡佛大学医学院的助理教授Catherine A. Musselman博士带领的研究团队对组蛋白赖氨酸甲基化过程进行研究。甲基化作为*多样化的组蛋白修饰，具有多种功能，例如H3K4me3（H:histone;K:Lsy;me:trimethylation）是促进转录激活基因表达；相反，H3K27me3抑制基因表达。 PHF1参与DNA损伤修复 Musselman博士的研究侧重于一类锌指蛋白——植物同源结构域锌
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西安德尔塔告诉大家：GM试验的局限性
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
近年随着广谱抗生素和免疫抑制剂的使用，侵袭性真菌感染(Invasive Fungal Disease，IFD)的发病率逐年上升。其中侵袭性曲霉菌病(Invasive Aspergillus，IA)在IFD中比例逐年增高。侵袭性曲霉菌感染常见于血液科，同时ICU，呼吸科，感染科等也是常见科室，高危人群为免疫功能缺陷或服用免疫抑制剂药物。众多研究里均统计出IA的死亡率可高达70%-90%，这样高的死亡率是由于IA早期诊断的困难性。 临床对IA的诊断往往基于传统方法，即：临床症状结合放射学结果和培养等，但是同样地，有研究中对IA诊断的几种方法学作了比较，特别是与Bio-Rad公司的PlateliaTM曲霉菌抗原检测试剂盒的比较： 诊断方法敏感性特异性 胸部x射线（1）94%60% CT扫描（晕征）（1）28%93% 组织培养（肺泡灌洗液）（1）50%92% GM抗原：（2） 单次样本检测≥0.5 连续2次样本检测≥0.5 97.4% 92.1% 90.5% 97.5% (1) Maertens, J., JID 2002 (2) Maertens, J., ａnd al. CID 2007 随着美国Bio-Rad公司商业化产品GM试剂盒(PlateliaTMAspergillus Ag Assay)的上市，越来越多的厂商和医学者们开始深度挖掘GM试验的局限性，如交叉反应或假阳/阴性结果。事实上，Bio-Rad公司曾做过一项研究，即用一个批号的曲霉菌抗原检测试剂盒评估侵袭性曲霉菌病不相关的医疗状况的潜在干扰，用以下来源的血清样本检查曲霉菌抗原检测试剂盒的交叉反应，受检血清151例。 病理学受检样本数阳性结果 类风湿因子100 ANA阳性100 IgG高丙种球蛋白血症100 IgM高丙种球蛋白血症100 多次输血100 甲型肝炎病毒100 风疹病毒100 丙型肝炎病毒100 巨细胞病毒100 梅毒100 弓形虫100 支原体100 非病毒性肝硬化100 癌症110 多胞胎孕妇100 从表中不难看出，以上医学状况与曲霉菌抗原的检测不存在交叉反应，仅为临床医生提供参考依据。 原创作者：德尔塔
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西安德尔塔告诉大家ELISA技术之双抗体夹心法
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型：双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法，属于非竞争结合测定。它是检测抗原*常用的ELISA，适用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，而不能用于小分子半抗原的检测。其基本工作原理是：利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品中被检测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待测抗原是过量的,因此复合物的形成量与待测抗原的含量成正比(在方法可检测范围内)。测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物质量(OD值)，即可确定待测抗原含量。 若固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品中被检测抗原分子上两个不同的抗原决定簇结合，则属于双位点夹心法。若采用固相载体上的抗原和酶标抗原分别与样品中被检测抗体分子结合，则是双抗原夹心法。 原创作者：德尔塔
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能捕杀肿瘤细胞的“纳米钻石”
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
手术和化疗是对付肿瘤细胞的主要手段，可是化疗中面临的一个*为棘手的问题就是肿瘤对药物产生耐受，90%的化疗失败要归结于肿瘤耐药。肿瘤耐药的方式和机制多种多样，其中有一种特殊类型的耐药，叫“多药耐药”（Multiple drug resistance, MDR），也就是肿瘤细胞变得“百毒不侵”，很多有药物都对它无效。究竟是怎么回事呢？原来，肿瘤细胞把药物都给“吐”出来了，不管你是什么药。究竟是怎么回事呢？ 细胞膜就像两层油布，把细胞内外完全隔开；膜上有些通道，安装着各种不同的“泵”，原本是负责细胞内外的物质交换，其中有些类型是负责往外排废物的。没想到，肿瘤细胞十分狡猾，就利用某些泵把一些化学药物在还没来得及发挥作用就给它“吐出去”了。真是“道高一尺，魔高一丈”。虽然科学家们一直在努力，比如想办法寻找能够阻断这些“泵”的化学抑制剂，可是难度太大，至今还是没有有效解决。 科学家们另想了个办法，如果把药物附着在纳米颗粒上，是否就可以避免药物被“吐”出去呢？因为纳米颗粒尺寸大过泵的出口口径。美国西北大学的生物医学工程师Dean Ho领导的小组率行了尝试，设计出一种“纳米钻石”。他们用“打磨”成8面体结构的2-8纳米的碳颗粒，把化疗药物阿霉素接在电中性一面上，另外一面连上能够专门识别肿瘤细胞的分子（如抗体），其它几面保持电性，为的是能在水性溶液“打成一片”；然后导入肝癌细胞。他们发现，肿瘤细胞“吃”了“纳米钻石”后，不再那么容易吐出来了，细胞内药物浓度比直接用阿霉素要高出十几倍。他们还在动物身上做了实验，结果证实，“纳米钻石”药物对肿瘤的杀伤效果要比直接用阿霉素好；他们还发现了另外一个意想不到的好处：“纳米钻石”降低了阿霉素的药物毒性，提高了安全性。原因可能是“纳米钻石”让药物在肿瘤细胞内稳定存留，相当于一个缓释系统，技能有效杀死肿瘤，有减少快速释放对正常组织的损害。 上述结果发表在*新一期的《科学转化医学》（Science Translational Medicine）上。当然，这只是
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Western Blot实验选择内参抗体的重要性
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，方法是western blot。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用的。 我们知道，要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。艾美捷向您推荐使用内参抗体来检测您的实验系统，或者校准您的实验结果。内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。 实验结果分析其实很简单：如果样品蛋白量有限，只够进行一次电泳转膜实验时，分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果。如果样品量充分，可以先检测内参，观测样品间内参显色条带是否一致，根据差异大小调整各样品的
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西安德尔塔与你讨论ELISA试剂盒实验中的显色问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
elisa试剂盒实验实验中的显色问题。试验中反应的温度和时间是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30 分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。OPD 底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD 产物用硫酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。TMB 受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。T MB 经HRP 作用后，约40 分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2 小时后即可完全消退至无色。TMB 的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间（12-24 小时）不褪，是目视判断的良好终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长（450nm）测读吸光值。您在实验中如遇到任何问题欢迎咨询本公司技术人员！ 原创作者：德尔塔
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染色质免疫共沉淀技术（ChIP）
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
染色质免疫共沉淀技术（ChIP）] 实验原理 基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的 蛋白结合的 DN段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。CHIP 不仅可以检测体内反式因子与 DNA 的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且，CHIP 与其他方法的结合，扩大了其应用范围：CH [ChIP 染色质 免疫共沉淀 细胞蛋白质 抗体] 实验原理 基 本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋 白结合的 DN段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。CHIP 不仅可以检测体内反式因子与 DNA 的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且，CHIP 与其他方法的结合，扩大了其应用范围：CHIP 与基因芯片相结合建立的CHIP-on- chip 方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选；CHIP与体内足迹法相结合，用于寻找反式因子的体内结合位点；RNA-CHIP 用于研究 RNA 在基因表达调控中的作用。由此可见，随着 CHIP 的进一步完善，它必将会在基因表达调控研究中发挥越来越重要的作用。 实验试剂 1. 37% 甲醛 2. 甘氨酸 3. PBS 4. 蛋白酶抑制剂 （protease inhibitor） 5. RnaseA 6. 0.5MEDTA 7. 1MTris.HCl（PH6.5） 8. 10 mg/ml 蛋白酶 K 等。 实验设备 1. 10 cm 平皿 2. 水浴锅 3. 细胞刮刀 4. 超声破碎仪 5. 15 ml 离心管 6. 高速离心机 7. 交联仪等。 实验材料 培养好的细胞 实验步骤 1. 细胞的甲醛交联与超声破碎 （天） 1） 取出 1 平皿细胞（10 cm 平皿），加入 243 ul 37% 甲醛，使得甲醛的终浓度为 1%（培养基共有 9 ml）。 2） 37 摄氏度孵育 10 min. 3） 终止交联：加甘氨酸至终浓度为 0.125M.
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GST融合蛋白表达与纯化的实验步骤与注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
GST表达融合蛋白载体pGEX-KG大小：5006bp，氨苄青霉素抗性（Ampr），iptg诱导表达酶切位点：BamHI 930、SmaI 937、EcoRI 962、XbaI 966、NcoI 974、SalI 980、XhoI 985、SacI 992、HindIII 994GST分子量：构建pGEX-KG-YFG重组质粒1、分析所感兴趣的基因（your favorite GENE, YFG）Primer Premier 5.0软件，分析YFG含有哪些酶切位点，注意是否与pGEX-KG载体的多克隆位点有重合2、确定合适的双酶切位点NEB网站（www.neb.com） Double Digest Finder软件，查找*佳双酶切组合（下表） NEB双酶切图谱 BamHI EcoRI NEBuffer EcoRI + BSA at 37°C. BamHI may exhibit star activity in this buffer. XbaI NEBuffer 3 + BSA at 37°C. At least one enzyme has < 100% activity in this buffer, so additional units of enzyme and/or longer incubation time may be necessary. NcoI NEBuffer 3 + BSA at 37°C. SalI NEBuffer 3 + BSA at 37°C XhoI NEBuffer 3 + BSA at 37°C. SmaI XbaI NEBuffer 4 + BSA at 25°C with SmaI, then add XbaI ａnd raise temperature to 37°C. At least one enzyme has < 100% activity in this buffer, so additional units of enzyme and/or longer incubation time may be necessary. NcoI NEBuffer 4 at 25°C with SmaI, then add NcoI ａnd raise temperature to 37°C. XhoI NEBuffer 4 + BSA at 25°C with SmaI, then add X
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绵羊溶菌酶（LYS）酶联免疫分析试剂盒操作说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
绵羊溶菌酶（LYS）酶联免疫分析试剂盒操作说明 本试剂盒仅供研究使用。 通俗名称：绵羊溶菌酶（LYS）定量检测试剂盒，绵羊溶菌酶（LYS）ELISA定量检测试剂盒 英文简称：LYS Elisa Kit 贮藏条件：试剂盒保存2-8℃ 有效期：6个月 特异性:本ELISA检测试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。 适用范围：此试剂盒仅用于科研实验，禁用于临床 ELISA常用的方法：双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。 实验原理 绵羊溶菌酶（LYS）酶联免疫分析试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊溶菌酶（LYS）水平。用纯化的绵羊溶菌酶（LYS）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入溶菌酶（LYS），再与HRP标记的溶菌酶（LYS）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的溶菌酶（LYS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中绵羊溶菌酶（LYS）浓度。 绵羊溶菌酶（LYS）酶联免疫分析试剂盒组成 130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（64µg/L）0.5ml×1瓶 3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶 4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 绵羊溶菌酶（LYS）酶联免疫分析试剂盒操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 32µg/L5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液 16µg/L4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液 8µg/L3号
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酶联免疫吸附实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
酶联免疫吸附实验 酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。1971年Engvall和Perlmann发表了该方法用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。 酶联免疫吸附法（ELISA）的基本原理 ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，*后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 方法类型和操作步骤 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本，干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子（或受体）的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体； ②酶标记的抗原或抗体； ③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原*常用的方法，操作步骤如下： （1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 （2）用脱脂奶粉或BSA进行封闭。洗涤除去多余的脱脂奶粉或BSA。 （3）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 （4）加
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西安德尔塔代理：GIBCO胎牛血清 10099141
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
西安德尔塔代理：GIBCO胎牛血清 10099141 ，原装正品行货，假一赔十，欢迎联系！胎牛血清, Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia OriginGIBCO胎牛血清 10099141详细描述Sera Category: SecureOrigin: AustraliaEndotoxin level:
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小鼠elisa试剂盒最新资料
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
德尔塔技术有限公司在上周五全新推出了小鼠，下面大家一起来了解下它的具体资料吧。 用途：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断 应用：被测样品的定性定量分析 库存：现货供应、厂家低价直销 实验方法：酶联免疫法/酶免法（ELISA） 检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法 保存条件：2-8℃ 样品类型：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。取材前须向销售人员索要说明书 小鼠提供免费代测服务，使用我公司试剂盒,只收取试剂盒的费用,其他辅助试剂全部免费。我们将根据实验工作量和难易程度，双方协定实验周期，保质保量完成委托实验，并将实验结果和材料用特快专递免费寄送到您手中。 elisa试剂盒 原创作者：德尔塔
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干细胞的关键蛋白质
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
再生医学研究的一个重要课题是:清楚地了解干细胞是如何分化为特殊的器官和组织的.现在,加州大学的Santa Barbara为这一领域的研究增添了新的发现,他的研究小组确定了果蝇中决定干细胞产生不同类型的子细胞的机制.这些结果被发布在今日的Proceedings of the National Academy of Sciences上. 果蝇是干细胞生物学研究的一个极好的模型.为了观察自然环境中的干细胞,UCSB的分子、细胞和发育生物学教授Denise Montell研究了果蝇的卵巢.通过这些工作,该小组阐明了卵泡细胞分化的*早期阶段.“很明显,简单动物控制细胞行为的基本原理是保守的,即该原理也控制了人类的细胞行为.”她说：“有太多的知识我们可以通过研究简单生物模型来了解.” castor（Cas）基因编码一个表达于滤泡干细胞（follicle stem cells, FSCs）中的结构核蛋白.研究人员发现在胚胎发育过程中,Cas对产生特殊类型的大脑细胞起到了关键作用,并且帮助维持了整个生命过程中的FSCs.“确定了果蝇中的这一重要蛋白质,我们就能够检测是否人类中该蛋白质的同源物对干细胞及其子代也是重要的.”Montell说：“我们对控制干细胞行为的分子了解的越多,就能更近一步地达到我们控制这些细胞的目标.” Cas和Eya的互补模式揭示了早期发育阶段极细胞和柄细胞的逐级分化.另外,它还提供了一个指示细胞命运的标记物,并阐明了FSC后代发生不同命运的分子和细胞机制. 在早期分化过程中,卵泡细胞经历了双项选择.那些将变为特化细胞的卵泡细胞位于卵室的两极,并接着变为两种类型的细胞——极细胞和柄细胞.3种基因——Cas,Eya和Hh,以不同的组合发挥作用,有时会强制性的决定形成哪类细胞.Cas是极细胞和柄细胞完成细胞命运所需的,而Eya是这些细胞命运的一个负调控因子.Hh是Cas表达必需的,并且Hh信号对Eya的抑制是必要性的. Montell解释说：“如果只得到了这些标记物中的一种,你很难评估事情的发展情况.所有的细胞看起来都是一样的,你没办法知道什么时候会发生什么事情.但是现在,我
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生化试剂应用常见问题的探讨
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
1 试剂空白 试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标。每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质；如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色。碱性磷酸酶、r一谷氨酰转肽酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄。有些试剂久置后变浑浊。这些情况均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应，在放置过程中其试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降。原则上，吸光度上升的反应，其试剂空白吸光度越低越好，不能超过一个高限；相反，吸光度下降的反应，其试剂空白吸光度不能低于一个低限。因此，试剂空白吸光度限值，常作为程序参数输入仪器，如经核查超限，仪器会自动报警，提示更换试剂。需要指出的是，还原型辅酶I（或II）等投料量不足或劣质的原料，往往需要加大用量，才使“表观”吸光度上升，凑合过试剂空白核对的“关”，其后果为如下情况： 1．1 线性范围变窄 现象：高值测不高。原因：生产试剂时有效成分投料量不足；试剂成份稳定性较差。 1．2 灵敏度变低现象：酶促反应速度曲线斜率下降，测定结果有严重系统误差。原因：试剂底物浓度不足。 1．3 低值偏高 现象：试剂空白的变化曲线（吸光度VS时间）明显波动。原因：试剂自身不稳定，自行分解；工具酶纯度不够，杂酶含量超限，导致干扰作用。 2 样品信息 样品的溶血、脂血、黄疸等会对测定结果产生非化学反应的干扰。因此，应根据溶血、脂浊、黄疸的光谱吸收特性，采用双波长或多波长的检测模式，并在结果计算中扣除因溶血、脂血、黄疸引起的影响，减少干扰程度。 3 测定范围 每种待测物都有一个可测定的浓度或活性范围，样品结果若超过此范围，分析仪将显示结果超过范围的提示。表示试剂已经变质，应更换合格试剂。 4 底物耗尽 使用连续监测法、两点法测定酶活性时，若酶活性非常高，底物接近被耗尽，吸光度上升或下降会超过某一吸光度变化范围，监
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PCR实验代做，PCR实验操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
PCR检测微量感染因子时，容易因为污染的而导致各种问题，因此，进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。 （1）划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行： ① 标本处理区，包括扩增摸板的制备； ② PCR扩增区，包括反应液的配制和PCR扩增； ③ 产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。 各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。 切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。 （2）分装试剂：PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA： ① PCR用水应为高压的双蒸水； ② 引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制； ③ 引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。 (3) 实验操作注意事项 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： ① 戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套； ② 使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染； ③ 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面； ④ 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度； ⑤ *后加入反应模板，加入后盖紧反应管； ⑥ 操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应
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