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如何避免血清中沉淀物的产生
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。我们科研人员在保存血清的时候，如何避免沉淀物的产生? 1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法（-2O。C至4。C至室温），若血清解冻时改变的温度太大（如-20。C至37。C），实验显示非常容易产生沉淀物。 2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 3、请勿将血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。 4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 5、若必须做血清的热灭活，请遵守56。C，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。 德尔塔代理销售人血清，人AB型血清，人混合型血清，胎牛血清，小牛血清，成牛血清等，如果你想了解更多详细信息，欢迎来电咨询。 原创作者：德尔塔
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ELISA试剂盒样本处理以及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
德尔塔代理销售elisa试剂盒，现货供应。ELISA试剂盒的样本处理资料，以及注意事项，西安德尔塔替你解答。1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。3.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。4.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 原创作者：德尔塔
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衡量胎牛血清质量的主要技术指标
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
德尔塔代理销售优质胎牛血清，gibco原装进口141胎牛血清，gibco胎牛血清141现货库存，原装进口，假一罚十，欢迎大家来电咨询。 1、内毒素 标准为不高于5EU/ml。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分，因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前，国产血清基本都能达到这一要求，很多进口胎牛血清内毒素含量反而更高，如Gibco 26140，只要求不高于50EU/ml，高出我国标准10倍，即使是16000，也要10EU/ml，血清质量也未见影响。可见，内毒素含量偏高不影响质量，除非含量极高，预示着已经污染。 2、总蛋白含量 胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高，说明采血的牛龄偏大，不是胎牛，数值偏低，表明血清可能掺水了。 3、血红蛋白 标准为不高于20mg/dl，颜色越红，数值越高，反之，数值越低。 4、pH 国产血清，大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，具体原因未知，可能和牛龄有关，这也能用来初步鉴别血清的来源。 5、微生物 包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高，细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制，支原体经过0.1um过滤，大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的，主要是生产环境过程中带入，又无法过滤，很难彻底清除，但对血清质量影响不大。病原性病毒，特别是BVDV，在国产血清中几乎90%以上都存在，这类微生物是影响国产血清质量的重要因素，而进口胎牛血清中基本都控制的很好。 6、免疫球蛋白 国产血清的只是定性检测，结果也很不准确，进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄情况，国产血清，基本都是新生牛的，血清中容易产生IgM，IgG的含量也偏高，进口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也较低。 7、其它 不管是国产还是进口血清，都是不测抗生素的（无四环素胎牛血清除外）。国外，抗生素的使用很严格，用量也很少，每头奶牛的产品包括血清都可以溯源的，因此可以做
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WB实验代测时：客户提供样本的注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
1、 抗体：常见指标，由德尔塔提供抗体，二抗等。客户不需要自行购买。不常见指标，客户可以自己提供抗体，或由本公司代购。2、 标本收集与保存：组织样品 新鲜组织放入液氮或-70度保存，组织不少于100mg（约绿豆大小）；培养细胞 通过细胞计数取不少于2000000个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-70℃，避免反复冻融）；血液细胞标本 以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，保存（-70℃可长期保存，避免反复冻融）血清或细胞培养液标本 离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（以上4℃可保存15-20天，-70℃可长期保存，避免反复冻融）3 、 样本运输：可选以下任何的一种方式寄送标本组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输；细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶（密封保证不污染，培养液不漏出，细胞不要长得太满，50%左右，灌满培养液）；血清或上清液直接加冰袋寄送（密封保证液体不漏出，视路途远近2-3天可到达）。德尔塔提供实验室代测服务，包括WB实验代测，免疫组化实验代测，PCR实验代测，放免实验代测等。专业的实验操作人员，一流的实验室配置，为您的实验保驾护航。欢迎大家来电咨询。 原创作者：德尔塔
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Schiff试剂，雪夫试剂产品简介及组成
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
产品简介:Schiff试剂又称雪夫试剂、希夫试剂等。是Schiff于1866年发现的一种有效的醛试剂，用于检测醛基（-CHO）。Schiff试剂的组成成分是副品红碱，为三氨基三苯甲烷的氯化物，其中的醌基是品红显色原因。在酸化的品红液中加入亚硫酸或者亚硫酸盐，品红被还原为品红-亚硫酸（或称白亚磺酸），即Schiff试剂。 Leagene Schiff试剂主要用于糖原、黏液物质染色，常与过碘酸（也称高碘酸）配合使用，过碘酸是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1,2-紫红色。配置好的Schiff试剂接近于无色。产品组成： 编号 名称 XF0004 XF0004 Storage Schiff Reagent 50ml 100ml 4度，避光 使用说明书 1份 自备材料：1、10%福尔马林固定液2、蒸馏水3、过碘酸溶液4、苏木素染色液5、酸性乙醇分化液6、系列乙醇操作步骤（仅供参考）：1、常规固定，常采用10%的福尔马林，常规脱水包埋2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水，冰冻切片直接入蒸馏水3、自来水冲洗2-3分钟，再用蒸馏水浸泡2次4、切片人过碘酸溶液，室温放置5-8分钟，一般不宜超过10分钟5、自来水冲洗一次，再用蒸馏水浸洗2次6、切片入Schiff Reagent，室温阴暗处浸染10-20分钟7、自来水冲洗10分钟8、入苏木素染色液，染细胞核1-2分钟 原创作者：德尔塔
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ELISA实验中：如果样本是细胞样本，应该如何处理样本
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
ELISA实验中：如果样本是细胞样本，应该如何处理样本，德尔塔为您支招。 对于培养细胞样品： 1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的*终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。 3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。如果您想了解更多详细信息，欢迎来电咨询。 原创作者：德尔塔
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ELISA试剂盒中重要试剂组成部分
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
在很多检验中一般采用elisa试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物。 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。西安德尔塔代理销售ELISA试剂盒， 试剂盒采用进口材料生产，专业权威的酶免专家，提供免费代测，数据分析，技术服务。产品远销全国各地。多年以来我们以极其苛刻的要求控制产品的质量，坚持生物科学研究与世界同步的理念。因此也得到了全国各大医院院校、三甲医院、研究所，科研机构等单位的一致认可，并发表了多篇文献。欢迎来电咨询。 原创作者：德尔塔
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西安德尔塔：大家在做PCR实验时候的注意事项都有哪些
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
德尔塔代做PCR实验，包括荧光定量PCR，电泳PCR，欢迎来电咨询。 PCR检测微量感染因子时，容易因为污染的而导致各种问题，因此，进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。 （1）划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行： ① 标本处理区，包括扩增摸板的制备； ② PCR扩增区，包括反应液的配制和PCR扩增； ③ 产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。 各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。 切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。 （2）分装试剂：PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA： ① PCR用水应为高压的双蒸水； ② 引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制； ③ 引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。 (3) 实验操作注意事项 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： ① 戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套； ② 使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染； ③ 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面； ④ 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度； ⑤ *后加入反应模板，加入后
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免疫荧光染色的注意事项和操作说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光，下文主要列举了三种细胞免疫荧光染色的实验步骤。 zo-1的免疫荧光，步骤如下： 1、细胞在盖片上生长融合到95%-100%时，从孵箱中取出。 2、用预温的1×PBS洗3次，每次10分钟 3、4%的甲醛室温固定20-30分钟 4、1×PBS洗3次，每次10分钟 5、0.2%Triton X-100透化2-5分钟 6、1×PBS洗3次，每次10分钟 7、5%BSA室温封闭30分钟 8、加一抗(用1%BSA稀释)放在湿盒里，4度过夜 9、1×PBS洗3次，每次10分钟 10、加二抗(用1%BSA稀释)30分钟，闭光!!! 11、1×PBS洗3次，每次10分钟 12、95%甘油封片 注：4%甲醛，0.2%Triton，5%BSA均用1×PBS稀释 从大鼠分离的T细胞能否直接做细胞免疫荧光 细胞爬片的免疫荧光步骤基本一致： 1.取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。 注意：有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心，注意 反正面，放在皿里洗比较方便，避免了来回夹取，另外洗的时候加PBS不要太冲，不要细胞冲下来。洗的时候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，没有等5分钟或10分钟。 2. 4%冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。 3. 0.2%Triton X-100通透10分钟，PBS洗三遍。 4. 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。 5. 一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果好，PBS洗三遍。 6.二抗室温2小时(避光)，或者37度1半小时，PBS洗三遍。 7.用DAPI染核，然后直接照荧光片。 8.蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周，因为甘油不象树脂那样会干，所以不用指甲油封的话会弄的一塌糊涂。 建议：1.还是染完之后没有封片前直接照一些，因为有的时候可能封片会出现问题，再想照反而没有了，另外不要拖太长时间，荧光会崔灭的。2.荧光的片子一定要避光保存，保存的好
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西安德尔塔告诉大家：凝胶迁移实验的几点注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
1. 什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验? 凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术*初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA复合物或RNA复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RN段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。 2. 实验中需要用到什么试剂? 凝胶迁移实验需要的结合蛋白，可来源于纯化或部分纯化的蛋白，或粗的核和胞质抽提液。还必须制备同位素标记的DNA或RNA。一般，DNA核苷酸探针用32P和T4多核苷酸激酶来作末端标记，同位素标记的RNA用噬菌体RNA聚合酶和同位素标记的核苷酸在体外合成。Promega公司的Riboprobe/sup系统（a,b）可用于同位素标记的RNA的体外合成，DNA 5＇末端标记系统，用于制备DNA探针，结合反应所需的组分有：含盐的溶液（氯化镁，氯化钠，或氯化钾）、缓冲体系（Tris-HCl或HEPES）、还原剂（DTT）、甘油、非特异的竞争DNA（poly（dI:dC）dI:dC），也可能含非离子去污剂。在结合蛋白和同位素标记的探针作用后，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物，随后将凝胶干燥并放射自显影，或用PhosphorImage/sup分析。 3. 凝胶迁移实验系统提供了什么试剂? Promega公司提供一种凝胶迁移实验系统检测DNA结
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人转化生长因子B1（TGF-B1）ELISA试剂盒基本原理和操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
德尔塔代理销售“人转化生长因子B1（TGF-B1）elisa试剂盒”公司具有良好的市场信誉,专业的销售和技术服务团队,权威的酶免代测机构，专业的技术人员操作。“人转化生长因子B1（TGF-B1）ELISA试剂盒”现货直销免费送货上门，欢迎联系。 ELISA基本原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法（图a）、用于检测抗原的双抗体夹心法（图b）以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。 ELISA基本操作步骤 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 在包被溶液中稀释纯化的包被抗体（一般0.5-4μg/ml），将该稀释后的包被抗体100μl/孔加入到酶标板内。 用封板膜将板封好防止蒸发，在室温（或4℃）孵育过夜。 吸干每一板孔并加洗液洗涤，重复3次。使用洗瓶、多道移液器、多功能分装器或洗板几，每孔加400μl彻底洗涤。规范的操作要求每步完全移出孔中的液体。*后一步，将板中液体移出并将板子在干净的纸巾上吸附。 加200-300μl/孔封闭液封板，室温至少孵育1小时。 重复步骤3，可利用真空泵干燥板子。加入干燥剂并封板，至少在4-8℃可贮存2个月。 每孔加100μl适当稀释的标准品和标本，轻轻敲打板子1分钟。贴上封板膜，室温孵育2小时。 重复步骤3 每孔加100μl经过适当稀释的生物素化的检测抗体，贴上新的封板膜，室温孵育2小时 重复步骤3 每孔加100μl经过适当稀释的Avidin-HRP或 Streptavidin-HRP，也可加其它种类预先优化物 重复步骤3 每孔加100μl底物溶液，避光，室温孵育5-30分钟进行显色反应 每孔加50μl终止液，轻轻振荡板子确保充分混
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人脂联素（ADP）ELISA试剂盒购买指南和使用小贴士
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
德尔塔代理销售“人脂联素（ADP）elisa试剂盒”公司具有良好的市场信誉,专业的销售和技术服务团队,权威的酶免代测机构，专业的技术人员操作。“人脂联素（ADP）elisa试剂盒”现货直销免费送货上门，欢迎联系。 酶联免疫吸附试验（ELISA） 因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全等特点而在临床上广泛应用，但是由于其操作步骤复杂，一般包括试剂准备，样本收集，加样，温育，洗涤，显色，比色，结果判定等，其中任何一项操作不当都会对检测结果产生很大影响。因此，必须加强ELISA检测的全面质量控制，保证其结果的准确可靠。 1 试剂 优质的试剂是保证检验质量的基础。从4℃冰箱取出的试剂必须放置室温20～30 min 后再启用，否则水化层的形成可能影响试剂的原始浓度及试剂中溶质分子的均匀分布。未用完的试剂和质控品应密封并及时放回冰箱保存。根据蛋白质在冷冻过程中出现蛋白分子分布改变的特点，试剂正式启用前应充分混匀。所用蒸馏水、去离子水和自行配制的缓冲液等，都必须调整其pH 值和离子强度等。不同批次的试剂在制作过程中很难保证质量完全一致，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保证保存条件，严格执行这一标准可以避免试剂批号改变而重建质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够保证结果的稳定性。 2 标本 患者标本中有可能含有干扰试验的免疫物质，导致假阳性或假阴性的结果，干扰因素一般可分为两类，即内源性和外源性干扰因素。内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等，避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂；外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长及标本凝固等。要注意避免标本出现严重溶血，标本中血红蛋白中含有血红素基因，其具有类过氧化物的活性，因此，在以辣根过氧化物酶（HRP）为标记的ELISA测定试验中，容易在温育过程中吸附于固相，从而与加入的底物反应显色。标本在低温下保存时间过长，I
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甲胎蛋白临床诊断简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
德尔塔代理销售“大鼠甲胎蛋白（AFP）elisa试剂盒”公司具有良好的市场信誉,专业的销售和技术服务团队,权威的酶免代测机构，专业的技术人员操作。“大鼠甲胎蛋白（AFP）elisa试剂盒”现货直销免费送货上门，欢迎联系。大鼠甲胎蛋白（AFP）elisa试剂盒采用进口材料生产，专业权威的酶免专家，提供免费代测，数据分析，技术服务。产品远销全国各地，多年以来我们以极其苛刻的要求控制产品的质量，坚持生物科学研究与世界同步的理念。因此也得到了全国各大医院院校、三甲医院、研究所，科研机构等单位的一致认可，并发表了多篇文献。欢迎来电咨询。 AFP主要由胎儿肝细胞和卵黄细胞产生的一种酸性糖蛋白少量由胎儿的胸腺、肺、胃、肠道的细胞产生。AFP也不是一种肝癌特有的标记物。初用时把AFP作 为原发性肝癌的一项特异性诊断指标。随着免疫组化的深入开展和研究的深入进行，实验结果证明：AFP的升高不仅在原发性肝细胞癌的病例，在生殖细胞肿瘤卵 黄瘤和睾丸胚胎癌的病例也可大量见到。用AFP检测后显示阳性的病例有：原发性肝细胞癌，胃癌，卵黄 瘤和睾丸胚胎癌等。其阳性 表达部位主要在细胞浆，也有少量在细胞膜和细胞核上。该抗体适合于各种切片的标记，可用任何一种 免疫 方法来进行染色，稀释度为1：100-1：300。上述四种类型的抗体可作为来源于上皮的肿瘤及其它来源的肿瘤的区别。只要损伤正确，抗体的质量没问题，就可获得满意的结果。使用时应根据不同的组织，不同 的形态结构，来选择合适的抗体。当然有的肿瘤决不是用一两种抗体就能够把它们给予区分开来。因此，要根据不同的情况合理使用抗体，以便作出正确的诊断。 原创作者：德尔塔
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WB实验代测之WB实验中需要用到的试剂以及WB实验的显影原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
德尔塔代做WB实验，客户只需要提供样本，其余所有试剂均由我司提供，下面我们就做WB实验的原理以及大致需要的试剂做了一个汇总，欢迎来电咨询。 Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 分类 western显影的方法主要有以下几种： 1.放射自显影 2.底物化学发光ECL 3.底物荧光ECF 4.底物DAB显色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。 主要试剂 1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w)丙稀酰胺和1%(w)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。 2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。 3、 分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris
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