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如何检测血清学的各项指标
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
实验动物的种类繁多，各种指标的检测方法往往各不相同，而且每个人在做动物试验时所需要检测的指标也各不相同，每个人掌握的测定方法也各不相同。 能到本版来的各位战友相信都做过动物试验，也检测过实验动物的指标，希望各位战友能将自己检测实验动物的各种指标时所使用的方法拿出来与大家分享。以形成一个比较完善的实验动物常用指标的检测方法！一．脉搏的检查方法 检查犬、猫、兔等较大动物的脉搏时，先将动物略加固定，待其安静后，用右手伸入动物股部内侧，用手指按股动脉测脉率1分钟，计算每分钟脉搏次数。小动物的脉搏不易摸测，可直接在动物左侧胸用手触及心跳zui明显处，计数一定时间，算出每分钟心跳次数，也可用听诊器或测量仪器进行测量。此外，在测量时应排除温度、湿度、动物的兴奋状态、健康状况、特殊的生理状况等对脉搏的影响。二．体重的测量方法 动物体重的测量一般使用照度计普通天平或电子天平等称量仪器，在称量前应禁食（不禁水），以减少食物对体重的影响。如果进行长期的实验时，应每隔7～10天称量1次。 三．体温的测定方法 动物体温测定可采用普通体温计（肛表、口表）或半导体温度计，为防止测定过程中动物挣扎，以至于挫伤肠壁或折断体温计，在测定前应先固定好动物。肛表测温可由实验者右手固定体温计，龙港金箔3分钟后取出观察读数。半导体点温度计在测定时可立即从温度表上读取温度数。
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细胞因子中全血的标本处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞因子中全血的标本处理方法分析：我们针对全血：使用肝素钠抗凝的真空采血管采血，不易采用肝素锂、EDTA和ACD抗凝剂，血样在8小时内分析，超过8小时会导致活性的损失，一般细胞因子阳性细胞会减少5%。如不能在8小时之内检测，应将真空采血管水平室温放置。自身血浆中外周血单个核细胞（PBMCs）：使用肝素钠抗凝的采血后，分离PBMCs，24小时内分析。组织培养基中的外周血单个核细胞（PBMCs）：用Ficoll分离PBMCs，将细胞重悬于含10%热灭活胎牛血清（FBS）的RPMI－1640培养基中，调节细胞浓度为2×106细胞/ml。调节细胞浓度2×106细胞/mL于新鲜培养基中。冰冻全血与PBMCs：使用1×红细胞裂解液处理活化的外周血或者PBMCs，用PBS漂洗，并用含1%的BSA及10%的DMSO的PBS重悬，－70℃冻存。溶化后细胞置于染色管中，加上2～3mL的洗液，离心5分钟后，用破膜剂对细胞进行破膜和染色。
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反相破乳剂简介及使用【万和环保】
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
【反相破乳剂概述】 反相破乳剂，是万和环保自主研发的高科技产品。该产品是复合型高分子水处理药剂,分子主链上带有大量正电荷基团，是一类性能独特的阳离子聚合物。具有*的反相破乳能力，能有效地改善油包水(W/O)或水包油(O/W)乳液的界面张力，使污水内的油或胶体颗粒失去稳定的排斥力及吸引力，zui终失去稳定性而形成絮体，更进一步通过化学桥联，zui终完成对污水中的油水分离及有害杂质的分离，达到回收油品、使污水得到净化的目的。该产品广泛应用于石油开采、加工炼制、造纸、化纤纺织、化工及城市等各类废水、废液处理净化工程中。该破乳剂能有效破除水包油型乳化液，缩短油水分离时间，能与水混溶，且在较宽的pH值范围内有效。 【反相破乳剂使用方法】 1、在含油废水中添加10-500ppm(具体用量可根据现场试验确定投加量)，搅拌1-2分钟，即可快速破乳。 2、原油脱水中，加入10-30g/L，搅拌，即可实现油水分离，在40～60℃时，效果更佳。 2、该破乳剂具有协同效果，在破乳剂投加之前或者之后投加5～100ppm的PAC或PFAC、PFC，可使水质快速变清。 3、可以调节破乳剂用量以及废水的pH来达到快速破乳分离的目的。pH在6～7时效果。 【反相破乳剂注意事项】 A、该剂及该剂的1-3倍稀释液，当温度低于5℃时会逐渐泛白。会随温度下降变稠甚至凝固。随温度升高，凝固的产品会逐渐熔化变稀，泛白的产品会逐渐还原透明。产品凝固或泛白还原透明后不影响性能。 B、该剂放置时间长，会发生结晶现象，有晶体状物质析出，但不影响其使用效果。 C、该剂易被生物降解，不影响水质，无毒。 【反相破乳剂安全、包装与储存】 ■安全：本品应避免与眼睛和皮肤直接接触。一旦接触，立即用大量清水冲洗，不可延误。 ■包装：25kg及200kg塑料桶，或按用户要求。 ■储存：宜存在阴凉处，保质期二年。
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高分子破乳剂破乳效率高的原因【万和环保】
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
【高分子破乳剂原理】 破乳剂由乙烯和丙烯氧化物组成，呈易流动或粘性的液体。据小编了解，我们常说的破乳剂通常被分为水溶性破乳剂和油溶性破乳剂，水溶性破乳剂能以任何比例溶于水，但不利于绿色环保，油溶性破乳剂不溶于水，却在绿色环保方面具有较为明显的技术优势，因此也是破乳剂的发展方向。 温度对破乳剂在水中的溶解性具有很大的影响。随着温度的不断升高，聚氧化乙烯链的脱水程度会随着氢键的破坏而加强，水溶液会越来会浑浊，甚至分两相。 【高分子破乳效率高的原因】 (1)大部分高分子原油破乳剂为油溶性的，在W/O型乳状液中比较容易分散，能较快地接触到油水界面，发挥其破乳作用。 (2)低分子的表面活性剂往往只有一个亲油基和一个亲水基，而高分子的原油破乳剂在一个大分子中含有多个亲油基团和亲水基团，由于分子内的结构与空间位阻，在油水界面构成不规则的分子膜，比较有利于油水界面膜破裂，而使水滴聚结。 (3)由于大分子中有多个亲水基团，具有束缚水的亲合能力，可将大分子附近分散的微小水滴聚结，而使乳化水分离。 但是，有些超高分子破乳剂并非是表面活性剂，其分子结构没有亲水基和疏水基之分。例如，超高分子量的聚丙二醇(相对分子质量在百万以上)以及高分子聚二丙醇的聚氨酯具有很强的破乳能力，这是由于絮凝作用而破坏乳状液的。 【温馨提示】 万和环保公司拥有多种型号的高分子破乳剂，具体产品性能、价格可或者留言咨询。我司可*时间寄出样品供您试用!
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焦油破乳剂j简介及用途【万和环保】
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
【焦油破乳剂简介】 焦油破乳剂71700plus为一种水溶性的破乳和减粘剂，可加强焦油氨水分离速度和分离效果，并通过破乳、分散、减粘作用，使氨水焦油乳化层变薄，达到提升氨水焦油在分离器内分离效率的目的，从而降低氨水中夹带的悬浮物含量，适当降低焦油的表面张力，加速焦油与焦油渣的分离以获得含水分及渣更低的焦油，同时zui大限度地减少夹带进入氨水中的悬浮物及油含量，改善循环氨水质量，加强剩余氨水处理效果。 【焦油破乳剂特点用途】 · 焦油水分会下降，喹啉不溶物也会相对减少;焦油水分下降达60% · 焦油粘度下降;下降幅度40% · 氨水含油及悬浮物降低，品质更加清洁。 · 蒸氨塔及换热器 显著减少换热器的清洗频率及蒸氨塔的排油频率; * 能减少清洗换热器和蒸氨塔的费用。 * 塔底排油频率降低90%，且排出液主要为氨水，焦油含量很少。 · 初冷器 * 达到更好的喷洒效果，良好的初冷阻力; * 使初冷器煤气出口温度降低，并有效降低初冷器的热负荷; · 焦油回收率 * 焦油回收率提高0.54%以上 · 化产品： 有助于改善硫铵、硫膏等换产品的色度。 焦化废水处理： 可降低废水中毒性COD的含量及总COD含量。从而降低微生物处理负荷，并保持更加有活力的微生物数量和微生物的活力提升。 【注】 万和环保公司拥有多种型号的焦油破乳剂，具体产品性能、价格可或者留言咨询。我司可*时间寄出样品供您试用!
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ELISA试剂盒回收率是什么意思?
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗体ELISA检测。应该说回收率越接近100%，说明这个ELISA试剂盒的正确度越高。 简朴的说，就是添加的和检出的比值。例如你知道样品中含有a，但是你用Elisa方法检出的结果是b，b/a就是回收率。相对回收率可能会高于100%的，假如只是说“损失程度”，实在是不正确的，回收率不一定是即是或者小于100%。回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，假如作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出尺度数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有紧密亲密的关系，说明方法的正确度。 好比水中总无机氯含量测定, 样品水中含有无机氯 20 mg/L, 取 100mL 被测水样品, 加入 0.1mL浓度为 10mg/mL 的含无机氯尺度样品，测定时忽略体积变化，假如测定出样品中无机氯为 2.98mg/L, 则以为回收率为 98%。因为其试剂不乱、易保留，操纵简便，结果判定较客观等因素，已广泛应用在免疫学检修的各领域中。即检出值与实际值的比值。 ELISA试剂盒回收率就是用于检测的ELISA试剂盒回收率，对于定量检测来说，主要仍是一个正确度的验证。
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ELISA的原理及类型
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：固相的抗原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；酶标记的抗原或抗体，称为“酶联物”、“结合物”（conjugate）；酶反应的底物。 根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型：双抗体夹心法测抗原；双抗原夹心法测抗体；间接法测抗体；竞争法测抗体；竞争法测抗原；捕获包被法测抗体；ABS-ELISA法。
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elisa试剂盒白介素类样本吹干后的操作方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
elisa试剂盒白介素类板放在湿纱布上。在吹干样本之前，用甲醇清洗针头，避免杂质搅扰。因为净化进程中引入的溶剂，可能会降低待测组分的浓度或许不适宜直接分析，需要去掉悉数有机溶剂。湿盒应先放在保温箱中预温至规矩的温度，特别是在气温较低的时分更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育，elisa试剂盒白介素类反响板均不宜叠放，以保证各板的温度都能活络平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严峻捆绑在规矩的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的恳求操控温育。elisa试剂盒白介素类样本吹干后应当即取下，避免吹的时间过长，ELISA试剂盒影响究竟查看效果。室温温育时，elisa试剂盒白介素类板只需平置于操作台上即可。应留心温育的温度和时间。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一起测定。即试剂盒前处理进程中把样本在60℃氮气下吹干，再用复溶液溶解单调残留物。浓缩方法：氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。在吹样本时，针头应在液面上空，避免与样本触摸，避免发作交叉污染。在实习运用中，通过不一样的方案，具体的方法进程可有多种。不一样的药物，吹干后样本的保质期不一样，建议待样本回到室温后当即复溶。elisa试剂盒白介素类然后保证试验效果的特异性与稳定性。
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稻麦立 矮壮素 氯化氯代胆碱
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
稻麦立 矮壮素 氯化氯代胆碱英文名称：Chlormequat chloride；(2-Chloroethyl)trimethylammonium chloride其他名称：稻麦立；氯化-2-氯-N,N,N-*基乙胺；三西；西西西；氯化氯代胆碱；2-氯-N,N,N-*基乙铵氯化物；(2-氯乙基)*基氯化铵；氯化矮壮素；2-氯乙基*基氯化铵；二氯胆碱；氯化氯胆碱；氯化*基(2-氯乙基)铵盐CAS号：999-81-5C5H13Cl2N=158.07级别：BR含量：≥98.0%PH：3.5～7.5性状：白色至浅黄色结晶粉末。熔点245℃（部分分解）。易溶于水，在常温下饱和水溶液浓度可达80%左右。不溶于苯、二甲苯、无水乙醇，溶于丙醇。有鱼腥臭，易潮解。在中性或微酸性介质中稳定，在碱性介质中加热能分解用途：生化研究。一种优良的植物生长调节剂，可用于小麦、水稻、棉花、烟草、玉米及西红柿等作物，抑制作物细胞伸长，但不抑制细胞分裂，能使植株变矮，杆茎变粗，叶色变绿，可使作物耐旱耐涝，防止作物徒长倒伏，抗盐碱，又能防止棉花落铃，可使马铃薯块茎增大。保存：RT上海德尔塔生物提供稻麦立 矮壮素 氯化氯代胆碱试剂、标准品。欢迎广大新老客户咨询订购。
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俄以科学家找到恢复蛋白质活性的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
俄罗斯圣彼得堡信息技术、机械与光学学院发布消息称，该校与以色列耶路撒冷希伯来大学合作，找到了一种恢复化学变性蛋白质结构的方法，该方法在用于制备**帕金森（阿尔茨海默氏症）类疾病药物时，可显著减低药物的制备成本。蛋白质特别是酶，可以加快化学反应的速度，所以被广泛用于药品和食品工业。蛋白质分子拥有复杂的空间结构，且其空间结构与蛋白质的功能直接相关，如果其空间结构被破坏，则蛋白质失去活性。一个常见的例子是鸡蛋蛋清在加热后凝结成不透明状。在生产酶的过程中，约 80% 的制成酶由于蛋白质会变性而失去活性，所以工业生产中急需找到能恢复蛋白质活性的办法。2015 年，美国化学家在实验室条件下成功恢复了受热变性的鸡蛋蛋白，但至今，科学家们未找到有效的工业条件下恢复变性蛋白的方法。俄罗斯和以色列科学家团队利用烃基氧化铝纳米粒子，使得工业条件下恢复变性蛋白得以实现。其原理在于通过纳米粒子的物理作用恢复变性蛋白质的分子结构。在实际应用中，由纳米粒子构成的保护壳干扰了蛋白质分子的聚集，从而更容易从混合反应液中筛选出蛋白质，接下来，蛋白质在纳米粒子的物理作用下恢复其分子结构。研究人员认为，该方法如应用于工业生产中，将显著提高酶的利用率。
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亮发光杆菌定期移植法操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
亮发光杆菌定期移植法亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，zui适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。 操作步骤如下： 1 培养基制备 1.1 器皿准备 培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。 1.2 溶解培养基配料 先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，zui后加足水量，搅拌均匀。 1.3 调pH值 配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。 1.4 加凝固剂 配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。 1.5 过滤分装 在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。 1.6 包扎标记 将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。 1.7 灭菌 根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。 1.8 斜面摆放 灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。 1.9 亮发光杆菌无菌检查 将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。 2接种 2.1 斜面接种 2.1.1 点接 把菌种点接在斜面中部偏下方处。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛霉、根霉等）。 2.1.2 中央划线 从斜面中央自下而上划一直线。适用于细菌和酵母菌等。 2.1.3 稀波状蜿蜒划线法 从斜面底部自下而上划
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elisa酶联免疫试剂盒价格实验问题分析方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
*、elisa酶联免疫试剂盒价格阴性样本的吸光度值低于阳性吸光度值原因：elisa酶联免疫试剂盒价格可能原因是出现跳孔的现象或酶标板孔中的试剂未充分的混合。解决的办法是注意操作的方法，注意洗涤时的方法、加完试剂后可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30s，混匀液体。第二、吸光度值偏高是怎么回事;可能引起的原因有孵育的温度过高、反应的时间过长。相对应的解决办法是调整孵育环境的温度，如无法调整室内的温度，请将显色时间适当的缩短、控制反应时间。第三、样品的稀释:elisa酶联免疫试剂盒价格样品稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。ELISA反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如某些产品应取10μl样品进行稀释，个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，elisa酶联免疫试剂盒价格检测结果出现问题。
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干细胞培养器皿的清洗方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
干细胞离体条件下，有害物质可直接与细胞接触，细胞对任何有害甚至有益的物质十分敏感，极少量残留物就会对细胞产生毒性作用。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，使其达到不含任何残留物的要求。因不同培养器皿的材料、结构、使用方法不同，清洗的方法也有区别．现分别介绍如下。1．玻璃器皿的清洗，玻璃器皿的清洗一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。(1)浸泡：新的或用过的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以软化和溶解附着物。新的玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗，然后用5％盐酸浸泡过夜；用过的玻璃器皿往往附有大量蛋白质和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后应立即浸入清水中以备刷洗。(2)刷洗：将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂(不能用含沙粒的洗衣粉)水溶液中，用软毛刷反复刷洗。刷洗中，要不留死角，并防止破坏器皿表面的光洁度。将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干，备浸酸。(3)浸酸：浸酸是将上述玻璃器皿浸泡到清洁液，又称洗液或酸液(表2一5)中，通过清洁液的强氧化作用清除器皿表面可能残留的物质。干细胞根据清洁液含硫酸比例，将清洁液分为强酸、次强酸和弱酸三种。根据需要配制和选用不同的清洁液。清洁液对玻璃无腐蚀作用，去污效果很好，是保证器皿洁净的关键一环。一般来说，新的或用过的玻璃器皿都应浸酸，那些无法用毛刷刷洗的用品(如吸管、滴管等)更要靠浸酸去除污物。浸酸时，器皿应完全被清洁液充满和覆盖。浸酸时间不能少于6h，一般要过夜或更长时间。将器皿放人清洁液时．应小心操作．防止伤及皮肤、眼睛或衣服。从清洁液中取出器皿时，应沥干清洁液，并将浸酸的器皿放入合适容器，如塑料盆中运输。配制清洁液时，操作者必须小心认真，戴耐酸手套和防护眼镜，并严格按下列方法进行：按配方称量好重铬酸钾和蒸馏水，然后将重铬酸钾完全溶于蒸馏水中。按配方把工业用浓硫酸缓慢(以产热很少为宜)加入重铬酸钾溶液中，边加边搅拌。自然冷却、备用。新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过
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细胞悬液标本制备实验步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞系悬液标本制备实验步骤 (1)取材：收集对数生长期细胞于离心管中，800～1000r／min离心10min，弃上清，弹指法混匀细胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，轻轻吹打，4℃固定30min。用小铝片将细清。4℃PBS缓冲液冲洗1～2h或过夜，1000r／min离心5min，弃上清。 (2)制备预包埋块：管内加入2％～4％37℃琼脂糖液0．1～0．5ml，两手搓离心管，使细胞系与琼脂糖混匀，室温冷却，形成细胞琼脂凝胶预包埋块。离心管内加适量PBs缓冲液或75％乙醇溶液，铝片沿管轻轻地将细胞琼脂糖凝胶块松动，预包埋块移入含75％乙醇溶液的青霉素瓶内，24h后换固定液一次，4℃保存，1年内使用。 (3)固定：预包埋块切成1mm3大小，置1％锇酸4℃固定1～2h。 (4)漂洗与脱水：PBS缓冲液反复漂洗30min或过夜。分别用50％、70％、90％、100％丙酮脱水各1次，每次10～15min；100％丙酮脱水3次，每次30min。 (5)浸透、包埋与聚合：浸入稀释包埋剂(丙酮：包埋剂为1：1)中，室温1h。再浸入纯包埋剂(如环氧树脂)中，37℃过夜。60℃固化48h。干燥器内保存备用。 (6)超薄切片：首先将标本包埋块顶端修成近45。的四边锥体，使标本暴露出来，切面呈长宽约为0．4mm～0. 6mm的长方形或梯形。然后将其夹在标本夹中，固定在切片机上。玻璃切片刀需用胶布围成水槽，加入适量蒸馏水，使切下的薄片漂在水面，用覆有支持膜(透明塑胶膜)的载网(铜网或镍网)收集。可以根据薄片与水面反射光所产生的干涉色判断切片的厚度：以银白色(50～70nm)为*；薄片大于l00nm(紫红色)，电子束的穿透较差，微细结构辨别不清；但小于40nm(暗灰色)图像反差低，难以观察。 (7)染色：在平皿中放一片蜡纸，并在其上滴1滴乙酸铀染液，用弯头小镊子夹住载网边缘，把贴有薄片的一面朝下，轻轻插入染液中，盖上平皿盖，室温下染色10～20min，双蒸水清洗2次；置人枸橼酸铅染液中染色15min，0. 1mol/L NaOH染液漂洗1～2s，双蒸水清洗2次。 (8)观察：切片自然干燥后观察。 细胞系注意事项 (1)
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细胞生长曲线的绘制操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ATCC细胞实验用品 材料：贴壁培养的细胞 器材：24孔培养孔板、吸管、胶帽、离心管、培养皿、半对数坐标纸、盖玻片、细胞计数板、酒精棉球、酒精灯、离心机、倒置显微镜、普通光学显微镜、超净工作台、CO2培养箱 试剂：Hanks液、DMEM培养基(含10％小牛血清)、0. 25％胰蛋白酶消化液、吉姆萨染液 实验步骤 (1)消化：用0．25％胰蛋白酶溶液消化处于对数生长期的单层培养细胞，收集消化的细胞于10 ml离心管中。 (2)离心：500～1000r／min离心5min，弃上清。 (3)加入DMEM培养基(含10％小牛血清)，制备单细胞悬液。 (4)计数：吹打均匀后对细胞进行计数。 (5)按2×104～5×104个／ml的ATCC细胞密度接种在24孔培养孔板内。 (6)每天用胰蛋白酶溶液对其中3孔细胞进行消化，镜下计数。 (7)计算3孔培养细胞数的平均值(细胞数／ml)。 (8)连续7天按上述方法消化3孔细胞并进行计数，算平均值。 (9)以培养时间作为横坐标、细胞数为纵坐标，在半对数坐标纸上，将各点连成曲线，即可获得细胞的生长曲线(图5-1)。 结果分析 培养细胞的生长曲线在正常情况下通常呈s形，观察曲线可发现，培养初期(1～2天)的细胞数约呈下降趋势，这段时期即为细胞滞留期(潜伏期)。滞留期之后的3～5天，细胞数增加显著，呈对数增长的趋势，此时细胞进入了对数生长期。当对数生长期细胞数达到高峰，细胞生长逐渐停止，细胞数量进入稳定状态，此时即为平台期(平顶期)。 注意事项 在进行生长曲线的测定时，接种到培养板孔中的细胞数量应保持每孔一致。接种量应适当，不能过少或过多，过少将使细胞生长周期延长，过多将导致细胞在实验未完成前即需传代，这两种情况下所得到的生长曲线均不能较准确地反应ATCC细胞的生长状况。
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