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ELISA试剂盒注意事项说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒注意事项说明：1. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。2. 试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时），2-8℃（频繁使用时）。3. 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
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恒远技术员为客户解说ELISA不显色原因
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
据客户郑老师提出的技术问题，上海恒远公司技术员解说出ELISA不显示的原因，我公司将重点内容整理出，在这里分享给各位，希望能够给您的ELISA试剂盒实验带来帮助。 问题描述：以前是空白值太高，现在是所有的孔读值都在0.09左右(空白孔也是)，哪里都检查了，不知道是哪一步错了。我的步骤是这样的： 采用间接ELISA检测抗血清效价。 用pH 9.6, 0.15 mol.L-1的碳酸盐缓冲液将纯化的重组蛋白稀释为8、2、0.5μg·mL -1 , 包被酶标板, 每孔100μL, 4℃包被过夜。次日每孔加入100μL 7%的山羊血清封闭液, 37℃封闭2h后, 用PBST洗涤3次。然后每孔加入400、800、1600、3200倍稀释的羊抗血清100μL, 空白对照为兔抗血清稀释液( BSA+PBS)，37℃孵育1 h后，同上洗涤3次。再次每孔加入100μL HRP标记的羊抗人IgG, 37℃孵育30 min后, 同上洗涤3次。接下来每孔加入100μL TMB显色液, 37℃避光反应15 min后, 每孔再加入50μL硫酸终止液。zui后，在酶标仪上测450 nm下的OD值。 不显色(几乎没有蓝色），后来用以前的ELISA试剂盒剩下的TMB，就显色，TMB是新的，没有问题，而且我用二抗加TMB后反应蓝色，这应该是TMB和二抗都没有问题吧？真不知道是哪里的原因了。 恒远技术：请问您包被的重组蛋白是人源的？如果是人源的，那么您加的二抗是羊抗人，这样测得的结果是不是不准确。间接法的二抗似乎应该和您的待测抗体结合。所以是不是应该选择HRP标记的X抗羊抗体？ 郑老师：我不太理解您的意思，我做的包被的重组蛋白是人源的，待测抗体是lgG类的，二抗是抗lgG的HRP标记的抗体。 恒远技术：您做的是间接法，包被抗原是人源，待测抗体是羊源抗人，那么酶标二抗应该与待测抗体结合而不是包被的抗原，所以应该是其他种属抗羊抗体。因为看了您的叙述我感觉您的抗体种属可能有问题。本底太高是不是封闭液有问题。换BSA或者脱脂奶粉可以试一下。 郑老师：嗯，我前面可能叙述有误，待测抗体是人血清中的抗体。谢谢您的解答! 恒远技术：不用谢！
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怎样完善ELISA试剂盒实验中的过失？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA操作步骤多，新手操作难免会有过失。而这些过失很多是由细节不够好造成的，减少过失的方法有很多，比如做实验时少说话，防止唾液掉进酶标条中。当然，大家还要学会自己发掘问题，找出原因。那么我们要怎样完善ELISA试剂盒实验中的过失？ ①：评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。 ②：操作前仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进，比如洗板次数的掌握等。 ③：加样要准确、快速。加样不准确，酶生成物的量不能确定，直接影响显色结果。另外，显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关，所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，保存期会缩短甚至失效。 ④：检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。 ⑤：使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。 ⑥：严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。 ⑦：洗涤彻底，洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外，洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。 ⑧：严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。 看完了上海恒远提供的完善方法之后，是不是有了新的收获呢？终上述几
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上海恒远与您分享：实验室常用试剂的配置方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
实验室总有一些试剂是经常用到的。也许市场上的价格看似不是那么贵，但由于经常需要用也用量较大，所以掌握常用试剂的配置方法是每个实验室科研人员的*课程。例如“PBS"它是生物化学研究中使用的一种缓冲液，想了解具体的配制方法请看下面详细介绍。 1、PBS: 取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。 2、Tris缓冲液： 先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6， zui后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。 3、TBS配制方法： 先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，zui后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。 4.储存液： A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸（C6H8O7?H20）溶于1000ml蒸馏水中。 B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7?2H20）溶于1000ml蒸馏水中。 5、工作液： 取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0±0.1 6、ZLI-9011胰蛋白酶消化液： 常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的zui终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。
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从哪几方面分析选购适合您实验的ELISA试剂盒
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
由于elisa试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点，深受广大师生朋友的喜爱。而现试剂盒种类颇多，产品的选择成为了实验前的重点事项。上海德尔塔生物公司技术员根据经验，建议您将这四大因素纳为购买Elisa试剂盒的选择条件： 一、检测方式 如今检测Elisa试剂盒有许多途径，我们可以根据自己的偏好进行选择。一般Elisa检测的是酶促反应的可溶性产物，抗体上结合有相应的酶，而反应体系中添加有相应的底物。这种酶促反应生成具有特征性的颜色，可以通过分光光度计进行检测，碱性磷酸酶ap也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上，也可以结合在二抗上，还可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。此外Elisa结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。 二、实验类型 虽然有多种类型，不过它们都有一个共同特点，就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。in-cell Elisa和酶联免疫斑点elispot是两种特殊的类型，in-cell Elisa需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。elispot有点像蛋白印迹western blot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外，我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行Elisa实验。 三、抗体类型 单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于Elisa检测，实际上有时候二者结合效果更好。例如，对于双抗夹心法而言，用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。多抗能够确保捕获所有抗原，随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。 四、交叉反应 如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。尽管现在购买源自动物的抗体越来越容易，我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行Elisa检测时，检测用的二抗必须特异性针对检测一抗，而不能与捕获抗体起反
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植物抗坏血酸过氧化物酶（APX）试剂盒订购可代测
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)试剂盒订购可代测 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 1ng/L - 50 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定植物样本中抗坏血酸过氧化物酶(APX)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)水平。用纯化的 植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次 加入抗坏血酸过氧化物酶(APX)，再与 HRP 标记的抗坏血酸过氧化物酶(APX)抗体结合，形 成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化 下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗坏血酸过氧化 物酶(APX)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算 样品中植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)浓度。 植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶 2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（80ng/L） 0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)试剂盒操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 40ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 20ng/L 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 10ng/L 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 5ng/L 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 2.5n
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研究确定 25 种癌症相关基因突变，有助于早期癌症诊断！
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
有没有人知道 DNA 突变与癌症发展的关系，虽然这个原因有点儿令人绝望，但是很多临床医生不得不承认，基因突变是造成很多致命疾病的关键因素。斯坦福大学医学院的研究人员和费城福克斯蔡斯癌症中心的研究人员们进行了基因测试，他们分析了将近 10 万名女性的家庭历史和疾病状态，并对她们进行基因测试，结果确定了与癌症有关的 25 种基因突变，在这 10 万名女性之后，有的是乳腺癌或者卵巢癌患者，也有的不是，但是，研究确定 7% 的参与者至少存在一种基因突变。研究人员表示：“这项研究的结果将有助于个性化我们的风险评估和预防保健建议，更好的理解癌症风险可以帮助女性了解患癌的风险因素，帮助她们的医生做出更好**选择。比如说，患乳腺癌风险高的女性可以考虑预防性乳房切除术等。”在此次研究中，研究人员发现了与癌症有关的 25 种基因突变，他们根据女性的年龄，种族和癌症家族史来分配她们每种癌症的风险，其中，研究人员确定了 11 种与卵巢癌有关的风险，以及 8 种与乳腺癌有关的突变。通过此次研究，可以帮助研究人员和临床医生确定各种癌症的高危人群，在疾病未发之前或者在疾病初期就对疾病采取预防的措施，或者为疾病争取**的黄金时间。关注公众号（bio360），定时推送，福利互动精彩多
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我们该如何来检测血清质量
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
我公司主营胎牛血清、生物试剂、ELISA试剂盒、培养基、抗体、细胞等，高品质为您提供gibco、hyclone、sigma等各个品牌的血清，血清质量100%保证，价格合理公道、质量保证，近期还有促销活动，且有礼品相赠，优惠海量！ 下面我们来了解下血清检测的那些个事： 1. 微生物查抄：细菌和真菌-直接作育法、噬菌体-噬斑法和增殖法、支原体-作育法和DNA染色法、牛病毒-细胞作育法。要求均为阴性。 2. 化学检定：包罗渗入渗出压(240～340)、pH(7.0～8.0)、总蛋白含量(3.5～5.0%)、血红蛋白(≤0.02%) 3. 内毒素检测：凝胶法和动态浊度法 要求内毒素含量≤10EU/ml 4. 促细胞生长测定(SP2/0-Ag14尺度划定) ·zui大增殖浓度≥1.0×106个/ml、倍增时间≤20小时 ·克隆率＝(阳性孔平均数/作育孔总数)×100% ·贴壁效率(VERO细胞、二倍体细胞等)10% ·血清：50或100个细胞/孔 ·贴壁效率(%)＝(每孔克隆平均数/每孔存活的作育细胞平均数)×100%相对贴壁效率＝被测血清贴壁效率/参考贴壁效率。 以上就是血清质量的检测总结，如果您有需要了解资料内容，可以致电到我公司说明。如果您有需要订购/咨询的试剂盒产品，也可以在本公司中留言，或者来电，本公司感谢您的支持！
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（必看）带您快速全面了解免疫球蛋白IgG
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
首先带大家快速了解下免疫球蛋白IgG： 免疫球蛋白(immunoglobulin)指具有抗体活性的动物蛋白。主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白(γ-球蛋白)中。免疫球蛋白可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类.本节内容主要为您详细介绍IgG相关作用介绍。 人体血清免疫球蛋白的主要成分是IgG ，它占总的免疫球蛋白的70-75%，，分子量约15万，含糖2～3%。抗体分子是由两对长短不同的多肽链所组成，四条链通过链间二硫键构成Y型基本结构（H2L2）。IgG分子由4条肽链组成。其中分子量为2.5万（23kD）的肽链，称轻链（L链），分子量为5万的肽链（50～60kD），称重链（H链）。轻链与重链之间通过二硫键（—S—S—）相连接。BIM试剂盒告诉您免疫球蛋白的作用：1、人体血清免疫球蛋白IgG是初级免疫应答中zui持久、zui重要的抗体，它仅以单体形式存在。它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用（调理作用），中和细菌毒素的毒性（中和毒素）和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力（中和病毒）。2、在自然被动免疫中起重要作用。3、IgG 还具有调理吞噬和结合SPA等作用。 上海德尔塔生物致力于提供生命科学领域的技术服务，提供实验技术服务，为广大科研工作者大大节省了重复劳动的时间和精力，我们有过硬的技术咨询和完善的售后服务，为您解决后顾之忧。如果您对本公司的ELISA试剂盒感兴趣，咨询订购！
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ELISA试剂盒SCI文章质量操控计划分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒SCI文章试验进程操作点的许多需求把握操作进程。假如稍有不小心，操作不合理的当地，会形成许多疑问，ELISA试剂盒影响了查看的精度，大大降低了测验质量。如花板，假阳性，全五颜六色，全五颜六色，色彩空间的低。根据现已使用的成果，以为ELISA试剂盒法具有活络、特异、简略、快速、安稳及易于自动化操作等特色。不只适用于临床标本的查看，而且因为一天以内可以查看几百乃至上千份标本,因而，也适合于血清流行病学查询。本法不只可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种前期诊断的良好办法。因而ELISA试剂盒法在生物医学各范畴的应用范围日益扩大，一、办法学的影响ELISA试剂盒SCI文章测定形式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞赛抑制法，其间竞赛抑制法因受操作时差所导致的竞赛等要素的影响，成果重复性较差，质量较难操控。二、试剂要素1.试剂的挑选 ：免疫查看的原理均根据抗原抗体反响。因为该反响进程受多种要素的影响，如普遍存在基质效应、穿插反响等，因而查看成果难以溯源，ELISA试剂盒不一样办法、不一样试剂之间乃至同一试剂不一样批号间成果均缺乏可比性。试剂质量在很大程度上决议了查看的水平，因而在引进新项目之前有必要对试剂进行严格的评价。2.试剂的预备 ：不一样批次的ELISA试剂盒在制造进程中很难确保质量完全一致，即使是经过批批检的项目其查看成果也存在区别，因而有必要挑选和订货长批号的试剂，并确保保存条件。严格执行这一规范可以防止因试剂批号改动而从头建立质控系统及从头评价试剂的杂乱进程，ELISA试剂盒而且可以确保成果的安稳性；关于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装有些即可，防止重复冻融形成ELISA试剂盒SCI文章的失效。
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羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒实验参考标准
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
*、羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒规范曲线 1.定量办法：规范曲线zui少由5个浓度组成，测定次数不少于5次，以断定作业浓度规模和IC50规模。 2.定性办法：作业浓度规模经过阴性、临界值浓度和阳性的样品测定来断定，每个浓度重复不少于5次，浓度与响应值之间应有必定的。 第二、检查限和定量限 1.检查限：20份空白样品测定均值加3倍规范差。 2.定量限：应大于规范曲线中zui低浓度点。关于定量办法，应对该浓度样品zui少测定6次进行验证，而不能经过外延法揣度。 第三、临界值（cut-off值）的断定 关于有zui高残留定量的药物，检查办法的临界值为20份增加MRL浓度的样品重复3次测定的均值减去1.64倍规范差，即95%置信限处。 关于禁用药物，检查办法的临界值为定量限，该值应到达公认的目标。 第四、羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒精密度和准确度 关于有zui高残留定量的药物，增加浓度为MRL及MRL上下各一个浓度；关于禁用药物，增加浓度为定量限和2倍定量限，每个增加浓度zui少测定5个平行样，并zui少进行3批实验（不一样检查日期，不一样规范曲线，不一样批次试剂盒）。 1.准确度：回收率规模大于40%或契合相应检查规范的要求。 2.精密度：以变异系数表明。 批内变异系数：每批平行样之间的变异系数小于或等于25%，关于禁用药物小于或等于30%. 批间变异系数：一切样品之间的变异系数值小于或等于30%，elisa试剂盒关于禁用药物小于或等于40%. 定性办法：阴性和阳性样品各测定不少于50份，断定假阳性率和假阴性率。 第五、穿插反应 试剂盒与待检药物类似物、代谢物或一起存在的药物测定穿插反应率。 第六、保留期 保留期经过保留条件的稳定性实验结果断定。 第七、羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒复核实验 1.定量办法：检查限、IC50以及zui少两个增加浓度的准确度和精密度，并与理化办法（或与具代表性进口试剂盒）对比。 2.定性办法：检查限、假阳性率和假阴性率。
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微生物菌种液氛超低温保藏技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
微生物菌种安瓿管或冻存管的准备 宜选用耐温度骤变，耐压，管壁厚度均一并且为中性玻璃的安瓿管，或螺旋口的塑料冻存管。注意玻璃管不能有裂纹。清洗安瓿管时，先用2％盐酸浸泡过夜，然后用自来水冲洗3次以上，zui后用蒸馏水冲洗、浸泡至pH中性，然后干燥。塑料冻存管用蒸馏水浸泡、冲洗干净、干燥即可，然后在121％下高压灭菌15—20min备用。 标签的准备 使用标签机在耐低温标签纸上打印菌种编号、保藏日期，大小为lcm×3cm左右，然后贴在安瓿管上。或采用非水溶性记号笔，记录菌种编号、保藏日期。 保护剂的选择与准备 保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时，应注意其浓度，一般采用10％一20％甘油。参见附录B《常用保护剂》。 菌种的准备 微生物的生理状态对液氮保藏的存活率有影响，一般采用对数生长期的中期或后期的培养物。菌种制备有多种方法，参见附录c《菌种的准备》。 菌液分装 菌液分装参见4 6菌液分装与加棉塞。若用安瓿管分装菌液，在分装完毕后应在距管口5cm左右用喷射火焰(喷灯、焊枪等)将其熔封，若用冻存管分装的，应立即拧紧螺帽。 微生物菌种预冻 预冻时，冷冻速度一般控制在每分钟下降1℃，zui后冻结温度低于共晶点温度10℃左右即可。 保藏 将安瓿管或塑料冻存管置于液氮罐中保藏。一般气相温度为一150℃，液相温度为一196℃。 保藏周期 一般10年以上。 适用范围 各类微生物。 液氮保藏应注意事项 ·防止操作人被冻伤，操作时应注意安全，戴面罩及皮手套； ·若用塑料冻存管保藏，一定要拧紧螺帽； ·运送液氮时一定要用特制的容器，绝不可用一般密闭容器存放或运输液氮，切勿使用保温瓶存放液氮； ·微生物菌种存放液氮容器的室内要注意通风，防止过量氮气使人窒息； ·防止安瓿管破裂爆炸。如液氮渗人安瓿管内，当从液氮容器中取出时，液态氮体积将膨胀约680倍，爆炸力很大，要特别小心； ·注意观察液氮容器中液氮的残存量，定期填充液氮。
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发酵培养基设计与优化操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
发酵培养基设计与优化过程一般要经过以下几个步骤： ①根据以前的经验以及在即用型平板培养基成分确定时必须考虑的一些问题，初步确定可能的培养基组分； ②通过单因子优化实验确定zui为适宜的各个培养基组分及其zui适浓度； ③zui后通过多因子实验，进一步优化培养基的各种成分及其zui适浓度。对于多因子实验，为了通过较少的实验次数获得所需的结果，常采用一些实验方法设计，即用型平板培养基如正交实验设计、响应面分析、遗传算法设计等。 金黄色葡萄球菌显色培养基 进口、国产 1升 Staphylococcus Chromogenic Medium 用于金黄色葡萄球菌的显色培养 进口、国产 250克 金黄色葡萄球菌显色培养基配套平皿 进口、国产 9㎝/块 Staphylococcus Chromogenic Medium Dish 霉菌和酵母菌显色培养基配套平皿 进口、国产 9㎝/块 Mould And Yeast Chromogenic Medium Dish 阪崎肠杆菌显色培养基 进口、国产 1升 Enterobacter Sakazakii Chromogenic Medium 用于坂崎杆菌的显色培养，坂崎杆菌显蓝色，其他肠杆菌显无色 进口、国产 250克 维生素B12测定用培养基 进口、国产 250克 Vitamin B12 Assay Broth 婴儿食品和乳粉中维生素B12测定 支原体琼脂基础培养基 进口、国产 250克 Mycoplasma Agar Base 用于支原体的分离培养 支原体肉汤培养基 进口、国产 250克 Mycoplasma Broth 用于培养支原体的基础培养基 BBE琼脂 进口、国产 250克 BBE Agar 脆弱拟杆菌群的分离培养 溴百里酚蓝乳糖胱氨酸琼脂 进口、国产 250克 Cystine-Lactose-Electrolyte Deficient Agar 尿液中微生物的选择性分离培养 CLED培养基添加剂 进口、国产 1毫升×5支 CLED Medium Supplement 加入100mlC.L.E
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体外培养细胞的分类
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1．贴附型 这类肿瘤细胞在培养时，能贴附在支持物表面生长。大多数培养细胞呈贴附型生长；只赖于贴附才能生长的细胞称贴附型细胞或锚着依存型细胞。关于细胞的贴附过程和机制将另加叙述。当单细胞贴附在支持物上后，易失去它们在体内时原有的特征，细胞分化现象常变得不显著。在形态上常表现单一化的现象，并常反映其胚层起源，呈现类似前述返祖现象。如来源于内、外胚层的细胞多呈上皮细胞型；来自中胚层的细胞则易呈成纤维细胞型(这种现象又与供体的年龄有密切的关系，原供体越幼稚则“返祖”越明显)；显然与细胞分化有关。由于上述原因，体外培养细胞形态常表现有一般化的倾向。因此在判定细胞形态时，很难再按体内细胞标准确定,仅能大致作如下分类。 (1)成纤维细胞型：本型细胞因形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名：细胞体呈梭形或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质向外伸出2—3个长短不同的突起。细胞在生长时多呈放射状、火焰状或漩涡状走行：除真正的成纤维细胞外．凡由中胚层间充质起源的组织．如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本类形态。另外在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称为成纤维细胞。因此组织培养中的成纤维细胞一词是一种习惯上的称法．此点与体内细胞不同。 (2)上皮细胞型：本型细胞具有扁平不规则多角形，中有圆形核．细胞紧密相连成单层膜：细胞增殖数量增多时，整块上皮膜随之移动；处于上皮膜边缘的细胞多与膜相连，很少脱离细胞群单独活动。起源于内、外胚层细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝、胰和肺泡上皮等组织培养时，皆呈上皮型形态。上皮型细胞生长时，尤其是外胚层起源的细胞．细胞之间常出现所谓拉网现象，即在构成上皮膜状生长的细胞群中一些细胞常相互分离卷曲，致使上皮细胞膜中形成网眼状空洞。拉网的形成可能与细胞分泌透明质酸酶有关。 (3)游走细胞型：本型细胞在支持物上散在生长．一般不连接成片。细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的
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细胞同步化实验操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
在肿瘤细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中。不同时相的细胞对药物干预存在不同的反应，会影响实验的重复性，因此需要制备细胞周期一致的细胞。细胞同步化是解决该问题的好办法。细胞同步化是利用药物或其他方法使细胞停止在细胞周期的某个时相的技术，其基本原则是使细胞停留在细胞周期的特定时相上；停滞过程可以通过调节，恢复细胞周期；恢复后所有细胞以一致的步调在细胞周期中运行。细胞同步化实验为特定细胞周期转变、细胞动力学、细胞周期调控以及细胞在不同时相中对药物的敏感性研究奠定了基础。 【实验用品】 材料：HeLa细胞 器材：培养瓶、移液器、枪头、小烧杯、10ml吸管橡皮头、超净工作台、CO2，孵箱、倒置相差显微镜、离心机 试剂：无血清培养基、胎牛血清、RPMI-1640培养液、0.25％胰蛋白酶溶液、PBS 【实验步骤】 (1)血清饥饿法(将细胞周期阻滞在G0／G1)： 1)用0．25％胰蛋白酶消化对数生长期HeLa细胞，收集肿瘤细胞，600g离心5min，弃上清液。 2)用37℃预温pH7．4的PBS或无血清培养基洗涤细胞2次，重悬于培养液中，培养液中血清浓度低于O.5％。 3)在CO2孵育箱中37℃、5％CO2以及饱和湿度的条件下，培养24～48h。 4)弃去无血清培养液，加入正常血清浓度的培养液，使细胞重新进入细胞周期。细胞约在12h后进入S期。 (2)胸苷法(诱导细胞停滞在Gl／s期交界)： 1)添加含2mmol／L胸苷的新鲜培养液于培养对数生长期HeLa细胞细胞的培养瓶中。 2)在CO2孵育箱中37℃、5％CO2以及饱和湿度的条件下，培养12h。 3)弃去含有胸苷的培养液，用等量的完全培养液洗涤贴壁细胞2次。更换新鲜培养液，在37℃的CO2孵育箱中孵育16h。 4)弃去培养液，再加入2mmoL／I_胸苷的新鲜培养液，并孵育12～14h。 5)重复本实验(2)胸苷法中的第3)步骤。 (3)有丝分裂摇落法(将细胞截获于M期)： 1)取覆盖瓶底70％～80％的HeLa细胞细胞1瓶，弃去原培养液，用无血清培养液冲洗。然后加入：3ml 0．1％胰蛋白酶消化5min
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